红细胞裂解液

红细胞裂解液.txt27信念的力量在于即使身处逆境，亦能帮助你鼓起前进的船帆；信念的魅力在于即使遇到险运，亦能召唤你鼓起生活的勇气；信念的伟大在于即使遭遇不幸，亦能促使你保持崇高的心灵。配制试剂所需材料：
1. Ammonium Chloride x10 Lysing Concentrate Solution
a) NH4Cl (1.5 M) 80 g
b) KHCO3 (100 nM) 10 g
c) Na4EDTA (10 nM) 3.7 g
d) Distilled H2O 1000 mL
2. 1N HCl or 1N NaOH（调节pH值用）

配制步骤：Luo J, Miller MW (1997) Differential sensitivity of human neuroblastoma cell lines to ethanol: correlations with their proliferative responses to mitogenic growth factors and expression of growth factor receptors. Alcohol Clin Exp
Res 21:1186–1194.
1. 将以上a、b、c试剂溶于900ml 去离子水中；
2.调节溶液pH值到7.2-7.4，加去离子水定容到1000ml；
3.在制备工作液时，将此储存液稀释10倍后使用。

保存：
1.10x 储存液储存于2-8°C不能超过半年（六个月）；
2.在使用前，工作液每天都应该新鲜配制放置于室温，当日用不完的弃掉。


红细胞裂解液（Tris-NH4Cl）：称取3.735g氯化铵、三羟甲基氨基甲烷（Tris）1.3g加水溶解并稀释至500ml。0.22μm滤膜过滤除菌，4℃保存。细胞悬液加红细胞裂解液后，混匀静止4-5分钟，待红细胞完全破碎，1000r/min离心5分钟，弃上清去除红细胞，得到白细胞沉淀。
结果第一次用的时候，觉得还可以，第二次和第三次用的时候离心后发现有絮状物质，不能很好的沉淀出白细胞。
（一）1　试剂配制
原液1号：10 g葡萄糖+0.6 g磷酸二氢钾+3.58 g磷酸氢二钠（7H2O）+20 ml 5 g/L酚红溶液，加双蒸水定容至1 000 ml。
原液2号：1.86 g氯化钙（2H2O）+4.0 g氯化钾+80 g氯化钠+1.04 g氯化镁+2.0 g硫酸镁（7H2O），加双蒸水定容至1 000 ml。
应用液有3种，1#：10 ml原液1号+10 ml原液2号，加双蒸水定容至100 ml。
2#：20 ml原液1号+20 ml原液2号，加双蒸水定容至100 ml。
3#：1 ml原液1号+1 ml原液2号，加双蒸水定容至100 ml。
2　红细胞裂解　
　取100 μl抗凝全血，加2 ml应用液3#，混匀15～20 s；加2 ml应用液2#，混匀15～20 s；加4 ml应用液1#，混匀15～20 s；300×g离心2 min，弃上清；收集沉淀，加PBS缓冲液，制成白细胞悬液，备用。
（这种红细胞裂解法满足了白细胞流式细胞仪检测分选要求，价格低廉，是一种简便快捷、经济实用的白细胞纯化分选方法。
（二）红细胞裂解液(0.01mol/L Tris-HCL pH7.6; 0.01mol/L NaCl; 0.005mol/L MgCl2)
（三）红细胞裂解液（139.6 mmol/L NH4Cl, 16.96 mmol/L Tris, 用1 mol/L HCl调 pH至7.2）
（四）红细胞裂解液的制备：碳酸氢钾（KHCO3）1.0g；氯化氨（NH4CL）8.3g；EDTA-Na2 0.037g，加双蒸水至1000ml，即

工作液。（该配方出自《实用流式细胞术彩色图谱》）



Acetylcholine stimulates cortical precursor cell proliferation in vitro via muscarinic receptor activation and MAP kinase phosphorylation.



Acetylcholine release by human colon cancer cells mediates autocrine stimulation of cell proliferation.网址：https://www.wendangku.net/doc/d017254141.html,/pmc/articles/PMC2536781/?tool=pubmed

CD38/cADPR/Ca2+ Pathway Promotes Cell Proliferation and Delays Nerve Growth Factor-induced Differentiation in PC12 Cells