黄土高原不同树龄刺槐丛枝菌根与根际微生物的群落多样性_杜小刚_2
第44卷第4期
2008年4月林业科学SCIE NT IA SILVAE SINICAE Vol 144,No 14Apr.,2008
黄土高原不同树龄刺槐丛枝菌根
与根际微生物的群落多样性
*杜小刚1 唐 明1 陈 辉1 张海涵2
张永安3(11西北农林科技大学林学院 杨凌712100; 21西北农林科技大学生命科学学院 杨凌712100;
31中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所 北京100091)摘 要: 采用BIOLOG 检测法,研究丛枝菌根与黄土高原不同树龄刺槐人工林及次生林根际微生物群落多样性的
关系。结果表明:8、15、23和30年刺槐人工林随着树龄的增加,菌根侵染率先增加后降低,微生物活性(AWCD 值)
增大,碳源代谢丰富度指数(S )和Shannon 指数(H )逐渐增加,23年达到峰值后趋于稳定,并逐渐降低,不同林地菌
根侵染率与根瘤数呈显著正相关(y =414182x -188173,r =01927,p <0105)。主成分分析表明:刺槐人工林根际
微生物群落结构与功能随着树龄的增加存在时间上的连续性,次生林优于相同树龄人工林,在碳源利用上表现为
与树龄更长的人工林相近。菌根侵染率与根瘤数、细菌量、丰富度指数(S )和Shannon 指数(H )的相关性分析表明:
丛枝菌根对刺槐根际微生物群落的稳定和功能多样性的增加具有促进作用,在造林年限上表现为对较短树龄刺槐
林根际微生物群落影响较大,在造林措施上对刺槐次生林微生物群落多样性的作用优于人工林。
关键词: 刺槐;菌根侵染率;BIOLOG;微生物群落;功能多样性
中图分类号:S718181 文献标识码:A 文章编号:1001-7488(2008)04-0078-05
收稿日期:2007-10-31。
基金项目:国家自然科学基金重点项目(30630054),国家/十一五0科技支撑项目(2006BAD08A1202),长江学者和创新团队发展计划(IR T0748)。
*唐明为通讯作者。本试验得到中国科学院生态环境研究中心城市与区域生态国家重点实验室郑华老师、陈展博士及中国科学院安塞水土保持试验站刘国彬老师的帮助,特此感谢。
Mycorrhizae and Diversity of Microbial Community in Rhizosphere Soils of
Robinia pseu doacacia at Different Ages on the Loess Plateau
Du Xia ogang 1 Tang Ming 1 Chen Hui 1 Zhang Haihan 2 Zhang Yong p an 3
(11Colleg e o f Forestry ,North we st Sci -Tech U ni versit y o f Agricu lture an d Forestry Y an glin g 712100; 21Colle ge o f Li fe Scien ces ,
North west Sc i -Tec h Un ive rsity o f Ag ric ultu re an d Forest ry Ya ng ling 712100; 31Resea rch In stitute o f Forest Ecology ,
En viron me nt a nd Protec tion ,CAF Be ijin g 100091)
Abstract : The relationship of mycorrhizae and diversity of mic robial c ommunity in rhizosphere soils of Robinia pseudoacacia plantation and seconda ry plantation a t different a ges on the Loess Plateau was measured wi th by BIOLOG me thod.It was found tha t in 8,15,23and 30a plantation forestland,with the age increased,the mycorrhizal infection rate increased at the early sta ge and then declined.The avera ge well c olor development (AWCD)increased.The ric hness index(S )and the Shannon index (H )increased a t the ea rly sta ge and reached to peak value a t 23a and the n gradually declined,The mycorrhizal infec t ion rate were significantly c orrelated with the number of nodule s were significant correlation (y =414182x -188173,r =01927,p <0105)in different forestlands.The principal co mponent analysis sho wed that with the ages inc reased,the mic robial community structure and func tion in rhizosphere soils of R .pseudoacacia plantation existed cont inuity of the time.The secondary forest perfo med better than the same a ge plantation,and its capacity of ca rbon utilization was similar to that of the older plantation.The c orrelation analysis of the mycorrhizal infection rate and the number of nodules,the number of bacte ria colonies,the richne ss index(S ),the Shannon inde x (H )indicated that,the arbuscular myc orrhizae promoted the stabiliza t ion and function diversity of mic robial co mmunity in rhizosphe re soils of R .seudoacacia .The mycorrhizae influenced more signific antly the microbial c ommunity of younger R .pseudoacacia plantation in ter ms of afforestation time and it had more re markable e ffec ts on diversity of mic robial communi ty of sec ondary forest than R .pseudoacacia planta t ion with re gard of afforestation measures.
Key words : Robinia pseudoacacia ;myc orrhizal infection rate;BIOLOG;mic robial co mmunity;func tion diversity
土壤微生物是生态系统的重要组成部分,在有机质分解、养分循环和植物养分利用过程中发挥着关键作
用(Steenwerth et al .,2002),并通过微生物之间的相互竞争和相互协调,驱动养分循环影响着植物多样性(Clay et al .,1999)。丛枝菌根(arbuscular mycorrhizae,AM)作为植物根系与土壤密切联系的桥梁,能够促进宿主植物生长和土壤物质转化,选择合适的树种和菌根真菌,是衰退土壤生态系统恢复的有效途径(Miller et al .,1990)。以微孔板碳源利用为基础的BIOLOG 定量分析,能够反映微生物群落水平的生理代谢轮廓,简单快捷地描述微生物群落功能多样性,目前已被广泛应用(Zheng et al .,2005;李忠佩等,2007)。
黄土高原植被恢复一直是生态研究的热点,但是目前该领域多注重植被恢复后土壤理化性质的研究,对土壤微生物研究较少(薛等,2007)。生态系统的恢复在考虑植物多样性的同时更应该考虑土壤微生物的多样性(Zheng et al .,2005)。本文采用BIOLOG 检测法,从丛枝菌根角度出发研究其与黄土高原不同树龄刺槐人工林及次生林根际微生物群落多样性的关系,旨在为黄土高原退化生态系统的恢复和西部地区退耕还林工程的实施提供科学依据。
1 材料与方法
111 研究地概况
研究地点为中国科学院安塞水土保持实验站纸坊沟流域,位于109b 13c 46d )109b 16c 3d E,36b 46c 42d )
36b 46c 28d N,属于黄土丘陵沟壑第2副区,流域面积8127km 2,土壤类型为黄绵土,海拔1010~1400m,属暖
温带半干旱季风气候,年均气温818e ,年均降雨量50513mm(薛等,2007)。流域内植被稀疏,主要为刺槐(Robinia pseudoacacia )、小叶杨(Po pulus simonii )、柠条(Caragana korshinkii )、沙棘(Hippophae rhamnoides )、铁杆蒿(Artemisia sacro rum )和白羊草(Bothriochloa ischaemum )等,其中刺槐为主要造林树种。该区域自20世纪50年代以来在不同坡地上营造生态恢复林,已建立起不同恢复年限的刺槐人工林。
112 样品采集
采用时空互代法(薛等,2007)在流域内选择营造和管理方法一致、土壤与成土母质类型相同、地形要素(坡度,坡向,海拔)相似的30、23、15、8年刺槐人工林及8年刺槐次生林地为取样地,在每个样地内随机选择5株刺槐采集细根及根际土样,每株刺槐在东西南北分别取4份土样,将20份土样混合后作为该林地测定土样,每个样地重复3次。取样时除去土壤表面动植物残体,在0~20cm 深的土壤中采集刺槐根系,轻轻抖落附在根上的土壤,剪取带有细根的根系,洗净后装入盛有FAA 固定液的小瓶,将剩下的根系和土壤在无菌自封袋中轻轻抖动大约1min,作为根际土(Cle gg et al .,1997),置于小冰箱内,4e 保存。同时选取裸地采集同样深度的土壤作为对照(CK)。采样于2006年11月进行。不同采样地状况如表1所示。
113 试验方法
11311 土壤pH 和含水量测定 用PHS-3B 型精密pH 计测定土壤pH 值(水土比为5B 1,v P m )(严昶升,1988)。称取1010g 新鲜土壤放入铝盒中,105e 干燥至恒重后称重,计算土壤含水量。
11312 菌根侵染状况测定 将根系剪成015~110c m 长的根段,采用透明压片法用10%KOH 透明后,进行Trypan blue 染色(弓明钦等,1997),显微镜下观察菌根结构特征并计算菌根侵染率。
11313 土壤细菌计数 采用牛肉膏-蛋白胨培养基,稀释平板涂布法进行土壤细菌培养,重复3次,以菌落形成单位(colony forming units,C FU)对细菌计数。统计刺槐根系根瘤数,换算为每克根干质量所带根瘤数。
表1 采样地状况1
Tab.1 The geographic conditions of different sample plots
样地
Sample plots
林地类型Forest type 树龄Tree age P a 坡向Slope aspect 坡度Gradient P (b )海拔Al ti tude P m 土壤pH Soil pH 土壤含水量Water content P %30a
刺槐人工纯林Pure plantati on 30东北Northeast 291129812951823a
刺槐人工纯林Pure plantati on 23西北Northwes t 321243812461115a
刺槐人工纯林Pure plantati on 15东北Northeast 27115081394188a
刺槐人工纯林Pure plantati on 8西北Northwes t 30118981364188A
刺槐次生林Secondary forest 8西北Northwes t 3212038130619CK 裸地Bare land P 西北Northwes t 2811808143418
130a,23a,15a,8a 代表30、23、15、8年刺槐人工林,8A 代表8年次生林,下同。30a,23a,15a,8a represented 30,23,15,8a pure R .pse udoacac ia forest,8A represented secondary R .pse udoacac ia plantation.The same below.
11314 微生物群落水平生理轮廓(c ommunity level physiological profiles,CLPPs)测定 1)BIOLOG EC O 79 第4期杜小刚等:黄土高原不同树龄刺槐丛枝菌根与根际微生物的群落多样性
Microplate反应原理BI OLOG ECO Microplate是一种多底物酶联反应(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)平板,该生态板在同一块板上有96孔,分为3组(3次重复),每组32孔,除对照孔仅有指示剂和水外,其余31孔都装有不同的单一碳源和四唑染料,碳源分为糖类、羧酸类、氨基酸类、多胺类、多聚物和芳香化合物6大类。土壤微生物在BI OLOG EC O Micropla te代谢过程中,氧化还原作用能够使四唑染料变成紫色,根据每孔颜色变化程度检测土壤微生物对31种不同单一碳源的代谢能力(C hoi et al.,1999)。2)BIOLOG EC O Microplate接种液制备准确称取相当于1010g干质量(按含水量换算,见表1)的新鲜土样,加入到装有90 mL0185%NaCl无菌溶液三角瓶中,封口后在摇床上震荡(200r#min-1)30min,按照10倍稀释法用0185% NaCl无菌溶液将其稀释至原来的1P1000。3)多底物酶联反应(E LISA)在超净工作台上,接种悬浮液于ECO板中,每孔150L L,置于25e暗箱培养;连续培养240h,期间每隔12h用ELISA反应微平板读数器在590nm处读数,记录微生物群落水平生理代谢轮廓(CLPPs)。
114数据分析
采用孔平均颜色变化率(average well color development,AWCD)、丰富度指数(S)和多样性指数进行数据分析(Zheng et al.,2005)。其中:AWCD=E(C i-R)/31,式中C i为各反应孔在590nm下的光密度值,R
是对照孔的光密度值(下同);丰富度指数(S)用碳源代谢孔数目表示;多样性指数用Shannon指数(H)表示,H=-E(P i@ln P i),式中P i=(C i-R)/E(C i-R),表示有碳源孔与对照孔光密度值之差与整板总差的比值。数据采用E xcel(V2003)、SAS(V811)和SPSS(V1210)软件进行统计分析。
2结果与分析
211BIOLOG分析
21111ELISA反应碳源平均颜色变化率(AWCD)平均颜色变化率(AWCD)是反映土壤微生物活性即利用单一碳源能力的一个重要指标(徐秋芳等,2007)。由图1可见,CK对单一碳源利用能力始终最低;不同树龄间刺槐根际微生物群落对单一碳源的利用能力存在差异,前24h AWCD值均较低,碳源基本未被利用, 48h后AWCD值出现差异,30年人工林AWCD值增长斜率最大,为0105;8年人工林最小,为0102。随着树龄增加,刺槐人工林根际土壤微生物活性(AWCD值)增大,碳源利用能力增强,以树龄最长的30年人工林最好;相同树龄(8年)的次生林和人工林相比,次生林AWC D值增长斜率(0104)大于人工林(0102),且180h后
8年次生林AWCD值高于树龄更长的15年人工林,
说明刺槐次生林较同龄人工林根际微生物活性强。
图1不同土壤平均颜色变化率Fi g.1Average well color development
of different
soils 图2微生物群落功能主成分分析Fig.2Principal component analysis of microbial communi ty function
21112微生物功能多样性分析丰富度指数(S)和Shannon指数(H)反映土壤微生物群落的功能多样性。
8、15、23、30年刺槐人工林指数S和H(培养144h)随着树龄的增长而递增,23年达到高峰,后趋于稳定,并逐渐降低;8年次生林指数H优于8年人工林,并与15年人工林处于同一水平(p<0101),说明刺槐次生林微生物功能多样性较同龄人工林好;5块林地微生物功能多样性均好于裸地(表2)。
80林业科学44卷
21113 微生物群落功能主成分分析 对培养144h 数据进行主成分分析(图2),可以看出刺槐根际土壤微生物群落代谢特征与树龄的相关性主要体现在PC1轴上,方差分析表明不同树龄刺槐林地和裸地按照土壤微生物群落功能分差可以区分为3个水平(图2)(p <0101),表现为15、8年人工林和8年次生林为一类,30、23年人工林为一类,裸地独为一类,前2个类群在PC1上顺次排列反映出刺槐人工林根际微生物群落结构与功能随着树龄的增加存在时间上的连续性;PC2主要体现了刺槐个体之间的分异,由于PC1在区分微生物群落代谢特征的方差贡献率(30167%)大于PC2(14103%)(图2),因此认为在区分刺槐根际微生物群落特征时,树龄作用的权重较大,即与个体差异相比刺槐根际微生物群落代谢特征主要与树龄有关。次生林和同龄人工林相比,8年次生林在PC1轴上靠近23、30年刺槐人工林一侧,在碳源利用上表现为与树龄更长的人工林相近,优于同龄人工林,与AWCD 值、丰富度指数(S )及Shannon 指数(H )测定结果一致。
212 丛枝菌根与微生物群落分析
21211 丛枝菌根对微生物群落功能的影响 对刺槐丛枝菌根形态观察发现,各林分刺槐根部均能形成典型的泡囊丛枝结构,但不同树龄菌根侵染率不同,表现为人工林随着树龄的增加侵染率先增加后降低,以15年人工林最高,30年人工林最低;8年次生林侵染率最高,为7916%(表2)。菌根侵染率与微生物功能多样性指数的相关性分析表明,8年次生林、8和15年人工林菌根侵染率与丰富度指数(S )、Shannon 指数(H )呈正相关(r =01974,01929),23、30年人工林三者变化相同,都呈降低趋势,说明丛枝菌根对刺槐林微生物群落功能影响均较大。8年次生林侵染率最高,其主成分分析与AWCD 值、丰富度指数(S )及Shannon 指数(H )均表明次生林较相同树龄人工林根际微生物活性强,功能多样性增加。
表2 土壤微生物群落分析1
Tab.2 Analysis of soil microbial com munity
样地
Sample
plots
树龄Tree age P a 菌根侵染率**Mycorrhi zal infection rate P %根瘤数**Nodules number P g -1root dry wei ght 细菌数**Bacteria number P (105cfu #g -1)丰富度指数**Richnes s index Shannon 指数**Shannon index 30a
305918?2175d 71?5103c 156?9154a 20133?1152a 2198?0108a 23a
236217?4116cd 73?6111c 147?8154a 21133?2108a 3112?0105a 15a
156814?0158b 99?7102b 85?8118bc 11167?1115bc 2164?0111bc 8a
86517?2152bc 62?8150c 72?6181c 11?2164bc 2156?0112c 8A
87916?3106a 146?8174a 91?7181b 12167?1115b 2171?0105b CK P P P 11?1153d 8133?2131c 0179?0101d 1数值为平均值;**表示差异极显著(p <0101)。Data in table sho wn as mean values;**s tands for s tatis tically significant difference at 0101level.21212 丛枝菌根对根瘤菌和细菌群落的影响 不同树龄刺槐根际微生物群落见表2。所采集的刺槐植株根部结瘤率均达到100%,但根瘤数随着菌根侵染率的变化呈现差异。菌根侵染率与根瘤数呈显著正相关(y =414182x -188173,r =01927,p <0105),说明刺槐林AM 真菌与根瘤菌存在协同作用。这是因为根瘤的形成与氮素的固定需要较高的磷素水平,丛枝菌根促进了刺槐对磷元素的吸收与利用,改善了根瘤菌磷素营养,同时根瘤菌固氮也促进了AM 真菌的侵染。此外,AM 真菌与根瘤菌在豆科植物根部的定殖过程存在相同的信号传导途径,对两者的互作也产生重要影响(赵丹丹等,2006)。
刺槐根际细菌量随着树龄的增加而增加(表2),以30年人工林最大,8年人工林最小,8年次生林根际细菌量高于15年人工林;树龄较短的8年次生林、8、15年人工林,菌根侵染率和细菌量的变化趋势均为8年(次生林)>15年>8年,两者呈正相关(r =01853),说明丛枝菌根对树龄较短的刺槐根际细菌群落影响较大,能够促进细菌的生长;而树龄较长的的23、30年人工林,菌根侵染率降低,细菌数量增加。
3 结论与讨论
目前关于林地微生物群落变化研究多集中在林木发育阶段(焦如珍等,2005)根系生物量及分泌物不同(Rutigliano et al .,2004)造成微生物群落演替,或土壤质地(杨承栋等,1999)与微生物群落变化的关系上。本文利用BI OLOG 检测法,研究丛枝菌根与黄土高原不同树龄刺槐人工林及次生林根际微生物群落多样性的关系。BIOLOG 代谢多样性的差异反映了微生物群落组成的变化(群落演替)(Haack et al .,1995)。8~30年刺槐人工林随着树龄的增加菌根侵染率先增加后降低,微生物活性增大,代谢多样性指数在23年达到峰值后趋于稳定,并逐渐降低,菌根侵染率与根瘤数呈显著正相关(p <0105);菌根侵染率与根瘤数、细菌量、81 第4期杜小刚等:黄土高原不同树龄刺槐丛枝菌根与根际微生物的群落多样性
82林业科学44卷
丰富度指数(S)、Shannon指数(H)的相关性分析表明:从造林年限上,丛枝菌根对较短树龄(8年次生林、8和15年人工林)刺槐根际微生物群落影响较大,从造林措施上对刺槐次生林微生物群落影响较大。
本研究发现AM真菌能够通过与根瘤菌和细菌的相互作用,使土壤微生物群落结构及功能发生改变。相关研究表明丛枝菌根庞大的生物量作为土壤重要的有机质库(Soderstrom,1992),能够为土壤微生物提供丰富的营养来源;菌丝远离根际在林地内延伸,菌丝桥在不同植物间传递营养物质(Graves et al.,1997),使得菌根对刺槐林微生物群落的影响可能不仅局限于植物根际,而是对整个林地的土壤系统及微生物群落产生作用。薛等(2007)的研究认为自身衰老的刺槐林地由于对土壤的长期改良作用,导致代谢途径多样化,有利于后续物种的生长,这可能也是次生林微生物群落多样性增强的原因。
土壤微生物由于其组成与功能上的多样性,已被用作评价退化生态系统中生物类群与功能恢复相关关系的指标(Harris,2003),而菌根真菌在植物群落发生、演替及维持物种多样性、稳定性(Marcel et al.,1998)、逆境造林(唐明等,1999)等方面起着重要作用,本研究也表明丛枝菌根对刺槐根际土壤微生物存在重要影响,因此后续工作应从传统的植被及水分养分循环研究转移至侧重土壤微生物多样性研究上,揭示陆地生态系统/植物-土壤-微生物0三者之间的关系。建议在造林时采用合适的树种和合适的菌根真菌组合,如刺槐与Glomus mosseae(何兴元等,2002),以提高林木成活率及生长率;植被恢复以次生林营造和抚育为主,加大微生物活性和功能多样性研究,充分发挥丛枝菌根真菌在黄土高原生态退化区植被恢复中的作用。
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(责任编辑王艳娜)
急性移植物抗宿主病的诊疗进展.
急性移植物抗宿主病的诊疗进展 白血病.淋巴瘤2014-05-31发表评论分享 文章作者:侯慧明刘林 急性移植物抗宿主病(aGVHD是发生在异基因造血干细胞移植(allo-HSCT后的一种特异的免疫现象,是移植物组织中的免疫活性细胞与组织抗原不相容的受者组织之间的反应。 即便是人类白细胞抗原(HLA完全匹配的亲缘供者移植,且受者接受严格的免疫抑制预防,仍有30%~60%的患者移植后有发生aGVHD的风险,因移植种类不同有明显临床征象的Ⅱ-Ⅳ度aGVHD的发病率在10%~80%,平均40%,一般发生于移植后20~40d内,且发生时间越早越容易进展为重度aGVHD。 aGVHD主要累及皮肤(皮疹或皮炎、肝脏(肝炎或黄疸和胃肠道(腹痛或腹泻。目前对于aGVHD的诊断世界上多采用西雅图诊断标准。 1 aGVHD的发病机制 感染、前期放化疗、移植前预处理及基础疾病等危险因素可导致宿主细胞释放炎性细胞因子失调,上调白细胞黏附分子和主要组织相容性复合物抗原(MHC在靶组织的表达,并接受来自受者和(或供者的抗原提呈细胞(APC提呈,从而促进供者T 细胞对宿主MHC和次要组织相容性抗原(MIH的识别。 MHCD类抗原(HLA-DR、HLA-DP、HLA-DQ刺激CD4[T细胞,诱发针对MHCn差异的GVHD;而MHCI类抗原(HLA-A、HLA-B、HLA-C可刺激CD8[T细胞,诱发针对MHCI 差异的移植物抗宿主病(GVHD。 此外,宿主APC也通过B7/CD28途径提供共刺激信号,抗原提呈导致T细胞活化为T辅助细胞,分泌白细胞介素-2(IL-2和干扰素7,促进T细胞进一步活化、增殖、分化为毒性T细胞,同时激活自然杀伤细胞(NK细胞,从而激发aGVHD。
微生物多样性研究—β多样性分析概述
微生物多样研究中的—β多样性分析概述
一、β-多样性分析介绍 1. β（Beta）Diversity： 是对不同样品/不同组间样品的微生物群落构成进行比较分析。 ?β多样性分析前的数据“来源”： 1）OTUs的丰度信息表； 2）OTUs之间的系统发生关系， 计算Unweighted Unifrac及Weighted Unifrac距离。 ?通过多变量统计学方法主成分分析(PCA，Principal Component Analysis)，主坐标分析(PCoA，Principal Co-ordinates Analysis)，非加权组平均聚类分析(UPGMA，Unweighted Pair-group Method with Arithmetic Means)等分析方法，从中发现不同样品（组）间的差异。
2. PCA & PCoA分析 ?主成分分析（PCA）是多变量统计学中最为人熟知的分析方法，它通过线性变换，将原始的高维数据投影至少量新合成的变量（即主成分），从而简化数据结构，展现样品的自然分布。 ?主成分分析不考虑原始变量之间可能存在的相互关系，并且是基于欧式距离评价样品之间的相似度。 ?多维尺度分析与主成分分析类似，但是它可以采用任何距离评价样品之间的相似度。主坐标分析（Principal coordinates analysis，PCoA）是经典的多维尺度分析方法。
3.UniFrac距离 ?由于微生物极其多样，不同微生物彼此之间的系统发育关系往往千差万别，仅仅将群落中不同微生物成员视为相互独立的变量显然并不合理。 ?因此，在比较不同群落样品之间的差异时，需要考虑两个群落成员之间的系统发育关系是否相似。 ?基于这个思想，计算微生物群落样品间距离的UniFrac距离应运而生，通过比较两个群落各自独有的微生物成员之间系统发育关系的远近，更为客观地反映两个群落样品之间的相似程度。
丛枝菌根真菌在园艺作物上的应用
丛枝菌根真菌在园艺作物上的应用1 邹英宁，吴强盛* 长江大学园艺园林学院，湖北荆州（434025） E-mail：wuqiangsh@https://www.wendangku.net/doc/b215612940.html, 摘要：丛枝菌根是土壤中的丛枝菌根真菌与植物根系结合的互惠共生体，能帮助植物吸收矿质营养和水分、促进植物生长、提高抗逆性、改善果实品质等。提出了丛枝菌根真菌生产的技术流程，综述了丛枝菌根真菌在果树、蔬菜、花卉植物上的应用与效应。 关键词：丛枝菌根真菌；丛枝菌根；园艺作物；菌剂生产 中图分类号：Q939.96 1. 引言 菌根（Mycorrhizas）是一类与植物根系紧密结合互惠互利的联合体，其互惠互利表现在菌根通过其根系外的菌丝、根系内的丛枝及根内特殊的水分运输通道给寄主植物运送矿质营养和水分，而寄主植物将光合作用产生的碳水化合物通过物质流转运给菌根以维持其生长发育[1]。菌根按照形态学分为三类：外生菌根（Ectomycorrhizas）、丛枝菌根（Endomycorrhizas）和内外生菌根（Ectoendomycorrhizas）[2]。外生菌根指菌根真菌侵入到植物根系的皮层，在间隙里形成哈蒂氏网，大量的菌丝在根系外面形成一个菌套，主要与森林植物共生；丛枝菌根指菌根菌丝不仅侵入到根系皮层，而且还进入到细胞内部，形成丛枝（Arbuscules）结构，有的还在细胞间或者内部形成泡囊（Vesicles），在许多园艺作物如柑桔、桃、苹果、梨、番茄、西瓜、非洲菊、月季等都可以发现和找到这种结构；内外生菌根则同时具备外生菌根和丛枝菌根的特性，菌根菌丝在细胞间隙形成哈蒂氏网，根系表面形成菌套，菌丝在细胞内部也形成各种菌丝团，主要在一些松科和杜鹃花科植物存在。目前的研究表明，在园艺作物上接种丛枝菌根真菌能够促进园艺作物的生长，增强园艺作物对矿质营养的吸收，提高抗逆性，改善水分代谢，提高果树和蔬菜的品质等[3]。因此，在园艺作物根系上没有丛枝菌根的存在反而不正常[4]，从而显示丛枝菌根在园艺作物上的重要性 2. 丛枝菌根真菌菌剂的生产 丛枝菌根真菌菌剂的生产是其应用于园艺作物的关键。尽管丛枝菌根真菌至今尚不能进行纯培养，但采用盆栽菌剂生产法[5]仍可以获得一定纯度的菌剂，其具体生产流程是：选择玉米或高梁为寄主植物，对其种子采用10％的次氯酸钠溶液表面消毒5～10 m，然后放置在一个湿巾上，用塑料袋包好进行催芽。一般玉米种子在2～3 d就能够发芽。选择3 mm大小的粉碎玄武岩为栽培基质，目的是基质含有非常低的营养水平，特别是P。然后对基质进行高压蒸汽灭菌，杀死土著丛枝菌根真菌。灭菌的基质与购买的纯菌剂（可以从北京市农林科学院植物营养与资源研究所“中国丛枝菌根真菌种质资源库（BGC）”购买）按照20：1（v/v）的比例混合均匀，装于15～25 cm直径的塑料盆中。将已经催芽的种子每盆播2～6粒，然后放置在温室或良好光照的避雨棚中以减少其他微生物通过风和雨水的污染。一般地，在正常水分管理的6 w后就能够观察到丛枝菌根真菌与寄主植物根系共生。14 w后开始控水，16 w时去除植物地上部分，将基质和根系倒在一个干净的盘中，把根系剪断，与栽培基质混合均匀，此菌剂即可应用于田间。如果菌剂不及时使用，可以保存在4 °C冰箱或凉爽干 1本课题得到长江大学科研发展基金(39210264)的资助。
中国微生物物种多样性研究进展_郭良栋.
生物多样性 2012, 20 (5): 572–580 Doi: 10.3724/SP.J.1003.2012.10129 Biodiversity Science http: //https://www.wendangku.net/doc/b215612940.html, —————————————————— 收稿日期: 2012-06-13; 接受日期: 2012-08-10 基金项目: 国家自然科学基金重点项目(30930005) ? 通讯作者 Author for correspondence. E-mail: guold@https://www.wendangku.net/doc/b215612940.html, 中国微生物物种多样性研究进展 郭良栋* (中国科学院微生物研究所真菌学国家重点实验室, 北京 100101) 摘要: 微生物是分布最为广泛的生命形式, 几乎分布到地球上的所有生境, 具有丰富的物种多样性。我国地域辽阔, 跨越热带至寒温带, 气候条件多样, 地理环境与生态系统类型复杂, 是世界上生物多样性最丰富的国家之一。我国已开展了大量微生物多样性研究, 并证实我国多样的生境蕴藏着丰富的微生物物种多样性。目前我国已报道真核微生物(菌物)约14,700种, 其中包括真菌约14,060种、卵菌约300种、黏菌约340种, 而真菌中有药用菌473种、食用菌966个分类单元。特别是近年来通过免培养的分子生物学技术发现我国存在丰富的原核微生物多样性。本文概述了传统方法和现代分子生物学技术在我国原核微生物(古菌、细菌)和真核微生物(真菌、卵菌、黏菌)物种多样性研究的最新进展。 关键词: 真核微生物, 原核微生物, 物种多样性, 培养方法, 分子技术 Progress of microbial species diversity research in China Liangdong Guo * State Key Laboratory of Mycology, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101 Abstract: Microbes with rich species and genetic diversity are widely distributed throughout various habitats in the world. China possesses a variety of climate zones, geographic environments, and complex ecosystems, which play a large role shaping the complex biodiversity of this country. Microbial diversity has been widely studied and well documented by Chinese scientists. For example, a total of ca. 14,700 eukaryotic microbe species have been recorded, including ca. 14,060 fungi, ca. 300 oomycetes, and ca. 340 slime molds. Within the Fungi, there have been 473 medicinal fungal species and 966 edible fungal taxa recorded. However, re-cent studies have documented much high species diversity of prokaryotic microbes using molecular tech-niques, which have greatly promoted the study level of microbial diversity in China. This review paper sum-marizes recent research progress of microbial (i.e., archaea, bacteria, fungi, oomycetes, and slime molds) di-versity in China based on traditional and molecular techniques. Key words: eukaryotic microbe, prokaryotic microbe, species diversity, cultivation method, molecular technique 微生物是分布最为广泛的生命形式, 几乎分布到地球上的所有生境, 可利用各种有机化合物、无机盐等作为能源, 在有氧或无氧条件下, 在寒冷的极地、高达100℃的热泉或高盐碱度等极端环境中生活。微生物具有丰富的物种和遗传多样性, 并以高度的变异性适应不同的生境。作为生态系统中的重要组分, 微生物在自然界的物质与能量循环、生态系统的演替以及生物多样性的维持中发挥重要的生态功能。微生物与人类的生活休戚相关, 在直 接或间接地为人类提供了极其丰富的物质资源的同时, 也为人类带来了巨大危害。 Woese 和Fox(1977)以核糖体RNA(rRNA)的小亚基(原核生物的16S 、真核生物的18S 基因)序列为依据, 提出了独立于真细菌(Eubacteria)和真核生物(Urkaryotes)之外的第三种生命形式——古菌(Archaea), 认为它和真核生物以及真细菌是从一个具有原始遗传机制的共同祖先分别进化而来。随后Woese 等(1990)提出了三域(Domain)分类系统, 将
AMF(丛枝菌根真菌)
AMF（丛枝菌根真菌）对香蕉试管苗的驯化日期：2011年5月24日 摘要：丛枝菌根真菌的影响（AMF）的香蕉试管苗上进行了评估在驯化期。植物接种无 梗scrobiculata，绣球clarum和Glomus etunicatum。在种植后温室3个月，株高，叶面积，鲜重和干物质的根，芽，AMF的殖民化的水平营养水平，光合作用和蒸腾率，水势和气孔导进行了测定。丛枝菌根真菌孢子的生产数量在每个治疗也决心。苗接种与丛枝菌根真菌具有更大的株高，叶面积和新鲜地上部和根系的重量，以及较高的光合作用和蒸腾比对照组。植物与血管球接种均优于在最评估参数。 关键词：穆萨菌，内生菌根，菌根菌，气候适应 引言：水果的营养快繁，观赏和森林物种，是一个良好的生产条件，转基因植物检疫植物 和均匀大量的主要工具。到温室栽培植物体外转移是在结构和生理适应的最重要的准备过程中试管苗的步骤之一。这一阶段，由于水土不服，是一种对植物自养的存在开始，以期为生存所必需的生理过程的开始。在这段时间内，必须增加水的试管苗和矿物质，光合速率的吸收。 试管苗，病免费的，但他们还缺乏丛枝（AMF）的菌根真菌。AMF的是众所周知的增加，增加水和矿物营养素的吸收，尤其是磷（P）植物的活力。此外，AMF的病原体可以保护寄主植物的根和减轻极端温度变化，pH值和水分胁迫（迪克森和马克思1987年的影响; Siqueira 1994年）。接种AMF的成功在驯化期间（格兰杰等人的开始。1983年; Brazanti等。1992年;罗杰古勒明等。1995年），甚至在体外培养已被证实。三是与从组织培养植物的根系形成共生互利的效果表现在蓬勃植物的光合作用和蒸腾速率高，养分和水分，提高抗逆性。 接种丛枝菌根真菌在植物组培苗生长初期当然可以对体外培养，通过积极对rootmeristem活动菌根共生效应，高殖利率。支持这个假说是由伯塔等人的结果。（1995年），谁表明，AMF的协会改变了红叶李根的分枝格局。接种类型的使用是很重要的驯化。福图纳等人（1992）建议的AMF的感染，高效品种的推广使用植物生长迅速增加。这些作者还表明，虽然在促进试管比较红叶李增长的2种AMF效率，该真菌感染影响其效力。更加新鲜，干物，高度增量被发现与血管球比与G. coronatum mosseae的接种植物，但在实验结束两组植物具有相似的增长。 我们工作的目的是评估的三个AMF的来自巴西的半干旱地区灌溉生长的香蕉种植园，营养和生理发展香蕉试管苗接种分离本土物种的影响作用。 材料与方法 植物材料和土壤性质 试管香蕉苗是根据生物技术。在植株形成的根在体外用MS液体培养基，后来转移到（500毫升的容量）与熏蒸基质：土，沙，有机质（1：1：1）。前沙混合料性能的土壤3.2克土壤有机质每公斤，马克土0.84毫克P每分米，pH值5.1（土：水=1：2.5）。接种量（约400每集装箱孢子）放置在以下5个香蕉植株根系与土壤接触面与熏蒸厘米，底层覆盖。滤液接种的土壤添加到所有的治疗方标准化微生物。植物在温室下保持12 h的800-1300勒克斯，光周期25B4 7C及70%-90％的相对湿度。 感染源
丛枝菌根研究方法
丛枝菌根研究方法 1.检测孢子含量的方法（湿筛倾注蔗糖离心法） 1.Gerdemann J W, Nicolson T H,1963. Spores of mycorrhizal endogone species extracted from soil by wet sieving and decanting. Transactions of the British Mycological Society, 46: 235-244 2.刘润进，李晓林．2000．丛枝菌根及其应用．北京：科学出版社：190-194 根据上述方法略有改动 1.称取10 g菌剂，置入大烧杯中加500 ml水，搅拌，静置10 s。 2.先后过80目分样筛、400目分样筛，将400目筛子上的残余物用药匙转入50ml 离 心管中，后用清水冲洗筛子，将残余物全部转入离心管中，配平，3000转/min 离 心10 min。（注分样筛最好直径为12 cm左右，便于下面放置烧杯过筛） 3.去掉上清液，在离心管中加入预先配制好的质量分数为50%的蔗糖溶液，玻璃棒搅 匀，配平，3000转/min 离心10 min（注意离心前离心管壁上不能有残余物）。 4.将400目筛子呈一斜面放置，离心后的蔗糖溶液过筛子的下侧，用水将筛子上的残 留物轻轻洗入划线培养皿中。（注意水不能加太多以防影响检测，培养皿划线便于 统计）。 5. 解剖镜镜检统计培养皿中的孢子数目，计算出菌剂中的孢子含量。 注：溶于蔗糖溶液中的孢子仍可进行接种。 2.检测菌根侵染率的方法（曲利苯蓝染色法） Phillips J M，Hayman D S，1970. Improved procedures for clearing and staining parasitic and vesicular-arbuscular mycorrhizal fungi for rapid assessment of infection. Transactions of the British Mycological Society, 55: 158~161
丛枝菌根侵染率研究
丛枝菌根研究方法 一、检测孢子含量的方法 A湿筛倾注法 1. 称取一定重量的土壤样品（最好是取自15cm 表层植物根系附近的土壤），放在容器内用水浸泡20-30min，使土壤松散。如果土壤粘性很大，也可加入各种土壤分散剂。 2. 选用一套洁净的具有孔径为0.5-0.034mm的土壤筛，依次重叠起来。最底层用一物体垫着（如培养皿、木块等物），使筛面稍微倾斜。 3. 用玻璃棒搅动浸泡的水溶液，停置几秒钟后，使大的石砾和杂物沉淀下去，即将悬浮的土壤溶液慢慢地倒在最上一层孔径最大的土壤筛上。倾倒时，最好集中倒在筛面的一个点上，不要使整个筛面都沾有土壤溶液。 4. 用清水依次轻轻冲洗停留在筛面上的筛出物，以免在上层粗筛面的剩留物中夹藏有VA 菌根真菌孢子。 5. 用洗瓶将停留在筛面上的筛出物轻轻冲洗到一个清洁的培养皿里面，再将滤液通过细筛并用水冲洗。在冲下来的筛出物中，除有许多细的沙砾和杂质外，就含有VA菌根真菌的不同直径的孢子。 6. 将含有筛出物的培养皿放在双目实体解剖显微镜下观察。 B 蔗糖离心法 1. 称取10 g菌剂，置入大烧杯中加500 ml水，搅拌，静置10 s。 2. 先后过80目分样筛、400目分样筛，将400目筛子上的残余物用药匙转入50ml 离心管中，后用清水冲洗筛子，将残余物全部转入离心管中，配平，3000转/min 离心10 min。（注分样筛最好直径为12 cm左右，便于下面放置烧杯过筛） 3. 去掉上清液，在离心管中加入预先配制好的质量分数为50%的蔗糖溶液，玻璃棒搅匀，配平，3000转/min 离心10 min（注意离心前离心管壁上不能有残余物）。 4. 将400目筛子呈一斜面放置，离心后的蔗糖溶液过筛子的下侧，用水将筛子上的残留物轻轻洗入划线培养皿中。（注意水不能加太多以防影响检测，培养皿划线便于统计）。 5. 解剖镜镜检统计培养皿中的孢子数目，计算出菌剂中的孢子含量。 注：溶于蔗糖溶液中的孢子仍可进行接种。
移植排斥反应类型
移植排斥反应类型 (一)宿主抗移植物反应 1、超急性排斥反应(hyperacute rejection) 在移植后数分-24小时发生 ABO血型抗体或抗Ⅰ类主要组织相容性抗原的抗体引起 受者反复输血，妊娠或曾做过同种移植，其体内有可能存在这类抗体(IgM)。 超急排斥一旦发生，无有效方法治疗，终将导致移植失败 ABO及HLA 配型可预防超急排斥的发生。 2、急性排斥反应(acute rejection) 急性排斥是排斥反应中最常见，在移植后数天-2周发生。 移植物病理：大量巨噬细胞和淋巴细胞浸润。 体温度升高、移植物肿胀，疼痛，少尿(肾)、SCr增高，血小板减低，补体下降，进展迅速。 机制：CD4+Th1细胞介导迟发型反应；CTL直接杀伤表达同种异型抗原的移植物细胞；激活的巨噬细胞和NK细胞 免疫抑制剂治疗有效。 3、慢性排斥反应(chronic rejection) 慢性排斥移植后数周-数年发生 临床过程，肾移植与慢性肾炎相似(进行性肾功能丧失) 主要病理特征是移植器官的毛细血管床内皮细胞增生，使动脉腔狭窄，并逐渐纤维化。 机制：免疫机制： 血管慢性排斥(Chronic vascular rejection)主要形式 1）CD4+T细胞通过间接途径识别血管内皮细胞表面HLA抗原而被活化，长期活化，Th1细胞可介导慢性迟发型超敏反应，Th2细胞参与B细胞抗体的产生2）急性排斥反复发作，引起移植物血管内皮细胞持续炎症损伤 非免疫机制 慢性排斥与组织器官退行性变有关 1）供者年龄过小或大 2）并发症：高血压、高血症、糖尿病、巨细胞病毒感染等 3）移植物缺血时间过长 4）肾单位减少 5）肾血液动力学改变 6）免疫抑制剂: 药物损伤(二)移植物抗宿主反应 1.GVHR是由移植物中抗原特异性淋巴细胞识别宿主组织抗原所致的排斥反应， 发生后一般均难以逆转，不仅导致移植失败，还可能威胁受者生命。 2.形成条件：HLA型不符；移植物中足量的免疫细胞（成熟T细胞）；受者免疫 无能或免疫极度低下。mH抗原相关 3.急性和慢性GVHR。GVHR主要见于骨髓移植后。脾、胸腺移植时，以及免疫 缺陷的新生儿接受输血时，均可发生不同程度的GVHR。 器官移植相关的免疫学问题 (一)诱导同种移植耐受 封闭同种反应性TCR 阻断共刺激信号 供者特异性输血(donor specific transfusion，DST) 过继输注Treg细胞 过继输注或诱导未成熟DC 定向调控Th细胞亚群分化 阻断效应细胞向移植物局部浸润 (二)排斥反应的特殊情况 免疫豁免区(immunologically privileged site)：接受同种或异种组织器官移植而不发生或仅轻微排斥反应的机体解剖部位或区域 形成机制：缺少输入血管和淋巴管； 机体内存在特殊的屏障； 组织免疫原性弱； 免疫区高表达FasL(T细胞Fas) (三)造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation, HSCT) 目的：重建正常造血和免疫功能（1955 Thomas） 可能后果：HVGR和GVHR（主要） HLA遗传特征决定了筛选造血干细胞供者的策略 1）HLA具有高度多态性 2）HLA基因为单基因遗传（同胞兄弟姐妹） 临床应用： 1）血液系统疾病（白血病，淋巴瘤） 2）遗传性血液病 3）经化疗或放疗的恶性实体肿瘤 4）先天性免疫缺陷和代谢失调
丛枝菌根真菌名录及新科新属
This is an electronic version of the publication: Schü?ler A, Walker C (2010) The Glomeromycota. A species list with new families and new genera. Arthur Schü?ler & Christopher Walker, Gloucester. Published in December 2010 in libraries at The Royal Botanic Garden Edinburgh, The Royal Botanic Garden Kew, Botanische Staatssammlung Munich, and Oregon State University. Electronic version freely available online at https://www.wendangku.net/doc/b215612940.html, This electronic version is 100% identical to the printed publication. This includes the errors; therefore the electronic version contains one additional, initial page as a corrigendum, giving corrections of some errors and typos.
Corrections, 2 FEB, 14 FEB, 19 JUL 2011. The corrections are highlighted in red. p 7. FOR Claroidoglomeraceae READ Claroid e oglomeraceae p 10. DELETE Glomus pulvinatum (Henn.) Trappe & Gerd. [as 'pulvinatus'], in Gerdemann & Trappe, Mycol. Mem. 5: 59 (1974) ≡Endogone pulvinata Henn., Hedwigia 36: 212 (1897) p 11. AFTER Botanical Code for formal descriptions after 1 Jan 1935 INSERT) p 14. BELOW ≡ Endogone macrocarpa var. geospora T.H. Nicolson & Gerd., Mycologia 60(2): 318 (1968) INSERT ≡ Glomus macrocarpum var. geosporum (T.H. Nicolson & Gerd.) Gerd. & Trappe [as macrocarpus var. geosporus], Mycol. Mem. 5: 55 (1974) p16. ABOVE Sclerocystis coccogenum (Pat.) H?hn., Sber. Akad. Wiss. Wien, Math.-Naturw. Kl., Abt. 1 119: 399 [7 repr.] (1910) INSERT Sclerocystis clavispora Trappe, Mycotaxon 6(2): 358 (1977) ≡ Glomus clavisporum (Trappe) R.T. Almeida & N.C. Schenck, Mycologia 82(6): 710 (1990) p 19. FOR Rhizophagus irregulare READ Rhizophagus irregularis p 19. FOR Rhizophagus proliferus (B?aszk., Kovács & Balázs) READ Rhizophagus proliferus (Dalpé & Declerck) p 28. FOR Scutellospora arenicola Koske Koske & Halvorson READ Scutellospora arenicola Koske & Halvorson p 29. FOR Scutellospora pernambucana Oehl, Oehl, D.K. Silva, READ Scutellospora pernambucana Oehl, D.K. Silva, p 30. FOR Genus name: Racocetra Oehl, F.A. Souza & Sieverd., Mycotaxon: 334 (2009) READ Genus name: Racocetra Oehl, F.A. Souza & Sieverd., Mycotaxon 106: 334 (2009) p 35. FOR Acaulospora mellea Spain & N.C. Schenck, in Schenck, Spain, Sieverding & Howeler, Mycologia 76(4): 689 READ Acaulospora mellea Spain & N.C. Schenck, in Schenck, Spain, Sieverding & Howeler, Mycologia 76(4): 690 p 39. FOR Entrophospora nevadensis J. Palenzuela, N. Ferrol & Oehl, Mycologia 102(3): 627 (2010) READ Entrophospora nevadensis Palenz., N. Ferrol, Azcón-Aguilar & Oehl, in Palenzuela, Barea, Ferrol, Azcón-Aguilar & Oehl, Mycologia 102(3): 627 (2010) p 41. FOR Generic type: Pacispora chimonobambusae (C.G. Wu & Y.S. Liu) Sieverd. & Oehl ex C. Walker, Vestberg & A. Schü?ler, in Walker, Vestberg & Schü?ler, Mycol. Res. 111(3): 255 (2007) ≡Gerdemannia chimonobambusae (C.G. Wu & Y.S. Liu) C. Walker, B?aszk., A. Schü?ler & Schwarzott, in Walker, B?aszkowski, Schwarzott & Schü?ler, Mycol. Res. 108(6): 717 (2004) ≡Glomus chimonobambusae C.G. Wu & Y.S. Liu, in Wu, Liu, Hwuang, Wang & Chao, Mycotaxon 53: 284 (1995) READ Generic type: Pacispora scintillans (S.L. Rose & Trappe) Sieverd. & Oehl ex C. Walker, Vestberg & A. Schü?ler, in Walker, Vestberg & Schü?ler, Mycol. Res. 111(3): 255 (2007) ≡Glomus scintillans S.L. Rose & Trappe, Mycotaxon 10(2): 417 (1980) ≡Gerdemannia scintillans (S.L. Rose & Trappe) C. Walker, B?aszk., A. Schü?ler & Schwarzott, i n Walker, B?aszkowski, Schwarzott & Schü?ler, Mycol. Res. 108(6): 716 (2004) =Glomus dominikii B?aszk., Karstenia 27(2): 37 (1988) [1987] =Pacispora dominikii (B?aszk.) Sieverd. & Oehl, in Oehl & Sieverding, J. Appl. Bot., Angew. Bot. 78: 76 (2004) Pacispora chimonobambusae (C.G. Wu & Y.S. Liu) Sieverd. & Oehl ex C. Walker, Vestberg & A. Schü?ler, in Walker, Vestberg & Schü?ler, Mycol. Res. 111(3): 255 (2007) ≡Gerdemannia chimonobambusae (C.G. Wu & Y.S. Liu) C. Walker, B?aszk., A. Schü?ler & Schwarzott, in Walker, B?aszkowski, Schwarzott & Schü?ler, Mycol. Res. 108(6): 717 (2004) ≡Glomus chimonobambusae C.G. Wu & Y.S. Liu, in Wu, Liu, Hwuang, Wang & Chao, Mycotaxon 53: 284 (1995) p 41. BELOW Pacispora robigina Sieverd. & Oehl, in Oehl & Sieverding, J. Appl. Bot. (Angew. Bot.) 78: 75 (2004) DELETE Pacispora scintillans (S.L. Rose & Trappe) Sieverd. & Oehl ex C. Walker, Vestberg & A. Schü?ler, in Walker, Vestberg & Schü?ler, Mycol. Res. 111(3): 255 (2007) ≡Gerdemannia scintillans (S.L. Rose & Trappe) C. Walker, B?aszk., A. Schü?ler & Schwarzott, in Walker, B?aszkowski, Schwarzott & Schü?ler, Mycol. Res. 108(6): 716 (2004) ≡Glomus scintillans S.L. Rose & Trappe, Mycotaxon 10(2): 417 (1980) =Pacispora dominikii (B?aszk.) Sieverd. & Oehl, in O ehl & Sieverding, J. Appl. Bot., Angew. Bot. 78: 76 (2004) p 43. FOR≡Glomus aurantium B?aszk., Blanke, Renker & Buscot, Mycotaxon 90: 540 (2004) READ≡Glomus aurantium B?aszk., Blanke, R enker & Buscot, Mycotaxon 90: 450 (2004) p 43. FOR Genus name: Otospora Palenz., Ferrol & Oehl READ Genus name: Otospora Oehl, Palenz. & N. Ferrol p 43. FOR Generic type: Otospora bareae Palenz., Ferrol & Oehl [as 'bareai'] READ Generic type: Otospora bareae Palenz., N. Ferrol & Oehl [as 'bareai'] p 50. FOR Ambispora granatensis J. Palenzuela, N. Ferrol READ Ambispora granatensis Palenz., N. Ferrol p 53. FOR (Morton & Redecker 2001; Kaonongbua 2010). READ(Morton & Redecker 2001; Kaonongbua et al. 2010). Comment on the gender of the epithets in Redeckera. In publishing the new genus Redeckera, in honour of Dirk Redecker, we treated the gender as neuter, thus giving the epithets as pulvinatum, megalocarpum, and fulvum. We had inadvertently missed the recommendation 20A.1(i) in the Botanical Code requesting that all such epithets should be made feminine, and we apologise for this. However, because the names have been formally published, the requirements of Article 62 apply, and the neuter gender must be retained.
移植物抗宿主病概述
第18章 移植物抗宿主病 移植物抗宿主病（graft versus host disease, GVHD）是异基因造血干细胞移植后的一个常见而又重要的并发症。尽管使用免疫抑制剂预防GVHD，甚至供体是HLA“完全”相合的同胞，GVHD仍可能发生。GVHD是受体抗原递呈细胞（Ag-presenting cells, APC）和供体成熟T细胞相互作用的结果。1955年，Barnes 和Loutit首先报道了发生在动物体内的GVHD，当时认为是一种移植继发性疾病或runt病。直到20世纪50年代后期，人们才认识到移植继发性疾病引起的皮肤异常、腹泻等症状是由于具有免疫活性的细胞进入无免疫活性的宿主体内所致，GVHD这一术语被用于描述这一免疫损伤的过程。GVHD是异基因造血干细胞移植、供体淋巴细胞输注（DLI）的常见并发症，大部分接受异基因造血干细胞移植的受者都会经历不同程度的GVHD，因而GVHD依然是目前困扰异基因造血干细胞移植成功的主要障碍。 根据GVHD发生的时间，可分为急性GVHD (aGVHD)和慢性GVHD (cGVHD)。一般100天以内发生的为aGVHD，100天以后发生的为cGVHD，但cGVHD也可在100天以内发生，随着减低剂量预处理和供体淋巴细胞输注的广泛开展，aGVHD也可迟至移植后4～6月发生。aGVHD可直接演变为cGVHD，没有明确的间隔期，亦可在aGVHD完全缓解一段时间后出现cGVHD；没有aGVHD，也可单独出现cGVHD。 第一节急性移植物抗宿主病 根据美国NIH的GVHD共识工作组意见，aGVHD分为移植后100天内发生的经典aGVHD和持续、复发及晚发性aGVHD（移植后100天以后）两种类型，兼有aGVHD和cGVHD临床表现者为“重叠综合征（overlap syndrome）”。【发病机制】 1966年Billingham将发生GVHD的条件定义为：①移植物中需含有免疫活性细胞成分；②宿主必须具备供者移植物不存在的异体移植抗原，这些异体移植抗原被移植物中的免疫活性细胞视为异体抗原而发生反应；③宿主必须对移植物缺乏有效的免疫反应能力，致使移植物有足够的时间组织其免疫反应，并放大、扩展此反应。近年来又提出第四个条件：效应细胞必须迁移至靶组织。
丛枝菌根实验方案
丛枝菌根实验方案 1.李晓林(1990)采用三室的试验装置，利用30μm的尼龙网将根与菌丝分开，建立了菌丝 际。该方法为研究菌丝及其菌丝际的生理生化变化提供了一条有用的途径。但是它仍然不能排除外界微生物及灌溉施肥等措施造成的影响，为了进一步研究菌丝的生理生化变化，必须建立一种无杂菌的菌丝际环境，将离体双重培养条件下形成共生体中的根与菌丝分离开来，使菌丝进入菌丝室，而将根阻止在菌根室中，不让二者混在一起，为深入研究菌根菌丝的生理生化特性提供新的技术和方法。 2.Glomus intraradices孢子较小，其直径为44μm一117μm，平均77μm，呈椭球形或 球形，颜色为淡黄色，其孢子的萌发是从联孢菌丝的断口处重新伸出菌丝(图4—1图版I一6)，而后再伸长、分枝，形成一个密集分枝的菌丝体。它的萌发不同于G．margarita 孢子和S．sinuosa孢子果的萌发。虽然较前两种孢子和孢子果的芽管数略少，但它仍具有很强的侵染潜力，可能同其具有很强的分枝能力有关。一旦萌发，菌丝的分枝速度很快。G．intraradices菌丝的分枝呈垂直方向。新生成的菌丝较联孢菌丝直径更细，对根段进行侵染会更容易。 3.菌根室中共生联合体的建立：将有机玻璃条用玻璃胶黏贴在直径为9cm的培养皿底部， 将培养皿分为两室，防止两室的培养基质进行营养交换。将30μm的尼龙网黏贴在有机玻璃条及培养皿壁，直至培养皿上盖，阻止根的进入(图4—2)。将转移RiT—DNA 胡萝卜根与萌发的G．intraradicesSchenck&Smith丛枝菌根真菌孢子，共同培养的室称为菌根室(MC)，而将菌丝穿过尼龙网进入的室称为菌丝室(HC)。图4—2培养皿中的两室试验装置将M培养基10mL倒入菌根室中，用于离体双重培养丛枝菌根真菌与转移RiT—DNA胡萝I-根。在菌丝室中：①倒入10mL的琼脂培养基质，其中含有NO3-N 或NH4-N(N的含量与M培养基中相同)，其pH分别为6．0或6．5，基质中含有0．6％溴甲酚紫作为指示剂；②倒入10mL不含蔗糖的M培养基，pH为5．5。在相应的菌根室中接种G．intraradices孢子。截取在M培养基上生长的转移RiT—DNA胡萝i-根的根尖5cm-7cm置于菌根室中，将萌发的孢子移入根旁空处，由于G．intraradices孢子直径小，每个培养皿移进30个孢子。将培养皿在27℃±1℃的恒温培养箱中黑暗培养。 4.菌根室中共生联合体生长状况：G．intraradices菌根真菌相似于G．margarita菌根真菌， 其生成的菌丝在与根相遇时入侵根段，在根细胞内形成丛枝。培养近一个月后，在培养基质中形成了大量的营养孢子及成熟的孢子(图4—3)。营养孢子的大小为4lμm-62μm，平均为49μm，而成熟孢子的大小范围是67μm一93μm，平均大小为78μm。
微生物多样性研究进展
姓名：崔靖璞学号：2010212802 专业：生物科学 微生物多样性研究进展 摘要：微生物资源丰富,开发潜力巨大,是生命科学发展的主要动力之一.本文介绍了几种常用的研究微生物多样性的分子生物学技术,主要包括:16SrDNA测序、DGGE/TGGE/TTGE、T-RFLP、SSCP、FISH、印记杂交、定量PCR、基因芯片等,并对微生物多样性研究技术的未来发展进行了展望，同时本文也介绍几种微生物多样性的研究实验方法。 关键词:微生物多样性聚合酶链式反应基因芯片平板纯培养 微生物是地球上生物多样性最为丰富的资源,微生物资源的开发,是21世纪生命科学发展的主要动力之一.由于微生物的微观性,微生物多样性与其他高等生物相比有许多独特之处,包括:生存环境多样;生长、繁殖速度多样;营养、代谢类型多样;生活方式多样.微生物多样性的揭示与研究技术的发展和创新是密不可分的,研究技术的进步是微生物多样性研究向前发展的重要推动力量.近年来,随着微电子、计算机、分子生物学、物理、化学等技术的发展,微生物多样性研究技术也在吸收其他学科先进技术的基础上不断向前发展.各种研究方法的发展使得这种状况有了很大改观.现代分子生物学技术在微生物多样性研究上的应用克服了微生物培养技术的限制,能对样品进行较客观的分析,较精确地揭示了微生物种类和遗传的多样性.目前用于研究微生物多样性的分子生物学技术主要包括:16SrDNA 测序、DGGE/TGGE/TTGE、T-RFLP、SSCP、FISH、印记杂交、定量PCR、基因芯片等。 1核酸探针杂交技术 核酸分子杂交技术是20世纪70年代发展起来的一种分子生物学技术.该技术快速、灵敏、具有高度特异性,近年来被广泛应用于微生物多样性的研究中.用于微生物多样性研究的探针主要有三类:双链DNA、单链DNA和RNA以及寡核苷酸探针,杂交方式主要有荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)、全细胞杂交(whole-cell hybridization)、数量印迹杂交(quantitative dot blot)及生物芯片(biochip).对于环境微生物样品解析而言,最有意义的核酸杂交技术是原位杂交技术,在原位杂交技术中,应用最广泛的是荧光原位杂交技术。