ABO血型鉴定正反定型不符原因分析

【摘要】目的分析临床常见的abo血型正反定型不符的原因及解决方法。方法应用正反定型、吸收放散试验和唾液血型物质测定试验检测abo血型正反定型不符的标本，分析正反定型不符原因，进行正确的分型。结果共出检abo血型正反定型不符标本18例，其中冷自身抗体8例；血浆成分异常4例；亚型2例；ab抗原减弱2例；抗体减弱或缺失1例；同种抗体1例子。结论对abo血型正反定型不符的标本，应采用正确方法鉴定abo血型，从而确保临床输血安全。

【关键词】 abo血型；正反定型不符；原因分析

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2014.03.733 文章编号：1004-7484（2014）-03-1767-02

血型鉴定及鉴定结果的可靠性对临床安全输血具有至关重要的作用，正确的血型鉴定是临床安全输血的关键，而错误血型的血液一旦输入，则直接危及患者生命安全。但在临床实际工作中，常出现abo血型不符的现象，本文对我院2010年8月至2013年8月鉴定abo血型正反定型不符的标本18例进行分析报告如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料我院2010年8月?2013年8月门诊及住院鉴定血型患者标本，其中abo 血型正反定型不符的有18例。

1.2 试剂抗a、抗b、抗ab、抗h、抗a1血清，红细胞ac、bc、oc、a1c、a2c（由长春博德生物制品研究所）；不规则抗体筛查红细胞及谱细胞（上海血液生物医药有限公司）。

1.3 方法血型正反定型（试管法、微柱凝胶法）、吸收放散试验、abo型认定试验、抗人球蛋白试验、抗体鉴定试验、唾液血型物质测定试验。以上试验均按规范进行操作。

2 结果

通过对18例血样标本进行abo正反定型、吸收放散试验、抗体鉴定试验、抗人球试验、唾液血型物质测定等试验，发现造成abo型正反定型不符的原因主要为冷自身抗体8例，其它原因有血浆成分异常4例，血型亚型2例，ab抗原性减弱2例，抗体缺失及减弱1例，同种抗体1例。

3 讨论

在鉴定abo血型时，如果发现正反定型不符，首先严格按照操作规程重新试验，排除人为操作失误、试剂因素后综合分析原因并应用正确的方法解决出现的问题。abo血型正反定型不符的常见原因如下。

3.1 冷自身抗体本组例中标本8例。冷自身抗体是引起正反定型不符的最常见原因。一般健康人血清中含有少量的冷凝集素，且效价很低，一般在1：16以下，冷凝集素是红细胞自身免疫抗体，以igm形式存在于血清中，其效价大于1：64凝集素的患者，能使血型鉴定受到干扰。在进行正定型时，误定a、b、o型为ab型，在反定型时，容易把a、b、ab型误定为o型。冷凝集素属冷反应的自身抗体，其特点是在较低的温度下能使患者自身的红细胞凝集，在体外最适的反应温度为4-27℃，4℃时反应最强，37℃时冷凝集消失。冷抗体效价不超过1：16时，一般不会发生凝集，但某些疾病如支原体肺炎、传染性单核细胞增多症、病毒性肺炎、再生障碍性贫血恶性变、自身免疫性溶血性贫血、红斑狼疮等可引起高效价的冷凝集素，因此，对有高效价凝集素的患者，可将红细胞和血清分别放在37℃预温，并在此条件下进行血型鉴定，对于自身红细胞已凝集的情况，进行血型鉴定时必须用37℃生理盐水反复洗涤红细胞，用洗涤后的红细胞反复吸收血清中的冷凝集素，使血清中自身的冷凝集素消失，再进行血型鉴定。在冷自身抗体效价太高，血样标本已凝固的情况下，可用巯基乙醇处理红细胞再进行abo正定型试验[1]。

3.2 血浆成分异常本组例中标本有4例，某些肝病、多发性骨髓瘤等疾病的患者存在大

量的异常蛋白，某些红细胞沉降率增快的疾病可引纤维蛋白增高，某些药物如右旋糖苷、聚维酮、羟乙基淀粉等主要为血浆扩溶剂[2]这些异常蛋白可使红细胞发生缗钱状凝集，此时可加1滴生理盐水混匀，假凝集即可消失，真凝集不变。如果加生理盐水后仍凝集不消失，可用抗人球蛋白法再确认。

3.3 抗体减弱或缺失本组例中标本1例，老年人、白血病、骨髓瘤患者、长期接受免疫抑制剂治疗、烧伤、丙种球蛋白缺乏症等都能导致患者抗体减弱，抗体水平下降或消失，会造成反定型凝集减弱，引起血型误定。这种情况反定型可通过延长反应时间或增加血清量并在4℃条件下试验观察结果。

3.4 抗原减弱本组例中标本2例，白血病和某些疾病能引起红细胞抗原减弱，造成正定型凝集减弱，引起血型误定。这种情况正定型可通过增加红细胞悬液浓度和延长反应时间，并在4℃条件下试验观察结果，还要加做吸收放散试验，唾液血型物质检测试验，并注意与亚型区别。

3.5 血型亚型本组例中有2例，亚型是abo血型正反定型不符的其中原因，由于abo 血型亚型红细胞抗原性减弱，抗a或抗b试剂有时不能检测出其抗原，造成abo血型正反定型不符。鉴定方法有：在红细胞的正定型中加做抗ab、抗a1、抗h，并观察红细胞与其凝集的强度；在反定中加做a1c、a2c；再做吸收放散试验、唾液血型物质检测试验。

3.6 同种抗体本组例中有1例，同种抗体在人群中的检出率为（0.3-2.0）%，一般通过输血、妊娠产生或人体计划免疫产生[3]，引起abo血型不符的同种抗体有rh、mn、p等血型系统抗体。当反定出现oc凝集而自身对照细胞不凝集时，有可能是同种抗体引起。可用筛选细胞和谱细胞做抗体筛查和鉴定。

血型鉴定是一项高度严谨的工作，必须严格遵守各项操作规程，熟练撑握实验技能，认真对待每一份标本，仔细观察各种异常情况，采用正确的方法解决血型疑难问题，确保临床输血安全。

ABORhD血型定型检测试剂卡操作指南

输血相容性检测培训课件 ABO/RhD血型定型检测试剂卡操作指南 【试验目的和原理】 ABO血型鉴定是通过检测被检者红细胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被检者血浆中是否存在抗A和/或抗B抗体（反定型）来确定。 对于成年个体被检者，红细胞上的A和/或B抗原与血浆中的抗A和/或抗B抗体存在一种对应关系。其独特性质在于：红细胞上缺乏A和/或B抗原，则血清中存在与所缺乏的抗原对应的强反应性抗体，如红细胞上缺乏A抗原，则可以预见血浆中存在抗A抗体。 常规的ABO定型必须包括正定型（红细胞定型）和反定型（血浆定型），并将正反定型结果相互验证，只有正反定型结果一致时才能准确定型。 Rh阳性和阴性的鉴定是通过检测被检者的红细胞上是否有D抗原，有D抗原为Rh阳性，没有D抗原则为Rh阴性。 ABO/RhD血型定型检测试剂卡采用凝胶作为微柱凝胶卡的填充物，将生物化学的凝胶分子筛过滤技术、离心技术和血型血清学的抗体特异性结合在一起，其中抗A凝胶管中灌注了含抗A抗体的凝胶，抗B凝胶管中灌注了含抗B抗体的凝胶，抗D凝胶管中灌注了含IgM 抗D抗体的凝胶。A细胞、B细胞及Ctr管中灌注了不含血型抗体的凝胶，抗A、抗B及抗D凝胶管用于红细胞上A、B及D抗原检测，而A

细胞、B细胞及Ctr管用于检测血浆中的抗体。当抗原抗体反应时，凝集的红细胞在离心力的作用下不能通过凝胶而留在凝胶上层或游离在凝胶中，呈现阳性反应；而抗原抗体没有反应时，未凝集的红细胞在离心力的作用下可通过凝胶而沉积在微柱凝胶管的底部，呈现阴性反应。 【ABO/RhD血型定型检测试剂卡的用途】 1、用于输血前检测 （1）鉴定ABO，以备选择 ABO血型相配合的血液用于交叉配血。（2）鉴定RhD血型，以备选择RhD血型相配合的血液用于交叉配血。 2、用于围产期检查 （1）用于产前夫妇的ABO、RhD血型检测，进行新生儿溶血病产前预测。

ABORhD血型定型检测试剂卡操作规程

ABO/RhD血型定型检测试剂卡操作规程 【试验目的和原理】 ABO血型鉴定是通过检测被检者红细胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被检者血浆中是否存在抗A和/或抗B抗体（反定型）来确定。对于成年个体被检者，红细胞上的A和/或B抗原与血浆中的抗A和/或抗B抗体存在一种对应关系。其独特性质在于：红细胞上缺乏A和/或B抗原，则血清中存在与所缺乏的抗原对应的强反应性抗体，如红细胞上缺乏A抗原，则可以预见血浆中存在抗A抗体。 常规的ABO定型必须包括正定型（红细胞定型）和反定型（血浆定型），并将正反定型结果相互验证，只有正反定型结果一致时才能准确定型。 Rh阳性和阴性的鉴定是通过检测被检者的红细胞上是否有D抗原，有D抗原为Rh阳性，没有D抗原则为Rh阴性。 ABO/RhD血型定型检测试剂卡采用凝胶作为微柱凝胶卡的填充物，将生物化学的凝胶分子筛过滤技术、离心技术和血型血清学的抗体特异性结合在一起，其中抗A凝胶管中灌注了含抗A抗体的凝胶，抗B凝胶管中灌注了含抗B抗体的凝胶，抗D凝胶管中灌注了含IgM抗D抗体的凝胶。A 细胞、B细胞及Ctr管中灌注了不含血型抗体的凝胶，抗A、抗B及抗D 凝胶管用于红细胞上A、B及D抗原检测，而A细胞、B细胞及Ctr管用于检测血浆中的抗体。当抗原抗体反应时，凝集的红细胞在离心力的作用下不能通过凝胶而留在凝胶上层或游离在凝胶中，呈现阳性反应；而抗原抗体没有反应时，未凝集的红细胞在离心力的作用下可通过凝胶而沉积在微柱凝胶管的底部，呈现阴性反应

【ABO/RhD血型定型检测试剂卡的用途】 1、用于输血前检测 （1）鉴定ABO，以备选择ABO血型相配合的血液用于交叉配血。 （2）鉴定RhD血型，以备选择RhD血型相配合的血液用于交叉配血。2、用于围产期检查 （1）用于产前夫妇的ABO、RhD血型检测，进行新生儿溶血病产前预测。（2）用于产后母子的ABO、RhD血型检测，进行新生儿溶血病产后诊断。 3、用于常规ABO、RhD血型化验检查，如健康体检等。 【样本要求】 1、建议使用抗凝的血样，尤其是EDTA抗凝管采集的血样，需要量2ml 。 （EDTA抗凝采血管为紫帽管）。 2、血液样本在采集后48小时以内检测。

ABO血型正反定型不符与交叉配血不合的原因及其处理方法_杨世明

论著 文章编号:1007-8738(2011)07-0812-02 ABO 血型正反定型不符与交叉配血不合的原因及其处理方法 杨世明*,张勇萍,田 榆,徐 宁,王文婷(第四军医大学唐都医院输血科,陕西西安710038) 收稿日期:2011-01-18; 接受日期:2011-04-28 作者简介:杨世明(1955-),男(苗族),湖北宣恩人,副主任技师 T e:l 029-********;E-m ai:l s hxkysh m@f m https://www.wendangku.net/doc/a95429509.html, .cn *Correspond i ng au t hor [摘要] 目的:探讨引起患者ABO 血型正反定型不符与交叉配血不合的原因及其处理方法,确保输血安全。方法:应用血型血清学检测方法对A BO 血型正反定型不符及交叉配血不合的血标本进行正反定型、不规则抗体筛选及特异性鉴定、吸收放散试验、唾液血型物质测定等系列检测,分析引起血型正反定型不符及交叉配血不合的原因,为患者选择同型及交叉配血相合的血液进行输注。结果:在输血前的血型血清学检测中发现ABO 血型正反定型不符及交叉配血不合的血标本468例,其中自身冷抗体132例(28.2%),血型不规则抗体96例(20.5%),血型抗原性减弱68例(14.5%),血型抗体效价减弱60例(12.8%),自身抗体阳性54例(11.5%),血浆蛋白异常18例(3.8%),实验方法学原因16例(3.4%),ABO 血型不合的干细胞移植13例(2.8%),肝素影响9例(1.9%),血标本污染2例(0.4%)。结论:ABO 血型正反定型不符及交叉配血不合的原因大多数是由自身抗体,不规则抗体,血型抗原抗体减弱及血浆蛋白异常等引起的。因此对ABO 血型正反定型不符及交叉配血不合的血标本,应采用多种血型血清学检测方法进行互相验证,以保证血型鉴定及交叉配血无误,确保临床输血安全。[关键词]血型鉴定;抗体鉴定;交叉配血;输血安全[中图分类号]R 457.1 [文献标识码]B ABO 血型是临床输血和器官移植中最重要的血型系统,在输血前的血型血清学检测中,准确地进行ABO 血型鉴定、不规则抗体筛选及交叉配血试验, 为患者选择不含相应抗原的血液进行输注,是确保临床输血安全和有效的重要措施。但在输血前的血型血清学检测中,常出现AB O 血型正反定型不符及交叉配血不合的现象。如果误定患者或供血者的ABO 血型,交叉配血未及时发现有临床意义的血型不规则抗体,误输异型血,就会严重威胁患者的生命安全。现将468例ABO 血型正反定型不符及交叉配血不合的原因进行分析,并对其处理方法及输血对策进行探讨。1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 标本来源 2000-01/2010-10期间在我院住院及门诊 的患者。进行血型血清学检测中,出现血型正反定型不符及交叉配血不合患者468例,男213例,女255例,年龄2d~82岁。1.1.2 试剂仪器 抗A 、抗B 、抗A +B 、抗H 、抗A 1、抗D 、抗C 、抗c 、抗E 、抗e 血型定型试剂、抗人球蛋白试剂、不规则抗体筛选细胞及谱细胞均由上海血液生物医药有限责任公司提供,反定型红细胞悬液由长春博德生物制品研究所提供(部分由本实验室制备),凝聚胺配血试剂由珠海贝索生物技术有限公司提供,微柱凝胶卡、专用离心机、37 孵育器及其配套试剂由达亚美公司提供。 1.2 方法 用微柱凝胶法进行A BO 正反定型及R h 血型鉴定;用凝聚胺法和微柱凝胶法进行血型不规则抗体筛选及特异性鉴定;吸收放散试验及唾液血型物质测定按参考文献[1]操作;用2-M e 处理被患者自身冷抗体凝集的红细胞;用氯喹放散法检测自身抗体掩盖的同种抗体。 2 结果 通过对468例患者血标本进行ABO 正反定型、吸收放散试验、唾液血型物质测定、抗人球蛋白试验、血型不规则抗体筛选及其特异性鉴定等,发现造成ABO 血型正反定型不符及交叉配血不合的主要原因有:自身冷抗体132例(28.2%),血型不规则抗体96例(20.5%),血型抗原性减弱68例(14.5%),血型抗体效价减弱60例(12.8%),自身抗体阳性54例(11.5%),血浆蛋白异常18例(3.8%),实验方法学原因16例(3.4%),A B O 血型不合的干细胞移植13例(2.8%),肝素影响9例(1.9%),血标本细菌污染2例(0.4%)。 3 讨论 AB O 血型鉴定和交叉配血可受多种因素的干 扰,引起正反定型不符或交叉配血不合。在进行AB O 血型鉴定和交叉配血时,如果发现正反定型不符及交叉配血不合,应重新抽取血标本并使用质量合格的检测试剂重做一次试验,在排除人为因素和技术原因以后,根据具体情况进行综合分析。本研究通过正反定型、吸收放散试验、唾液血型物质测定、血型不规则抗体筛选及其特异性鉴定,并在正定型时加做抗AB 、抗A1和抗H 试剂,反定型时加做A1型细胞、A 2型细胞、O 型细胞及自身对照,排除AB O 亚型的干扰,同时在4 、22 及37 孵育,结果表明引起AB O 血型正反定型不符及交叉配血不合的主要原因有:自身冷抗体132例(28.2%),血型不规则抗体96例(20.5%),血型抗原性减弱68例(14.5%),血型抗体效价减弱60例(12.8%),自身

ABO血型鉴定正反定型试验方法

A B O血型鉴定正反定型 试验方法 This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020

ABO血型鉴定正反定型试验方法 一、试剂和材料： （一）单克隆抗A、抗B试剂（由试剂厂家提供） （二）显微镜、载玻片 （三）A型、B型红细胞（本实验室制备的5%混悬液） （四）EDTA抗凝的待测红细胞全血 （五）竹签 二、方法（玻片法）： （一）正定型： 1.在一块干净的玻片上，间隔一定距离做好标记，分别滴一滴抗A和抗B试剂； 2.在每滴试剂中加一滴待测红细胞全血； 3.用竹签混匀试剂和红细胞，并使混合物直径＞15mm； 4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察； 5.判读、解释并记录反应结果。 （二）反定型： 1.在玻片上间隔一定距离标明Ac和Bc字样。分别滴加5%的A型红细胞悬液、B型红细胞悬液各一滴；

2.在玻片每滴红细胞悬液上滴加待测血清各一滴； 3.混匀（同正定型）； 4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察； 5.判读、解释并记录反应结果。 6.结合正反定型反应结果、判定血型，见表1 表1 ABO血型正反定型试验结果判定 三、附注： （一）表中“O”表示无凝集，“+”表示凝集，一般都是3-4个+的强凝集反应；（二）2分钟后红细胞仍呈均匀混悬状态是阴性反应；

（三）若得到弱的或可凝集反应结果，该标本应用试管法重新试验； （四）由于新生儿在出生4~6个月内，血浆中的ABO抗体活动太弱，并且含有来自母亲的抗体，故新生儿血型只能由检测红细胞抗原的正定型来测定其ABO血型； （五）做正定型时，还可加一抗A、B血清（O型人血清），以检测ABO弱抗原；做反定型时可以加试一O型红细胞，借以证实是否有不规则抗体的存在。

ABO血型鉴定正反定型试验方法

A B O血型鉴定正反定 型试验方法 标准化管理处编码[BBX968T-XBB8968-NNJ668-MM9N]

ABO血型鉴定正反定型试验方法 一、试剂和材料： （一）单克隆抗A、抗B试剂（由试剂厂家提供） （二）显微镜、载玻片 （三）A型、B型红细胞（本实验室制备的5%混悬液） （四）EDTA抗凝的待测红细胞全血 （五）竹签 二、方法（玻片法）： （一）正定型： 1.在一块干净的玻片上，间隔一定距离做好标记，分别滴一滴抗A和抗B试剂； 2.在每滴试剂中加一滴待测红细胞全血； 3.用竹签混匀试剂和红细胞，并使混合物直径＞15mm； 4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察； 5.判读、解释并记录反应结果。 （二）反定型： 1.在玻片上间隔一定距离标明Ac和Bc字样。分别滴加5%的A型红细胞悬液、B型红细胞悬液各一滴；

2.在玻片每滴红细胞悬液上滴加待测血清各一滴； 3.混匀（同正定型）； 4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察； 5.判读、解释并记录反应结果。 6.结合正反定型反应结果、判定血型，见表1 表1 ABO血型正反定型试验结果判定 三、附注： （一）表中“O”表示无凝集，“+”表示凝集，一般都是3-4个+的强凝集反应；（二）2分钟后红细胞仍呈均匀混悬状态是阴性反应；

（三）若得到弱的或可凝集反应结果，该标本应用试管法重新试验； （四）由于新生儿在出生4~6个月内，血浆中的ABO抗体活动太弱，并且含有来自母亲的抗体，故新生儿血型只能由检测红细胞抗原的正定型来测定其ABO血型； （五）做正定型时，还可加一抗A、B血清（O型人血清），以检测ABO弱抗原；做反定型时可以加试一O型红细胞，借以证实是否有不规则抗体的存在。

抗A抗B血型定型试剂

抗A抗B血型定型试剂（单克隆抗体） 包装规格：10ml 预期用途： 1、专用于定性鉴定人ABO血型（正定型） 2、ABO血型系统是临床输血、器官移植中最重要的血型系统， 错误的ABO血型定型导致的输血反应将给受血者带来十分严 重的后果。因此，《中国输血技术操作规程》规定，ABO血型 鉴定必须通过正反定型。正定型是用已知的抗A和抗B血型 定性试剂测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；反定 型是用已知ABO血型的红细胞测定血清中有无相应的抗A抗 体或/和抗B抗体。 检验原理：根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，以及血清中有无抗A或（和）抗B抗体，可以将红细胞血型分为A型、B 型、AB型和O型。根据抗A和抗B抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，可以鉴定ABO血型。ABO血型表现型反应格局表见下表： ABO血型表现行反应格局表

主要组成成分： 1、本品由抗A血型定型试剂、抗B血型定型试剂各1支组成。 2、本品由法国GIAGAST公司提供的杂交瘤细胞培养上清液 和本公司自制的杂交瘤细胞培养上清液按4:1比例混合后， 加入适量稳定剂、染色剂、防腐剂配置而成。 贮存条件及有效期: 1、储存条件：2-8℃避光保存。如果长时间储存在高温或反复冻 融会使试剂失去活性。 2、有效期：储存条件下有效期24个月。 适用仪器： 本品为非仪器配套试剂。 样本要求： 按照临床输血技术规范中的血液样本采集步骤，采集患者或供血者、受血者的血液，红细胞抗凝或不抗凝样本。严重溶血、脂血、污染标本不适用本项检测。 检验方法： 1、平板法（玻片法） （1）加1滴抗A或抗B试剂于玻片上。 （2）再加1滴10%的被检红细胞悬液。该红细胞悬液可以是盐水悬液，也可以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞。 （3）在圆形的玻片区域中混匀，（直径约为20mm大小），前后缓慢摇晃玻片。2分钟左右肉眼判读结果，并记录。

ABO血型正反定型

ABO血型正、反定型操作规程 [目的] 保证ABO血型鉴定准确，确保临床输血安全。 [适用范围] XXX医院输血科 [职责] 具有专业技术的工作人员主要负责本院输血（或备血）标本的ABO血型鉴定（但只对该单份标本负责）。 [相关文件] 试剂采购、保存和使用管理程序 设备采购、使用管理程序 消毒与清洁管理程序 标本采集、运输、保存和报废管理程序 紧急用血管理程序 [相关记录] 仪器设备的采购、使用和维护记录 仪器的温度记录 恒温水温箱的换水和消毒记录 消毒液的配置记录 清洁消毒记录 试剂采购、使用记录 标本交接和报废记录 紧急用血记录 [实验原理] ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。存在A凝集原的称为A型，存在B凝集原的称为B型。而血清中还存在凝集素。当A凝集原与抗A凝集素相遇或B凝集原与抗B凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。一般A型血清中含有抗B凝集素，B型血清中含有抗A凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者的红细胞反应（称为正定型），用标准红细胞与被测者血清中的凝集素反应（称为反定型），以确定其ABO血型。 [仪器器械] 玻璃试管、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、普通离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。 [试剂] 抗A标准血清、抗B标准血清、A型标准红细胞、B型标准红细胞、O型标准红细胞、生理盐水。以上试剂均为有合格证件的正品。 [标本收集与处理] 1．受检者血清：采集受检者静脉血2~3ml，经1000r/min离心1分钟或室温静置1小时后取上清。 2．2~5%的受检者红细胞：采集受检者静脉血或末梢血，用生理盐水制成2~5％红细胞盐水悬液备用，制备方法见本节质量控制和注意事项。 3．标本出现中度以上溶血者，为不合格标本，不能用于检测。 [实验方法与步骤] 1.ABO血型的正定型（试管法）：

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输血相容性检测培训课件 ABO/RhD血型定型检测试剂卡操作指南 【试验目的和原理】 ABO血型鉴定是通过检测被检者红细胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被检者血浆中是否存在抗A和/或抗B抗体（反定型）来确定。 对于成年个体被检者，红细胞上的A和/或B抗原与血浆中的抗A和/或抗B抗体存在一种对应关系。其独特性质在于：红细胞上缺乏A和/或B抗原，则血清中存在与所缺乏的抗原对应的强反应性抗体，如红细胞上缺乏A抗原，则可以预见血浆中存在抗A抗体。 常规的ABO定型必须包括正定型（红细胞定型）和反定型（血浆定型），并将正反定型结果相互验证，只有正反定型结果一致时才能准确定型。 Rh阳性和阴性的鉴定是通过检测被检者的红细胞上是否有D抗原，有D抗原为Rh阳性，没有D抗原则为Rh阴性。 ABO/RhD血型定型检测试剂卡采用凝胶作为微柱凝胶卡的填充物，将生物化学的凝胶分子筛过滤技术、离心技术和血型血清学的抗体特异性结合在一起，其中抗A凝胶管中灌注了含抗A抗体的凝胶，抗B凝胶管中灌注了含抗B抗体的凝胶，抗D凝胶管中灌注了含IgM 抗D抗体的凝胶。A细胞、B细胞及Ctr管中灌注了不含血型抗体的凝胶，抗A、抗B及抗D凝胶管用于红细胞上A、B及D抗原检测，

而A细胞、B细胞及Ctr管用于检测血浆中的抗体。当抗原抗体反应时，凝集的红细胞在离心力的作用下不能通过凝胶而留在凝胶上层或游离在凝胶中，呈现阳性反应；而抗原抗体没有反应时，未凝集的红细胞在离心力的作用下可通过凝胶而沉积在微柱凝胶管的底部，呈现阴性反应。 【ABO/RhD血型定型检测试剂卡的用途】 1、用于输血前检测 （1）鉴定ABO，以备选择 ABO血型相配合的血液用于交叉配血。（2）鉴定RhD血型，以备选择RhD血型相配合的血液用于交叉配血。 2、用于围产期检查

ABO血型鉴定正反定型不符原因分析

【摘要】目的分析临床常见的abo血型正反定型不符的原因及解决方法。方法应用正反定型、吸收放散试验和唾液血型物质测定试验检测abo血型正反定型不符的标本，分析正反定型不符原因，进行正确的分型。结果共出检abo血型正反定型不符标本18例，其中冷自身抗体8例；血浆成分异常4例；亚型2例；ab抗原减弱2例；抗体减弱或缺失1例；同种抗体1例子。结论对abo血型正反定型不符的标本，应采用正确方法鉴定abo血型，从而确保临床输血安全。 【关键词】 abo血型；正反定型不符；原因分析 doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2014.03.733 文章编号：1004-7484（2014）-03-1767-02 血型鉴定及鉴定结果的可靠性对临床安全输血具有至关重要的作用，正确的血型鉴定是临床安全输血的关键，而错误血型的血液一旦输入，则直接危及患者生命安全。但在临床实际工作中，常出现abo血型不符的现象，本文对我院2010年8月至2013年8月鉴定abo血型正反定型不符的标本18例进行分析报告如下： 1 资料与方法 1.1 一般资料我院2010年8月?2013年8月门诊及住院鉴定血型患者标本，其中abo 血型正反定型不符的有18例。 1.2 试剂抗a、抗b、抗ab、抗h、抗a1血清，红细胞ac、bc、oc、a1c、a2c（由长春博德生物制品研究所）；不规则抗体筛查红细胞及谱细胞（上海血液生物医药有限公司）。 1.3 方法血型正反定型（试管法、微柱凝胶法）、吸收放散试验、abo型认定试验、抗人球蛋白试验、抗体鉴定试验、唾液血型物质测定试验。以上试验均按规范进行操作。 2 结果 通过对18例血样标本进行abo正反定型、吸收放散试验、抗体鉴定试验、抗人球试验、唾液血型物质测定等试验，发现造成abo型正反定型不符的原因主要为冷自身抗体8例，其它原因有血浆成分异常4例，血型亚型2例，ab抗原性减弱2例，抗体缺失及减弱1例，同种抗体1例。 3 讨论 在鉴定abo血型时，如果发现正反定型不符，首先严格按照操作规程重新试验，排除人为操作失误、试剂因素后综合分析原因并应用正确的方法解决出现的问题。abo血型正反定型不符的常见原因如下。 3.1 冷自身抗体本组例中标本8例。冷自身抗体是引起正反定型不符的最常见原因。一般健康人血清中含有少量的冷凝集素，且效价很低，一般在1：16以下，冷凝集素是红细胞自身免疫抗体，以igm形式存在于血清中，其效价大于1：64凝集素的患者，能使血型鉴定受到干扰。在进行正定型时，误定a、b、o型为ab型，在反定型时，容易把a、b、ab型误定为o型。冷凝集素属冷反应的自身抗体，其特点是在较低的温度下能使患者自身的红细胞凝集，在体外最适的反应温度为4-27℃，4℃时反应最强，37℃时冷凝集消失。冷抗体效价不超过1：16时，一般不会发生凝集，但某些疾病如支原体肺炎、传染性单核细胞增多症、病毒性肺炎、再生障碍性贫血恶性变、自身免疫性溶血性贫血、红斑狼疮等可引起高效价的冷凝集素，因此，对有高效价凝集素的患者，可将红细胞和血清分别放在37℃预温，并在此条件下进行血型鉴定，对于自身红细胞已凝集的情况，进行血型鉴定时必须用37℃生理盐水反复洗涤红细胞，用洗涤后的红细胞反复吸收血清中的冷凝集素，使血清中自身的冷凝集素消失，再进行血型鉴定。在冷自身抗体效价太高，血样标本已凝固的情况下，可用巯基乙醇处理红细胞再进行abo正定型试验[1]。 3.2 血浆成分异常本组例中标本有4例，某些肝病、多发性骨髓瘤等疾病的患者存在大

抗A、抗B血型定型试剂(单克隆抗体)操作规1

抗A、抗B血型定型试剂（单克隆抗体）操作规程 一、检测目的 用于检测患者血型 二、标本要求 新鲜全血或5%红细胞悬液社 三、试剂 单克隆抗A、抗B抗体（两瓶\盒） 四、测定原理： 利用单克隆抗A、抗B抗体和相应的红细胞抗原发生特异性凝集反应的原理。能和抗A抗体发生凝集反应，而不和抗B抗体反应的为A型；和抗B抗体发生凝集反应而不和抗A抗体发生反应的为B型；同时能和抗A及抗B抗体发生凝集反应为AB型；而不被抗A及抗B抗体凝集的则为O型。 五、操作步骤（玻片法） 1.标记：取一载玻片，用蜡笔画上直径2cm左右的两个圆圈，分别标记抗A、抗B。 2.抗血清：在玻片蜡笔圈内按标记所示分别滴加抗A、抗B标准抗血清各一滴。 3.红细胞：在抗A、抗B圈内加被检者全血各一滴。用玻棒将红细胞与抗体充分混匀， 摇动玻片，肉眼观察玻片蜡笔圈内有无颗粒状凝集及凝集程度，判定阴性、阳性。 阴性指视野中红细胞程均匀散布，无凝集颗粒显微镜下红细胞分散存在，无聚集靠 拢现象。阳性时红细胞出现凝集。 六、质量控制 1. 分型血清质量性能符合要求，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。 2.试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。 3.按理IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以6℃为最强，但为了防止冷凝集现 象的干扰，一般仍在室温内进行试验，36℃可反应减弱。 4.观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。

七、干扰因素 1.分型血清效价太低、亲和力不强；8 s 2.受检者红细胞上抗原位点过少或抗原性减弱； 3.受检者血清中缺乏应有的抗-A/抗-B抗体； ` 4.各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集。部分溶血时，可溶性血型物质中和了 相应的抗体； 5.由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因； 6.血清中有意外抗体，如自身抗-I，常引起干扰； 7.老年人血清中抗体水平大幅度下降； 编写者： 科主任签字： 日期：2011年4月6日

抗A、抗B血型定型试剂(单克隆抗体)、抗D(IgM)血型定型

抗A、抗B血型定型试剂（单克隆抗体）、抗D(IgM) 血型定型试剂（单克隆抗体）参数 一、用于ABO血型正定型、Rh（D）血型鉴定 二、适用于平板法（玻片法）、试管法、微量板法 三、抗A、抗B血型定型试剂随货提供批批检质检合格证书 四、提供深圳市三家以上三甲医院供货发票 凝聚胺试剂参数 一、准确度 1.lgM抗A或抗B与A型或B型红细胞反应，重复3次，结果均为阳性且凝集强度一致；与B型或A型红细胞反应，重复3次，结果均为阴性。 2.lgG抗D抗体与RhD阳性红细胞反应，重复3次，结果均为阳性且凝集强度一致：；与RhD阴性红细胞反应，重复3次，结果均为阴性。 二、检验限度 1.lgM抗A或抗B抗体(效价≥128)等比稀释至9支管，分别与A型或B型红细胞反应，结果呈阳性(包括弱阳性的）管子不少于7支。 2.IgG抗D抗体(效价≥128)等比稀释至9支管，分别与RhD阳性红细胞反应，结果呈阳性(包括弱阳性）的管子不少于7支 三、重复性 1.按检验限度，同一批试剂等比稀释梯度两组间的阳性管数差值应不

大于2支。 2.按检验限度，三批试剂间的等比稀释梯度之间的阳性管数差值应不大于2支。 四、提供深圳市三家以上三甲医院供货发票 样本释放剂参数 一、主要成分为2-巯基乙醇 二、规格1毫升/支 三、特异性 1.效价为1：128的抗D(IgM)试剂经本品处理后，与O细胞反应结果为阴性。 2.抗D(IgG)试剂经本品处理后，效价不变。 输血相容性检测室内质控品参数 一、用于质控ABO、Rh（D）血型鉴定、不规则抗体筛查、交叉配血。 二、试剂性能稳定，参数符合定性质控品通用要求，适合手工操作。 三、提供深圳市三家以上三甲医院供货发票

ABO血型鉴定中正反定型不符的原因及对策分析

ABO血型鉴定中正反定型不符的原因及对策分析 摘要：目的：探讨在实施ABO血型鉴定期间导致呈现出正反定型不符原因并研 究具体干预对策。方法：将我院2017年05月～2020年01月收治的40例ABO 血型正反定型不符患者作为实验对象；就正反定型不符原因进行分析，并研究具 体的干预对策。结果：针对ABO血型鉴定患者表现出正反定型不符原因进行分析，主要集中于冷自身抗体干扰、不规则冷抗体干扰以及抗体减弱几方面，对此通过 研究有效干预对策给予对应干预，可获得显著干预效果。结论：针对患者在实施ABO血型鉴定期间，需要依据患者表现型具体情况以及临床资料，合理展开血清 学试验操作，以确保对于ABO血型正反定型不符原因能够充分了解以及掌握，并 且对应完成解决方法的创建，以对血型检查安全性以及准确性做出充分保证，为 患者早期确诊以及治疗方法的快速、有效研究做出充分准备。 关键词：ABO血型鉴定；正反定型不符；原因；对策 针对患者在进行治疗期间，需要对患者临床输血安全性做出充分保证，对此积极展开ABO 血型鉴定工作意义显著[1]。具体在实施ABO血型鉴定期间，往往因为系列因素的影响最终使 得患者红细胞以及血型抗体表面呈现出血型抗原变化的现象，对应表现出ABO血型正反定型 不符的现象[2]。当前针对此种情况需要就具体诱发原因加以充分了解以及掌握，对应完成解 决办法的创建，以使得ABO血型正反定型不符现象获得充分减少，对患者临床诊治效果做出 充分保证。 1、资料与方法 1.1 一般资料 将我院2017年05月～2020年01月收治的40例ABO血型正反定型不符患者作为实验 对象：女26例，男14例；年龄区间为55岁～89岁，平均为（65.25±2.35）岁；纳入标准：①患者均能够配合完成本次实验研究；②对于沟通以及交流工作均可以顺利展开；排除标准：①实验期间呈现出强烈不配合现象；②短期内接受过其他实验研究。 1.2 方法 针对此次研究主要利用贝索离心机完成，水浴恒温箱分别控制为37℃以及56℃。此外，合理进行ABO反定型试剂、抗B试剂以及抗A试剂等选择。针对所有患者血型合理采用试管 法完成鉴定工作，针对不规则抗体主要利用盐水试管法以及抗人球蛋白试管法完成筛查工作。依据试剂盒具体说明合理完成不规则抗体特异性鉴定工作，针对对照谱细胞格局之间合理完 成对比，从而对特异性抗体种类进行有效明确。之后针对完成标化的抗A血清、抗H血清以 及抗B血清，于抗血清以及等量唾液中合理完成中和处理操作，＞10min，准备对应量红细 胞合理加入，对混合均匀性做出保证后，合理展开孵育（30min，在室温条件下展开），利 用离心方法针对获得结果展开对应观察，最终确保血型物质于唾液中有效获得。 2、结果 针对ABO血型鉴定患者表现出正反定型不符原因进行分析，主要集中于冷自身抗体干扰、不规则冷抗体干扰以及抗体减弱几方面，对此通过研究有效干预对策给予对应干预，可获得 显著干预效果。

ABO血型反定型试剂红细胞配制SOP修订版

A B O血型反定型试剂红 细胞配制S O P修订版 IBMT standardization office【IBMT5AB-IBMT08-IBMT2C-ZZT18】

ABO血型反定型试剂红细胞配制（SOP） 1．目的 规范ABO血型反定型检测试剂红细胞配制的操作，以保证该实验在工作中能够正常进行，确保检测结果的准确性。 2．职责 2.1操作者负责试验操作，并作好相关记录及留样。 2.2科主任监督该规程的执行。 3．适用范围 本规程适用于中心血库检验室ABO血型反定型检测试剂红细胞配制的操作工作。 4.材料与设备 5.1 注射器 5.2 试管 5.3 离心机 注：ISO2000不允许从血袋的小辫上留取红细胞样本。 6.检测环境 6.1 温度：23-27℃

6.2相对湿度：30-70% 7．方法步骤 7.1 选取的样本分别定型并且准确无误。 7.2 选取每型至少10人份的同型细胞等量混合，越多越好。 7.3 用足量的生理盐水至少洗三遍，最后一遍压积必须扣干。 7.4 经多批次定型试剂鉴定确认血型无误方可使用，并作好明显标记。 7.5 悬浮在含有葡萄糖等保存液的抗凝剂中。 9．注意事项 9.1 特异性鉴定，阴性必须在显微镜下观察，包括红细胞形态。 9.2 每次使用前必须观察溶血现象，并配制成5％左右的红细胞悬液。 9.3 不使用时必须4℃保存。 9.4 配制必须符合《实验室质量管理规范》和《生物安全守则》的规定。操作时必须戴手套、穿工作衣，严格执行消毒隔离制度。所有样品、废液、废弃物都应按污物处理程序进行。 9.2应严格按照以上操作步骤进行。 11质量记录 11.1 《检验室污物处理记录》

ABO血型正定型标准操作规程

ABO血型正定型标准操作规程 一．目的：规范ABO血型正反定型的操作。 二．适用范围：适用于ABO血型正反定型。 三．支持性文件：全国临床检验操作规程第二版。 四．原理：根据红细胞上有或无A抗原或／和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型。可利用红细胞凝集试验，通过正反定型准确鉴定ABO血型。 所谓正定型，是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A 抗原或／和B抗原； 五．仪器：离心机。 六．试剂： 1．抗A、抗B分型血清；定期进行效价滴定,以保分型血清质量性能符合要 求。抗A：1∶128，抗B：1∶128。 七．样本要求： 1．红细胞可用针刺手指采血，并直接用生理盐水稀释制成5%红细胞悬液； 也可静脉采血，用1∶9枸橼酸钠抗凝．。 2．血清取静脉血将血液沿管壁慢慢注入干燥试管中，待自然凝固后用玻璃棒轻轻搅动血块，使之与试管壁分离。或置37℃水浴1小时，使血块收缩 离心分离血清。 八．操作步骤： 1．取洁净小试管3支，分别标明抗Ａ．抗Ｂ和抗A＋B，用滴管分别加抗Ａ．抗B和抗A＋B分型血清各1滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5% 红细胞悬液1滴，混合。 2．另取洁净小试管3支，分别标明A、B和O细胞；用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5%试剂红细胞悬 液1滴，混合。 3．用离心机以1000r／min离心1分钟；或3400r/10秒。 4．将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。 5．观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型； 类B或cisAB的发现。 6．凝集强度判断标准： 4＋＝红细胞凝集成一大块，血清清晰透明 1．观察结果时不可用力振摇； 2．严格按规程操作，避免操作失误，以免重新试验浪费时间和试剂； 3．试验结束后，试剂置2-6℃冰箱保存，以免试剂中的免疫球蛋白变质

ABO-Rh正反定型血型定型操作规程

ABO-Rh正反定型血型定型操作规程 一、项目名称、检验方法名称 1．项目名称：ABO-Rh正反定型血型定型 2．检验方法名称：柱凝集 二、方法学原理 该试剂卡是基于柱凝集的原理而设计。正常具有抗原的人红细胞将与相应的抗体发生凝集反应，BioVue血型诊断试剂卡的微柱中含有玻璃珠介质和试剂。加入红细胞并将试剂卡离心后，发生凝集的红细胞会被阻挡在玻璃珠的上面，而未凝集的游离红细胞则会在离心力的作用下通过玻璃珠之间的间隙到达微柱的底部。 三、试剂卡品牌、代号、包装规格、内含物 1．试剂卡品牌：美国强生奥索(Ortho-Clinical Diagnostica,Inc) 2．代号：BioVue -ABO/Rh-Reverse 3．包装规格： 400卡/箱试剂卡（707100）；100卡/箱试剂卡（707155） 4．试剂成分： BioVue ABO-Rh正反定型血型诊断试剂卡有6根微柱组成，每一柱中含有缓冲液，其成分为牛血清蛋白，大分子增强剂以及0.1％叠氮钠，0.01M的EDTA. 成分描述 第一柱：抗－A试剂抗－A鼠单克隆(lgM)抗体混和；蓝色染料第二柱：抗－B试剂抗－B鼠单克隆(lgM)抗体混和；黄色染料第三柱：抗－D试剂（抗RH）抗－D人单克隆(lgM)抗体 第四柱：质控优化增强剂，用于血型检测的质控对照 第五，第六柱：反定型稀释液优化增强剂，用于反定型血型检测 5．试剂的储存与效期： 储存条件： 2～25℃环境中保存。请勿将试剂存放在自动除霜的冰箱中，也不要冷冻保存。并且不要放在离热源（如孵育箱、辐射器、大型设备、冰箱、冰柜等）很近或阳光直射的地方。 效期：试剂盒上有记载 四、仪器品牌、型号 BioVue专用离心机；BioVue专用孵育器 五、样本的采集与准备： 在采集标本前对病人/献血者无特殊要求，血液采集应符合相关的技术标准及管理规范。含有或不含有抗凝剂的标本均可使用。 标本采集后应尽快进行检测。如果实验不能立即进行，应将标本置于2－8℃保存。已凝集的标本以及用EDTA、肝素或柠檬酸盐抗凝的标本应在7天内检测。献血员标本应在其效期内检测。 采集自脐带血的红细胞应确保没有污染。如怀疑样品污染需用生理盐水洗涤。 抗凝全血标本以900－1000g离心5分钟，即可得到浓度约为80％的浓缩红细胞。 1ml生理盐水＋40ul浓缩红细胞即配制成3％的红细胞悬液。 或 1ml生理盐水＋10ul浓缩红细胞即配制成0.8％的红细胞悬液。 六、试剂准备： BioVue ABO-Rh正反定型血型诊断试剂卡应在铝箔开启后一小时内使用。请勿使用液面在玻璃珠以下的试剂卡。

抗A、抗B血型定型试剂(单克隆抗体)操作规程

抗A、抗B血型定型试剂（单克隆抗体）操作规程【用途】本试剂盒专供鉴定人血型用，具有快速简便、灵敏度高、特异性强、重复性好等优点。 【测定原理】利用单克隆抗A、抗B抗体和相应的红细胞抗原发生特异性凝集反应的原理。能和抗A抗体发生凝集反应，而不和抗B 【用途】本试剂盒专供鉴定人血型用，具有快速简便、灵敏度高、特异性强、重复性好等优点。 【测定原理】利用单克隆抗A、抗B抗体和相应的红细胞抗原发生特异性凝集反应的原理。能和抗A抗体发生凝集反应，而不和抗B抗体反应的为A型；和抗B抗体发生凝集反应而不和抗A抗体发生反应的为B型；同时能和抗A及抗B抗体发生凝集反应为AB型；而不被抗A及抗B抗体凝集的则为O型。 【测定步骤】 1.被检者的抗凝血，用生理盐水洗涤1-2次后，取压积红细胞配成5%的生理盐水悬液。 2.取小试管5支，分别标明抗A、抗B、A细胞、B细胞、O细胞。在抗A管内加1滴抗A试剂，抗B管内加1滴抗B试剂，A细胞、B细胞、O 细胞管内各加被检血清1滴，然后在抗A、抗B管内各加被检红细胞1滴，A细胞管内加1滴5% A型红细胞悬液，B细胞管内加1滴5% B型红细胞悬液，O细胞管内加1滴5% O型红细胞悬液。 3.混匀，离心1000转/分，1分钟。然后判断结果。

【结果判断】 按下表判别被检者血型 “+”表示凝集,“-”表示不凝集 【注意事项】 1.本试剂可用平板法(玻片法)操作，步骤如下： 本试剂与受检者全血或10%红细胞生理盐水悬液在玻片上按1：1比例混合，摇匀，3分钟按照有无凝集判定结果。 2.最好血型试验与细胞试验同时进行。 3.单克隆抗体试剂发生定型疑问时，用人血清型试剂来裁决。

抗 A 、抗 B 血型定型试剂(人血清)

抗 A 、抗 B 血型定型试剂（人血清） Kang A、Kang B Xuexing Dingxing Shiji (Renxueqing) Anti- A and Anti-B Blood Grouping Reagents (Human Sera) 本品系用人抗A、抗B血型血清，经处理后制成，用于鉴定人ABO血型。 1 基本要求 生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合凡例的要求。 2制造 2.1专用原材料 2.1 人血液 2.1.1血液经 HBsAg、HCV 抗体、HlV-1/ HIV-2抗体、梅毒血清学检测，应为阴性，丙氨酸氨基转移酶（ ALT ）值应在正常范围内。 2.1.2用人A血型红细胞和B血型红细胞分别测定抗 A 、抗 B 血型血清凝集效价，均应不低于1：128 倍稀释。 2.1.3染色剂 抗A可选用次甲基兰等蓝色染料、抗B可选用吖啶黄等黄色染料，配制至适宜浓度。 2.1.4防腐剂 可选用叠氮钠、硫柳汞钠盐等，配制至适宜浓度。 2.2制备程序 2.2.1采血 供血者血样按 2.1.1 项检查合格后方可在无菌条件下采血。 2.2.2分离 血液凝固后于 4℃放置 48 小时吸收冷抗体，分离血清。如系血浆，则需去除纤维蛋白原并经测定合格。分离的血清经 56℃30分钟处理后加入叠氮钠或其他适宜的防腐剂。 2.3半成品 2.3.1半成品配制 取制备好的血清或血浆，加入染料，使抗 A 血型血清染色呈蓝色，抗B血型血清染色呈黄色，除菌过滤。 2.3.2半成品检定 按3.1项进行。 2.4 成品 2.4.1 分批 应符合“生物制品分批规程”规定。 2.4.2 分装与冻干 应符合“生物制品分装与冻干规程”规定。 2.4.3 规格 应为经批准的规格。

ABO血型鉴定正反定型试验方法

A B O血型鉴定正反定型试 验方法 The latest revision on November 22, 2020

A B O血型鉴定正反定型试验方法 一、试剂和材料： （一）单克隆抗A、抗B试剂（由试剂厂家提供） （二）显微镜、载玻片 （三）A型、B型红细胞（本实验室制备的5%混悬液） （四）EDTA抗凝的待测红细胞全血 （五）竹签 二、方法（玻片法）： （一）正定型： 1.在一块干净的玻片上，间隔一定距离做好标记，分别滴一滴抗A和抗B试剂； 2.在每滴试剂中加一滴待测红细胞全血； 3.用竹签混匀试剂和红细胞，并使混合物直径＞15mm； 4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察； 5.判读、解释并记录反应结果。 （二）反定型： 1.在玻片上间隔一定距离标明Ac和Bc字样。分别滴加5%的A型红细胞悬液、B型红细胞悬液各一滴； 2.在玻片每滴红细胞悬液上滴加待测血清各一滴； 3.混匀（同正定型）； 4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察； 5.判读、解释并记录反应结果。 6.结合正反定型反应结果、判定血型，见表1 （一）表中“O”表示无凝集，“+”表示凝集，一般都是3-4个+的强凝集反应； （二）2分钟后红细胞仍呈均匀混悬状态是阴性反应； （三）若得到弱的或可凝集反应结果，该标本应用试管法重新试验； （四）由于新生儿在出生4~6个月内，血浆中的ABO抗体活动太弱，并且含有来自母亲的抗体，故新生儿血型只能由检测红细胞抗原的正定型来测定其ABO血型； （五）做正定型时，还可加一抗A、B血清（O型人血清），以检测ABO弱抗原；做反定型时可以加试一O型红细胞，借以证实是否有不规则抗体的存在。

反复冻融对血型定型试剂的影响

反复冻融对血型定型试剂的影响作者：杨世明杨枨林景志宏 【关键词】冰冻 关键词:冰冻;融化;血型试剂 0引言 正确鉴定血型是确保输血安全的重要措施，目前在使用人源定型血清进行ABO血型定型的同时，已部分使用单克隆抗体（mAb）血型定型试剂.实验观察发现在-20℃冰冻保存的血型定型试剂稳定性较好［1］，为了解反复冻融对人源定型血清及mAb血型定型试剂质量的影响，我们对上述两种血型定型试剂进行了实验比较. 1材料和方法 1.1材料人源抗-A、抗-B血型定型血清由本室制备，mAb血型定型试剂Ⅰ和Ⅱ分别购自两个厂家. 1.2方法将特异性合格的人源定型血清及mAb血型定型试剂分别测定基础效价、积分和亲和力后，置-20℃低温冰箱冻存，取出置37℃水浴融化，在7d内如此反复冻融7次和只融化1次后置4℃冰箱

的上述血型定型试剂，均在第7日再次测定其效价、积分和亲和力.冻融后效价下降2个滴度，积分下降12以上判为降低，操作方法和结果判定均按照文献［2］执行. 2结果 只融化1次置4℃冰箱保存的人源血型定型血清和mAb血型定型试剂，在第7日时测定效价、积分和亲和力与基础效价的测定结果比较无明显变化（表1）. 表1人源血清与mAb血型定型试剂冻融前/后性能比较略 3讨论 实验结果表明，反复冻融对人源及mAb血型定型试剂的效价、积分和亲和力均有不同程度的影响，对mAb血型定型试剂的影响尤为明显，其原因可能是人源血清的抗体属于IgM类型，是在胎儿免疫系统成熟过程中产生的第一类Ig，抗体性能比较稳定;而mAb血型定型试剂是通过杂交瘤细胞技术生产出来的，其稳定性较人源血清差.在实验观察中同时发现mAbⅠ较mAbⅡ稳定性好，可能是因为mAbⅠ未加入同型腹水或其他添加剂，所以其稳定性比mAbⅡ好.使用高质量的血型定型试剂和正确的血型鉴定方法，提高交叉配血试验的敏感性，是确保输血安全和有效的重要措施.因此应严格执行血型定型试剂的质量控制标准，对新购进的血型定型试剂，不论是人源血型定型血清或是mAb血型定型试剂，均要严格进行特异性、效价和亲和力测定，定期抽查并做细菌培养，观察其阳性界值是否达到实验要求，对血型定型