多功能电穿孔系统

多功能电穿孔系统

1、工作条件：

电源：100 – 120 VAC or 220 – 240 VAC, 50/60 Hz.

功率：最大240W

室温：0 - 35?C,

相对湿度：0 – 95%, (non-condensing)

2、总则用于原核和真核细胞电转化

3、详细技术指标及规格：

3.1 系统配置：带有方波输出功能的主机、原核细胞组件及哺乳动物细胞组件，0.1/0.2/0.4cm

电激转化杯。该细胞转化仪用于原核细胞、真菌以及哺乳动物细胞的电击转化试验，包括外源DNA导入和细胞融合等。

技术要求和参数：

*（1）系统输出波形：指数衰减和方波两种输出，适合不同应用需要。

（2）输出电压：10 – 3,000伏，最小调节量1伏。

*（3）电容容量：10 – 500伏：25 – 3275 μF以25 μF 递增，适合哺乳动物细胞需要。

500 – 3000伏：10, 25, 50 μF三种调节，适应原核细胞要求。

（4）电阻（并联）：50 – 1,000 Ω以50 Ω递增，及无限大设置

*（5）样品电阻：在10 – 2,500 V时，最小20 Ω

在2,500 – 3,000 V时，最小600 Ω

（6）方波放电时间：10 – 500 V档位: 持续时间0.05 – 10 ms时，以0.05 ms递增，持续时间10 – 100 ms时，以1 ms 递增，可设1 – 10 次脉冲重复，0.1 – 10 sec 间隔500 – 3,000 V档位: 持续时间0.05 – 5 ms时，以0.05 ms递增，可设1 – 2 次脉冲重复，5 sec 最

小间隔

（7）主机：

输出波形：指数衰减和方波两种输出波形

输出电压; 200 – 3,000伏

放电容量：10, 25, 50 μF，三档调节

样品电阻：最小20 Ω，在10 – 2,500 V档位，

最小600 Ω，在2,500 – 3,000 V档位，

方波放电时间：持续时间0.05 – 5 ms时，以0.05 ms递增，

可设1 – 2 次脉冲重复，5 sec 最小间隔*实验方法预存：24种程序预设，方便用户优化自己的实验条件

用户自定义方法储存：最多144个程序方便用户储存自己的实验方法。

脉冲波形检测：实时监测并显示脉冲波形。

（8）原核细胞系统

*输出波形：指数衰减或方波

输出电压; 200 – 3,000伏

放电容量：10, 25, 50 μF

*样品电阻：在10 – 2,500 V ，20 Ω最小

在2,500 – 3,000 V，600 Ω最小

*方波放电时间：持续时间0.05 – 5 ms以0.05 ms递增，

1 –

2 次脉冲，5 sec 最小间隔

（9）哺乳动物系统:

*系统输出波形：指数衰减和方波两种输出，适合不同应用需要。

输出电压：10 – 3,000伏，最小调节量1伏。

电容容量：10 – 500伏：25 – 3275 μF以25 μF 递增，适合哺乳动物细胞需要。

500 – 3000伏：10, 25, 50 μF三种调节，适应原核细胞要求。

*样品电阻：在10 – 2,500 V时，最小20 Ω

在2,500 – 3,000 V时，最小600 Ω

*方波放电时间：

10 – 500 V档位: 持续时间0.05 – 10 ms时，以0.05 ms递增，持续时间10 – 100 ms时，以1 ms 递增，可设1 – 10 次脉冲重复，0.1 – 10 sec 间隔

500 – 3,000 V档位: 持续时间0.05 – 5 ms时，以0.05 ms递增，可设1 – 2 次脉冲重复，5 sec 最小间隔

系统附件及消耗品

*** 电击杯：0.1cm，50个/包

0.2cm，50个/包

0.4cm，50个/包

技术服务要求

1设备安装调试: 在买方指定的地点完成安装调试，并配合买方进行测试验收。

2质保期验收合格日起12个月。

3维修响应时间: 接到维修通知后，1个工作日内做出响应，3个工作日内到场排除故障。

4交货地点：用户指定位置。

lipo2000转染操作步骤

L i p o2000瞬时转染细胞步骤 Stealth?RNAiorsiRNATransfection 以24孔板为例，其余规格的转染见表1 1中板，细胞密度为30-50%适宜。 注意：根据转染后细胞检测时间长短决定细胞中板密度，如果转染后需要长时间后检测，则细胞中板密度适当降低，已避免细胞过度生长导致存活降低。 2第二天（24-36小时后）每个孔转染方式如下： A将20pmolsiRNA溶于50ulOpti-mem无血清培养基中。 B将1ullipo2000溶于50ulOpti-mem无血清培养基中，混匀室温放置5min。 C将AB两管混合，放置20min。 3转染期间，将24孔板培养基换成无血清培养基，每孔400ul。将C管mix加入24孔板对应孔中，4-6小时候换成有血清培养基。PlasmidDNATransfection DNA(ug):lipo2000(ul)=1:2-3 转染时细胞密度越高，转染效率，表达效率也越高，并且可以降低细胞毒性。1中板。 贴壁细胞：0.5-2X105cells/well，第二天待细胞密度达到70-80%时转染 悬浮细胞：4-8X105cells/well，中板后随即转染。 2转染。 A将0.8ugDNA溶于50ulOpti-mem无血清培养基中。 B将2ullipo2000溶于50ulOpti-mem无血清培养基中，混匀室温放置5min。 C将AB两管混合，放置20min。 转染期间，将24孔板培养基换成无血清培养基，每孔400ul。将C管mix加入24孔板对应孔中，4-6小时候换成有血清培养基。 Table1.CultureSharedreagentsDNAtransfectionRNAitransfection

电穿孔系统技术参数

多功能电穿孔系统 1、工作条件： 电源：100 – 120 VAC or 220 – 240 VAC, 50/60 Hz. 功率：最大240W 室温：0 - 35?C, 相对湿度：0 – 95%, (non-condensing) 2、总则用于原核和真核细胞电转化 3、详细技术指标及规格： 3.1 系统配置：带有方波输出功能的主机、原核细胞组件及哺乳动物细胞组件，0.1/0.2/0.4cm电激转 化杯。该细胞转化仪用于原核细胞、真菌以及哺乳动物细胞的电击转化试验，包括外源DNA导入和细胞融合等。 技术要求和参数： *（1）系统输出波形：指数衰减和方波两种输出，适合不同应用需要。 （2）输出电压：10 – 3,000伏，最小调节量1伏。 *（3）电容容量：10 – 500伏：25 – 3275 μF以25 μF 递增，适合哺乳动物细胞需要。 500 – 3000伏：10, 25, 50 μF三种调节，适应原核细胞要求。 （4）电阻（并联）：50 – 1,000 Ω以50 Ω递增，及无限大设置 *（5）样品电阻：在10 – 2,500 V时，最小20 Ω 在2,500 – 3,000 V时，最小600 Ω （6）方波放电时间：10 – 500 V档位: 持续时间0.05 – 10 ms时，以0.05 ms递增， 持续时间10 – 100 ms时，以1 ms 递增，

可设1 – 10 次脉冲重复，0.1 – 10 sec 间隔 500 – 3,000 V档位: 持续时间0.05 – 5 ms时，以0.05 ms递增， 可设1 – 2 次脉冲重复，5 sec 最小间隔 （7）主机： 输出波形：指数衰减和方波两种输出波形 输出电压; 200 – 3,000伏 放电容量：10, 25, 50 μF，三档调节 样品电阻：最小20 Ω，在10 – 2,500 V档位， 最小600 Ω，在2,500 – 3,000 V档位， 方波放电时间：持续时间0.05 – 5 ms时，以0.05 ms递增， 可设1 – 2 次脉冲重复，5 sec 最小间隔 *实验方法预存：24种程序预设，方便用户优化自己的实验条件 用户自定义方法储存：最多144个程序方便用户储存自己的实验方法。 脉冲波形检测：实时监测并显示脉冲波形。 （8）原核细胞系统 *输出波形：指数衰减或方波 输出电压; 200 – 3,000伏 放电容量：10, 25, 50 μF *样品电阻：在10 – 2,500 V ，20 Ω最小 在2,500 – 3,000 V，600 Ω最小 *方波放电时间：持续时间0.05 – 5 ms以0.05 ms递增， 1 – 2 次脉冲，5 sec 最小间隔

ECM830多功能型细胞电穿孔 细胞转基因活体导入系统 简介 ...

ECM830多功能型细胞电穿孔 细胞转基因活体导入系统 简介： ECM830可以满足所有体外和体内电穿孔研究的需要，并可对预处理的动、植物细胞进行融合。该型号具有精细的电压调节，可监控所有参数，可调整脉冲间隙，这些细节是其优异品质的内在保证。特别需要指出的是，配合BTX 提供的专用附件，可以轻松进行诸如活体转基因和导入蛋白，多肽及其他药物的研究和治疗。 应用： ?哺乳动物细胞转染 ?体外／体内／离体／卵内实验 ?核移植 ?植物组织和原生质体的转染 ?细菌和酵母的转化 可靠性： 方形波技术保证了更高的效率和哺乳动物细胞存活率。 通用性： 利用BTX多种专业电极和新型的BTX MOS多孔板电穿孔仪，可以将仪器运用到各种电穿孔领域。 监控仪选配 新的VIP 3000可以允许用户监控和记录下电穿孔过程中的主要电参数。利用选配的通讯模块，就可以把数据下载到电脑上或在打印机上打印出来。 多孔板电穿孔仪 新的MOS-多孔优化系统利用BTX-ECM电源发生器可为研究人员提供先进的多孔技术。 ECM830是为体外和体内电穿孔设计的方形波电穿系统。BTX方形波技术为研究者提供了更高的细胞转染率和存活率。ECM830应用范围广泛，包括了哺乳动物细胞和植物细胞转染，胚胎操作，核转移以及细菌和酵母转化。ECM830的主要特点包括了：5至3000伏的电压范围；精确的电压调进，10微秒至10秒的脉冲范围，可控制的脉冲间隔，电弧淬灭功能（arc Quenching）可显示真实电压及脉冲波长数字显示屏。更为客户提供了两年的质量保证。 ECM830主机可和BTX的各种专业及配件结合使用，使分子或药物的体外／体内导入实验更加得心应手。 技术规格 操作状态：启动后内部自检 界面：数字用户界面 输入：110V／220V通用 充电时间：最大5sec(没有延迟) 电压范围：5－500V电压模式／1V分辨率 505－3000V高电压模式／5V分辨率 波长范围：10μsec─999μsec低电压模式／1μsec分辨率

电转染操作流程

Neon TM 电转染一般流程 1． 电穿孔前一至两天，将细胞转移至装有新鲜培养基的培养皿中，保证实验当天细胞量达 到70-90%。 2． 加培养基（不含抗生素）到24孔板中，每孔500μl ，放于37℃培养箱预热。（注：使用 其他孔数培养板或者100μl 枪头时，加入培养基和质粒及细胞的数量见下表1） 3． 将培养细胞取出，悬浮细胞直接取部分培养的细胞计数，确定细胞密度；贴壁细胞用2ml 的PBS 冲洗细胞，吸出PBS ，加入约750μl 胰酶消化3min ，加入750μl 培养基，终止消化，取部分细胞悬液进行细胞计数，确定细胞密度。 4． 将悬浮细胞转到离心管，室温下100-400g 离心力离心5min ，倒掉上清。 5． 向细胞中加入2mlPBS 冲洗细胞，室温下100-400g 离心力离心5min 。 6． 吸出PBS,用重悬缓冲液R 重新悬浮细胞沉淀，最终使细胞密度为2.0×107个/ml 。轻轻 吹打细胞，使其形成单细胞悬液。（注：细胞悬液在室温时间不能超过15-30min ,否则将导致细胞活性和转染效率降低） 7． 将适量质粒加到1.5ml 离心管中，再加入细胞悬液，轻轻混匀。所用细胞浓度、DNA 和 接种体积见下表1）。 8． 将装有3ml 电解缓冲液E 的Neon TM 管插入移液器架中。 9． 在仪器上设置脉冲电压、脉冲宽度、脉冲数。 10．将枪头插入NeonTM 移液器中，用10μl 的枪头吸细胞混合液，枪头中必须无气泡。将带有样品的NeonTM 移液器垂直插入NeonTM 管中。 11．选择电穿孔方案，并按下触摸屏上的Start （开始）键。 12．电脉冲释放后，触摸屏上会显示完成，提示电穿孔完成。 13．将脉冲好的样品立即转移至准备好的装有预热培养基的培养板中。将培养板放到培养箱培养。 14．实验结束后，倒掉移液器中E 液，关闭电转仪。 注意：1．加R 液体积=四大格细胞总数/（4×104）×细胞液体积/（2.0×107）。 2．加入质粒体积=加入质粒的量/质粒浓度。 3．加入细胞悬液体积=需加细胞数量/细胞悬液浓度。 4．每个枪头最多只能用2次。 5．Neon TM 管装入的3ml 电解缓冲液E 可用10次电转化。 6．Neon TM 管中加入3ml 电解缓冲液，用10μl 枪头时加E 液,100μl 枪头时用E2液。 表1 NeonTM 枪头 平板培养基的体积 细胞数量（个） 规格 每孔表面积(cm2) DNA(μg) 10μl 100μl 96孔 0.3 0.2-0.3 √ 100μl 1-3×104 48孔 0.7 0.3-0.7 √ 250μl 5-7.5×104 24孔 2 0.5-1.5 √ 500μl 0.5-1.5×105 12孔 4 0.5-3.0 √ 1.0ml 1-3×105 6孔 10 2.0-4.0 √ √ 2.0ml 0.5-1×106 60mm 20 4.0-8.0 √ 5ml 2-4×106 10CM 60 8.0-16 √ 10ml 4-8×106

细胞电转染系统技术参数

细胞电转染系统招标参数 1．工作条件 1.1.环境温度：10-35℃ 1.2.相对湿度：20-80% 1.3.工作电压：220V 50Hz 2.技术指标 *2. 1 用途：用于基因转染实验，适用于各种贴壁细胞和悬浮细胞、包括难转染的血液系统细胞和干细胞等 2. 2 系统原理：综合应用电穿孔方法及细胞特异性的电极液，通过调整优化电转参数，可直接将多种转染物导入细胞中，可实现瞬转和稳转两种技术方式。 *2.3转染物：质粒DNA、RNA等； 2.4 实验操作：针对各种细胞有优化好的实验条件数据库，无需优化； *2.5 能提供配套的转染试剂耗材； 2.6 耗材一次性无菌设计，细胞不与仪器接触，无需清洗仪器； 2.7 电极材料：使用高分子聚合物电极材料，非金属电极； 2.8 转染体系：可进行100ul体系、20ul体系2种规格转染； 2.9 仪器内置2个100ul电极杯孔位，16个板条孔位； 2.10 操作界面：触摸屏操作； 2.11 仪器升级：可通过USB接口与电脑连接进行软件的升级和数据的传送，软件可免费从网站下载更新； 2.12 有实验数据支持：外源基因可直接入核。转染速度快，最快转染GFP 2小时后即可观察到蛋白的表达情况； 2.13 仪器未来可添加模块以实现贴壁细胞直接转染（如神经元、血管内皮细胞等）； 2.14仪器未来可添加模块以实现高通量转染（96孔转染）； 2.15仪器未来可添加模块以实现大体积转染（1mL和20mL）； 2.16该仪器具有专用配套试剂、耗材； *3. 仪器配置要求 3.1细胞电转染主机：一台（含转染系统核心模块和系统配套X模块） 3.2微生物电转化仪：一台（可用于细菌和酵母菌的电转化） 3.3配套凝胶成像：一台（用于ECL、ECL Plus、Western、Northern、Southern等样品的发光成像和分析，用于电化学发光、生物芯片发光检测、植物活体成像、菌落活体成像等检测，CCD相机冷却温度：≤-65℃提供FLI厂家证明文件，标配F0.80镜头，无需改装校正光圈即可达到F0.8，上下双层样品台设计，可兼容拍摄样品厚度0.01mm - 10cm，可自由选择曝光识别区域，实现精确自动曝光） 3.4 配套试剂：试剂包95个（100μl 体系可做24反应，首批提供60个其他按用户需求

细胞的脂质体转染法和电穿孔法

细胞的脂质体转染法和电穿孔转染法 （一）脂质体转染 一、实验试剂及器材 Lipofectamine? 3000 Transfection Reagent，质粒DNA(0.5-5 μg/μL储液)，Opti-MEM?减血清培养基，培养板，酒精灯，离心机，微量移液器，离心管等。 二、实验步骤 1. 接种细胞至70－90%汇合度时转染； 2. 使用Opti-MEM?减血清培养基稀释Lipofectamine? 3000试剂（2管），充分混匀（6孔板Opti-MEM?培养基为125 μL× 2，Lipofectamine? 3000为 3.75和7.5 μL）； 3. 在每管已稀释的Lipofectamine? 3000试剂中加入稀释的DNA（用P3000TM试剂稀释）（1:1比例）； 4. 室温孵育5分钟； 5. 加入DNA－脂质体复合物至细胞中； 6. 37°C(PK-15在39°C下培养)孵育细胞2–4天，然后分析转染细胞。 三、注意事项 1. 在无血清培养基（如Opti-MEM?减血清培养基）中制备DNA－Lipofectamine? 3000脂质体复合物，直接将其加入含细胞培养基的细胞中（在血清／抗生素存在或不存在时均可）； 2. 转染后无需去除转染复合物或者更换／添加培养基；

3. Lipofectamine? 3000试剂用量各有不同，测试推荐的两种浓度的Lipofectamine? 3000试剂，以确定最佳用量，开始新的转染； 4. Lipofectamine? 3000试剂应放在4℃储存（切勿冷冻）。 附上Lipofectamine 3000 REagent Protocol：

Bio-rad Gene Pulser Xcell电穿孔系统(中文)

Bio-rad Gene Pulser Xcell电穿孔系统 一Gene Pulser Xcell电穿孔系统介绍 电穿孔的过程中可以有2种波型来控制外界电压的变化，Gene Pulser Xcell可以提供2种波型，即指数波和方波。 1.Exponential Decay Wave（指数波） 所谓指数波的方式，就是将已经充电到指定电压的电容进行快速的放电，放电的方式是以指数的形式进行的（如上面的slide显示）。该种方式的电穿孔取决于2个参数，电场强度(kV/cm)和时间常数(ms)。在实验过程中，采用具体的电击杯调整电压即可调整不同的电场强度。此外，电容和电阻的具体值也可以在Gene Pulser Xcell的界面上进行设置。

?电容器充电到预定的电压(V0)放电后，即向样品释放脉冲，细胞表面的电压随时间按指数方式下降的 ?电容器的电压值达到峰值释放脉冲后迅速的衰减 ?电场强度E (V/cm) 是用来描述电击杯外界电场环境的一个参数（E=V/d ） ?脉冲时间是一般用时间常数来进行衡量(~37% of V0，V0/e) ?脉冲的时间是由电阻和电容的大小所决定的 备注：PC module作用 PC（Parallel Capacitor）模块的本质就是在放电回路中在样品上并联一套电阻。在放电回路中设置PC模块的目的：如果实验样品具有很高的电阻值，那么脉冲就需要维持相当长的时间，这样对细胞是会有损伤的，长时间的电场作用会导致细胞的裂解。并联了PC模块后对样品而言电击是的电压并没有变化，但是PC 模块起到了分流的作用，可以使得脉冲的时间常数大大减小，可有效的维持细胞的活性。并联了PC模块后，时间常数取决于该模块的电阻，电阻越小，那么放电的时间也就越短。 2. Square Wave（方波） 对于某些细胞而言，采用指数波进行实验特别容易导致细胞的死亡。对于这种细胞而言，采用方波的形式来进行电穿孔既可以进行有效的转染，又可以很好的保护细胞，维持细胞的活性。方波的形式通常用以下的参数来进行描述：电压、脉冲时间、脉冲次数和脉冲间的间隔时间。上述所有的参数都可以在Gene Pulser Xcell的操作界面上方便的设置。在实验结束后，Gene Pulser Xcell还可以显示实验中这些参数的具体值。 方波的本质和指数波是一样的，区别在于电压还没有下降为0的时候，电容器的放电已经被截止了。所有的方波都会有电压的细微下降，以其始的电压值的百分比计算。一般下降率不超过5%。

活体电穿孔法介绍 1、什么是活体电穿孔 活体电穿孔法(in vivo ...

活体电穿孔法介绍 1、什么是活体电穿孔 活体电穿孔法(in vivo electroporation) 是将外源基因通过电场作用，导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因，可在多种组织器官上应用,并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单,在直流电场作用的瞬间,细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通道105～115μm ,这种通道能维持几毫秒到几秒,然后自行恢复。在此期间生物大分子如DNA 可通过这种微小的通道进入细胞。近年来活体电穿孔法用于转基因研究的报道不断增多,在基因治疗方面的优势也日趋显著,是一种很好的活体基因导入方法。 活体电穿孔法可用于检测瞬时表达系统中载体的表达状况。大量的研究表明活体电穿孔法在基因治疗方面有非常好的应用前景。因此目前国内外对活体电穿孔法介导外源基因转移的研究越来越多。 2、活体电穿孔的法的特点 活体电穿孔法基因导入和表达效率较高,它的特点主要在以下几个方面: 首先,靶器官的选择面广,理论上任何组织和器官都可以作为活体电穿孔的靶器官。 在用于基因治疗方面，要考虑到靶器官组织生理特性。如果所选择的局部组织细胞不能把所转移基因的表达产物分泌到外周血液循环中,则在某种意义上说已失去了基因导入的价值,这在基因治疗中是关键性的问题。当使用组织特异性表达载体时,研究人员应根据所构建的表达载体来选择基因转移和表达的靶器官组织。例如鱼精蛋白21 启动子可指导外源基因在精母细胞中特异性表达,以小鼠的睾丸作为靶器官将含有鱼精蛋白21启动子的表达载体导入,获得外源基因的表达量远远高于该基因在肝脏和骨骼肌中的表达。 其次,对导入的外源基因片段的大小没有限制,从几KB 或十几KB 的表达载体, 到100～200KB 的Y AC、BAC 基因组,都有成功导入并获得表达的报道。 此外活体电穿孔法操作简单快速,电穿孔的时间只有几秒钟,而且DNA片段不需要特殊的纯化操作。 但电穿孔法也存在一些的缺点:首先,外源基因表达持续的时间很短,虽然外源基因导入后最快可在215 小时有表达,但大多1～2 月后表达量降至很低。外源基因表达的时间主要由于所构建的表达载体和基因导入的靶细胞组织器官不同而存在巨大差异。 由于应用不同的表达载体,Muramatsu 在小鼠肝脏进行电穿孔7天后则检测不到外源基因的表达,而Heller 21 天后还可以检测到外源基因的表达。如果选择代谢和酶活动旺盛的组织器官如肝脏,则表达持续时间会较短,表达时间在 1 个月以内,但以骨骼肌为靶组织,表达可持续15个月。

美国伯乐电转化仪使用说明

Gene pulser xcell TM Electroporation system quick guide 产品名称: Gene Pulser Xcell 电穿孔系统 产品型号: Gene Pulser Xcell 电穿孔系统 产品展商: 众磊（北京）生物科技发展有限公司驻沪办 简单介绍 Gene Pulser Xcell 电穿孔系统 Gene Pulser Xcell 电穿孔系统的详细介绍 【介绍】 电穿孔是功能强大的将核酸、蛋白及其它分子导入多种细胞的高效技术。通过高强度的电场作用，瞬时提高细胞膜的通透性，从而吸收周围介质中的外源分子。这种技术可以将核苷酸、DNA 与RNA、蛋白、糖类、染料及病毒颗粒等导入原核和真核细胞内。电转化相对其它物理和化学转化方法，是一种有价值和有效的替代方法。Gene Pulser Xcell 系统的设计，基于Bio-Rad 15年来在电转化技术上经验积累，它提供指数波和方波波型选择、系统配置选择及友好的用户界面。 主要特点指数波和方波波型确保所有细胞类型（原核及真核）均可获得最佳的电转化效果Bio-Rad 专利的* PulseTrac 电路和电弧保护设计，确保可重复性并保护样品模块化设计可根据研究需要选择系统用户友好的数字化界面，具有直观的编程以控制所有参数，包括附属模块的参数包括人工操作、预设规程、用户规程、一个优化规程及其它先进功能等程序选择 指数波或方波脉冲选择 Gene Pulser Xcell 系统可产生指数波和方波波型，使你选择最适合你细胞的波型与规程。指数波和方波均能有效地用于电转化及电融合。电穿孔波型对不同类型细胞的转化效率有很重要的影响。 左，指数衰变脉冲。当一个充电至电压为V 0 的电容器放电到细胞，加在细胞上的电压随时间以指数方式下降。从起始电压下降到V0 / e 所需的时间称为为时间常数τ, 一种方便的脉冲时间表达方式。 右，方波脉冲。放电到样品后截断电容器脉冲可产生方波脉冲。脉冲时间为细胞被放电的时间。所有方波设备都会产生细微的电压下降。这种电压下降称为脉冲下垂，并以起始电压的百分比计量。 PulseTrac 电路和电弧保护提供可靠的、可重复的和安全的性能Bio-Rad 独创的专利微处理器控制电路能为任何规程提供可重复的结果，无论使用何种介质，它所产生的电压值可在全世界范围内测试。PulseTrac 电路和电弧保护： ●确保电压准确地传送到电击杯 ●把CE 模块中的低压电容器精确度从20% 提升到10% ●便于电容器再校正，以保持精确的脉冲指标，修正电容器随着时间而发生的偏移 ●提供脉冲前样品电阻测量 ●当脉冲或电路中断时，可安全地自动放电降 ●低电弧危险，保护设备及样品 用户友好界面，便于编程和控制 主单元上的图形界面可控制包括任何连接的附属模块在内的所有功能。界面由一个通过功能键和字母数字键盘 操作的屏幕组成。根据屏幕提示进行简便而直观的编程。屏幕用于编程和显示储存与设定的程序、运行参数以及波型。规程包括： ●人工编程以输入或编辑方波或指数衰变脉冲的所有参数 ●辅助编程需要的时间常数 ●预设有适合常用细菌、真菌和哺乳动物细胞株的优化程序

不可逆电穿孔治疗前列腺癌的研究进展

不可逆电穿孔治疗前列腺癌的研究进展 摘要：前列腺癌是常见的男性恶性肿瘤，其治疗方式有手术、放疗、化疗、内 分泌治疗及局部微创介入治疗等。传统前列腺癌根治术和放疗对癌症的控制效果 较好，但会引起侧支组织损伤且有较强的毒副作用；而局部热消融的精度不高， 易导致消融不完全。不可逆电穿孔作为一项先进的介入技术，具有消融范围精准 和消融效果良好的优点，目前已有多个国家开展相关临床研究。本文就不可逆电 穿孔消融的原理及其在前列腺癌治疗中的主要进展进行综述。 关键词：前列腺癌；不可逆电穿孔；介入治疗 前列腺癌（Prostate Cancer，PCa）是最常见的男性恶性肿瘤之一，其发病率 随着年龄的增长而显著增加。在中国，PCa是继肺癌后，男性死亡率最高的癌症。PCa主要的治疗方法有外科治疗、放射治疗、化学治疗、内分泌治疗及局部微创 介入治疗。前列腺近端有许多重要结构，如直肠、尿道、神经血管束等，PCa根 治术作为常规治疗方法，易对上述结构造成破坏，导致严重的并发症。以能量效 应为基础的微创介入疗法，包括冷冻消融、射频消融和微波消融等，为避免并发症，靠近血管及邻近正常组织器官的肿瘤常常消融不完全。 不可逆电穿孔（Irreversible Electroporation，IRE）是一种新的非能量消融方式，它利用强有力的电脉冲，在细胞膜上产生不可逆的穿孔，使得细胞内外物质自由 流动，从而导致细胞内物质紊乱，进而导致细胞凋亡。与热消融相比，IRE的机 制是不受能量影响的，这使得在热敏感结构附近的肿瘤也可消融完全。优化后的 脉冲参数和电极布置使治疗期间的血管和神经得以保护，利于患者的功能恢复。 这些优点使IRE在临床中得以广泛应用。 1.临床研究 2015年，Ting等[1]第一次对IRE治疗PCa的结果进行研究，他们选取了32 个未经手术治疗的中等风险的PCa患者，使用3-6个电极以5mm以上的安全距 离排列消融肿瘤。随访调查并发症，术后6个月进行MRI检查、术后7个月进行 活检，并将治疗区域内的发现细分为内野、临近区域和外野。结果显示在6个月时，泌尿、肠道及性功能未明显下降。一般身心健康评分在术后6个月时未显著 下降，且在整个随访期间保持稳定。在肿瘤方面的随访活检中，16/21（76%）的 组织学标本上未见明显疾病，8/21（38%）的组织学标本上未见癌症。综上所述，对于中早期PCa患者，局灶性IRE治疗安全可靠、并发症发生率低。 2016年，Kaite等[2]对25名经IRE治疗的PCa患者进行回顾性分析。对患者 随访至少6个月，最终随访时间的中位数为10.9个月。2例发生3级并发症包括 附睾炎和尿路感染。14例发生2级及以下的并发症，主要包括血尿、尿路感染等。25例患者中，4例（16%）在术后6个月的随访活检中发现消融区肿瘤复发。术 前泌尿功能正常的患者，在术后6个月和12个月后分别有出现12%和6%的泌尿 功能异常，术后12个月时只有1名患者出现勃起功能障碍，2个病人（8%）出 现尿失禁。结果证明了IRE治疗局限性PCa是可行和安全的。 2016年，Massimo等[3]报告了一项关于不可逆电穿孔治疗局灶性PCa的前瞻 性研究，主要目的是确定病灶的副作用，次要目标包括确定特定领域的不良反应 概况、早期疾病控制率和三叉神经痛发生率。在研究过程中，16名患者完成了所 有的临床试验和12个月的随访。所有16名男性患者在术后12个月时均无漏尿。

电穿孔法转染人树突状细胞条件的优化

电穿孔法转染人树突状细胞条件的优化 (作者：___________ 单位： __________ 邮编：___________ ) 作者：单铁英苏安英唐军民 【摘要】目的：通过电穿孔法将带有增强型绿色荧光蛋白基因 (enhan ced gree n fluoresce nt protein EGFP )的真核表达载体plRES2-EGFP( IRES2 in ternal ribosome en trysite 2 内部核糖体 进入位点2)质粒导入未成熟树突状细胞( Immature Den dritic Cell,imDC)，探讨不同电穿孔条件对imDC电转染率和存活率的影响。方法：通过密度梯度离心法分离人外周血单核细胞，采用细胞因子体 外培养诱导其成为imDC在大肠杆菌中扩增plRES2-EGFP质粒，选择不同的电压、脉冲时间、细胞浓度、DNA剂量等。应用电穿孔仪将PIRES2-EGFP质粒导入未成熟树突状细胞，荧光显微镜下和光镜下分别计算绿色荧光阳性细胞数和总细胞数。0.4%锥虫蓝(trypan blue) 染色，计数电转染后细胞存活率。结果：当imDC浓度为5X 106/mL 与6卩g DNA质粒混合，设定电转染仪电压为300 V、脉冲时间为500 卩s时,其电转染率到最高，细胞存活率最高，转染后24 h明显表达，48

h后表达最强。结论：在适当的电压、脉冲时间下，选择适当的细胞浓度、DNA剂量，在转染后的一定时间范围内，电穿孔法转染imDC 可使目的基因获得较高的转染率，且细胞死亡最少。电转染提供了外 源基因转染imDC的可行技术。 【关键词】电穿孔转染绿色荧光蛋白树突状细胞 Abstract Objective:plRES2-EGFP was successfully tran sfacted into immature dendritic cells by means of electroporation in order to investigate the effect of electransfection efficiency and survival rate of immature dendritic cells in different con diti on s.Methods:M ono cytes obta ined form huma n peripheral blood by density guadient centrifugation are induced into imDCs in the presenee of cytokines in vitro.plRES2-EGFP was amplified in E.coli.imDCs were tran sferred with pIRES2-EGFP by means of electroporati on with differe nt electric voltages,times of impulse,cell concen trati onsand the doses of DNA.Numbers of green fluorescence positive cells and the total cell number were coun ted respectively un der fluoresce nt microscope and visible light microscope.the cells were stained with 0.4% trypan blue,electransfection efficiency and the cell survival rate were counted.Results:Electransfection efficiency was in creased to the highest value whe n imDCs with the

细胞电转染

细胞电转染 电转的简介 (1) 电穿孔转染的基本原理及过程 (1) 电穿孔转染条件的选择 (1) 1 电参数 (1) 2脉冲时程 (2) 3 脉冲次数 (2) 4 细胞因素 (3) 5 质粒因素 (3) 6 温度 (4) 7．缓冲液以及培养液的成 (4) 仪器常用键区介绍 (5) Neon TM电转染一般流程 (7) 电转的简介 电穿孔转染，作为物理方法的一种，出现于20世纪80年代中。这种方法不仅能够将DNA、RNA，还能将抗体、酶及其他生物活性分子转入细菌、酵母、动物细胞和植物细胞。它是一种高效、简便的基因转移系统，具有其它转移方法无可比拟的优越性，如操作简便、快捷，可重复性强，臻染率高，适用谱广等。尤其对目前一般认为难转染的悬浮培养细胞也能获得较高的转染。 电穿孔转染的基本原理及过程 电穿孔法是通过电场作用于细胞几微秒到几毫秒之后，在细胞膜上暂时形成小孔或开口，把大分子如DNA等导入细胞并最终进入胞核的技术。其过程简述如下：首先在电击过程中，细胞膜上出现穿孔，质粒在电泳力的作用下与细胞膜接触，并与细胞膜上电穿孔的区域形成一种可转移的复合物。再次电击后，质粒脱离复合物并扩散至胞质内，开始瞬转；同时小部分质粒进入核内与染色体整合，开始稳转。一旦DNA扩散进入细胞，细胞膜上的小孔可 自动重新闭合。 电穿孔转染条件的选择 1 电参数 电场强度E与电压V有以下关系：V=E×d，在电穿孔实验中，d为两电极之间的距离，是一个定值，故本文所指的电场强度的选择即电压的选择。对于动物细胞

来说，电场强度通常选择1～1000V／cm，并遵循低电场长时程的原则。电场强度的大小对DNA摄入量的影响主要有：在阈电场强度Ec (Ec=Uc／1．5R)以下无R)以下无DNA摄入；适中的场强下DNA的摄入呈电场依赖型，随场强的升高而增大；高场强下，DNA的摄入进入平台期，与电场的大小无关。电场强度的大小对细胞存活率的影响主要有：在阈电场强度以下存活率无变化；在适中的场强下，存活率呈电场依赖型，随场强的升高而下降；存活率在高场强下降为0。因此，要保证较高的转染效率，必须综合考虑DNA摄入量以及存活率两个方面。不同的细胞系具有不同的最佳场强值，其确定方式除了实验直接测定比较不同场强下(对悬浮细胞来说，取1～3倍的阈电场强度，对贴壁细胞来说可升至5倍)转染率的高低之外，还可以采取较为简便的间接法。文献显示存活率在50％左右的电场参数为较理想的参数，故可间接测定存活率来确定最佳场强值。 2脉冲时程 时间常数为电容与电阻的乘积，是设定的电压呈指数衰减到37％的时间。电脉冲的时间长短对电转染效率有较大的影响，太长、太短都会使转染效率下降。最佳时间的确定主要取决于细胞的大小，细胞越大，穿透胞膜所需的脉冲时程越长。电转染真核细胞的脉冲时程一般控制在ms级(不小于1 ms)。电脉冲之前，DNA和细胞随机分布于电极之间；电脉冲早期，DNA和细胞向阳极运动；电脉冲后期DNA分子撞向细胞阴极面或末端，并且插入细胞外膜或者进一步进入细胞膜间隙，随后在孵育期间，DNA通过内膜渗透进入胞质。因此电压脉冲有双重效应，即驱使DNA快速向阳极运动以及向受体细胞表面渗透。电脉冲的时间太短，则不能使DNA分子有效进入细胞；而电脉冲时间过长，细胞局部过热可导致不可恢复的损伤，同时电泳所引起的细胞内外的物质进出(如Na+／K+浓度差的破坏)都可引起细胞存活率下降，转染效率的提高被抵消。真核细胞基因转染一般遵循低电场长时程的原则。长时程(一般20～60 ms)可使细胞上的穿孔更大，开放时间更长。此外，适当地延长时程也能降低电穿孔的阈电场值，加大电场依赖性吸收的斜率，提高平台期电场值的放大作用。 3 脉冲次数 脉冲次数的选择一般为1～10次，实验证明对于大多数细胞系较理想的脉冲次数为3～4次。第1次脉冲后，外加的电场开始在细胞膜上穿孔，第2 次脉冲后，

电穿孔系统

电穿孔系统 BJ5183电转感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。BJ5183为重组腺病毒质粒构建专用菌株，能够表达供pAdEasy骨架质粒和pAdEasy穿梭质粒进行同源重组的所有组分。pUC19质粒检测感受态细胞的转化。 1.电极间距为0.1cm的电转杯（Gene Pulser?/MicroPulser? electroporation cuvettes）插入碎冰中，压实冰面，冰中静置5分钟，使电转杯充分降温。（电转杯重复使用方法：每次用完后，用大量的自来水冲洗干净去掉菌液和DNA，用蒸馏水洗3遍，将其泡在75%乙醇中30分钟，取出杯子，沥干液体，放在超净台中，使乙醇充分挥发，盖上盖子放干燥地方备用）； 2.取-70℃保存的感受态细胞插入冰中，待细胞刚化冻后，加入质粒DNA或连 接产物（洗脱或溶解质粒的溶液中离子不能太高，或用双蒸水稀释，对照pUC19可以用无菌水稀释到10pg/μl），用手指拨打管底轻轻混匀，立即插入冰中，在超净台中用无菌吸头将细胞/DNA混合物快速转移到电击杯中，避免产生气泡，确保细胞沉到杯底，盖上杯盖，空管保留待用。 3.启动电转仪，设置电击参数：2.0kV，200Ω，25μF（BTX ECM 630或Bio-Rad GenePulser）。用纸巾擦掉电转杯外部的水分，将电转杯放入电转槽中进行电击。完成后，将电转杯插入冰中，加入950μl无抗生素的SOC或LB培养基，并将液体转移到原来保留的感受态空管中，37℃，150-250rpm振荡培养1小时。 4.取100-200μl左右的菌液或稀释后的菌液，涂布于含相应抗生素的LB平板上， 倒置放于37℃培养箱培养12-18小时。 注意事项： 1.电转杯必须预冷。感受态细胞应该在冰水浴中化冻，加入DNA后应轻柔 混匀，加入DNA的体积小于细胞体积的1/10。 2.一旦DNA加入到细胞中，电击操作应该立即进行。 3.DNA 应该溶解在水或TE中，连接酶的存在会降低转化效率，必要时需 纯化连接产物。 4.电击时，电转杯中的气泡和含高浓度盐离子的DNA或转化产物会导致电 弧现象的发生。

电转染标准步骤

电转染标准步骤 1.清洗电转杯，将电转杯置于75%酒精中浸泡2小时，然后在紫外灯下照射后即可使用。 2.电穿孔前一天，以合适密度传代细胞，使细胞在转染前出于对数生长期。对于原代培养细胞，一般培养2-3天后，细胞单层融合度可以达到70-80%，即可开始试验。 3.PBS洗细胞2次后，胰酶消化细胞2min，待细胞变圆后，用完全培养基终止消化。 4.轻轻吹下细胞成单细胞悬液后，1200rpm室温离心5min。 5.完全弃去上清，根据细胞数量，加入适量的电转缓冲液重悬细胞（一般为0.5-0.6ml左右），并上下吹打均匀。 6.加入适量相应浓度的待转染核酸至相应的终浓度（质粒为20ug/ml，SiRNA的终浓度为100nM），上下吹打均匀。若以0.5ml计算，所需质粒为0.5×20=10ug。 7.将含有相应浓度核酸的细胞悬液转移入相应规格的电转杯中，按照预定条件设置参数，进行电击操作。（不同细胞电转前，需要进行预试验摸索电转的最佳条件，既要保证较高的转染效率，又要保证较高的细胞存活率。经过实践摸索后得出，相应的最佳参数为：质粒：250V，10ms，1（最多2），0，4mm cuvette；SiRNA: 250V，5ms，1（最多2），0，4mm cuvette。 8.电击完成后，将电转杯置于恒温培养箱中8-12min，以使核酸充分进入细胞。 9.将电击杯从恒温培养箱中取出，接种细胞悬液于预热的培养基中，上下吹打均匀后，置于培养箱中正常培养。 10.正常培养4h，待细胞贴壁后，给细胞换新鲜的完全培养基，以去除上层的死细胞。 11.培养24h后，即可进行细胞转染效率的检测或是进行细胞的实验处理。

电穿孔美容仪使用说明

电穿孔美容仪使用说明 卡酷尚电穿孔（EMS）美容仪使用说明： 1.第一次使用，需要充电 将电源插头接插连接充电器插孔内，电源插头另一端接到外接电源上，充电座电源显示灯亮蓝光，表示电源插通。再将主机插通充电座插孔内，充电指示灯将会亮红灯，充电饱和后，充电指示灯会亮绿灯，每次充电时间约为4小时。 2.清洁皮肤后，拍上精华液 3.拿起充电好的主机，按下开关按钮，彩光灯盘的五颗粉光亮，电流强度为默认档1档。 4.根据您的需要调节电流强弱，电流指示档1-4档，对应的电流强度是从低至高，数字越大，电流强度越高。 5.电流强弱选择方式 第1次按开关，电流强弱默认1档； 第2次按开关，电流强弱跳至2档； 第3次按开关，电流强弱跳至3档； 第4次按开关，电流强弱跳至4档； 第5次按开关，机器进入关机状态。 6.操作时由下至上，由内至外，在皮肤上提拉状移动，移动过程中皮肤会微微发热，EMS电流可以刺激肌肉运动，肌肉运动产生热量，温度约为40度左右，需配合美容液一起使用，正常每周两次为宜。 卡酷尚电穿孔美容仪技术参数 卡酷尚电穿孔美容仪注意事项 1.使用前请阅读说明书中《安全注意事项》，然后再正确使用。

2.请按操作顺序使用机器。 3.请不要自行拆机或改造，修理请咨询修理店。 4.请不要用于说明书以外的用途。 5.请不要在日晒下、火盆旁、浴室灯高温高湿的地方使用或放置。 6.不要放在较热的电器旁边，以免发生火灾、触电等事故。 7.充电器不要放在湿的情况下使用，以免短路、触电或起火。 8.请不要让小孩或身体活动不自由的人使用，未成年人使用时需要有成年人陪同指导。 警告： 异常发热时，请立即停止使用，以免引起破损或者着火。 请不要摔掉或撞击主机，以免引起故障。 使用中，要不断补充精华，以免皮肤干燥。 电源线破损时，请不要使用，以免起火。 以下人群请不要使用：心脏病人、发高烧患者、有传染病者、有恶性肿瘤者、有伤口者、急性病患者、高低血压患者、起搏器植入体内者、人工心肺者、正使用医用电器者、皮肤病患者、孕妇哺乳期、过度晒伤的人、特别敏感的人、血管扩张者、正在住院的人

电穿孔转染质粒DNA

质粒的构建： 1. 酶切反应 按照1ugDNA需1-10u内切酶的用量，在反应体系中加入相应的10×缓冲液，内切酶的体积不得大于总体积的十分之一，ddH2O补足体系，如需长时间消化，还需加入适量的BSA 已稳定内切酶活性。 2. DNA片断的回收 欲回收的DNA片断经琼脂糖凝胶电泳分离后，切下所需片断所在的凝胶（胶的体积尽可能小），加入3倍体积的BufferQX1,及适量的QIAXⅡ(Glassmilk),55℃10分钟，每隔2分钟涡旋1次，待凝胶完全溶解，12000转离心1分钟，BufferQX1洗涤沉淀1次以消除剩余凝胶.。再用BufferB洗涤沉淀2次，将沉淀晾干，加入适当体积的ddH2O,离心后收集上清，琼脂糖凝胶电泳确定回收效率。 3. DNA片断3凹端的补平 于Eppendorf管中依次加入DNA0.2-5ug,2mMdNTP2ul,人以一种酶切缓冲液（10×）2ul,加水至19ul。然后加入1-5单位Klenow酶，混匀后室温下反应15分钟。待补平反应结束后，于65℃水浴20分钟使Klenow酶失活，电泳定量后即可用于连接反应或-20℃保存备用。 4. DNA片断3凸端的补平 于Eppendorf管中依次加入DNA0.2-5ug,2mMdNTP2ul,人以一种酶切缓冲液（10×）2ul。,加水至19ul。然后加入1-2单位T4噬菌体DNA聚合酶，12℃温育15分钟，于75℃加热10分钟，使T4噬菌体DNA聚合酶灭活。 5. 载体的脱磷酸化： 载体质粒经内切酶酶切后可直接进行脱磷酸化处理。40ul的酶切反应体系，景点永建车酶切完全后可加入10×CIAP（牛小肠碱性磷酸酶）缓冲液5ul,水4ul和适量CIAP进行脱磷酸化反应。 CIAP的用量依载体5端磷酸的摩尔数及末端性质而定，对于5突出的末端，每100pmol 5末端磷酸需1单位CIAP，对于5凹端或平末端，每2pmol 5端末端磷酸需1单位CIAP,一般2ug 5kb的线性化质粒DNA约翰1.4pmol 5端磷酸。 反应条件：1）5突出末端：加入CIAP后于37℃反应30分钟，再加另一小份CIAP(加入量依DNA量而定)，继续反应30分钟。2）5凹或平末端：加入CIAP后于37℃反应15分钟，56℃反应15分钟，再加另一小份CIAP(加入量依DNA量而定)，又于37℃反应15分钟，56℃反应15分钟。

电穿孔法转化大肠杆菌TG1的条件优化

药　物　生　物　技　术 Pharmaceutical Biotechnology　2001,8(3):143～146 电穿孔法转化大肠杆菌TG1的条件优化Ξ 李　南,凌世淦2,吴梧桐1 (11中国药科大学生物制药学院,南京210009;21军事医学科学院基础医学研究所分子病毒学实验室,北京100850) 摘　要　研究了质粒pFab74X经电穿孔转化大肠杆菌TG1菌株的影响因素,并优化其转化条件。电场强度和脉冲时间的影响较为复杂,两者适当组合才可获得高转化效率。此外,采用对数生长早期的细菌,提高细菌浓度和降低筛选用氨苄青霉素的浓度均可提高转化效率。 关键词　电穿孔;转化效率;大肠杆菌TG1 中图分类号:Q68,Q936　文献标识码:A 文章编号:100528915(2001)0320143204 构建cDNA文库或基因文库时,转化效率高低是决定其多样性的关键因素之一。但常用的磷酸钙及原生质体等转化法转化效率均较低,批间差异较大,转化后再生时间长。电穿孔法(E lec2 troporation)则较好的解决了这个难题,它是利用瞬间高压电脉冲作用于受体细胞,使细胞表面产生暂时性的孔隙,从而将DNA、RNA、蛋白质等多种生物分子或颗粒导入胞内的方法,也称为电转化法。由于电穿孔是一个物理过程,适用范围广,转化效率高,特别是针对易受溶酶体消化的生物分子[1]及没有合适遗传转化系统或转化效率低的细胞,效果显著。目前,电穿孔法已经广泛应用于生物学、医药学、食品学等各个领域,成为转化细胞的常用方法。 电穿孔法最早是应用于真核细胞。1982年, W ong和Neumann成功的用电穿孔法转化小鼠成纤维细胞[2],但效率不高。现在,由于技术改进,操作简便快速,转化效率高,已广泛应用于原核细胞外源生物分子的导入。但影响转化效率的因素众多,不同的电穿孔体系[3]、受体细胞[4]、外源生物分子[5],其最佳转化条件均有一定差异。因此要获得高转化效率必须寻找这些因素的最佳组合。本文探讨了电场强度、脉冲时间、细菌浓度、细菌生长周期及转化子筛选过程氨苄青霉素浓度对TG1细菌转化效率的影响,并优化转化条件,以便利用TG1菌株建立高度多样性的基因文库,促进基因工程药物的发展。1　材料与方法 111　材料与仪器 E1coli TG1supE hsdΔ5thiΔ(lac2proAB)F’[traD36proAB+lacI q lacZΔM15]和质粒pFab74X (613kb,Ap r),由军事医学科学院基础医学研究所分子病毒学实验室保存;蛋白胨和酵母提取物为Ox oid公司产品,MOPS购自北京鼎国生物工程公司,氨苄青霉素(简称Ap)和其余试剂为进口或国产分析纯;S B培养基(3%蛋白胨,2%酵母提取物,1%MOPS,014%葡萄糖,10mm ol/L MgCl2, pH710),S OB培养基(2%蛋白胨,015%酵母提取物,0105%NaCl,215mm ol/L K Cl,10mm ol/L MgCl2, pH710),S OB2A培养基(含100mg/L Ap的S OB培养基),S OC培养基(S OB培养基,加20mm ol/L葡萄糖),S OC2A培养基(含100mg/L Ap的S OC培养基);I N2101型基因脉冲导入仪(天津理工学院), Lambda2UV/VIS型光谱分析仪(美国Perkin2 E lmer公司)。 112　菌株制备 将270℃冻存的TG1菌种分别于S OB和S OB2 A琼脂平板上划线培养,验证其为Ap s。从S OB 平板上挑取单菌落,37℃于S B培养基中培养至OD600约为110。取培养物按1∶100的比例重接于S B培养基中,37℃培养至OD600约为016。培养物冰浴中放置30min后,在4℃以4000r/min离心 341 Ξ收稿日期:2001203212 基金项目:北京市自然科学基金资助,N o.7002031 作者简介:李南(1976年生),男,江苏南京人,中国药科大学硕士生,分子生物学,E2mail:s outh-lee@etang1com