里氏木霉的纤维素酶产生条件研究

里氏木霉的纤维素酶产生条件研究

作者：张加春;王权飞;余尊祥;慕跃林;张晓宗;黄遵锡

作者机构：云南师范大学生命科学系,昆明,650092;云南师范大学生命科学系,昆明,650092;云南师范大学生命科学系,昆明,650092;云南师范大学生命科学系,昆明,650092;云南师范大学生命科学系,昆明,650092;云南师范大学生命科学系,昆明,650092

来源：食品与发酵工业

ISSN：0253-990X

年：2000

卷：026

期：003

页码：21-23

页数：3

中图分类：TS2

正文语种：chi

关键词：里氏木霉;纤维素酶;滤纸酶活

摘要：从7株里氏木霉中筛选出1株纤维素酶高产菌Tr-G.通过对培养基中含水量,C:N,初始pH值,葡萄糖、尿素、KH2PO4的添加,培养时间,培养温度以及酶解条件进行优化,获得纤维素酶生产苗株Tr-G的最佳户酶条件为:稻草粉35g,麦麸15g,KH2PO40.25g,MgSO4·7H2O0.025g,(NH4)2SO41g,豆饼粉水解液7mL,葡萄糖0.5%,蒸馏水2.3倍,初始PH值5.0,最适酶解温度为60℃,于28℃培养6d,最大滤纸酶活达308m8G/g·h;尿素对酶活有明显的抑制作用.

绿色木霉

绿色木霉 木霉菌属于半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目，粘孢菌类，是一类普遍存在的真菌。 绿色木霉（Trichoderma viride）在自然界分布广泛，常腐生于木材、种子及植物残体上。绿色木霉能产生多种具有生物活性的酶系，如：纤维素酶、几丁质酶、木聚糖酶等。在植物病理生物防治中具有重要的作用 绿色木霉是所产纤维素酶活性最高的菌株之一，所产生的纤维素酶对作物有降解作用，效果非常好，绿色木霉又是一种资源丰富的拮抗微生物，在植物病理生物防治中具有重要的作用。具有保护和治疗双重功效，可有效防治土传性病害。 使用方法 可直接加入腐熟剂、有机肥料、生物菌剂等肥料中，在分解纤维、病理防治中有重要作用。 1.1 形态学特征木霉的菌落生长迅速，呈不定型棉絮状或致密丛束状，其表面的颜色多呈绿色。菌丝有隔分枝，厚垣孢子有或无。分生孢子梗是菌丝的短侧枝，侧枝上对称或互生分枝，形成二级和三级分枝，分枝角度为锐角或近于直角，在分枝末端形成瓶状小梗。分生孢子多为卵圆形，无色或绿色，簇生于小梗顶端。 1.2 生态学特性 1.2.1 生长发育的物理条件 1.2.1.1 温、湿度生长适温为20－28℃，在6℃或32℃仍生长良好，它是一种嗜温真菌，在37℃条件下能生长，但在48℃条件下不能生长；木霉的生长要求较高湿度，其营养生长的相对湿度要求92%以上，孢子的形成需要93%－95%，因而木霉在潮湿土壤中的生命力较干性土壤中强。 1.2.1.2 光照若光照以对数比例增强可以促进分生孢子的产生，有研究发现380nm和440nm波长的光诱导力最强，而254nm和1100nm以外波长的光不可能诱导繁殖体的产生。木霉经日光处理3min或经紫外线光处理10-30s诱导产孢的效果更好。 1.2.1.3 pH值和CO2木霉的最适生长pH值为5－5.5，在pH值为1.5或9.0的培养基上也可能生长，但酸性条件比碱性条件下的萌发率更高。CO2对木霉生长的影响取决于CO2的浓度和培养基的pH值，在碱性基质中，高浓度的CO2有利于木霉菌的生长。 1.2.2 营养条件 1.2.2.1 碳源木霉菌株能够利用多种有机物作为碳源，较理想的是单糖、双糖、多糖、嘌呤、嘧啶和氨基酸等。绿色木霉在富含碳水化合物的培养基上大量产生酸类，用葡萄糖或淀粉作为碳源，该菌产生60%－80%的柠檬酸（理论上推算）。 1.2.2.2 氮源在缓冲介质中，铵是木霉菌最易利用的氮源，其他氮源如氨基酸、尿素、硝酸盐、亚硝酸盐也能维持其正常生长。以天冬门素为氮源生长特别好，含氮量低，会促进孢子形成，对高浓度硝酸盐的负影响由于硫酸镁的存在可以得到补偿。 1.2.2.3 无机盐及微量元素无机盐对木霉的生长很重要，对绿色木霉来说，镁离子能促进其生长，铜离子能促进分生孢子色素形成，铁离子对孢子的形成也很重要。

食用菌木霉的危害症状及防治方法

食用菌木霉的危害症状及防治方法 木霉俗称绿霉。属于真菌门，半知菌亚门。在自然界中分布极广，对各种食用菌的致病力强，不仅危害菌丝体生长阶段，也危害食用菌子实体，它是生产中发生最普遍、危害性最严重的杂菌之一，不论制种还是栽培，也不论生料、熟料、发酵料、发菌期间均可发生，甚至在出菇阶段也有发生，个别品种如草菇的菌种在完成发菌后亦可发生该种杂菌，并且发生的温度范围也越来越广，不少地区的银耳、香菇，近年的平菇、鸡腿菇等生产中曾发生毁灭性的污染，木霉就是主要杂菌之一。 危害症状木霉的主要生物特征为其菌丝成熟期很短，往往在一周内即可达到生理成熟，然后即生出绿色霉层，即其孢子层。当基料被侵染后，菌丝阶段不易察觉，直到出现霉层时才能引起注意；起初只是点状或斑块状，当条件合适或食用菌菌丝不很健壮时，很快发展为片状，直至污染整个菌袋或料床，若不及时采取措施，菇棚内短时间即可成一片绿色，其孢子飞扬，周边棚墙上也将附着大量木霉孢子，给以后的生产留下严重隐患。 发生规律木霉主要生存在朽木、枯枝落叶、土壤、有机肥、植物残体上和空气中。许多栽培的老菇房，带菌的菇具和场所是主要的初侵染源，已发病所产生的分生孢子，可多次重复侵染更为频繁。木霉发病率的高低与环境条件的关系较大，木霉孢子在15-30`C下萌发

率较高，菌丝体在4-42`C的温度下均能生长，在25-30`C生长最快。孢子在空气相对湿度95%的条件下，萌发最快，相对湿度低于85%较难萌发。因此，在高温、高湿、通气不良和培养料呈偏酸性时，很容易滋生木霉。木霉侵染寄主后，与寄主争夺养分和空间，同时还分泌毒素杀伤、杀死寄主，把寄主的菌丝缠绕、切断。 防治措施（1）制种或熟料栽培拌料时按比例加入1：1000倍疣霉净，并严格灭菌，以彻底杀死其孢子。 （2）科学调配基料组分，使营养全面、均衡，以保证食用菌菌丝的健康和抗性，可对霉菌形成拮抗或抑制。实践证明，生产中按比例加入天天菇耳壮即可。 （3）发酵栽培时，加入疣霉净后，基料仍要发酵均匀，尽可能多的杀死或抑制其孢子。 （4）接种操作要严格、规范，不使霉菌孢子落于料中。研究发现，接种时，开启食用菌接种净化机5min后再进行操作，生产效果与常规甲醛熏蒸相仿，并且，杜绝了甲醛对人体的刺激，避免了甲醛残留的可能。 （5）菌种或菌袋发菌以及出菇期间，每5天左右对菇棚空闲处

木霉菌与植物病害的生物防治

木霉菌与植物病害的生物防治 摘要：木霉菌是重要的植物病害防治菌，广泛分布于自然界。木霉菌具有广泛的适应性，能够杀伤多种重要的植物病原菌，作用机制多种多样。除了从自然界分离筛选之外，木霉菌的诱变育种改良技术，原生质体融合技术以及基因操作技术已有效地应用于木霉菌的改造。木霉菌的大量生产技术以及菌剂的制备技术也有较大发展，已经有10多种商品化制剂。木霉菌的筛选技术是需要重视的研究领域，而其发展则离不开对生态学和作用机制的详细了解。木霉菌具有广阔的研究与应用前景。 关键词：木霉菌;；植物病害；生物防治 1前言 木霉菌(Trichoderma spp.) 属于半知菌类的丝孢纲，丛梗孢目，丛梗孢科，广泛存在于土壤、根围、叶围、种子和球茎等生态环境中1932年，Weindling发现木素木霉(Trichodermalignorum) 可以寄生于多种植物病原真菌，建议将该菌用于土传植物病害的生物防治，木霉菌生防研究工作从此开始。由于木霉菌的广泛适应性、广谱性及多机制性，一直是植病生防学家研究的重点对象。由于生物技术的发展，木霉菌已由单一地从自然界分离筛选达到有目的地利用生物技术进行改造以获得新型菌株的程度，如原生质体融合技术的引入已成功地研制出商品制剂F-Stop。截止到1997年，国内外已经登记的木霉菌制剂多达11种，其中包括哈茨木霉菌(Trichodermaharzianum)5个，多孢木霉菌(Trichodermapolysporum) 1个，绿色木霉菌(Trichodermaviride)2个，其他木霉菌(Trichoderma spp. ) 3个，多数用于植物土壤传播病害的防治，如Sclerotinia，Phytophthora，Rhizoctonia，Pythium，Fusarium，Verticillium等。 2木霉菌的分类 由于木霉菌株的形态特征复杂，又缺乏稳定性，木霉菌的种类鉴定长期处于混乱状态。直到1939年，木霉菌的种类鉴定或是依据Gilman的工作，或是各行其事，没有统一的鉴定标准。1939年，Bisby检查了大量的木霉菌分离物，没有发现稳定的鉴别特征可供参考，因此主张木霉菌(Trichoderma)是一个单种属(monotypicgenus)。他的意见得到许多真菌学家的认可，此后相当长一段时间内，凡是产生绿色孢子的木霉菌都定为绿色木霉(Trichodermaviride)。然而木霉属是

里氏木霉及其纤维素酶高产菌株的研究进展_覃玲灵

综述与专论 生物技术通报 BI OTEC HNOLOG Y BULLETI N 2011年第5期 里氏木霉及其纤维素酶高产菌株的研究进展 覃玲灵 何钢 陈介南 (中南林业科技大学生物环境科学与技术研究所,长沙410004) 摘 要: 随着纤维素在能源、材料及化工等领域的广泛开发和应用,里氏木霉作为一种重要的产纤维素酶工业用菌种,越来越受到人们的广泛关注。为了提高其酶活,人们做了大量的工作,获得了一些相当好的突变株。对里氏木霉及其突变株的基因组进行研究,有助于人们理解其高效产酶的机制,同时也有利于构建其基因工程菌。介绍里氏木霉T r ichoderma reesei 的背景及其部分高产纤维素酶突变株,并阐述近些年来对其突变株的基因组的研究进展。 关键词: 里氏木霉 纤维素酶 突变株 基因组 SNV Research Develop m ent of Trichoder ma reesei and Its Cell ulase Hyperproduction Strai ns Q in L i ng ling H e G ang Chen Jienan (Instit ute of B i o l og ic al an d Environ ment al Science&T echnology,Ce ntral South University of Forest ry and Tec hnology,Changsha 410004) Abstrac:t A s w i de l y deve lop m ent and utilization of ce llulose i n the fi e l d of energy ,m ate rials and chem istry i ndustry,T r ichoderma reesei has been caught m ore and m ore attenti on for its be i ng a k i nd of i m portant ce ll u l ase stra i n for i ndustry .Fo r enhanc i ng i ts cell u l ase product ,peop l e hav e done a lot of work on it ,and ob tained seve ra l cons i derably good mutant strai ns .T o learn the genom e o f T r ichoderma reesei and its mu tant strains is he l p f u l to us understand its syste m o f ce llulase hype rproduction ,also he l p f u l to people construct its g enet ic eng i neering stra i n i n the f uture .T h i s article i ntroduced t he background o f T richoderma reesei and part of its hyperce llulase product stra i ns ,a l so elabo rated the research deve l op m ent of its m utan t strains geno m e i n t he recent yea rs . K ey words : T richoderma reesei Cell u l ase M u tant stra i n G enom e SNV 收稿日期:2010 11 24 基金项目:国家林业局 948 项目(2006 4 123) 作者简介:覃玲灵,女,硕士研究生,研究方向:生物质能源;E m ai:l canaceili ng @163.co m 通讯作者:何钢,男,教授,从事生物技术教学和科研;E m a i :l hegong262@yahoo .co https://www.wendangku.net/doc/551621014.html, 1 背景 随着人口不断增长,以及现有的煤、天然气和石 油存储量的减少,发展新能源成为实现经济社会可持续发展的必经之路。以纤维素、半纤维素和木质素形式存在的生物质收集并且存储了大量太阳能,是一种重要的能源和物质资源[1] 。地球上最主要的生物质来自绿色植物,每年光合作用的生物质净产量约为1800亿t [2] 。生物质中含量最多的是纤维素,其由成百上千个葡萄糖分子聚合而成,是地球上存在最丰富的有机大分子,储量约为850亿t [3] ;其次是半纤维素,储量约为500亿;t 第三类是木质素,由结构复杂的含芳香环的有机分子聚合而成,约 占20%,即350亿t [4] 。这些生物质大多以农业和林业废弃物的形式存在,并且每年都在大量积累,这不仅会导致环境的恶化,而且会导致这种可利用资源的流失[1] 。因此如何充分利用这些资源成为迫 在眉睫的问题,在对生物质的开发利用中,一个重要瓶颈就是如何高效利用微生物进行酶催化水解将生物质降解为单糖[5] 。 自然界中能降解和利用纤维素的微生物种类很多,许多细菌可分解纤维素,而且产生的纤维素酶具有高度专一性,但是它们生长速度慢,需要厌氧的生长条件[6],这些都限制了其应用。真菌所产生的纤维素酶多是胞外酶,便于分离和提取,且

灵芝栽培中木霉的预防和治疗

灵芝栽培中木霉的预防和治疗 灵芝是一种名贵的中药材，近年来灵芝的生产发展很快，但在灵芝栽培中常因杂菌的污染造成不同程度的损失，其中绿色木霉是发生频率和危害程度最高的，在灵芝栽培的各个阶段均可发生。 灵芝是一种名贵的中药材，近年来灵芝的生产发展很快，但在灵芝栽培中常因杂菌的污染造成不同程度的损失，其中绿色木霉是发生频率和危害程度最高的，在灵芝栽培的各个阶段均可发生。绿色木霉广泛存在于自然界的各种有机物质和土壤中，还常以分生孢子的形式漂浮在空气中，它适应性强，特别是在营养丰富的基质上生长迅速，传播蔓延快，既可以和栽培的灵芝菌丝竞争养料，消耗养分，也可以分泌毒素破坏灵芝菌丝的细胞质，抑制灵芝菌丝的生长，严重影响着灵芝的产量和质量，是灵芝栽培中病害防治的重点。在近几年的栽培中我们采取了以预防为主、并辅助治疗的措施，取得了较好的效果。 1、选用抗杂性好、菌丝生长势强的灵芝品种。选用优质的灵芝品种是栽培成功的关键。抗病能力好、生长势强的品种不易被绿色木霉菌感染。 2、严格挑选栽培用种。所选菌种要求种性纯正，菌丝生活力强，菌丝洁白、浓密、健壮、菌龄适宜，防止菌种带入绿色木霉。 3、搞好栽培环境的清洁卫生。菇房内要清除菌渣、垃圾，彻底清洗栽培用架，并进行空间消毒，消灭杂菌隐匿场所，以减少传播媒介。搞好环境卫生对防止污染能起到事半功倍的效果。 4、严格选料。培养料要求新鲜、无霉变，用前要曝晒数天，培

养料配方要求合理，主料和辅料要充分拌匀，含水量控制在60%-70%左右，装量合适、松紧适度，装好后立即进行高压或常压灭菌，以防培养基的酸化。灭菌要求彻底。 5、接种中树立严格的无菌观念。由于空气中到处漂浮有绿色木霉的孢子，操作时不能因为肉眼看不见而麻痹大意，操作人员的双手、衣物和所用接种工具、材料须严格消毒，如选用接种室接种的操作人员应戴上帽子，以防头发上落有绿色木霉的孢子。接种动作要尽量快捷、熟练，防止接种过程中带入杂菌、杂菌孢子，对灭菌过程中破损的袋子用胶布封好，并在封口处用75%酒精消毒。 6、适当加大接种量，可使灵芝菌丝以绝对优势迅速占领地盘，减少杂菌的污染，起到以菇抑菌的作用。 7、保证培养室内具有适宜的小气候，把好菌丝培养关。控制25℃左右的温度、60%-70%的湿度，注意通风换气，严防高温高湿，创造灵芝菌丝生长的最适宜环境条件，促进灵芝菌丝快速生长，迅速占领整个料面。 8、认真抓好出芝阶段的培养管理工作。浙江一带灵芝栽培一般选在春季进行，出芝时正好是6、7月份的高温季节，子实体生长阶段由于需要较高的湿度，因此是防治绿色木霉污染的重要时期。灵芝原基长出后，要及时拔去棉塞或开袋，以免原基损坏而感染绿色木霉菌。做好保温保湿工作，同时加强通风和给予一定的光照，促使原基健康地长成子实体，子实体成熟后及时采摘。 9、加强早期防治。定期检查生长情况，一旦发现污染，应采取

木霉名录

木霉及其肉座菌有性阶段种类名录 1 Trichoderma aggressivum Samuels & Gams (侵占木霉) 1.1 Trichoderma aggressivum f.aggressivum Samuels & Gams (侵占木霉侵占 变种) 1.2 Trichoderma aggressivum f. europaeum Samuels & Gams (侵占木霉欧洲 变种) 2 Trichoderma arundinaceum Zafari, Fraf. & Sanuels (苇状木霉) 3 Trichoderma asperellum Samuels，Lieckfeldt & Nirenberg (棘孢木霉) 4 Trichoderma atroviride Karsten / Hypocrea atroviridis Dodd, Lieckfeldt et Samuels (深绿木霉/肉座菌) 5 Trichoderma aureoviride Rifai / Hypocrea aureoviridis Plowr. & Cooke (黄绿木霉/肉座菌) 6 Trichoderma austrokoningii Samuels & Druzhinina/Hypocrea austrokoningii Samuels & Druzhinina (澳洲康宁木霉/肉座菌) 7 Trichoderma brevicompactum Kraus, Kubicek & Gams (短密木霉) 8 Trichoderma candidum Chaverri & Samuels /Hypocrea candida Chaverri & Samuels (雪白木霉/肉座菌) 9 Trichoderma caribbaeum Samuels & Schroers (加勒比木霉) 9.1 Trichoderma caribbaeum var. aequatoriale Samuels & Evans (加勒比木霉 厄瓜多尔变种) 9.2 Trichoderma caribbaeum var. caribbaeum Samuels & Schroers (加勒比木 霉加勒比变种) 10 Trichoderma catoptron Chaverri & Samuels /Hypocrea catoptron Berk. & Broome (低头木霉/肉座菌) 11 Trichoderma ceraceum Chaverri & Samuels /Hypocrea ceracea Chaverri & Samuels (蜡座木霉/肉座菌) 12 Trichoderma ceramicum Chaverri＆Samuels /Hypocrea ceramica Ellis & Everh. (陶瓷木霉/肉座菌) 13 Trichoderma cerinum Bissett, Kubicek & Szakacs (蜡素木霉) 14 Trichoderma chlorosporum Chaverri & Samuels /Hypocrea chlorospora Berk. & Curtis (绿孢木霉/肉座菌) 15 Trichoderma chromospermum Chaverri & Samuels /Hypocrea chromosperma Curtis & Peck (色精木霉/肉座菌) 16 Trichoderma cinnamomeum Chaverri & Samuels /Hypocrea cinnamomea

绿色木霉对大豆等植物的危害及防治

重寄生菌木霉灭毒剂作为抗红豆尖孢镰刀菌和强雄腐霉的生物防治药剂以及大豆生长促进剂 文章信息 Article history: Received 18 May 2010 Received in revised form 23 July 2010 Accepted 2 August 2010 关键词: 木霉灭毒剂 大豆 生物防治药剂 红豆尖孢镰刀菌 强雄腐霉 生长促进剂 摘要: 木霉灭毒剂被证实能够有效地针对两种真菌病原体, 感染大豆的红豆尖孢镰刀菌和强雄腐霉进行生物防治.在体外进行的生物防治试验,木霉显示了试验病原真菌的重寄生现象和破坏性控制.这两种病原体显著影响发芽,强雄腐霉具有严重的影响(发芽率只有5%).大豆根系发育不良是由于感染和外加的负面影响在根瘤固氮以及植物的进一步发展阶段.在生物防治活性测定中,结果表明木霉菌生长促进大豆植物的生长.木霉强化嫩枝和根系的生长以及十二周后果实的产量.腐霉和镰刀菌感染的木霉治愈过的植株比病原体单独的高194%和141%.木霉治愈过的果实产量每株66而对照植株只有41.腐霉和镰刀菌感染过的木霉治愈植株果实产量分别为43和53他们比被病原体感染的分别高5倍和1.6倍. 1简介 大豆(毛豆属Merr. cv. Lotus,早期品种,加拿大魁北克省农业和农业食品参考中心)是最重要的农作物之一(Herridge et al., 2008; Prévost et al., 2010)以及植物蛋白和油的来源.大豆占全球豆类作物种植面积的一半和68%的产量以及修复16.4 Tg N/year,它代表了大于四分之三的种植面积施用氮肥(Herridge et al., 2008).真菌疾病是一个主要的获得高产商业大豆的障碍,普遍使用一些化学杀菌剂控制这些疾病.由于生物防治剂的出现化学杀菌剂的应用已被取代,因为出现了杀菌及耐药菌株以及公众对于健康和化学物质对环境的影响的关注.在过去的几十年里,几个潜在的生防微生物已被隔离,以及商业化和特点,因此植物病害生物防治已受到更多的关注(Shali et al., 2010).木霉被认为是现在的生防和促生长剂对于许多的作物来说(V erma et al., 2007; Bai et al., 2008; Savazzini et al., 2009).病原体,寄生菌和抗真菌化合物的竞争中最重要的是生防机制(V erma et al., 2007; Savazzini et al., 2009).木霉种群可以比较容易的生长在不同的土壤类型,可以继续在检测水平持续几个月.木霉灭毒剂(被印度理工学院分离获得,印度新德里)是对土传植物病原微生物制剂,他可以轻松地分散在植物根周围以及帮助植物生长(V erma et al.,2007). 镰刀菌属和腐霉属,是两种真菌病原体能够严重感染大豆从而影响大豆的从萌发生长到各生长阶段.腐霉属,感染常见于玉米和大豆,造成两种作物的猝倒疾病.这种损害是由腐霉引起的对于种植者能够带来重大的经济损失. (Zhang and Y ang, 2000).镰刀菌如茄病镰刀菌感染大豆幼苗根和叶症状(坏死,枯黄,落叶等)通常花开前后略有下降.该菌株可减少严重感染早期,种子和荚果的减产. (Luo et al., 1999).强雄腐霉3047(收集于AAFC Ottawa collection, Ontario)

木霉菌

木霉菌( Trichoderma spp)是食用菌生产上最重要的病菌之一,对食用菌危害极大,每年都造成很大的损失。 木霉又称绿霉，为食用菌主要竞争性杂菌，分布广，对多种食用菌子实体寄生力也很强。蘑菇、香菇、草菇、平菇、风尾菇、金针菇、猴头菇、木耳和银耳等几乎所有食用菌在制种和栽培过程中都受其侵染危害，发生轻时局部范围少出菇或出现斑点菇，重时导致整批菌种报废或整床培养料毁坏。 1、症状识别培养料染菌后初期产生白色纤细致密菌丝，逐渐形成无定形菌落，以后从菌落中心到边缘逐渐产生分生孢子，使菌落由浅绿变成深绿色霉层。通常菌落扩展很快，特别在高温高湿条件下，几天内木霉菌落可遍布整个料面，毫无收获。 2、病原及发病规律危害食用菌的木霉均属半知菌木霉菌真菌，常见种为绿色木霉和康氏木霉。绿色木霉菌落外观深绿色或蓝绿色。康氏木霉菌落外观浅绿、黄绿或绿色。病菌分布很广，栽培菇房、带菌的工具和废料等场所是病菌主要初侵染源。以分生孢子通过气流、水滴和昆虫等传播扩散。高温高湿和偏酸环境适宜病菌生长繁殖。菌丝生长温度4-42℃，25-30℃生长最快，孢子萌发温度10-35℃，15-30℃萌发率最高。25-27℃菌落由白变绿只需4-5昼夜。高湿对菌丝生长和孢子萌发有利，孢子萌发要求相对湿度95%以上，但在较干燥的坏境中也能生长。病菌喜微酸条件，pH值4-5生长最好。通常接种时消毒不严格，棉塞潮湿，生产环境不干净易染病，菌丝愈合、定植或采菇期菇柄基部伤口多易受感染。 3、防治方法 ①注意接种箱、接种室、栽培菇房及有关用具的彻底灭菌，保持生产坏境洁净。防止消毒施用甲醛过最，以免甲醛变成甲酸形成酸性环境。 ②根据病菌和食用菌对温度的不同要求，尽可能利用不适宜木霉生长环境条件，先让生产食用菌发菌良好，形成竟争优势。如香菇菌丝25℃生长最好，16℃时菌丝生长速度大于木霉菌丝，25℃以上木霉菌丝大于香菇。在香菇接种后先l6℃培养，待菌丝占满料面后，逐渐提升到25℃，避免木霉侵染。 ③尽量选择低温干燥季节栽培，菌丝愈合价段覆盖塑料膜，注意适当通风降湿，后期揭膜不宜过早，以防病菌侵染。生产菇房空气湿度控制在85%左石，保持清洁卫生和通风良好，避免或减少侵染。高温潮湿或多雨季节加强菇房通风排湿，勤翻堆。播种后或生产期间发现木霉污染，立即挖除，同时注意把死菇、老根清除干净，防止病菌菌丝扩散蔓延。 ④适时进行药剂防治，菌种袋或菌种块局部发生木霉时，可用1%克霉灵或0.5%多丰农，或 0.1%施保功或0.1%扑海因或0.2%食用菌专用万力，或2%甲醛溶液注射或涂抹，也可用10%漂白粉溶液局部涂抹。菇床培养料发生木霉时，可直接在污染料面上撒薄层石灰粉，控制病菌扩展蔓延。 ⑤必要时用克霉灵、多丰农、施保功或食用菌专用万力拌料防治。

有关绿色木霉的介绍

绿色木霉 一、木霉菌概述： 木霉菌属真菌门，半知菌亚门，丝孢纲，丝孢目，丛梗孢科，木霉属，广泛存在于不 同环境条件下的土壤中。自19世纪中叶，人类对木霉菌已有了初步的认识，但直到上世纪60年代木霉菌的分类地位才得以确定。大多数木霉菌可产生多种对植物病原真菌、细菌及昆虫具有拮抗作用的生物活性物质，比如细胞壁降解酶类和次级代谢产物，并 能提高农作物的抗逆性，促进植物生长和提高农产品产量，因此被广泛用于生物防治、生物肥料及土壤改良剂。由于化学农药对环境的负面影响较为严重，所以对环境较为 友好的生物农药木霉菌受到了广泛的关注。 绿色木霉是所产纤维素酶活性最高的菌株之一，所产生的纤维素酶对作物有降解作用，效果非常好，绿色木霉又是一种资源丰富的拮抗微生物，在植物病理生物防治中具有 重要的作用。具有保护和治疗双重功效，可有效防治土传性病害。绿色木霉菌剂防治 蔬菜根结线虫病的生物农药，还可以防治黄瓜等葫芦科、番茄等茄科蔬菜的根结线虫 病害。绿色木霉菌剂生物农药通过产生抗生素、营养竞争、微寄生、细胞壁分解酵素、以及诱导植物产生抗性等机制。可直接加入腐熟剂、有机肥料、生物菌剂等肥料中， 在分解纤维、病理防治中有重要作用。 二、木霉菌特点： 在防治灰霉病上，主要有以下几个防治特点： 1.拮抗作用：木霉菌通过产生小分子的抗生素和大分子的抗菌蛋白或胞壁降解酶类来 抑制病原菌的生长、繁殖和侵染。木霉菌在抗生和菌寄生中,可产生几丁质酶、β21 ,3 葡聚糖酶、纤维素酶和蛋白酶来分解植物病原真菌的细胞壁或分泌葡萄糖苷酶等胞外 酶来降解病原菌产生的抗生毒素。同时，木霉菌还分泌抗菌蛋白或裂解酶来抑制植物 病原真菌的侵染。 2.竞争作用：木霉菌可以通过快速生长和繁殖而夺取水分和养分、占有空间、消耗氧 气等,以至削弱和排除同一生境中的灰霉病病原物。 3.重寄生作用:研究发现木霉菌会在特定环境里形成腐霉对灰霉病菌具有重寄生作用,它进入寄主菌丝后形成大量的分枝和有性结构,因而能抑制葡萄灰霉病症状的出现。 4.诱导抗性:木霉菌可以诱导寄主植物产生防御反应,不仅能直接抑制灰葡萄孢的生长和繁殖,而且能诱导作物产生自我防御系统获得抗病性。 5.促生作用:经实验人员发现，木霉菌在使用过程中，不仅能控制灰霉病的发生,而且能增加种子的萌发率、根和苗的长度以及植株的活力。

里氏木霉原生质体的制备及转化

里氏木霉原生质体的制备及转化 摘要本实验通过将含潮霉素B抗性标记的质粒pAN7-1转化至里氏木酶原生质体中，在含100ug/ml潮霉素B的PDA平板上筛选转化子。并予以验证，结果表明，在1kb处有潮霉素抗性基因组，其中浓度为107个/ml的转化子效果最好。 关键词里氏木酶原生质制备转化 前言纤维素是自然界提供给人类的最宝贵的财富，植物每年通过光合作用产生数千亿吨的纤维素，但目前只有一小部分用于纺织、造纸、建筑和饲料等方面。木霉属是迄今被认为纤维素酶成分最全面，分解天然纤维素活力最高的一类菌。在育种方面利用高能电子、紫外线、亚硝基胍处理和原生质体融合等方法，使酶的活力得到很大的提高。本试验对里氏木霉原生质体的制备及转化进行了研究,为进一步的育种工作奠定基础。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 菌株及质粒来源 里氏木霉QM9414和质粒pAN7-1由深圳大学生命科学学院S402实验室刘刚老师提供。 1.1.2试剂及培养基的配制 1.1. 2.1 Mandels 营养盐浓缩液配制(NH4)2SO4 14 g，尿素 3 g，KH2PO420 g，CaCl2?2H2O 4 g，MgSO4?7H2O 3 g，ddH2O 定容至1L 1.1. 2.2 Mandels 微量元素浓缩液配制 FeSO4?7H2O 5 g，ZnSO4?7H2O 1.7 g，CoCl2?6H2O 23.7 g，MnSO4?H2O 1.6 g，ddH2O 定容至1L 1.1. 2.3 1 M柠檬酸缓冲液配制 柠檬酸210 g，NaOH（纯度96 %）78 g，ddH2O 750 ml，冷却后定容至1L 1.1. 2.4 60％的PEG4000 50 mM CaCl2，10 mM Tris·Cl（pH 7.5），60 g PEG4000加水定容到100 ml 1M CaCl25ml，1M Tris·Cl（pH 7.5）1ml，PEG4000 60g，ddH2O定容至100 ml 1.1. 2.5 STC 山梨醇218.6g（所需浓度为1.2 M），1M Tris·Cl（pH 7.5）10ml（所需浓度为10 mM），1M CaCl2 50ml（所需浓度为50 mM），ddH2O 定容至1L 1.1. 2.6 PDA培养基 去皮土豆200g，葡萄糖20g，琼脂(Agar) 15g，ddH2O定容至1L 其中20 %土豆浸出液制作方法如下：将土豆去皮切碎，每20 g土豆加水100 ml，置电炉上煮20分钟，用纱布过滤，定容。筛选里氏木霉转化子时加入终浓度为100 μg/ml潮霉素。 1.1. 2.7 里氏木霉种子培养基 培养里氏木霉转化子时加入终浓度为100 μg/ml潮霉素。Mandels营养液浓缩液100 ml，Mandels微量元素浓缩液1 ml，1 M 的柠檬酸缓冲液（pH 4.5）50 ml，吐温80 2 ml，蛋白胨1g，ddH2O定容至900 ml，D-葡萄糖（单灭后加入）20g溶于100 ml ddH2O 1.1.2.8 原生质体再生培养基 用于里氏木霉原生质体再生培养，为含 有STC的里氏木霉种子培养基。 1.2M STC 500 ml，Mandels营养液浓缩液100 ml，Mandels微量元素浓缩液 1 ml，1 M的柠檬酸缓冲液（pH 4.5）50 ml，吐温80 2 ml，蛋白胨1g，ddH2O定容至900 ml，D-葡萄糖（单灭后加入）20g溶于100 ml ddH2O 1.1. 2.9 酶解液 称取100mg溶壁酶（Sigma）溶于已灭

木霉对土传病害的生防机制及其应用前景

木霉对土传病害的生防机制及其应用前景 【摘要】文章从竞争作用、重寄生作用、抗生作用、诱导抗性等四个方面对木霉防治土传病原菌的作用机制进行了概述,并对其应用前景进行了展望。 【关键词】木霉土传病害生防机制应用前景 近年来随着温室蔬菜栽培面积的不断扩大,保护地栽培已经成为设施农业发展的新特点,并产生了很好的经济效益,但由于保护地多年连作的原因,为土传病原菌提供了赖以生存的寄主和适宜的繁殖环境。枯萎病、根腐病、青枯病、根结线虫病等都是常见的土传病害,严重制约了高效农业的发展。土传病害可以通过采用喷施农药的手段进行防控,但农药的使用与当前绿色、环保的的大主题相悖,因此,生物防治则表现出了极大的优势。木霉菌就是一类普遍存在于土壤以及植物残体等环境中的生防益菌。它可以拮抗两种或两种以上的病原菌,为了使其发挥更好的效果,我们必须了解木霉拮抗真菌作用的机理[1],本文从竞争作用、重寄生作用、抗生作用、诱导抗性等多方面总结了木霉防治土传病原菌的作用机制,以求达到木霉菌的最佳生防效果,并对其应用前景进行展望。 1.木霉的生防机制 1.1 竞争作用竞争作用参与的双方是生防菌株和病原菌,他们主要是争夺营养和生长空间。木霉菌较病原菌对环境的适应性强,且生命力顽强,生长速度更快, 能够快速抢占生长的空间,将植物表面或侵入点附近低浓度营养物质作为起点,吸收营养,从而抢占病原菌的入侵位点[2],将病原菌的生长控制在很小的范围内。竞争作用机制在木霉菌拮抗植物根际的病原菌的作用较明显,对于已经有病害潜伏的植物根系,如果施用木霉的孢子悬浮液,一段时间后会发现木霉分布满根系的表面;相对地,不喷施木霉的根系,一段时间后,它的根系则布满了病原菌

绿色木霉在肥料中的作用以及使用方法

一、木霉菌概述：木霉菌属真菌门，半知菌亚门，丝孢纲，丝孢目，丛梗孢科，木霉属，广泛存在于不同环境条件下的土壤中。自19世纪中叶，人类对木霉 菌已有了初步的认识，但直到上世纪60年代木霉菌的分类地位才得以确定。 大多数木霉菌可产生多种对植物病原真菌、细菌及昆虫具有拮抗作用的生物活 性物质，比如细胞壁降解酶类和次级代谢产物，并能提高农作物的抗逆性，促 进植物生长和提高农产品产量，因此被广泛用于生物防治、生物肥料及土壤改 良剂。由于化学农药对环境的负面影响较为严重，所以对环境较为友好的生物 农药木霉菌受到了广泛的关注。 绿色木霉是所产纤维素酶活性最高的菌株之一，所产生的纤维素酶对作物有降 解作用，效果非常好，绿色木霉又是一种资源丰富的拮抗微生物，在植物病理 生物防治中具有重要的作用。具有保护和治疗双重功效，可有效防治土传性病害。绿色木霉菌剂防治蔬菜根结线虫病的生物农药，还可以防治黄瓜等葫芦科、番茄等茄科蔬菜的根结线虫病害。绿色木霉菌剂生物农药通过产生抗生素、营 养竞争、微寄生、细胞壁分解酵素、以及诱导植物产生抗性等机制。可直接加 入腐熟剂、有机肥料、生物菌剂等肥料中，在分解纤维、病理防治中有重要作用。 二、木霉菌特点： 系列产品在防治灰霉病上，主要有以下几个防治特点： 1.拮抗作用：木霉菌通过产生小分子的抗生素和大分子的抗菌蛋白或胞壁降解 酶类来抑制病原菌的生长、繁殖和侵染。木霉菌在抗生和菌寄生中,可产生几丁质酶、β21 ,3 葡聚糖酶、纤维素酶和蛋白酶来分解植物病原真菌的细胞壁或分泌葡萄糖苷酶等胞外酶来降解病原菌产生的抗生毒素。同时，木霉菌还分泌抗 菌蛋白或裂解酶来抑制植物病原真菌的侵染。 2.竞争作用：木霉菌可以通过快速生长和繁殖而夺取水分和养分、占有空间、 消耗氧气等,以至削弱和排除同一生境中的灰霉病病原物。 3.重寄生作用:研究发现木霉菌会在特定环境里形成腐霉对灰霉病菌具有重寄生作用,它进入寄主菌丝后形成大量的分枝和有性结构,因而能抑制葡萄灰霉病症 状的出现。 4.诱导抗性:木霉菌可以诱导寄主植物产生防御反应,不仅能直接抑制灰葡萄孢 的生长和繁殖,而且能诱导作物产生自我防御系统获得抗病性。

里氏木霉概述

里氏木霉 一、里氏木霉概述：里氏木霉是多细胞的真核微生物，红褐肉座菌的无性型,隶属于丛梗孢目木霉属。其作为工业菌株用于生产分解不同植物材料的酶类，包括纤维素酶、半纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶等，已有多年历史。里氏木霉所产生的一种主要的纤维酶一纤维二糖水解酶，由单拷贝基因编码，其产量可达里氏木霉胞外分泌性蛋白总量的50%。由此可见，纤维二糖水解酶启动子是很强的启动子。因此在对里氏木霉的遗传改造中，常利用纤维二糖水解酶的启动子与终止子序列构建载体，并利的前导肽序列引导重组蛋白进行分泌性表达。里氏木霉具有极好的合成蛋白和分泌蛋白的能力；并具有真核的分泌机制，很可能还具有与哺乳动物系统相似的蛋白修饰性能，如：高甘露糖型和N-糖基化等。由于里氏木霉具有以上优良性能，再加之其工业化规模发酵条件已比较成熟，这些都促进了对里氏木霉的遗传改造，为同源或异源分泌性蛋白的产生提供了一条行之有效的途径。 里氏木霉不仅具有适于蛋白生产的诸多优点，且对人没有毒性，在产酶条件下也不产生真菌毒素和抗生素。近年来的实践表明，经过基因工程手术改造的里氏木霉重组菌株是安全无害的。 二、里氏木霉使用说明：里氏木霉主产纤维素酶-纤维二糖水解酶，具有极好的合成蛋白和分泌蛋白的能力，一般采用的发酵方法有两种：固态发发酵和液体深层培养发酵生产纤维素酶，产生的纤维素酶是胞外酶。现在的固体发酵比较的成熟，液态发酵一般采用的是流加发酵。主要用于秸秆腐熟剂添加使用。

产品用途：作为饲料添加剂使用, 作饲料用：1.提高饲料原料中营养物质的转化，提高原料的消化能力和代谢能力，提高动物生产性能。 2.提高内源酶的分泌及活性，促进营养物质的消化吸收，提高饲料利用率。 3.促进动物肠道内有益菌的生长从而抑制有害菌的繁殖，有效提高了动物的免疫力，并有效防止腹泻。 使用量：建议添加80-100克/吨。 添加方法：均匀的混合于粉料中 保存方法:25℃以下低温干燥保存 产品包装：4kg一袋 保质期：阴凉干燥下12个月 注意事项:防暴晒、雨淋，避免高温或阳光直射；防止与皮肤或粘膜性物质接触。

(重点)里氏木霉(Trichoderma reesei)分泌组的预测及分析

Research Paper 研究报告 微生物学报Acta Microbiologica Sinica 48(4)：473~479; 4 April 2008 * 通讯作者。Tel: +86-25-83587695; E-mail: yanming@https://www.wendangku.net/doc/551621014.html, 作者简介: 唐雯(1983? ), 女, 浙江丽水人, 硕士研究生, 主要从事分子生物学的研究。E-mail: jiongjiong821@https://www.wendangku.net/doc/551621014.html, 收稿日期: 2007-08-27; 修回日期: 2007-12-28 ISSN 0001-6209; CN11-1995/Q https://www.wendangku.net/doc/551621014.html, 里氏木霉(Trichoderma reesei )分泌组的预测及分析 唐雯, 严明* (南京工业大学制药与生命科学学院, 南京 210009) 摘要：【目的】里氏木霉是一种重要的产纤维素酶工业用菌种, 研究其分泌组特性具有现实意义。【方法】应用生物信息学方法对里氏木霉基因组中9997个开放阅读框(ORF) 所编码的氨基酸序列进行了分析, 获得了294条可能的分泌蛋白序列, 并且按功能对其进行了分类, 同时用搜索模体的方法在未知功能的序列中找到具有关键模体的序列, 初步确定其潜在的功能。对获得的分泌蛋白的信号肽序列进行了分析。【结果】里氏木霉分泌组中有188种水解酶, 包括114种糖苷水解酶、42种蛋白水解酶和11种脂类水解酶等; 在糖苷水解酶中包括已报道的22种纤维素酶和15种几丁质酶等, 以及30条具有潜在纤维素酶功能的蛋白序列。信号肽序列分析结果表明其同源性较低, 而在信号肽酶切位点附近则相对保守。【结论】通过该预测和分析开拓了里氏木霉的研究空间, 为今后的研究奠定了理论基础。 关键词：里氏木霉; 分泌蛋白; 分泌组; 预测; 信号肽; 模体 中图分类号：Q933 文献标识码：A 文章编号：0001-6209 (2008) 04-0473-07 里氏木霉(Trichoderma reesei )是用于生产纤维素酶最常用的菌种[1], 具有容易培养控制、产物容易分离纯化、代谢物安全无毒等特性, 近年来倍受关注。里氏木霉可以通过分泌产生大量与纤维素降解相关的酶, 因此研究其分泌组特性具有重大的意义。 传统研究分泌蛋白的方法主要是通过蛋白质双向凝胶电泳进行分析, 往往只能得到一部分分泌蛋白的信息。用生物信息学[2,3]的方法通过研究微生物的基因组、蛋白组而得到微生物的系统特性是洞悉微生物的有效途径, 即从庞大的基因组数据中通过计算获得一系列相关信息, 并经过分析和实验验证最终得到所需的结果。目前, 研究人员已经通过计算机对酿酒酵母[4]、结核分枝杆菌[5]、秀丽小杆线虫[6]、稻瘟菌[7]、根癌土壤杆菌[8]等多种微生物进行分泌蛋白的预测, 得到其分泌组的相关信息。 里氏木霉基因组的测序工作已经完成, 总大小约为33MB [9], 它的注释正在进行。本文通过对里氏木霉已公 布的9997条ORF 进行信号肽和跨膜区的预测, 筛选到其分泌蛋白组, 然后通过功能的预测[10]进行了初步分类, 并对其信号肽序列进行了分析, 对更全面地掌握里氏木霉的分泌特性有重大意义, 并为里氏木霉糖苷水解酶的进一步研究奠定了基础。 1 材料和方法 1.1 工具 1.1.1 真核生物基因组数据库JGI(DOE Joint genome institute): Eukaryotic genomics(http: //https://www.wendangku.net/doc/551621014.html,) 提供里氏木霉已注释和未注释的完整基因组序列和已注释的转录组和蛋白组信息。从中获得了的9997条蛋 白序列。 1.1.2 信号肽预测：SignalP 3.0 Server (http: //www. cbs.dtu.dk/services/SignalP)利用人工神经网络和HMM (Hidden Markov Models)的原理对氨基酸序列的信号肽存在情况和信号肽切割位点进行预测[11,12], 其准确度