黄曲霉毒素及其检测方法整体解决方案

黄曲霉毒素及其检测方法整体解决方案

一、黄曲霉毒素介绍

黄曲霉毒素(aflatoxin，简称为AF)是到目前为止所发现的毒性最大的真菌毒素。它可通过多种途径污染食品和饲料，直接或间接进入人类食物链，威胁人类健康和生命安全，对人体及动物内脏器官尤其是肝脏损害严重，该毒素是黄曲霉和寄生曲霉中产毒菌株的代谢产物，普遍存在于霉变的粮食及粮食制品中。黄曲霉毒素比较耐热，加热至230℃才能被完全破坏，因此一般烹饪加工也不易消除。

二、黄曲霉毒素对人体的危害

1、引起急、慢性中毒：

黄曲霉毒素是剧毒物质，其毒性相当于氰化钾的10倍，砒霜的68倍。黄曲霉毒素属肝脏毒，除抑制DNA、RNA的合成外，也抑制肝脏蛋白质的合成，黄曲霉毒索引起人类的急性中毒事件，国内外均有许多报导，最典型的是印度的霉变玉米事件，该事件直接导致了数十人丧生，数百人患上不同类型的肝脏疾病。

2、致癌性：

黄曲霉毒素有极强的致癌性，长期摄入黄曲霉毒素会诱发肝癌。它诱发肝癌的能力比二甲基亚硝胺大75倍，是目前公认的致癌性最强的物质之一。另据世界卫生组织报导，黄曲霉毒素含量在30~50ug/kg时为低毒，50~100ug/kg时为中毒，100~1000ug/kg时为高毒，1000ug/kg以上为极毒。鉴于黄曲霉毒素对人类的巨大危害性，我国对其在食品中的含量作了严格规定，其中，乳制品中黄曲霉毒素最高允许量为5ug/kg（即5ppb）。

三、黄曲霉毒素的种类

黄曲霉毒素主要有4种：即B1、B2、G1、G2，其中B1被认为是主要的有毒物质，有2种这些毒素的代谢产物M1和M2。其中黄曲霉毒素B1主要存在于农产品，动物

饲料，中药等产品中；黄曲霉毒素M

1是动物摄入黄曲霉毒素B

1

后在体内经羟基

化代谢的产物，一部分从尿和乳汁排出，一部分存在于动物的可食部分，如乳、

肝、蛋类、肾、血和肌肉中，其中以乳最为常见。黄曲霉毒素M

1

的毒性和致癌

性与黄曲霉毒素B

1

的基本相似。由于牛乳及其制品是人类、特别是婴儿的主要食

品，所以其危害性更大。

四、最新政策及国标（含国外一些政策）

1、自2003年8月1日起，凡在我国境内从事米、面、油、酱油、醋生产加工的企

业，其产品须经检验合格后方可上市。国家质检总局发布的《关于印发小麦粉等5类食品生产许可证实施细则的通知》中明确规定，黄曲霉毒素B1必须检测。

2、在第八期《中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局公报》中发布关于黄

曲霉毒素检测方法的最新国标：

（1）、GB/T 18979-2003 《食品中黄曲霉毒素的测定——免疫亲和层净化高效液相色谱法和荧光光度法》

（2）、GB/T 18980-2003 《乳和乳粉中黄曲霉毒素M1的测定——免疫亲和层净化高效液相色谱法和荧光光度法》

以上两项国标均在2003年8月1日开始实施

3、2002年2月4日欧盟决议对从中国进口或委托从中国进口的花生和花生制品实施黄曲霉毒素强制性检测的特殊条件

五、中国及国际上对黄曲霉毒素的检测标准

1、主要国家：

2、其他

(1)、WHO/FAO标准。国际卫生组织(WHO)/世界粮农组织所属的食品法典委员会(CAC)推荐食品、饲料中黄曲霉毒素最大允许量标准为总量(B1+B2+G1+G2)小于15μg/kg；牛奶中M1的最大允许量为0．5μg/kg

(2)、南非标准。1990颁布了黄曲霉毒素的最大允许标准：食品中黄曲霉毒素总量小于10μg/kg，其中黄曲霉毒素B1小于5μg/kg。

(3)、其他标准。印度标准是花生中黄曲霉毒素B1小于30μg/kg；越南和阿根廷的标准为黄曲霉毒素B1小于20μg/kg。

六、黄曲霉毒素检测方法

测定黄曲霉毒素测定的方法有薄层色谱法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附测定法、质谱法、放射免疫测定法。这些方法中，国标方法“免疫亲和柱法”是现在国际公认的比较经济有效的分析方法。有着较好的权威性和通用性，且为国外多个组织认可，被列为标准方法，如：

美国公职分析化学家协会（AOAC）

美国农业部联邦谷物检测中心（FGIS）

国际纯粹与应用化学协会（IUPAC）

美国食品药品行政署（US-FDA）

美国农业部（USDA）

同时在国内被认证的机构：

中国出入境检验检疫局（CIQ）

七、黄曲霉毒素检测—“免疫亲和柱法”方法有以下特点：

1、认证机构广泛，通用性强

2、分析速度快，一个样品只需10-15分钟，其他传统的方法要做到定量分

析需要几小时至几天的时间。

3、灵敏度高，测定范围广泛（0-300ppb）,用荧光计可以测定0.1ppb的黄

曲霉毒素四种异构体，用HPLC可以检测出10ppt的黄曲霉毒素B1。

4、采用单克隆免疫技术，可以特效性地将黄曲霉毒素和其他真菌毒素分离

出来，分离效率和回收率高，正确性和可靠性强。

八、黄曲霉毒素检测—“免疫亲和柱法”方法具体步骤如下：

1、试剂配制

（1）样品提取溶剂：甲醇/水（4/1，v/v）

（2）5mmol磷酸盐缓冲溶液（PBS）（pH7.2）母液配制：

1）称取50.14gNa2HPO4.12H2O溶解于700ml水中。

2）称取9.66gNaH2PO4.H2O溶解于350ml水中。

3）将上述两种溶液进行混合并加入42.5gNaCl，配制成pH7.2 5mmol 磷酸盐缓冲溶液

（3）1mmol磷酸盐缓冲溶液(PBS)（pH7.2）工作液配制：

取200ml 的5mmol磷酸盐缓冲溶液（pH7.2）稀释于800ml水中。

（4）磷酸盐缓冲溶液（PBS）/吐温(Tween)配制：

取8ml吐温-20稀释于92mlpH7.2磷酸盐缓冲溶液中

（5）HPLC 流动相配制：水/甲醇/乙腈（60/30/15,v/v）

2、样品处理方法：

方法一：标准方法

该处理程序适用于样品基质中没有干扰，主要适用于大多数谷类样品的处理。

1、取20g样品加入100ml提取液（甲醇/水，4/1，v/v）放入匀浆机中，并高速搅拌5分钟。

2、用滤纸过滤上述提取液

3、取14ml过滤后的提取液加入86ml的1mmolPBS缓冲溶液（pH 7.2）。如果样品量比较少，取样品体积可以适当减少（如1.4ml+8.6ml缓冲溶液）。如混合过程中有沉淀产生，样品需要用注射过滤器进行过滤或进行离心。

4、打开净化柱上密封盖和下面堵头后，柱中的缓冲溶液会排出，直到缓冲溶液液面达到柱中填料上层处。

5、取5-50ml稀释后的提取液（取样体积根据分析方法的灵敏度来确定）上AflaCLEAN TM柱。在净化过程中可对柱子进行抽真空和加压；但必须保证过柱流速不大于1-2滴/秒。尽量让所有上样样品都通过柱子流出来，即使柱中溶剂流干了也没有太大问题，但是要避免柱子溶剂完全流干。

6、用10ml蒸馏水或纯化水清洗柱子

7、用气体吹扫或抽真空除去柱子中残余的水

8、每次用1ml甲醇洗脱柱子，可洗2次。第一次加入的甲醇需用堵头堵住柱子下端，使甲醇在净化柱中保持5min后，再放出收集。

9、根据分析的需要对洗脱液进行稀释或浓缩并直接进行HPLC分析。

方法二：标准方法加正己烷分层

该样品处理方法针对样品中含有油脂比较多，如坚果类，一些香料或无花果酱，脂肪和样品中含有一些需要用正己烷去除的杂质。

1、称取20g样品并加入2g的氯化钠

2、加入100ml提取溶剂（甲醇/水，4/1，v/v）和50ml正己烷于匀浆机中高速搅

拌5min。

3、静止分层，取下层液进行下一步处理

4、取下层液用滤纸过滤

5、取14ml过滤后的提取液加入86ml 的1mmolPBS缓冲溶液（pH 7.2）。如果

样品量比较少，取样品体积可以适当减少（如1.4ml+8.6ml缓冲溶液）。如混合过程中有沉淀产生，上柱液需要用注射过滤器进行过滤或进行离心。

6、打开净化柱上端密封盖和下端堵头后，柱中的缓冲溶液会排出，直到缓冲溶

液液面达到柱中填料上层处。

7、取5-50ml稀释后的提取液（取样体积根据分析方法的灵敏度来确定）上

AflaCLEAN TM柱。在净化过程中可对柱子进行抽真空和加压；但必须保证过柱流速不大于1-2滴/秒。尽量让所有上样样品都通过柱子流出来，即使柱中溶剂流干了也没有太大问题，但是要避免柱子完全溶剂流干。

8、用10ml蒸馏水或纯化水清洗柱子

9、用气体吹扫或抽真空除去柱子中残余的水

10、每次用1ml甲醇洗脱柱子，可洗2次。第一次加入的甲醇需用堵头堵住

柱子下端，使甲醇在净化柱中保持5min后，再放出收集。

11、根据分析的需要对洗脱液进行稀释或浓缩并直接进行HPLC分析。

方法三：标准方法加正己烷分层和PBS/Tween稀释

该处理过程用于样品含有干扰杂质，主要是大部分的香料和中草药。

1、此处理过程样品最大取样量为20g（一些样品需要减少取样量可以达到比较

好的提取效果）。

2、称取20g样品并加入2g氯化钠

3、样品先进行均质化处理，向处理好的样品中加入100ml提取溶剂（甲醇/水，

4/1，v/v）和50ml正己烷于匀浆机中并高速搅拌5min。

4、提取液静止分层，取下层溶液进行下一步处理

5、取下层溶液用滤纸过滤

6、取5ml滤液加入35mlPBS/Tween溶液稀释。如稀释混匀中出现沉淀，需用注

射过滤器进行过滤或离心。

7、打开净化柱上端密封盖和下端堵头后，柱中的缓冲溶液会排出，直到缓冲溶

液液面达到柱中填料上层处。

8、取14ml稀释后的提取液（取样体积根据分析方法的灵敏度来确定）上

AflaCLEAN TM柱。在净化过程中可对柱子进行抽真空和加压；但必须保证过柱流速不大于2ml/min。尽量让所有上样样品都通过柱子流出来，即使柱中溶剂流干了也没有太大问题，但是要避免柱子完全溶剂流干

9、用10ml蒸馏水或纯化水清洗柱子

10、用气体吹扫或抽真空除去柱子中的残余的水

11、每次用1ml甲醇洗脱柱子，可洗2次。第一次加入的甲醇需用堵头堵住

柱子下端，使甲醇在净化柱中保持5min后，再放出收集。

12、根据分析的需要对洗脱液进行稀释或浓缩并直接进行HPLC分析

3、HPLC分析方法：

黄曲霉毒素检测需要一台配有荧光检测器的HPLC系统。

黄曲霉毒素HPLC分析检测条件可参照以下设定：

流动相：水/甲醇/乙腈60/30/15 (v/v)；流速：1.2ml/min

进样量：10-100μL；柱温：36℃

HPLC黄曲霉毒素专用分析柱：150×4.6mm；RP C18（货号：10522）

荧光检测器设置：EX.:365nm;Em.:460nm (使用柱后衍生系统，

详见柱后衍生技术)

或Em.:430nm用于黄曲霉毒素B类的检测和455nm用于黄

曲霉毒素G类的检测

4、柱后衍生技术

在HPLC分析中，为提高一些检测痕量目标物的灵敏度（如黄曲霉毒素B1和G1），需要对检测的目标物进行衍生化，目前在HPLC中，以柱前衍生法和柱后衍生法居多，但柱前衍生法由于操作过程较繁琐，容易影响定量的准确性，不适合用于对大量样品做常规检测，而柱后衍生法操作简单，可连续反应以实现自动化分析，适用于大量样品的连续的自动化操作。LCTech公司现有UVE TM光化学柱后衍生设备

LCTech的UVE TM柱后衍生设备（如图1，P/N 10519）是最简单，最便捷和性价比高的柱后衍生设备。只要将该设备连接到HPLC柱出口和荧光检测器的进口之间可以使用。该设备不需要任何试剂，HPLC流动相的水就可以作为反应试剂。当分析时不需要使用该设备，只要将设备电源关闭就可以了，不需要额外的操作。

图1 LCTech公司的UVE TM系统

图2 Aflatoxin B1 光化学衍生到AflatoxinB2a 的过程

虽然黄曲霉毒素B2和G2在荧光检测器上有很好的响应值，但是黄曲霉毒素B1和G1需要进行衍生才可以在荧光检测器上有好的响应值。这个过程可以通过UVE TM在254nm紫外光照射下进行光化学反应完成。

通过黄曲霉毒素B1和G1进行羟基化（在双键结构上加一分子水，如图2），并产生稳定可测的荧光。这个光化学反应过程不影响其他黄曲霉毒素B2和G2化学和检测性质。

一般来说，检测方法的检出限与样品前处理过程和荧光检测器的性能有关。如果仪器灵敏度足够好，黄曲霉毒素经AflaCLEAN TM柱净化后直接检测，其检测限可达到ppt级。

图3 使用UVE TM柱后衍生化处理黄曲霉毒素HPLC检测的色谱图比较6a图是UVE TM打开的结果，6b是UVE TM关闭的结果

5、黄曲霉毒素分析实验室配置

1、仪器

货号10514：AflaCLEAN TM黄曲霉毒素免疫亲和柱

货号10081：三指型烧杯夹，用于固定120ml免疫亲和柱上样瓶；

货号10896：120ml免疫亲和柱上样瓶，DURAN玻璃，包含盖和密封垫

货号10519：UVE TM 黄曲霉毒素紫外柱后衍生仪，CE认证

货号10522：黄曲霉毒素专用HPLC分析柱，

货号10523：预柱（3个/包）；

货号10750：预柱套；

货号10837：黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2认证标样。

其他仪器设备：HPLC系统；混匀器；高速搅拌器；25ml，100ml 烧杯；漏斗；一次性10ml注射器；0.2μm过滤膜；10ml移液管；1ml移液管；2ml容量瓶；

2、试剂

所需试剂需要分析纯以上，并确保试剂对荧光分析结果没有影响。Acetonitrile 乙腈；n-hexane n-正己烷；methanol 甲醇；NaCl 氯化钠；Na2HPO4·12H2O 十二水合磷酸氢二钠；Na2PO4·H2O 水合磷酸二氢钠；Tween20 吐温-20；Water 蒸馏水或纯水。

黄曲霉素B1检测卡说明书

黄曲霉毒素B1 检测卡说明书 【简介】 黄曲霉毒素是由黄曲霉和寄生曲霉中产毒菌株所产生的有毒代谢产物，最主要的4种分别为：B1、B2、G1、G2。黄曲霉毒素具有很强的急性毒性，也有明显的慢性毒性及强致癌性。黄曲霉毒素主要污染粮、油及其制品，其中受污染最严重的是花生、棉籽、玉米及其制品；其次是稻米、小麦、大麦、高粱、芝麻、茶叶等。鉴于这些霉菌毒素的毒性，欧盟国家规定，黄曲霉毒素B1的残留限量值为5ppb。 【检测原理】 该试剂盒采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术进行检测。 【检测范围】 花生、玉米、小麦、大米、茶叶、油脂、饲料等； 【产品组成】 黄曲霉毒素B1免疫胶体金快速检测卡(40份/盒) 滴管（40支） 干燥剂（40片） 一次性手套（5只） 【技术指标】 检测下限：5μg／kg； 【检测步骤】 1．取5g以上有代表性的粉碎后的谷物样品（过20目筛），准确称取0.5g均匀粉碎试样，加入到配套的15ml离心管中。 2．向离心管中准确加入纯净水和乙酸乙酯各2mL，将瓶塞盖紧密封，用力振荡5分钟，4000rpm离心1分钟（备注：如实验室没有大离心机设备，可以用小离心管取上清液，用小离心机离心）。 3．用吸管取上清液到小玻璃杯中，吹干滤液（吹风机或烘箱），然后用体积稀释液复溶杯底固体。此溶解液即为检测液. 4．取出试纸，开封后平放在桌面，用滴管向试纸孔缓慢而准确地逐滴加入3滴检测液。 5．5~10分钟判断结果，半小时后的结果判读无效。 【结果判断】 1、阴性:测试线(T)与对照线(C)都出现，表明样品中黄曲霉毒素的浓度小于5ug／kg。 2、阳性:只有对照线(C),无测试线(T)，表明样品中黄曲霉毒素的浓度大于或等于5μg／kg。 3、无效:对照线(C)和测试线(T)都不出现，或者对照线（C）不出现。

(整理)黄曲霉素致癌作用机制及预防

黄曲霉素致癌作用机制及预防 概念：化学致癌作用是指化学物质引起正常细胞发生恶性转化并发展成肿瘤的过程。具有这种作用的化学物质称为化学致癌物。 原理：化学致癌作用机制分为3个阶段:1.引发阶段：启动阶段是指化学物或其活性代谢物（亲电子剂）与 DNA作用，导致体引发阶段。2.促长阶段：促长阶段是引发细胞增殖成为癌前病变或良性肿瘤的过程。3.进展阶段：进展阶段是从促长阶段产生的细胞群（癌前病变、良性肿瘤）转变成恶性进展阶段。 例子：黄曲霉素具有诱导突变、抑制免疫和致癌作用，对于人类和动物健康有着严重的危害。人类健康受黄曲霉素的危害主要是由于食用被黄曲霉素污染的食物，黄曲霉素主要存在于各种坚果，特别在花生、大豆、杏仁和核桃等植物产品中。黄曲霉素１９９３年已被世界卫生组织划定为一类致癌物，是一种毒性极强的剧毒物质。目前已经确定黄曲霉素结构有１８种，其基本结构为二呋喃环和香豆素，主要分子形式含Ｂ１、Ｂ２、Ｇ１、Ｇ２，Ｍ１、Ｍ２等，其中Ｍ１、Ｍ２主要存在于牛奶中，Ｂ１为毒性及致癌性最强的物质。黄曲霉毒素的产生主要是产品收获后在储存、加工和运输过程中，由于原料携带就会致使加工后的食品含有黄曲霉，给人的健康带来极大的危害，或饲料中含有黄曲霉毒素动物摄入后造成同样的危害，再链接到人类。 致癌的化学物质可分为启动剂和促进剂,某些物质兼具二者的作用。黄曲霉素中AFB,、AFG,和AF、M,属于促进剂范畴,其致癌的机制主要是基因水平的作用。AFB 可通过与DNA的共价结合抑制DNA的甲基化,从而改变基因表达和细胞分化,并导致癌基因的激活。黄曲霉素相关肝癌中抑癌基因P的高频突变,其中最为常见的是外显子7中密码子249由AGG转化为AGT,突变率约为20％之50％。黄曲霉素主要以形成加合物的方式造成DNA损伤,并进一步导致肝癌的发生。 预防黄曲毒素的滋生和污染有多种途径，拿出口杏仁来说，在加工挑选之前，首先必须要保证水分含量在安全水８％以下，水分含量越低越好，才能保证不被黄曲霉毒素的污染。因为出口农产品在运输过程中，一是时间长，仅海运途中有时就需一个月；二是在密闭的集装箱内温度较高，很适宜黄曲霉素的滋生和繁衍。其二在挑选过程中一定要剔除霉变粒、严重的损伤粒和虫蚀粒，避免出口前和货物到达目的地后黄曲霉检测超标。平凉检验检疫局曾经多次经抽样检测黄曲霉毒素超标，通知企业重新加工挑选剔除上述三种仁粒后，经再次抽样检测黄曲霉含量就会降到限量以内。可见三种仁粒是霉源，水分和温度是条件。其它的农产品也有类似共同点，因此初级农产品的加工只要在挑选中注意这两个问题，就会解决黄曲霉毒素超标问题。 参考文献:<<黄曲霉素资料选编>>,贵州省卫生防疫站编辑,1978.01 黄曲霉素,时代周报,催悙,2012年第4期 解读黄曲霉素,家庭医药,刘梦琥,2012年第2期 2011222437 2011级麻醉3班吴丹

黄曲霉毒素B检测试剂盒操作方法

黄曲霉毒素B1检测试剂盒操作方法2/50 ppb 一、样品的准备/萃取 1. 获取具有代表性的样品，使用Romer 系列II型研磨机研磨，使至少95%的研磨样品能够通过20目筛网，彻底混合并对样品进行二次取样。 2. 称取4g 研磨样品于干净并可密封的广口瓶中。加入20mL 70/30（v/v）甲醇/水萃取溶液并密封广口瓶。注意：样品与萃取溶液比例应为1：5（w:v），振荡或均质3分钟。 3. 静置样品，用滤纸过滤萃取上清液，收集待检滤液。 4. 用提供的分析缓冲液对滤液进行1：2稀释。例如，将50μL待检滤液加入50μL分析缓冲液中，混匀准备进行随后检测。 二、检测步骤 1．将适量的标记颜色的稀释孔条放入微孔板架上，稀释条孔的数目需使每个标准品（0, 2, 5, 20 & 50ppb）或样品能够对应一个稀释孔。 2．将等量的有抗体包被的微孔条放入微孔板架上，未使用的有抗体包被的微孔条需放回装有干燥剂的原铝箔袋内并密封保存。 3．按照240 μL/孔或2 mL/条的体积计算所需的酶联偶合物用量。从绿色瓶盖的瓶中量取所需用量的酶联偶合物至一个酶联偶合物试剂槽中（如多道移液器所用的试剂槽）。使用8道移液枪移取100μL酶联偶合物至每个稀释孔中。 4．使用单道移液枪，移取50μL标准品和样品至已装有100μL酶联偶合物的稀释孔中。用移液枪反复吸送3次以充分混合孔中液体。每当移取一个标准品或样品时，单道移液枪必需更换上新吸头。注意确保最后将吸头中的液体排空。 5．使用换有全新吸头的8道移液枪，快速移取每个稀释孔中的液体各100μL至相应的有抗体包被的微孔中。室温下放置15分钟。注意不要摇动微孔板去混匀孔中液体，以免引起孔与孔之间的污染。 6．将孔中的液体甩入水槽中，用去离子水或蒸馏水冲洗每个孔，然后将微孔中的水

黄曲霉毒素解毒方法

1、1、4 黄曲霉毒素得解毒措施 黄曲霉毒素危害严重，分析每一批家禽饲料中霉菌毒素得含量就是不可能得，当慢性霉菌毒素中毒发生时，除了轻微得生产性能下降外，没有任何明确得临床症状。在发展中国家中，每年黄曲霉毒素都会给饲料业及畜牧业带来巨大经济损失。在过去很长得一段时间里，为尽量减少霉菌毒素得危害所做得努力已经取得长足得进步，避免饲料中黄曲霉毒素得含量超过规定允许得浓度就是预防与治疗毒素中毒得方法之一。为减少黄曲霉毒素及其代谢物残留在动物性食品中以及减轻毒性反应，适当得方法包括物理分离，化学方法与毒素粘合剂就是必须要使用得[42]，如沸石化合物，活性炭，珍珠岩，膨润土，硅藻土等已经被使用。 1、1、4、1 物理去毒方法 传统用于霉菌毒素得物理去毒方法主要有混合稀释法、水洗法、热处理、脱壳、磨粉、放射、萃取、吸附等。混合稀释法就是将简单地将霉变饲料与未霉变饲料进行混合，以降低饲料中霉菌毒素得浓度，此法成本低，工作量大，不能从根本上解决饲料中毒素得问题。水洗法可显著减少毒素，但只用于湿磨或发酵得前处理，否则干燥成本太高。霉菌素素在谷物表面含量高，脱壳可有效降低霉菌毒素水平，但工作量大。黄曲霉毒素耐热，一些试验表明热处理似乎能降低一些毒素水平，然而实际效果存疑。磨粉处理只能改变毒素得分布，不能减少毒素总量。放射能杀真菌孢子，但不减少毒素含量。有机溶剂可提取花生油、棉籽油中得黄曲霉毒素，几乎可将油中所有得黄曲霉毒素除去，但成本高，应用不广[43]。 在当前得实际生产中，往饲料中添加可以吸附霉菌毒素得物质就是一种常用得方法，利用吸附剂来降低机体对毒素得吸收率，减少毒素对机体得毒害作用，众所周知得吸附剂主要有水合硅铝酸钙钠盐、蒙脱石、膨润土、粘土、沸石与活性炭等。汪前红、齐德生等[44,45]报道含有矿物、酵母等得复合吸附剂以及蒙脱石均能降低AFB1对动物得负面作用。在含黄曲霉毒素日粮中添加复合吸附剂或蒙脱石，均能在一定程度上能缓解AFB1对动物得毒性作用，降低AFB1中毒得死淘率，一定程度上恢复动物得生产性能，提高动物产品得质量。物理吸附法虽在一定条件下能吸附霉菌毒素，但其吸附毒素得特异性与广谱性得统一还就是一个世界性问题。 1、1、4、2 化学去毒方法

黄曲霉毒素不可不知的秘密

黄曲霉毒素不可不知的秘密 在外聚餐时，餐桌上常会有赠送的餐前小吃——花生米，不过，如果你在金灿灿的花生米中无意夹到一颗变黑的，这时可千万不要往嘴里送，因为它们有可能已经被黄曲霉毒素污染而可能会对人体产生一定的危害。那什么是黄曲霉毒素呢？ 1、黄曲霉毒素 黄曲霉毒素是一种由黄曲霉和寄生曲霉等真菌经过聚酮途径产生的次生代谢产物，是一组结构类似的化合物总称。迄今为止，已发现的黄曲霉毒素至少包含有黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q1、H1、GM、B2a、G2a及毒醇等20种左右结构相似化合物。 通常黄曲霉毒素存在于土壤、动植物、各种坚果特别是花生和核桃中。在大豆、稻谷、玉米、通心粉、调味品、牛奶及奶制品、食用油等制品中也可能会发现黄曲霉毒素。 ２、黄曲霉毒素在食物中的限量标准 根据我国国家标准GB2761-2011《食品中真菌毒素限量》的规定，我国食品中黄曲霉毒素B1允许量标准为：玉米及其制品、花生及其制品中不得超过20μg/kg；稻谷、糙米、大米和其他植物油脂中不得超过10μg/kg；小麦、大麦、其他谷物、发酵豆制品和其他熟制坚果及籽类中不得超过5μg/kg；部分调味品（如酱油、醋、酿造酱）中不得超过5μg/kg；婴幼儿配方食品中不得超过0.5μg/kg。乳及乳制品和特殊膳食用食品中黄曲霉毒素M1限量不得超过0.5μg/kg。 ３、黄曲霉毒素的检测方法 （1）薄层色谱法（TLC法） TLC法是测定黄曲霉毒素的经典方法，是我国测定食品及饲料中黄曲霉毒素B1的标准方法之一(GB/T5009.23-2006)。适用于各种食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定。（2）免疫分析法 免疫化学分析法是以抗原抗体的免疫化学反应为基础进行抗原抗体含量测定的方法。用于黄曲霉毒素测定的免疫分析法主要有免疫亲和层析净化—荧光光度法、免疫亲和层析净化—高效液相色谱法、酶联免疫吸附法等。 ▲免疫亲和层析净化—荧光光度法和免疫亲和层析净化—高效液相色谱法免疫亲和层析技术的方法特异性好、灵敏度高，是目前我国现行国家标准推荐的方法之一（GB/T18979-2003），适用于玉米、花生及其制品（花生酱、花生仁、花生米）、大米、小麦、植物油脂、酱油、食醋等食品中黄曲霉毒素的测定。 ▲酶联免疫吸附法（ELISA） ELISA法是应用抗原抗体特异性反应和酶的高效催化作用来测定黄曲霉毒素含量的免疫分析方法，其相对应的标准是GB/T5009.22-2003（第二法），适用于粮食、花生及其制品、薯类、豆类、发酵食品及酒类等各种食品中黄曲霉毒素B1的测定。 ４、黄曲霉毒素的预防与控制措施 （1）挑选霉粒法 因黄曲霉毒素主要集中在霉坏、破损、皱皮、变色和虫蛀等的粮粒中，这些带毒颗粒比健康颗粒轻，外表也较易辨认，可用机械或人工掏除。 （2）植物油加碱去毒法

黄曲霉毒素

黄曲霉毒素是一种强烈的致癌物质，能使人体或动物的免疫功能丧失，诱导畸形、癌症的发生。黄曲霉毒素是毒性极强的化合物，AFB1的急性毒性为成年人半至死量（LD50）10.0。黄曲霉毒素急性中毒症状主要表现为呕吐、厌食、发热、黄疸和腹水等肝炎症状。而黄曲霉毒素的“三致”（致突变、致癌、致畸性）危害性，更引起人们的关注。黄曲霉毒素是目前所知致癌性最强的化合物，对鱼类、禽类、家畜和灵长目类动物的实验肿瘤诱导作用极大，并且能同时诱导多种癌症。黄曲霉毒素对人的致癌性虽然缺乏直接证据，但大量的流行病学调查均证实，黄曲霉毒素的高摄入量和人类肝癌的发病率密切相关。因此，世界各国对食品中的黄曲霉毒素的含量做出了严格的规定。 黄霉菌是微生物世界的一个大家族，黄曲霉菌是这个大家族的一员。黄曲霉菌本身是无毒的，但在其繁殖代谢的过程中可分泌出有毒的物质黄曲霉毒素。黄曲毒素是一种剧毒物质，它损害动物的肝脏，引起肝细胞坏死、肝纤维化、肝硬化等病变。黄曲霉毒素是目前发现的最强的致癌物质之一。 1 主要可诱发肝痛，还能诱发胃癌、肾癌、直肠癌及乳腺、卵巢、小肠等部位的肿瘤黄曲霉毒素对人体健康威胁很大。目前已确定其化学结构，黄曲霉毒素B1、B2、C1、G2等17种，其中趴毒性最大。食物中的花生、花生油、玉米、大米、棉籽等最容易污染上黄曲霉寿素，小麦，大麦也常被污染，豆类一般污染较轻，工业化生产的发酵制品如面酱。咸肉、火腿、香肠等肉类食品，亦能受到黄曲霉菌的污染。我国卫生标准规定，花生、花生油、玉米中，黄曲霉毒素含量不超过20微克/公斤；大米、食用油不得超过10微克/公斤；其它粮食、豆类、发酵食品不得超过5微克/公斤；婴儿食品中不得有黄曲毒素。 2 受黄曲霉菌污染的粮及食品不能食用 轻度污染的粮及其他食品，可以用一些简单的方法将毒素破坏掉或除去。日常生活中可以用以下方法去毒： 2．1 剔除霉变粮粒因毒素主要集中在霉变的粮粒中，凡表面长有黄绿色霉菌，或破损皱缩、变色、变质的花生米和玉米，都有可能污染黄曲霉毒素。在食用前应仔细挑选，剔除霉变粒。2．2 提高加工精度稻谷污染黄曲霉菌后，米中的毒素主要集中在米糠层，如果在稻谷加工时，将糙米碾得精一点，尽量除去米糠层，可降低大米中毒素的含量。玉米中的黄曲霉毒素有 54~72％集中在皮层和胚中，如在加工时提取胚，可除去大部分毒素。用含黄曲霉毒素的玉米制成玉米淀粉，毒素的含量仅为原有含量的1％。 2．3 水洗去毒将污染上黄曲霉菌的大米用清水反复搓洗五六次，一直洗到水清时再煮饭，可除去大部分毒素。 2．4 加热去毒蒸煮、爆炒或油炸可减少一部分黄曲霉毒素。轻度污染的花生米，爆炒可使黄曲霉毒素B1、C1含量分别减少65％和62％；若用油炸，可使黄曲霉毒素Bl、 Cl含量分别减少69％和67％。大米煮成米饭，一般能破坏20％的黄曲霉毒素。用高压锅煮米饭，去毒效果比普通锅煮饭好。 2．5 植物油中的去毒在含黄曲霉毒素的植物油中，加入活性白陶土或活性炭等吸附剂，搅拌后静置沉淀，取上层清油，毒素含量大为降低。如在含毒花生油中加入1．5％的白陶土，可使含毒量从每公斤100微克降至10微克以下。用含黄曲霉毒较低的植物油烹调食物时，先将油倒入锅内烧至冒微烟(约120℃时)，可除去油中90％以上的毒素。如果菜肴中加葱、姜、蒜等辛香料，对除去黄曲霉毒素效果更为理想。 2．6 山苍子去毒用中药山苍子或山苍子胶丸均可，每百公斤粮食用十四五粒胶丸。用法是先把胶丸剖开，放在小瓶中，用透气纱布扎住瓶口，然后连瓶埋人米缸中，盖上缸盖，让芳香油自然挥发，熏蒸粮食，即可消除黄曲霉毒素。将山苍子野果或干果直接埋人粮食中，亦可收到良好的效果。3 黄曲霉素的去除方法 黄曲霉毒素的污染是一个全球性的难题。黄曲霉在食品的加工、生产、贮存、运输等各个

黄曲霉毒素及其检测方法整体解决方案

黄曲霉毒素及其检测方法整体解决方案 一、黄曲霉毒素介绍 黄曲霉毒素(aflatoxin，简称为AF)是到目前为止所发现的毒性最大的真菌毒素。它可通过多种途径污染食品和饲料，直接或间接进入人类食物链，威胁人类健康和生命安全，对人体及动物内脏器官尤其是肝脏损害严重，该毒素是黄曲霉和寄生曲霉中产毒菌株的代谢产物，普遍存在于霉变的粮食及粮食制品中。黄曲霉毒素比较耐热，加热至230℃才能被完全破坏，因此一般烹饪加工也不易消除。 二、黄曲霉毒素对人体的危害 1、引起急、慢性中毒： 黄曲霉毒素是剧毒物质，其毒性相当于氰化钾的10倍，砒霜的68倍。黄曲霉毒素属肝脏毒，除抑制DNA、RNA的合成外，也抑制肝脏蛋白质的合成，黄曲霉毒索引起人类的急性中毒事件，国内外均有许多报导，最典型的是印度的霉变玉米事件，该事件直接导致了数十人丧生，数百人患上不同类型的肝脏疾病。 2、致癌性： 黄曲霉毒素有极强的致癌性，长期摄入黄曲霉毒素会诱发肝癌。它诱发肝癌的能力比二甲基亚硝胺大75倍，是目前公认的致癌性最强的物质之一。另据世界卫生组织报导，黄曲霉毒素含量在30~50ug/kg时为低毒，50~100ug/kg时为中毒，100~1000ug/kg时为高毒，1000ug/kg以上为极毒。鉴于黄曲霉毒素对人类的巨大危害性，我国对其在食品中的含量作了严格规定，其中，乳制品中黄曲霉毒素最高允许量为5ug/kg（即5ppb）。 三、黄曲霉毒素的种类 黄曲霉毒素主要有4种：即B1、B2、G1、G2，其中B1被认为是主要的有毒物质，有2种这些毒素的代谢产物M1和M2。其中黄曲霉毒素B1主要存在于农产品，动物 饲料，中药等产品中；黄曲霉毒素M 1是动物摄入黄曲霉毒素B 1 后在体内经羟基 化代谢的产物，一部分从尿和乳汁排出，一部分存在于动物的可食部分，如乳、 肝、蛋类、肾、血和肌肉中，其中以乳最为常见。黄曲霉毒素M 1 的毒性和致癌 性与黄曲霉毒素B 1 的基本相似。由于牛乳及其制品是人类、特别是婴儿的主要食

饲料中黄曲霉毒素简易去除法

饲料中黄曲霉毒素简易去除法 黄曲霉毒素污染严重的饲料，应该废弃。对轻度污染的饲料，经适当的处理后可以达到饲用标准的，仍可利用。下面介绍几种简易去除法： 1.水洗法：此法适用于籽实饲料的去毒处理，其方法是：先将发霉的饲料磨成碎粉，将其倒进缸中，加入3～4倍水，然后进行搅拌静置浸泡，每日换水搅拌两次，直至浸泡的水由茶色变成无色为止。 2.挑除法：其方法是把饲料中有霉变的部分挑除。可适用于秸秆、颗粒饲料的去毒处理。 3.晾晒去毒法：此法主要用于秸秆饲料的去毒。其方法是：先将发霉饲料置于阳光下晒干，然后进行通风抖松，以除去霉菌的芽孢，使其变得无害而达到无毒的目的。 4.脱胚去毒法：此法主要用于玉米的去毒，因为发霉玉米的毒素主要集中在玉米的胚部。其方法是：先将玉米磨成1.5～4.5毫米的小颗粒，再加5～6倍水，然后进行搅拌，胚部碎片因轻而浮在水面上，将其捞出或随水倒掉，如此反复数次，即可达到脱胚去毒的目的。 5.石灰水浸法：此法适宜对玉米、高粱等籽实类饲料进行去毒处理。其方法是：先将玉米等大粒发霉饲料粉碎成直径1.5～5毫米的小粒，然后将过120目筛后的石灰粉按0.8%～1%的比例掺入发霉饲料中，最后将掺入石灰粉的料和水按1：2的比例倒入容器中搅拌1分钟，然后静止5～8小时，将水倒出，再用清水冲洗2～3次，一般去毒率可达90%以上。 6.热处理法：在湿度较高的条件下，高热或高热高压可破坏毒素，如用260℃处理污染玉米，可使黄曲霉毒素含量下降85%。 7.碱煮处理法：此法适用于对籽实类饲料进行去毒处理。其方法是：按每100克发霉饲料加入3倍的水，再加入500克苏打粉或1000克石灰共煮，待煮到饲料裂开时，让其冷却，然后再用清水冲洗到没有碱味时即可使用。 来源：中国农业新闻网

怎样防治花生黄曲霉菌病

怎样防治花生黄曲霉菌病 花生是最容易受黄曲霉菌感染的农作物之一，在世界范围内均有发生。黄曲霉毒素是目前世界上公认的毒性最强的致癌物质，主要有黄曲霉毒素Bl、黄曲霉毒素B：、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素GZ 4种，其中以黄曲霉毒素B,毒性最强，产毒量也最大。其侵染所造成的黄曲霉毒素污染不仅影响花生的品质和外贸出口，而且直接危害入们的健康。黄曲霉菌的感染首先在田间发生，特别是在花生生长后期。收获后不能及时晾晒，以及贮藏不当可以加重黄曲霉菌的感染和毒素污染。 我国规定在花生油、花生及其制品中黄曲霉毒素3，的允许含量为十亿分之二十。联合国粮农组织和世界卫生组织，包括美国的初步标准中规定，黄曲霉毒素超过30微克／千克时不能食用，也不能作饲料。 侵染途径和感染条件黄曲霉菌广泛存在于土壤中，土壤中的黄曲霉菌可直接从伤口处侵染花生果针、荚果和籽仁，并在籽仁上迅速繁殖和产毒。影响黄曲霉菌田间感染的因素有下面几种。①地下害虫如蟒蟾、金针虫等为害花生荚果不仅直接把黄曲霉菌带进受害的荚果，而且破损部位也为黄曲霉菌侵染增加了机会。②花生田间管理和收获时受损伤的荚果以及由于土壤温度和湿度波动引起的种皮自然破裂，使黄曲霉菌更易侵入。③锈病、叶斑病、茎腐病等真菌病害引起早衰，甚至枯死的花生植株荚果，受黄曲霉菌感染率也较高。④花生生育后期遭遇干旱是影响黄曲霉菌侵染花生的重要因素。

⑤对不同类型土壤样品黄曲霉菌菌量进行测定，以水旱轮作地土壤含菌量最高，其次为水田，旱地最少。⑥适时收获的花生受黄曲霉菌感染的较少，而延迟收获的花生黄曲霉菌感染率较高。延迟收获花生的过熟荚果，特别是含水量高于30％的种子显著增加了黄曲霉菌侵染的机会。⑦种皮在抗黄曲霉菌侵染中起关键作用，具有完整种皮的花生种子才能表现出抗侵染特性。⑧花生品种间对黄曲霉菌侵染和产生毒素的抗性存在明显差异。 大田中的防治在花生生育后期，花生荚果发育期间保障水分供给，避免收获前干旱造成黄曲霉菌感染率大幅度增加；尽量避免结荚期和荚果充实期中耕，以免损伤荚果；把病虫害对荚果的损伤减少到最低程度；收获后及时晒干荚果，把花生种子含水量控制在5％以下；由于花生品种对黄曲霉菌侵染的抗性存在差异，各地应通过调查选用对黄曲霉菌侵染具有抗性的品种，以减少黄曲霉菌的感染。 食品及词料中黄曲霉毒素的去除黄曲霉毒素的去毒方法有物理法和化学法2种。 （1）物理法 ①筛选用筛选、风选、入工手选、电子色选等将霉坏、破损、皱皮、变色的花生仁选去，即可使黄曲霉毒素B,的含量降低到5ppb 以下。 ②加热把花生油采用升温法去毒。将黄曲霉毒素3,含量在200ppb以下的花生油，加温到220℃-250℃保持3 -5分钟，其毒素可下降到

2015版新药典黄曲霉毒素检测方案

2015年药典黄曲霉毒素测定法 本法系用高效液相色谱法测定药材及制剂中的黄曲霉毒素（以黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2总量计），除另有规定外，按下列方法测定。 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（40:18:42）为流动相，流速0.8mL/min；采用柱后衍生法检测: 光化学衍生法：光化学衍生器（254nm. PriboFast-KRC光化学柱后衍生 器.Pribolab-MDU光化学柱后衍生器）；以荧光检测器检测，激发波长λex =360nm(或365nm)，发射波长λem =450nm。两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。 混合对照品溶液的制备：精密量取黄曲霉毒素混合标准品（黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标示浓度分别为1.0μg/m L、0.3μg/m L、1.0μg/m L、0.3μg/m L、）0.5mL，置10mL于量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。精密量取储备液1mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。(Pribolab STD#1082-2 AFT混合标准品：AFT B 1 和AFT G 1：1.0μg/mL，AFT B 2 和AFT G 2 ：0.3μg/mL ） 供试品溶液的制备： 1. 取供试品粉末约15g(过二号筛)，精密称定，加入氯化钠3g，置于均质瓶中，精密加入精密加入70%甲醇溶液75mL，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11,000r/min, ? 真菌毒素等物质的高效粉碎、萃取，保证检测结果的准确性和精确度。 粉碎样品在不锈钢杯中通过电机旋转驱动刀同时进行劈裂、碾碎、掺合等过程。使物料搅拌粉碎,转速高达22000以上,全金属机身和不锈钢杯子,抗有机溶剂的腐蚀,可以实现在2-3分钟高效实现真菌毒素的均质、萃取等关键环节。 优点： ●高速震荡3分钟即可完成整个真菌毒素及 其他物质的萃取过程； ●转速两档可调，低速12000r/min， 高速22000r/min； ●全金属机身，不锈钢材质，抗有机溶剂腐蚀； ●可广泛应用于食品检验、科学研究、医学治疗、化工制药等行业； ●本机构造方面均合于无菌操作的要求； ●通过CE认证。 应用:

黄曲霉素检测装置

毕业设计 题目：黄曲霉素检测装置设计 专业： 班级： 姓名： 学号： 企业指导教师: 日期： 目录 黄曲霉素的检测装置 (2) 1引言 (3) 1.1黄曲霉素简介 (3) 1.2设计任务 (3) 2黄曲霉素检测装置的工作原理及结构 (4) 2.1黄曲霉素检测装置示意图 (4) 2.2工作原理 (4) 2.3黄曲霉素的检测器的工艺流程 (5) 3相关仪器的选择 (5) 3.1紫外线LED灯的选择 (5) 3.2激光聚焦镜片的选择 (6) 3.3玻璃滤光片的选择 (6) 4黄曲霉素检测装置相关零件的设计 (7) 4.2聚光镜和滤光镜的组合体零件设计 (7) 4.3扇形支撑板零件设计 (8) 4.4电动推杆的零件设计 (8)

5自动化系统设计 (8) 5.1C51单片机概述 (8) 5.2单片机的应用领域 (9) 5.2.1在工业控制中的应用 (9) 5.2.2在智能仪器中的应用 (9) 5.2.3在家用电器中的应用 (9) 5.2.4在信息和通信产品中的应用 (9) 5.2.5在办公自动化设备中的应用 (10) 5.2.6在汽车电子产品中的应用 (10) 5.3芯片的选择 (10) 5.3.1单片机的确定 (10) 5.3.2单片机的结构 (10) 5.3.3传感器的选择 (13) 5.3.4交流继电器的选择 (13) 6系统硬件电路设计 (14) 6.1电源电路设计 (14) 6.2传感器电路设计 (14) 6.3蜂鸣器电路设计 (15) 6.4继电器电路设计 (16) 7系统程序及软件设计 (16) 7.1流程图及软件整体机构设计 (16) 7.2黄曲霉素检测装置程序的工作过程 (17) 8结语 (19) 附录： (19) 附图1 黄曲霉素检测装置图 (19) 附图2 检测装置示意图 (20) 附图3电路仿真图 (20) 黄曲霉素的检测装置 摘要：随着人们生活水平的愈加提高，人们在满足温饱的前提下越来越注重食品的安全，粮食产品中的主要污染物之一的黄曲霉素越来越受到人们的关注。黄曲霉素的分子为真菌毒素，是一种剧毒物质和强致癌物质，黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时可导致肝癌甚至死亡。在天然污染的食品中以黄曲霉毒素B1最为多见，其毒性和致癌性也最强。所以黄曲霉素及时、快速、高效地检测对食品的安全具有重要的意义。 本课题主要研究的是发明一种对粮食产品中的黄曲霉素进行快速检测的装置。我国当前对黄曲霉素的检测的仪器都价格昂贵，耗时较长，远远无法达到市

黄曲霉毒素解毒方法

1.1.4 黄曲霉毒素的解毒措施 黄曲霉毒素危害严重，分析每一批家禽饲料中霉菌毒素的含量是不可能的，当慢性霉菌毒素中毒发生时，除了轻微的生产性能下降外，没有任何明确的临床症状。在发展中国家中，每年黄曲霉毒素都会给饲料业及畜牧业带来巨大经济损失。在过去很长的一段时间里，为尽量减少霉菌毒素的危害所做的努力已经取得长足的进步，避免饲料中黄曲霉毒素的含量超过规定允许的浓度是预防和治疗毒素中毒的方法之一。为减少黄曲霉毒素及其代谢物残留在动物性食品中以及减轻毒性反应，适当的方法包括物理分离，化学方法和毒素粘合剂是必须要使用的[42]，如沸石化合物，活性炭，珍珠岩，膨润土，硅藻土等已经被使用。 1.1.4.1 物理去毒方法 传统用于霉菌毒素的物理去毒方法主要有混合稀释法、水洗法、热处理、脱壳、磨粉、放射、萃取、吸附等。混合稀释法是将简单地将霉变饲料与未霉变饲料进行混合，以降低饲料中霉菌毒素的浓度，此法成本低，工作量大，不能从根本上解决饲料中毒素的问题。水洗法可显著减少毒素，但只用于湿磨或发酵的前处理，否则干燥成本太高。霉菌素素在谷物表面含量高，脱壳可有效降低霉菌毒素水平，但工作量大。黄曲霉毒素耐热，一些试验表明热处理似乎能降低一些毒素水平，然而实际效果存疑。磨粉处理只能改变毒素的分布，不能减少毒素总量。放射能杀真菌孢子，但不减少毒素含量。有机溶剂可提取花生油、棉籽油中的黄曲霉毒素，几乎可将油中所有的黄曲霉毒素除去，但成本高，应用不广[43]。 在当前的实际生产中，往饲料中添加可以吸附霉菌毒素的物质是一种常用的方法，利用吸附剂来降低机体对毒素的吸收率，减少毒素对机体的毒害作用，众所周知的吸附剂主要有水合硅铝酸钙钠盐、蒙脱石、膨润土、粘土、沸石和活性炭等。汪前红、齐德生等[44,45]报道含有矿物、酵母等的复合吸附剂以及蒙脱石均能降低AFB1对动物的负面作用。在含黄曲霉毒素日粮中添加复合吸附剂或蒙脱石，均能在一定程度上能缓解AFB1对动物的毒性作用，降低AFB1中毒的死淘率，一定程度上恢复动物的生产性能，提高动物产品的质量。物理吸附法虽在一定条件下能吸附霉菌毒素，但其吸附毒素的特异性与广谱性的统一还是一个世界性问题。 1.1.4.2 化学去毒方法

黄曲霉毒素的危害及预防措施

黄曲霉毒素的危害及预防措施 https://www.wendangku.net/doc/6710638961.html, 2004-9-24 中国畜牧网 摘要本文主要阐述了黄曲霉毒素的理化特性、对动物和人的危害、在畜产品中的残留以及预防和去毒措施。 关键词黄曲霉毒素危害措施 黄曲霉毒素（Aflatoxin，简写AF）主要是黄曲霉菌和寄生曲霉菌的代谢产物。在温暖潮湿气候地区的粮食和饲料，凡被黄曲霉菌和寄生曲霉菌污染都可能存在黄曲霉毒素。黄曲霉毒素最易污染花生、玉米、棉籽、禽蛋、肉、奶及奶制品，其次是小麦、高粱和甘薯，大豆粕被黄曲霉毒素污染的程度轻些。我国粮食和饲料被黄曲毒素污染率很高，给饲料企业和养殖业主带来了很大损失，人们食用含有黄曲霉毒素的食物危害到人体健康。 1 黄曲霉毒素的理化特性 目前已确定黄曲霉毒素结构的有AFB1、AFB2、AFM1等18种，它们的基本结构中都含有二呋喃环和氧杂萘邻酮（又名香豆素），前者为其毒性结构，后者可能与其致癌有关。黄曲霉毒素难溶于水、己烷、乙醚和石油醚，易溶于甲醇、乙醇、氯仿和二甲基甲酰胺等有机溶剂。分子量为312-346，熔点为200-300℃，黄曲霉毒素耐高温，通常加热处理对其破坏很小，只有在熔点温度下才发生分解。黄曲霉毒素遇碱能迅速分解，但此反应可逆，即在酸性条件下又复原。一般来说，温度30℃、相对湿度80%、谷物水份在14%以上（花生的水份在9%以上）最适合黄曲霉繁殖和生长。在24-34℃之间，黄曲霉菌产毒量最高。几乎所有谷物、饲草和各种食品（包括畜产品）都可作为黄曲霉基质。 2 黄曲霉毒素的危害 2.1黄曲霉毒素对动物的危害 黄曲霉毒素的毒性很大，是目前已发现霉菌中毒性最大的一种。目前发现的18种黄曲霉菌毒素中，AFB1毒性最强，AFM1、AFG1次之，AFB2、AFG2、AFM2毒性较弱。AFB1的毒性是砒霜的68倍，诱发肝癌的能力比二甲基亚硝胺大75倍。其毒性因动物的种类、年龄、性别和体况以及营养状况的不同有差异，年幼动物、雄性动物较敏感。 黄曲霉毒素具有诱导突变、抑制免疫和致癌的作用。黄曲霉毒素作用的靶器官主要是肝脏，动物中毒以全身性出血、消化机能障碍和神经系统紊乱为特征。急性中毒表现为食欲废绝，运动失调，排泄停止，肝炎，黄疸，肝脏充血、出血、肿大、变性和坏死，并伴有严重的血管和中枢神经损伤，动物中毒后几小时至数天内死亡。慢性中毒者早期症状表现为食欲不佳，体重减轻，生产性能降低，胴体和蛋壳品质下降，后期出现黄疸，脂肪肝、肝损伤及抑制动物免疫机能和致癌作用。 猪 猪对霉菌毒素敏感，特别是哺乳或哺乳仔猪。一般来讲，当水平相对较低时，霉菌毒素降低饲料采食量、生产性能和免疫功能。20-200ppb的黄曲霉毒素B1可引起饲料采食量和生产性能下降，但可通过提高特殊日粮养分如赖氨酸或蛋氨酸水平来抵消；严重黄曲霉毒素中毒（1000-5000ppb），可发生急性影响，包括对呼吸的影响。据报道，饲料中黄曲霉毒素含量为2.0mg/kg时，可使猪体重由对照组的33.7kg减少到29.7kg。黄曲霉毒素通过胎盘屏障转移到胎儿，引起胎儿畸形，导致产仔数减少、产弱仔、死胎和木乃伊。急性中毒的个别母畜会发生流产。公猪黄曲霉毒素中毒则表现性欲下降。 家禽

黄曲霉毒素M1检测

黄曲霉毒素M1最近算是成大明星了，准备写个黄曲霉毒素M1分析方法总结，和大家一起探讨（持续更新）！ 1、结构及理化性质 不管三七二十一，还是先上个图： 先开个头，吃个饭回来写…… 为什么说黄曲霉毒素M1，都出现在与动物相关的产品中？ 黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1在动物组织内的代谢产物，并能够进入乳汁（牛奶？），因此大家看到的检测黄曲霉毒素M1都是检的“动物组织：如肝肾、乳腺”以及乳及其制品等”。 再来一个黄曲霉毒素B1代谢途径图，黄曲霉毒素B1在体内羟化形成黄曲霉毒素M1（左上，相机不好，照的效果不太好，大家见谅，有空补一个好点的图）。新图如下：

2、黄曲霉毒素M1的相关限量标准 食品中的限量标准以GB 2761—2011为准：规定如下：

注：上述限量的检测方法：婴幼儿配方食品按GB 5009.24 规定的方法测定，乳及乳制品按GB 5413.37（GB 541337-2010 食品安全国家标准乳和乳制品中黄曲霉毒素M1 的测定）规定的方法测定。 3、分析方法 黄曲霉毒素M1的分析方法主要包括：薄层色谱法；酶联免疫吸附法，免疫亲和柱净化荧光光度法，液相色谱法，液质联用法等。 3.1 薄层色谱法： GB 5009.24-2010 食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定（用于替代“GB/T 5009.24-2003 食品中黄曲霉毒素M1与B1的测定”）为薄层色谱法： 适用范围：牛乳及其制品、奶油及新鲜猪组织（肝、肾、血及瘦肉）等食品中黄曲霉毒素M1 与B1 的测定。 原理：样品经提取、浓缩、薄层分离后，黄曲霉毒素M1 与B1 在紫外光（波长365nm）下产生蓝紫色荧光，根据其在薄层上显示荧光的最低检出量来测定含量。 3.2 酶联免疫吸附法ELISA 适用范围：ELISA适用于乳，乳粉和乳酪中黄曲霉毒素M1含量的测定。 原理：黄曲霉毒素M1偶联物包被在酶标板的小孔中，将含有黄曲霉毒素M1的样品或标准液和抗M1的抗体加入到小孔中，此事固相包被的黄曲霉毒素M1和样品、标准品中游离的黄曲霉毒素M1竞争性地与抗体进行反应。反应完全之后，用稀释过的清洗液洗小孔，将未反应的物质冲掉。再在小孔中加入过氧化物酶，温育后再次清洗，加入底物溶液，温育后产生蓝色，加入停止液，终止颜色反应，颜色变为黄色，用酶标仪在450nm处测定颜色的强度，黄曲霉毒素M1的浓度与颜色强度成反比关系。 3.3 免疫亲和柱净化高效液相色谱法 适用范围：乳，乳粉，低脂乳，脱脂乳，低脂乳粉，脱脂乳；乳粉中的黄曲霉毒素M1的最低检测限大约是0.1μg/kg，乳中的最低检测限大约是0.01μg/kg。 原理：亲和柱内含有的黄曲霉毒素M1特异性单克隆抗体交联在固体支持物上，含有黄曲霉毒素M1的样品通过免疫亲和柱时，抗体选择性的与黄曲霉毒素M1（抗原）结合，形成抗原抗体复合体。用水洗柱除去柱内杂质，然后用洗脱剂洗脱吸附在柱上的黄曲霉毒素M1，收集洗脱液。HPLC-FLD测定。 3.4 C18，硅胶柱净化高效液相色谱法

黄曲毒霉素测定法

1．主题内容：建立有黄曲霉毒素测定法操作方法。 2．适用范围：本规程适用于检查药物在生产过程中的黄曲霉毒素测定法的操作。 3．引用标准：《中国药典2010版一部》 4．责任：化验员、QC主管。 5. 用途：化验室 6．内容：本法系用高效液相色谱法（附录ⅥD）测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素（以黄 曲霉毒素B 1、黄曲霉毒素B 2 、黄曲霉毒素G 1 和黄曲霉毒素G 2 总量计），除另有规定外，按下列 方法测定。 6.1色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（40:18:42）为流动相，流速每分钟0.8ml；采用柱后衍生法检测，衍生溶液为0.05%的碘溶液（取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀释至1000ml制成），衍生化泵流速每分钟0.3ml， 衍生化温度70℃；以荧光检测器检测，激发波长λ ex =360nm（或365nm），发射波长λ ex =450nm。 两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。 6.2混合对照品溶液的制备：精密量取黄曲霉毒素混合标准品（黄曲霉毒素B 1、黄曲霉毒素B 2 、 黄曲霉毒素G 1和黄曲霉毒素G 2 标示浓度分别为1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml） 0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。精密量取储备液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。 6.3供试品溶液的制备：取供试品粉末约15g（过二号筛），精密称定，加入氯化钠3g，置于均质瓶中，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11000转/分钟），离心5分钟（离心速度2500转/分钟），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，量取续滤液20.0ml，通过免疫亲合柱（AflaT-est@P），流速每分钟3ml，用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，在用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

I667-01黄曲霉毒素测定法一部检验标准操作规程

1.目的：建立黄曲霉毒素测定法(一部)检验标准操作规程，并按规程进行检验，保证检验操作规范化。 2.依据： 2.1. 《中华人民共和国药典》2010年版一部。 3.范围：适用于所有用黄曲霉毒素测定法(一部)测定的供试品。 4.责任：检验员、质量控制科主任、质量管理部经理对本规程负责。 5.正文： 5.1. 本法系用高效液相色谱法（附录Ⅵ D）测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉 毒素（以黄曲霉毒素B 1、黄曲霉毒素B 2 、黄曲霉毒素G 1 和黄曲霉毒素G 2 总量计）， 除另有规定外，按下列方法测定。 5.1.1. 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（40：18：42）为流动相，流速每分钟0.8ml；采用柱后衍生法检测，衍生溶液为0.05%的碘溶液（取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀释至1000ml制成），衍生化泵流速每分钟0.3ml，衍生化温度70℃；以荧光检测器检 测，激发波长γ ex =360nm（或365nm），发射波长γ em =450nm。两个相邻色谱峰的 分离度应大于1.5。 5.1.2. 混合对照品溶液的制备：精密量取黄曲霉毒素混合标准品（黄曲霉毒素 B 1、黄曲霉毒素B 2 、黄曲霉毒素G 1、 黄曲霉毒素G 2 标示浓度分别为1.0μg/ml、 0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。精密量取储备液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。 5.1.3. 供试品溶液的制备：取供试品粉末约15g（过二号筛），精密称定，加入氯化钠3g，置于均质瓶中，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11000转/分钟），离心5分钟（离心速度2500转/分钟），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，量取续滤液20.0ml，通过免疫亲和柱（AflaT-est@P），流速每分钟3ml，用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

黄曲霉毒素检验方法

一、目的 规范实验室检验方法。 二、内容 （一）试验准备 1、标定荧光计。 （1）、将仪器后的电源开关打开。 （2）、按SELECTTEST键，直至显示出AflaTest，按ENTER。 （3）、荧光计显示：START CALBRATION…OPEN THE LID INSERT RED VIAL 打开仪器盖，将红色的真菌毒素标定管放入。一定要确认标定管是 否已放到了仪器的底部。 （4）、仪器显示：HIGHCAL 22PPB 如果这个值正好是所选分析方法规定的设定值，请按ENTER键。否则，从键盘上所规定的设定值，确认准确无误后，按ENTER键。 （5）、仪器显示：READING HIGH CAL…SA VING HIGH INENSTTY OPEN THE LID INSERT GREEN VIAL 打开仪器盖取出红色的标定管，插入绿色的真菌毒素标定管。一定 要确认标定管是否已充分插入仪器的底部。 （6）、仪器显示：LOW CAL 1.0PPB

如果这个值正好是所选分析方法规定的设定值,请按ENTER键.否则,从 键盘上所规定的设定值,确认准确无误后,按ENTER键。 （7）、仪器显示：READING LIW CAL…SA VING HIGH INTENSITJY 接着显示：OPEN THE LID INSERT GREEN VIAL 打开仪器盖取出绿色的标定管。 （8）、仪器显示：VICAM V1.3 READY 按SELECT TEST键,仪器显示: AFLATEST, 按ENTER键。 （9）、仪器显示：START RUN TEST OPEN THE LID （10）、插入黄色的真菌毒素标定管，其读数应该在分析方法的测定范围内。 （11）、荧光屏计标定工作完毕，可经进行样品分析了。荧光计每 周需要标定一次。如果需要重新标定，请按STOP键，再按OPIONS 键，直至仪器显示：CALIBRATE TEST 然后按ENTER键，仪器显示：AFLATEST 如果不是这样，按SELECT TEST键，直至仪器显示：AFLATEST， 按 ENTER键。然后，按照上面所述操作步骤进行。如果进行样品分析，按SELECT TEST键，直至仪器显示：AFLATEST键。 2、配制AflaTest显色液（一天配制一次）。

浅谈如何预防黄曲霉毒素中毒

浅谈如何预防黄曲霉毒素中毒 黄霉菌是微生物世界的一个大家族，黄曲霉菌是这个大家族的一员。黄曲霉菌本身是无毒的，但在其繁殖代谢的过程中可分泌出有毒的物质黄曲霉毒素。黄曲毒素是一种剧毒物质，它损害动物的肝脏，引起肝细胞坏死、肝纤维化、肝硬化等病变。黄曲霉毒素是目前发现的最强的致癌物质之一。 1主要可诱发肝痛，还能诱发胃癌、肾癌、直肠癌及乳腺、卵巢、小肠等部位的肿瘤 黄曲霉毒素对人体健康威胁很大。目前已确定其化学结构，黄曲霉毒素B1、B2、C1、G2等17种，其中趴毒性最大。食物中的花生、花生油、玉米、大米、棉籽等最容易污染上黄曲霉寿素，小麦，大麦也常被污染，豆类一般污染较轻，工业化生产的发酵制品如面酱。咸肉、火腿、香肠等肉类食品，亦能受到黄曲霉菌的污染。我国卫生标准规定，花生、花生油、玉米中，黄曲霉毒素含量不超过20微克/公斤；大米、食用油不得超过10微克/公斤；其它粮食、豆类、发酵食品不得超过5微克/公斤；婴儿食品中不得有黄曲毒素。 2受黄曲霉菌污染的粮及食品不能食用 轻度污染的粮及其他食品，可以用一些简单的方法将毒素破坏掉或除去。日常生活中可以用以下方法去毒： 2．1剔除霉变粮粒因毒素主要集中在霉变的粮粒中，凡表面长有黄绿色霉菌，或破损皱缩、变色、变质的花生米和玉米，都有可能污染黄曲霉毒素。在食用前应仔细挑选，剔除霉变粒。 2．2提高加工精度稻谷污染黄曲霉菌后，米中的毒素主要集中在米糠层，如果在稻谷加工时，将糙米碾得精一点，尽量除去米糠层，可降低大米中毒素的含量。玉米中的黄曲霉毒素有54~72％集中在皮层和胚中，如在加工时提取胚，可除去大部分毒素。用含黄曲霉毒素的玉米制成玉米淀粉，毒素的含量仅为原有含量的1％。 2．3 水洗去毒将污染上黄曲霉菌的大米用清水反复搓洗五六次，一直洗到水清时再煮饭，可除去大部分毒素。 2．4加热去毒蒸煮、爆炒或油炸可减少一部分黄曲霉毒素。轻度污染的花生米，爆炒可使黄曲霉毒素B1、C1含量分别减少65％和62％；若用油炸，可使黄曲霉毒素Bl、Cl 含量分别减少69％和67％。大米煮成米饭，一般能破坏20％的黄曲霉毒素。用高压锅煮米饭，去毒效果比普通锅煮饭好。 2．5植物油中的去毒在含黄曲霉毒素的植物油中，加入活性白陶土或活性炭等吸附剂，搅拌后静置沉淀，取上层清油，毒素含量大为降低。如在含毒花生油中加入1．5％的白陶土，可使含毒量从每公斤100微克降至10微克以下。用含黄曲霉毒较低的植物油烹调食物时，先将油倒入锅内烧至冒微烟(约120℃时)，可除去油中90％以上的毒素。如果菜肴中加葱、姜、蒜等辛香料，对除去黄曲霉毒素效果更为理想。 2．6山苍子去毒用中药山苍子或山苍子胶丸均可，每百公斤粮食用十四五粒胶丸。用法是先把胶丸剖开，放在小瓶中，用透气纱布扎住瓶口，然后连瓶埋人米缸中，盖上缸盖，让芳香油自然挥发，熏蒸粮食，即可消除黄曲霉毒素。将山苍子野果或干果直接埋人粮食中，亦可收到良好的效果。