平板计数琼脂培养基
PCA平板计数琼脂培养基
平板计数琼脂培养基即PCA，是在08GB中用于菌落总数测定的
配方：
1、成分
胰蛋白胨 5.0g
酵母浸粉 2.5g
葡萄糖 1.0g
琼脂 15.0g
蒸馏水1000ml
pH 7.0士0.2
2、制法：
将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。分装试管或锥形瓶，121℃高压灭菌15min。
LST 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤
月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤简称LST，在08GB中是用于大肠菌群的检测，大肠杆菌的计数，金黄色葡萄球菌的检测。
配方：
1、成分：
胰蛋白胨或胰酪胨 20.0g
氯化钠 5.0g
乳糖 5.0g
磷酸氢二钾 2.75g
磷酸二氢钾 2.75g
月桂基磺酸钠0.1g
蒸馏水1000ml
pH 6.8士0.2
2、制法：
将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH ，分装到有玻璃小导管的试管中，每管10ml。121℃高压灭菌15min。
煌绿乳糖胆盐肉汤BGLB
煌绿乳糖胆盐肉汤简称BGLB，在08国标中是用于大肠菌群的检测
配方：
1、成分：
蛋白胨10.0g
乳糖 10.0g
牛胆粉溶液 200.0ml
0.1%煌绿水溶液 13.3ml
蒸馏水1000ml
pH 7.2士0.1
2、制法：
将蛋白胨、乳糖溶解于500ml蒸馏水中，加入牛胆粉溶液200.0ml（将20.0g脱水牛胆粉溶于200ml的蒸馏水中，pH7.0-7.5）用蒸馏水稀释到975ml，调节pH至7.4，再加入0.1%煌绿水溶液13.3ml，用蒸馏水补足到1000ml，用棉花过滤后，分装到有玻璃小导管的试管中，每管10ml。121℃高压灭菌15min。
V-P试剂 Voges-Proskauer试剂
V-P试剂是Voges-Proskauer试剂的简称，用于副溶血性弧菌的V-P试验。
配方：
1、成分
甲液
α-萘酚 5.0g
无水乙醇100.0ml
乙液
氢氧化钾40.0g
用蒸馏水加至1000ml
2、试验方法
将3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂生长物接种3%氯化钠MR-VP培养基，36℃士1℃培养48h。取1ml培养物转放到一个试管内，加0.6ml甲液，摇动。加0.2ml乙液，摇动。随意加一点肌酸结晶，4h后观察结果。阳性结果是呈伊红的粉红色。
尿素培养基
尿素培养基是尿素酶琼脂培养基中去掉琼脂的培养基，是用于小肠结肠炎耶尔森氏菌检验。
配方：
1、成分
尿素 20.0g
酵母浸粉 0.1g
磷酸二氢钾 0.091g
磷酸氢二钠 0.095g
酚红 0.01g
蒸馏水1000ml
2、制法
将上述成分于蒸馏水中溶解，校正pH6.8士0.2.不需要加热，过滤除菌，无菌分装于灭菌小试管中，每管为3ml。
3、试验方法
挑取琼脂培养基接种于尿素培养基，26士1℃培养24h。尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变成红色。
改良CCD琼脂 mCCD
mCCD是改良CCD琼脂的简写，在08GB中是用于空肠弯曲菌检验的。
配方：
1、基础培养基：
成分：
肉浸液 10.0g
动物组织酶解物10.0g
氯化钠 5.0g
木炭 4.0g
酪蛋白酶解物 3.0g
去氧胆酸钠 1.0g
硫酸亚铁0.25g
丙酮酸钠0.25g
琼脂 8.0g-18.0g
水1000ml
制法：用水溶解基础培养基成分，煮沸。分装至合适的三角瓶内，121℃高压灭菌15min。
2、抗生素溶液
成分
头孢哌酮 0.032g
两性霉素 0.01g
利福平0.01g
乙醇/灭菌水（50/50，体积比）5ml
制法：将上述成分溶解于乙醇/灭菌水混合溶液中。
3、完全培养基：
成分：
基础培养基 1000ml
抗生素溶液 5ml
制法：
当基础培养基的温度约为45℃左右时，加入抗生素溶液，混匀。待完全培养基的pH值调至7.2士0.2（25℃）。倾注约15ml于无菌平皿中，静置至培养基凝固。使用前需预先干燥平板。可将平皿盖打开，使培养基面朝下，置于干燥箱中约30min，直到琼脂表面干燥。预先准备的平板未干燥时在室温放置不得超过4h，或在4℃左右冷藏不得超过7.4.
Bulton肉汤
在08国标中，Bulton肉汤是用于空肠弯曲菌检验的。
配方：
1、基础培养基
成分：
动物组织酶解物 10.0g
乳白蛋白水解物 5.0g
酵母浸粉 5.0g
氯化钠 5.0g
丙酮酸钠 0.5g
偏亚硫酸氢钠0.5g
碳酸钠0.6g
α-酮戊二酸 1.0g
水 1000ml
制法
用水溶解基础培养基成分，如需要可使用加热促其溶解。将基础培养基分装至合适的锥形瓶内，121℃灭菌15min。
2、无菌裂解脱纤维绵羊或马血
对无菌脱纤维绵羊或马血通过反复冻融进行裂解或使用皂角昔进行裂解。
3、抗生素溶液
成分
头孢哌酮（cefoperazone) 0.02g
万古霉素（vancomycin) 0.02g
三甲氧苄氨嘧啶乳酸盐（trimethoprimlactate) 0.02g
两性霉素B(amphotercin B) 0.01g
多粘菌素B(polymyxin B) 0.01g
乙醇／灭菌水（50/50，体积比） 5mL
制法
将上述成分溶解于乙醇／灭菌水混合溶液中。
4、完全培养基
成分
基础培养基（A.1.1) 1000mL
无菌裂解脱纤维绵羊或马血（A.1.2) 50mL
抗生素溶液（A.1.3) 5mL
制法
当基础培养基的温度约为45℃左右时，无菌加人绵羊或马血和抗生素溶液，混匀，将完全培养基的pH值调至7.2士0.2(25℃），将培养基无菌分装至合适的试管或锥形瓶中备用。配制的增菌液在常温下放置不得超过4h，或在4℃左右避光保存不得超过7d。
Mueller Hinton琼脂 MH琼脂
MH琼脂是Mueller Hinton琼脂的简称，用于空肠弯曲菌的检测
配方：
1、基础培养基
成分
动物组织酶解物6.0g
酪蛋白酶解物17.5g
可溶性淀粉1.5g
琼脂5.09—15.0g
水1000mL
制法
将基础培养基成分溶解于水中，煮沸。将基础培养基分装于合适的三角瓶中，121℃高压灭菌15min。
2、无菌脱纤维绵羊血
无菌操作条件下，将绵羊血加人到盛有灭菌玻璃珠的容器中，振摇约10min，静置后除去附
有血纤维的玻璃珠即可。
3、完全培养基
成分
基础培养基（A.7.1) 1000mL
无菌脱纤维绵羊血（A.7.2) 50mL
制法
当基础培养基的温度约为45℃左右时，无菌加人绵羊血，混匀。根据需要，将完全培养基的pH值调至7.2士0.2(25℃）。倾注约15mL于灭菌平皿中，静置至培养基凝固。使用前需预先干燥平板。可将平皿盖打开，使培养基面朝下，置于干燥箱中约30min，直到琼脂表面干燥。预先制备的平板未干燥时在室温放置不得超过4h，或在4℃左右冷藏不得韶讨7d_ 哥伦比亚琼脂
哥伦比亚琼脂就是哥伦比亚血琼脂，用于用空肠弯曲菌的检测。
配方
1、基础培养基
成分
动物组织酶解物 23.0g
淀粉 1.0g
氯化钠 5.0g
琼脂8.0g—18.0g
水 1000ml
制法
将基础培养基成分溶解于水中，加热促其溶解。分装至合适的三角瓶内，121℃高压灭菌15min。
2、无菌脱纤维绵羊血
无菌操作条件下，将绵羊血加人到盛有灭菌玻璃珠的容器中，振摇约10min，静置后除去附有血纤维的玻璃珠即可。
3、完全培养基
组分
基础培养基（A.3.1) 1000mL
无菌脱纤维绵羊血（A.3.2) 50mL
制法
当基础培养基的温度为45℃左右时，无菌加人绵羊血，混匀。将完全培养基的pH值调至7.2士0.2(25℃）。倾注15mL于无菌平皿中，静置至培养基凝固。使用前需预先干燥平板。可将平皿盖打开，使培养基面朝下，置于干燥箱中约30min，直到琼脂表面干燥。预先制备的平板未干燥时在室温放置不得超过4h，或在4℃左右冷藏不得超过7d。
脑心浸出液肉汤 BHI
BHI是脑心浸出液肉汤的简写，08GB中用于金黄色葡萄球菌的检测。
配方：
1、成分
胰蛋白质胨 10.0g
氯化钠 5.0g
磷酸氢二钠（Na2HPO4?12H2O ) 2.5g
葡萄糖 2.0g
牛心浸出液 500 mL
pH7.4±0.2
2、制法
加热溶解，调节pH ，分装16 mmX160 mm 试管，每管5 mL ，置121 ℃，15 min 灭菌。
10％氯化钠胰酪胨大豆肉汤 LST
LST是10％氯化钠胰酪胨大豆肉汤的简称，是用于08GB中金黄色葡萄球菌的检测。
配方：
1、成分
胰酪胨（或胰蛋白胨） 17g
植物蛋白胨（或大豆蛋白胨）3g
氯化钠 100g
磷酸氢二钾 2.5g
丙酮酸钠 10g
葡萄糖 2.5g
蒸馏水 1000ml
pH 7.3±0.2
2 制法
将上述成分混合，加热，轻轻搅拌并溶解，调节pH ，分装，每瓶50 mL , 121oC 高压灭菌15 min
MRS培养基
在08GB中，MRS培养基是用于食品中乳酸菌检测的。
配方：
1、成分
蛋白陈 10.0g
牛肉粉 5.0g
酵母粉 4.0g
葡萄糖 20.0g
吐温80 1.0mL
磷酸氢二钾 2.0g
乙酸钠 5.0g
柠檬酸三铵 2.0g
硫酸镁 0.2g
硫酸锰 0.05g
琼脂粉 15.0g
蒸馏水 1000mL
2、制法
将上述成分加人蒸馏水中，加热溶解，校正pH 6.2，分装后121℃高压灭菌15min—20min。MC培养基
在08GB中，MC培养基是用于食品中乳酸菌检测的。
配方：
1、成分
大豆蛋白陈 5.0g
牛肉粉 3.0g
酵母粉 3.0g
葡萄糖 20.0g
乳糖20.0g
碳酸钙 10.0g
琼脂15.0g
蒸馏水 1000ml
1％中性红溶液5.0ml
2、制法
将前面7种成分加人蒸馏水中，加热溶解，校正pH6.0，加人中性红溶液。分装后121℃高压灭菌15min—20min。
0.5%蔗糖发酵管
在08GB中，0.5%蔗糖发酵管是用于食品中乳酸菌生化鉴定的。
0.5%纤维二糖发酵管
在08GB中，0.5%纤维二糖发酵管是用于食品中乳酸菌生化鉴定的。
0.5%麦芽糖发酵管
在08GB中，0.5%麦芽糖发酵管是用于食品中乳酸菌生化鉴定的。
0.5%甘露醇发酵管
在08GB中，0.5%甘露醇发酵管是用于食品中乳酸菌生化鉴定的。
0.5%水杨苷发酵管
在08GB中，0.5%水杨苷发酵管是用于食品中乳酸菌生化鉴定的。
0.5%山梨醇发酵管
在08GB中，0.5%山梨醇发酵管是用于食品中乳酸菌生化鉴定的。
0.5%乳糖发酵管
在08GB中，0.5%乳糖发酵管是用于食品中乳酸菌生化鉴定的。
七叶苷发酵管
在08GB中，七叶苷发酵管是用于食品中乳酸菌生化鉴定的。
VRB-MUG琼脂
在08GB中是用于大肠杆菌计数。
配方：
1、成分：
蛋白陈7.0g
酵母膏3.0g
乳糖10.0g
氯化钠5.0g
胆盐或3 号胆盐 1.5g
中性红0.03g
结晶紫 0.002g
琼脂15g琼脂18g
蒸馏水1000.0mL
4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷（MUG ) 0.1g
pH7.4±0.1
2、制法
将上述成分溶于蒸馏水中，静置几分钟，充分搅拌，调节pH 。煮沸2 min ，冷却至45℃～
50 ℃使用。
缓冲蛋白胨水BPW
BPW是缓冲蛋白胨水的简称，在08GB中用于阪崎杆菌检验和沙门氏菌的前增菌。
配方：
1、成分
蛋白胨10g
氯化钠5g
磷酸氢二钠9g
磷酸二氢钾1.5g
蒸馏水1000ml
pH 7.2
2、制法
加热搅拌至溶解，调节pH,121℃高压灭菌15 min 。
改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤一万古霉素mLST-Vm
mLST-Vm 是改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤一万古霉素的简称，是用于坂崎杆菌检验。配方：
1、改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨（mLST ）肉汤
成分
氯化钠34.0g
胰蛋白胨 20.0g
乳糖 5.0g
磷酸二氢钾 2.75g
磷酸氢二钾 2.75g
十二烷基硫酸钠0.1g
蒸馏水 1000mL
pH 6.8±0.2
制法
加热搅拌至溶解,调节pH 。分装每管10mL,121℃高压灭菌15 min 。
2、万古霉素溶液
成分
万古霉素10.0 mg
蒸馏水10.0mL
制法
10.0mg万古霉素溶解于10.0mL 蒸馏水,过滤除菌。万古霉素溶液可以在0℃-5℃保存15 天。
3、改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤一万古霉素
每10mL mLST 加人万古霉素溶液0.1mL，混合液中万古霉素的终浓度为10g/mL 。注意：mLS-Vm 必须在24h 之内使用。
阪崎肠杆菌显色培养基DFI琼脂
DFI琼脂是阪崎肠杆菌显色培养基的简称，是用于阪崎肠杆菌的分离培养。
配方：
1、成分
胰蛋白胨15.0g
大豆蛋白胨 5.0g
氯化钠 5.0g
柠檬酸铁按 1.0g
硫代硫酸钠 1.0g
脱氧胆酸钠 1.0g
5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃葡萄糖0.1g
琼脂 15g
蒸馏水 1000mL
pH 7.3±0.2
2、制法
加热搅拌至完全溶解，调节pH，121℃高压15min，冷却至50℃，倾注平板。
4% 2,3,5一氯化三苯四氮唑水溶液TTC
TTC是2,3,5一氯化三苯四氮唑的简称，在08GB是中用于鲜乳中抗生素残留检验。
配方：
1、成分
2,3,5一氯化三苯四氮哩（TTC) 1g
灭菌蒸馏水 5mL
2、制法
称取TTC，溶于灭菌蒸馏水中，装褐色瓶内于2℃一5℃保存。如果溶液变为半透明的白色或淡褐色，则不能再用。临用时用灭菌蒸馏水5倍稀释，成为4％水溶液。
溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨培养基
在08GB中，溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨培养基是用于鲜乳中抗生素残留检验。
配方：
1、成分
蛋白胨10.0g
葡萄糖 5.0g
2％漠甲酚紫乙醇溶液 0.6mL
琼脂 4.0g
蒸馏水1000mL
2、制法
在蒸馏水中加人蛋白陈、葡萄糖、琼脂，加热搅拌至完全溶解，调节pH至7.1±0.1，然后再加人嗅甲酚紫乙醇溶液，混匀后，115℃高压灭菌30min。
酵母浸粉用于果汁或饮料中存在的耐热霉菌的检测，是可口可乐方法。
K氏培养基
K氏培养基是用于检验浓缩苹果清汁（比如苹果）的TAB的。可乐和库克耐酸耐热菌检测。配方：
1、成分：
酵母粉 1.25g
蛋白胨 2.50g
琼脂粉 7.50g
葡萄糖 0.50g
吐温80 0.5ml
去离子水 500ml
2、配制：
将上述成分加于1000ml的三角瓶中，使其溶解，轻轻盖上三角瓶的盖子，在121℃灭菌25min。
TAB：浓缩果汁中有时含有导致腐败的含有孢子的耐热耐酸菌，也叫TAB。它们的特点是：（1）能耐热的孢子
（2）能耐果汁中的酸
（3）能在含有很少量的氧中生长
YSG培养基
YSG培养基是适用于清汁、浊汁、水和浓缩果汁中的耐热耐酸菌的检测。
配方：
1、A组：
酵母粉 2.0g
葡萄糖 1.0g
可溶性淀粉2.0g
蒸馏水 500ml
把A组用1-2N硫酸或盐酸调至pH为3.7士0.1.
2、B组
琼脂 15.0g
蒸馏水500ml
把A组和B组分别在121℃15min条件下灭菌，冷至50—60℃，把两者混合。
酸化K氏培养基
酸化K氏培养基是用于果汁和浓缩果汁中环脂芽孢杆菌和其它的耐热耐酸菌的检测的。
配方：
1、成分：
酵母浸粉 2.5g
蛋白胨 5.0g
琼脂粉15.0g
葡萄糖 1.0g
吐温80 1.0ml
2、配制：
将上述试剂加到990ml的蒸馏水中，溶解后混匀，煮沸，然后在121℃条件下灭菌15min。
培养基制备的基本方法和注意事项
培养基制备的基本方法和注意事项 1.培养基配方的选定 同一种培养基的配方在不同着作中常会有某些差别。因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外．一般均应尽量收集有关资料．加以比较核对．再依据自己的使用目的加以选用，记录其来源。 2 ．培养基的制备记录 每次制备培养基均应有记录，包括培养推各称，配方及其来源．和各种成份的牌号。最终pH 值、消毒的温度和时间制各的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。 3.培养基成分的称取 培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱．最好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方上做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后．还应进行一次检查。 4.培养基各成份的混合和溶化 培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。最好使用不锈钢锅加热溶化．也可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动，以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。 待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化．迄至煮沸。如为琼脂培养基，应先用一部分水将琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两溶液充分混合。在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，最后必须加以补足。 5.培养塞pH 的初步调整 培养基各成分完全溶解后，应进行pH 的初步调正，因培养基在加热消毒过程中、pH 会有所变化，例如，牛肉浸液约可降低.而肠浸液pH 却会有显着的升高。因此，对这个步骤，操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的最终pH ，保证培养基的质量。 pH 调正后，还应将培养基煮沸数分钟，以利培养基沉淀物的析出。
哥伦比亚血琼脂基础说明书
哥伦比亚血琼脂基础培养基使用说明书 【产品名称】 通用名称：哥伦比亚血琼脂基础培养基 英文名称：Columbia Blood Agar Base Medium 【包装规格】 Φ90㎜和Φ70㎜，5块／包。 【预期用途】 本产品用于营养需求较高的细菌培养和保存菌种用，既适合革兰氏阳性菌生长也适合革兰氏阴性菌生 长。 【检验原理】 培养基（Medium）是指由人工方法配制而成的，专供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存用的混合营养制品。培养基按用途分为基础培养基、增菌培养基、选择性培养基、鉴别培养基和厌氧培养基等，按原料来源分为天然培养基、半合成培养基和合成培养基。按形态分为液体培养基、流体培养基、半固体培养基和固体培养基等。 本产品是以人工的方法配制而成的，除基础培养基外另外还添加了脱纤维羊血，以增加营养性能，适 应有些细菌的特殊营养要求。 【主要组成成份】 哥伦比亚血琼脂基础培养基由脱纤维羊血、蛋白胨、氯化钠、牛肉浸粉、琼脂粉和玫瑰红酸等原料经配制、高压灭菌，至45℃加入动物血定量灌入一次性塑料培养基内而成。 【贮存条件及有效期】 2-8℃，避光保存，有效期3个月，用前复温。 【样本要求】 标本可以是液体也可以是固体，液体标本可以直接使用，固体标本需用适量无菌生理盐水溶解后，取溶液使用。根据浓度需要决定是否采用10倍稀释法进行稀释。 【检验方法】 用接种环或棉签以无菌方法取标本直接画线接种于培养基中，或无菌吸取0.1ml适当浓度的标本溶液用玻璃涂布棒均匀涂布于培养基中，置35~37℃温箱中培养。 【检验结果的解释】 大肠埃希氏菌生长良好，菌落为白色半透明；金黄色葡萄球菌产生β-溶血环，菌落呈金黄色；肺炎链球菌的周围产生α溶血。 【检验方法的局限性】 正确的标本采集及良好的细菌划线分离技术是检出细菌的基础，所检出细菌要经镜检、生化鉴定来确 认。 【注意事项】 1．该培养基仅用于体外诊断。
平板菌落计数法操作步骤
平板菌落计数法 一、目的要求 学习平板菌落计数的基本原理和方法。 二、基本原理 平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散为单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2~3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。现在常使用菌落形成单位。 该计数法的缺点是操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是这种计数方法最大的优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验，以及食品、饮料和水等含菌指数或污染度的检测。 三、器材 大肠杆菌悬液，LB琼脂培养基，1mL、5mL无菌吸管，无菌平皿，无菌水，无菌试管，试管架和记号笔等。 四、操作步骤 1、编号 取无菌平皿9套，分别标明为10-4、10-5、10-6各三套，另取6支无菌试管分别标记为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。 2、稀释 用1mL无菌吸管吸取1mL已充分混匀的大肠杆菌菌悬液，精确地放0.5mL至10-1的试管中，此即为10倍稀释，将多余的菌液放回原菌液中。 将10-1试管充分振荡、混匀。另取一支1ml吸管插入10-1试管中来回吹吸菌液三次，进一步将菌体分散、混匀。动作不要太猛太快，吸时插入，吹时提出，再用此吸管吸取10-1菌液1mL，精确地放0.5mL至10-2试管中，此即为100倍稀释，依次类推， 3、取样
培养基的制备程序
培养基的制备程序不同类型培养基制备的程序也不尽相同。但一般培养基的程序主要可分为：配料、溶化、矫正pH、澄清过滤、分装、灭菌及检定等8个步骤。 （一）配料 按培养基处方准确称取各种成分，先在三角烧瓶中加入少量蒸馏水，再加入各种成分，以防蛋白胨等粘附于瓶底，然后再以剩余的水冲洗瓶壁。 （二）溶化 将各种成分混匀于水中，最好以流通蒸气溶化半小时，如在电炉上溶化应随时搅拌，如有琼脂成分时更应注意防止外溢。溶化完毕，补足失去的水分。 （三）矫正pH 1.pH测定 取与标准管同口径的试管（通常用华氏试管）3支，于第1、3管各加入欲测定pH的的培养基5ml，并于第一管中加入0.2g／L的酚红0.25ml作为测定管，混匀；于第2管加入蒸馏水5ml，第4管为pH标准比色管。 2.pH的校正 若测定管过酸或过碱可用0.1mol／L氢氧化钠或0.1mol／L盐酸溶液矫正，直至颜色与标准管相同为止，加碱或加酸时要精确缓慢，每加1滴后要充分混匀，比色后再加第2滴（有时仅加半滴）准确记录加入的量。 3.计算 设5ml培养基矫正pH至7.4时需0.1mol／L氢氧化钠0.15ml，现有培养基4990ml，需加氢氧化钠的量可按下列方法计算：5∶4990＝0.15∶X X＝0.15×4990/5＝149.7（ml） 如将此0.1mol／L的氢氧化钠改用1mol／L的氢氧化钠时，则需14.9ml即可。 （四）过滤澄清 培养基配制后一般都有沉渣或混浊出现，需过滤成清晰透明后方可使用，常用的过滤方法如下： 1.液体培养基 液体培养基必须清晰，以便观察细菌的生长情况，常用滤纸过滤，亦可在加热前加入用水稀释的鸡蛋白（1000ml培养基用1个鸡蛋白）在100℃加热后保持60～70℃40～ 60分钟，使其不溶性物质附于凝固的蛋白上而沉淀，然后再用虹吸法吸出上清液或以滤纸过滤。 2.固体培养基
微生物培养基种类大全
摘要：1、营养琼脂（普通琼脂）成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤）100毫升琼脂（视天气，琼脂质量而定）制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。用途：作普通琼脂平皿。2、血琼脂平板（BA）制法：取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养 1、营养琼脂（普通琼脂) 成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤) 100毫升 琼脂（视天气，琼脂质量而定) 制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。 用途：作普通琼脂平皿。 2、血琼脂平板（BA) 制法：取营养琼脂（PH7．6)，加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。 用途：1．一般棉拭子均接种此培养基。 2．尿液，脓液 3．分离细菌标本用。 3、基础培养基（肉膏汤BB) 成份：蛋白胨10克牛肉膏5克 氯化钠5克水1000毫升 制法：将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至7．6，过滤分瓶，121℃高压灭菌，20分钟备用。 用途：1 作耐药试验，增菌用分装小管。 2 作普通琼脂斜面。 4、血液培养基（大管肉汤培养基) 成份：1 新鲜牛肉浸液1000毫升 2 PABA（对氨基苯甲酸〔相当于10mg/毫升〕) 1g% 1毫升 3 MgSO 4 [相当于0．493/100毫升] 49．3% 1毫升 4 枸椽酸钠0．3g 制法：1 将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。
2 取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。 用途：作血，骨髓培养用。 5、肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂) 成份：蛋白胨10克乳糖10克 氯化钠5克琼脂25（22)克 水1000毫升2%伊红溶液20毫升 0．5%美兰溶液20毫升 制法：将蛋白胨，氯化钠琼脂称好，加水1000毫升使溶解，校正PH7．4过滤，补足失水，加入2%伊红溶液20毫升，0．5%美兰溶液20毫升，（115℃高压20分钟)，冷却至50℃左右倾注平板，凝固后存冰箱备用。（高压以后方可再加乳糖) 用途：用作分离沙门氏，志贺氏菌属，也作菌群调查。 1 6、罗文斯坦培养基 成份：磷酸二氢钾2．4克硫酸镁0．24克 枸椽酸钠0．6克天门冬素3．6克 纯甘油（丙三醇) 12毫升水600毫升 马铃薯粉30克鸡蛋1000毫升（约3公斤) 2%孔雀绿水溶液20毫升 制法：1 除鸡蛋外（还有孔雀绿)。可将其它物品称好，放入大三角瓶包扎好，高压灭菌。 2 鸡蛋用75%酒精泡30分钟，灭菌法打蛋，倒入盛有玻璃珠的灭菌三角烧瓶内充分将鸡蛋摇散。 3 将各成份按比例配好，分装每管约5毫升。 4 间歇灭菌第一次90℃1小时，第二次80℃半小时，第三次80℃半小时（或放85℃烤箱内连续二次)。 质控标准： 1 灭菌试验合格。 2 接种结核杆菌要求两星期生长良好。 用途：作结核分枝杆菌培养用。
(完整版)稀释平板计数法
实验十一稀释平板计数法 实验目的 学习稀释平板菌落计数的基本原理和方法。 实验内容 用稀释平板菌落计数法对菌悬液进行计数。 实验原理 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2—3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。 平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水〔包括水源水〕等的含菌指数或污染程度的检测。 实验器材 酿酒酵母菌悬液 马铃薯培养基 1m1吸管，平皿，试管，试管架，恒温培养箱等。 实验步骤 1．无菌器材的准备 (1) 无菌培养皿：取培养皿9套，包扎、灭菌。 (2) 无菌移液管的准备：取1m1移液管，在后部管口处用铁丝塞入棉花少许（长约1~1.5cm ），以防将菌液吸出，同时也可避免将外面的微生物吹入。棉花要塞得松紧适宜吹时能通气但不使棉花滑下为准。然后将移液管尖端放在4~5cm宽的长纸条一端呈45o角折叠纸条包住尖端，用左手捏住管身，右手将吸管压紧，在桌面上向前滚动，以螺旋式包扎起来，上端剩余纸条折叠打结后干热灭菌。 (3) 无菌水：取6支试管，分别装入4.5m1蒸馏水，加棉塞，灭菌。 2．样品稀释液的制备 (1) 编号 取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6(稀释度)各3套。另取6支盛有4.5m1无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
细胞培养基及其配制方法
【DMEM专题】DMEM细胞培养基（二）配制方法及注意事项 配制方法： （1）在一个尽可能接近总体积的容器中加入比预期培养基总体积少5％的双蒸水。（2）在室温（20℃到30℃）的水中加入干粉培养基，轻轻搅拌，不要加热。（3）水洗包装袋的内部，转移全部的痕量干粉到容器内。 （4）加NaHCO3到培养基中。 （5）用双蒸水稀释到想要的体积，搅拌溶解。注意不要过分搅拌。 （6）通过缓慢搅拌加入1N NaOH 或1N HCL调节pH值，由于pH值在过滤时会上升0.1到0.3，因而调节pH值使它比最终想要的pH值低0.2到0.3。培养基在过滤前要保持密封。 配制培养基要注意以下问题： ●认真阅读说明书。说明书都注明干粉不包含的成分，常见的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等。这些成分有些是必须添加的，如NaHCO3、谷氨酰胺，有些根据实验需要决定。 ●配制是要保证充分溶解，NaHCO3、谷氨酰胺等物质都要等培养基完全溶解之后才能添加。 ●配制所用的水应是三蒸水，离子浓度很低。 ●所用器皿应严格消毒。 ●配制好的培养基应马上过滤，无菌保存于4度。 ●液体培养基主要是为了科研工作的方便而设计的培养基，它是一种灭菌后保证无菌的溶液，必要时可制成无内毒素等的溶液，可节省科研人员的工作量。
DMEM各种成分都有什么作用 一般的基础培养基包括四大类物质：无机盐、氨基酸、维生素、碳水化合物。 （1）无机盐：对调节细胞渗透压、某些酶的活性及溶液的酸碱度都是必须的。 （2）氨基酸：缬氨酸、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨酸、胱氨酸(L型)都是细胞用以合成蛋白质的必需氨基酸，不能由其他氨基酸或糖类转化合成。除此之外，还需要谷氨酰胺(glutamine)。谷氨酰胺具有特殊的作用，对细胞的培养特别重要，能促进各种氨基酸进入细胞膜；它所含的氮是核酸中嘌呤和嘧啶的来源，还是合成—磷酸腺苷、二磷酸腺甘和三磷酸腺苷的原料。细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，谷氨酰胺缺乏可导致细胞生长不良甚至死亡。在配制各种培养液中都应补加一定量的谷氨酰胺。值得注意的是：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，故4℃下放置1周可分解50%，使用中最好单独配制，置-20℃冰箱中保存，用前加入培养液中。 （3）维生素：是维持细胞生长的一种生物活性物质，在细胞中大多形成酶的辅基或辅酶，对细胞代谢有重大影响。 （4）碳水化合物：是细胞生命的能量来源，有的是合成蛋白质和核酸的成分。体外培养动物细胞时，几乎所有培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质。 （5）葡萄糖和谷胺酰胺：体外培养条件下，葡萄糖主要经糖酵解降解，产生过量的乳酸。减少乳酸生产最常用的方法是限制培养基中葡萄糖的含量，但葡萄糖含量过低可造成细胞营养供应不足，细胞生长抑制。在目前常用的培养基中，葡萄糖和谷胺酰胺是体外培养动物细胞的主要能源，其能量代谢通路与体内完全不同，表现为葡萄糖主要经糖酵解途径为细胞提供能量，谷胺酰胺大部分通过不完全氧化途径，另一小部分通过完全氧化为细胞供能。 （6）除了以上与细胞生长有关的物质以外，培养基中一般还要加入酚红（当溶液酸性时pH 小于6.8呈黄色；当溶液碱性时pH大于8.4呈红色），一种pH指示剂。
细胞培养基及其配制方法
细胞培养基及其配制方 法 Company Document number：WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT
D M E M(A)细胞培养基（粉末型）成分
●所用器皿应严格消毒。 ●配制好的培养基应马上过滤，无菌保存于4度。 ●液体培养基主要是为了科研工作的方便而设计的培养基，它是一种灭菌后保证 无菌的溶液，必要时可制成无内毒素等的溶液，可节省科研人员的工作量。 DMEM各种成分都有什么作用 一般的基础培养基包括四大类物质：无机盐、氨基酸、维生素、碳水化合物。 （1）无机盐：对调节细胞渗透压、某些酶的活性及溶液的酸碱度都是必须的。 （2）氨基酸：缬氨酸、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨酸、胱氨酸(L型)都是细胞用以合成蛋白质的必需氨基酸，不能由其他氨基酸或糖类转化合成。除此之外，还需要谷氨酰胺(glutamine)。谷氨酰胺具有特殊的作用，对细胞的培养特别重要，能促进各种氨基酸进入细胞膜；它所含的氮是核酸中嘌呤和嘧啶的来源，还是合成—磷酸腺苷、二磷酸腺甘和三磷酸腺苷的原料。细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，谷氨酰胺缺乏可导致细胞生长不良甚至死亡。在配制各种培养液中都应补加一定量的谷氨酰胺。值得注意的是：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，故4℃下放置1周可分解50%，使用中最好单独配制，置-20℃冰箱中保存，用前加入培养液中。 （3）维生素：是维持细胞生长的一种生物活性物质，在细胞中大多形成酶的辅基或辅酶，对细胞代谢有重大影响。 （4）碳水化合物：是细胞生命的能量来源，有的是合成蛋白质和核酸的成分。体外培养动物细胞时，几乎所有培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质。 （5）葡萄糖和谷胺酰胺：体外培养条件下，葡萄糖主要经糖酵解降解，产生过量的乳酸。减少乳酸生产最常用的方法是限制培养基中葡萄糖的含量，但葡萄糖含量过低可造
实验室常用培养基大全
表皮葡萄球菌 产气肠杆菌 鼠伤寒沙门氏菌 单核增生李斯特氏菌 大肠埃希氏菌 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 表面接触碟/表面接触皿 https://www.wendangku.net/doc/d47282184.html, 金黄色葡萄球菌 酿酒酵母菌 脑心浸出液肉汤(BHI) 品红亚硫酸钠液体培养基 MFC肉汤 CFU培养基基础 4-甲基伞形酮葡糖苷酸(MUG)培养基蛋白胨 胰蛋白胨 胰酪蛋白胨 酵母浸粉 大豆蛋白胨 酸水解酪蛋白 明胶蛋白胨 马铃薯浸粉 琼脂粉 琼脂粉 动物组织胃蛋白酶消化物 肉胃酶消化物 牛肉浸粉 牛肝浸粉 牛肝浸粉 牛心浸粉 多价蛋白胨(多聚蛋白胨) 月示蛋白胨 玉米浸出粉 一次性培养皿 表面接触碟 一次性培养皿（密理博浮游菌采样）表面接触碟/表面接触皿 https://www.wendangku.net/doc/d47282184.html, 金属玻璃培养皿（可重复使用） 金属玻璃表面接触碟
嗜热脂肪肝菌芽孢菌片（ATCC7953 枯草杆菌黑色变种芽孢菌片（ATCC9372）121度高压灭菌化学指示卡 132℃压力蒸汽灭菌指示卡 葡萄糖 氯化钠 L-半胱氨酸盐酸盐 氧化酶试剂 三磷酸腺苷二钠盐（ATP） 费尔休林（无吡啶） SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 SDS-PAGE电泳液 SDS-PAGE上样缓冲液5倍 考马斯亮蓝R-250染色套装 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 大肠埃希氏菌 大肠埃希氏菌 产气肠杆菌 乙型副伤寒沙门氏菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 表面接触碟/表面接触皿 https://www.wendangku.net/doc/d47282184.html, 黑曲霉 生孢梭菌 大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤) 大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤) 无菌大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉? 大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤) 大豆酪蛋白消化液培养基 大豆酪蛋白琼脂培养基 大豆酪蛋白琼脂培养基 无菌大豆酪蛋白琼脂培养基 卵磷脂-吐温80营养琼脂培养基基础 胰化大豆坚固绿琼脂(TSFA) 营养肉汤(NB) 营养琼脂(NA) 0.5%葡萄糖肉汤培养基 pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 三糖铁琼脂培养基(TSI) 三糖铁琼脂培养基 R2A琼脂
细菌平板计数法
操作步骤 l．编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6。(稀释度)各3套。另取6支盛有4.5mL无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。 2．稀释用lmL无菌吸管吸取lmL已充分混匀的大肠杆菌菌县液(待测样品)，精确地放0.5ml 至10-1的试管中，此即为10倍稀释。将多余的菌液放回原菌液中。将10-1试管置试管振荡器上振荡，使菌液充分混匀。另取一支lml吸管插入10- 1试管中来回吹吸菌悬液三次，进一步将菌体分散、混匀。吹吸菌液时不要太猛太快，吸时吸管伸人管底，吹时离开液面，以免将吸管中的过滤棉花浸湿或使试管内液体外溢。用此吸管吸取10-1菌液lmL，精确地放0.5mL至10-2试管中，此即为100倍稀释。……其余依次类推。放菌液时吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只能接触一个稀释度的菌悬液，否则稀释不精确，结果误差较大。 3.取样用三支1mL无菌吸管分别吸取10-4、10-5和10-6的稀释菌悬液各lmL，对号放入编好号的无菌平皿中，每个平皿放0.2mL。不要用lmL吸管每次只靠吸管尖部吸0.2mL稀释菌液放入平皿臼，这样容易加大同一稀释度几个重复平板间的操作误差。 4．倒平板．尽快向上述盛有不同稀释度菌液的平皿中倒入融化后冷却至45℃左右的牛肉膏蛋白胨培养基约15毫升/平皿，置水平位置迅速旋动平皿，使培养基与菌液混合均匀，而又不使培养基荡出平皿或溅到平皿盖上。由于细菌易吸附到玻璃器皿表面，所以菌液加入到培养皿后，应尽快倒入融化并于已冷却至45℃左右的培养基，立即摇匀，否则细菌将不易分散或长成的菌落连在一起，影响计数。待培养基凝固后，将平板倒置于37℃恒温培养箱中培养。 5．计数培养48h后，取出培养平板，算出同一稀释度三个平板上的菌落平均数，并按下列公式进行计算，每毫升中菌落形成单位(cfu)=同一稀释度三次重复的平均菌落数×稀释倍数×5。一般选择每个平板上长有30~300个菌落的稀释度计算每毫升的含菌量较为合适。同一稀释度的三个重复对照的菌落数不应相差很大，否则表示试验不精确。实际工作中同一稀释度重复对照平板不能少于三个，这样便于数据统计，减少误差。 由10-4、10-5、10-6三个稀释度计算出的每毫升菌液中菌落形成单位数也不应相差太大。平板菌落计数法，所选择倒平板的稀释度是很重要的。一般以三个连续稀释度中的第二个稀释度倒平板培养后所出现的平均菌落数在50个左右为好，否则要适当增加或减少稀释度加以调整。 平板菌落计数法的操作除上述倾注倒平板的方式以外，还可以用涂布平板的方式进行。二者操作基本相同，所不同的是后者先将牛肉膏蛋白胨培养基融化后倒平板，待凝固后编号，并于37℃左右的温箱中烘烤30min，或在超静工作台上适当吹干，然后用无菌吸管吸取稀释好的菌液对号接种于不同稀释度编号的平板上，并尽快用无菌玻璃涂棒将菌液在平板上涂布均匀，平放于实验台上20～30min，使菌液渗入培养基表层内，然后倒置37℃的恒温箱中培养24～48h。涂布平板用的菌悬液量一般以0.1ml较为适宜，如果过少菌液不易涂布开，过多则在涂布完后或在培养时菌液仍会在平板表面流动，不易形成单菌落。五、实验报告1．结果2．将培养后菌落计数结果填入下表2．思考题(1)为什么融化后的培养基要冷却至45℃左右才能倒平板? (2)要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键?为什么? (3)试比较平板菌落计数法和显微镜下直接计数法的优缺点及应用。(4)当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中在一起时，你认为问题出在哪里? (5)用倒平板法和涂布法计数，其平板上长出的菌落有何不同?为什么要培养较长时间(48h)后观察结果?
血琼脂培养基配制标准操作规程
血琼脂培养基配制标准操作规程 1．目的 规范血琼脂培养基配制标准操作规程，保证培养基质量。 2．原理 羊血或兔血等是细菌生长繁殖的良好营养物质。在45～50℃的基础培养基中加入血液可以完好保存血液中某些不耐热的生长因子，同时血细胞不被破坏。若将NaCl浓度提高到0.85%，可使血平皿在35℃培养18～24小时后色泽仍然新鲜。 3．用途 供一般病原菌的分离培养、溶血性鉴别及保存菌种用。 4．配方 特殊蛋白胨23g、淀粉1g，氯化钠5g、琼脂10g、无菌脱纤维羊血（或兔血）5%～10%，pH7.1～7.5。 5.操作步骤
将上述成分混合，溶于1000ml蒸馏水中，加热溶化，校正pH，121℃高压灭菌15分钟。冷却至50℃加入无菌血液，充分摇匀后倾注平板，待凝固后冷藏备用。血琼脂层厚4mm。 6.储存条件 2～8℃冰箱。 7.有效期 实验室自行规定，确保培养基质量。 8. 质量控制 8.1 质控频度每次新配制时做质控 8.2 质控方法及结果见表5-18. 表5-18 配制血琼脂培养基质量控制方法及结果 试验方法结果 无菌试验<100块抽检5%，>100块随机取10 块，35℃培养，观察有无细菌生长 化脓性链球菌ATCC19615，35℃，培 无细菌生长
生长试验 平行试 验 养18～24小时 肺炎链球菌ATCC6305，35℃，培养 18～24小时 金黄色葡萄球菌ATCC25923， 35℃，培养18～24小时 大肠埃希菌ATCC25922，35℃，培养 18～24小时 做质控时，取新旧批号的培养基同时 做 生长良好，β溶血 生长良好，a溶血 生长良好，β溶血 生长良好， 9.注意事项 倾注时温度不易过高，否则血细胞易被破坏而溶血；若 温度过低，琼脂易凝固。 参考文献 [1] 周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海： 上海科学技术出版社，2007
平板计数法
稀释平板计数法 实验目的 学习稀释平板菌落计数的基本原理和方法。 实验内容 用稀释平板菌落计数法对菌悬液进行计数。 实验原理 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2—3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。 平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水〔包括水源水〕等的含菌指数或污染程度的检测。 实验器材 酿酒酵母菌悬液 马铃薯培养基 1m1吸管，平皿，试管，试管架，恒温培养箱等。 实验步骤 1．无菌器材的准备 (1) 无菌培养皿：取培养皿9套，包扎、灭菌。 (2) 无菌移液管的准备：取1m1移液管，在后部管口处用铁丝塞入棉花少许（长约1~1.5cm ），以防将菌液吸出，同时也可避免将外面的微生物吹入。棉花要塞得松紧适宜吹时能通气但不使棉花滑下为准。然后将移液管尖端放在4~5cm宽的长纸条一端呈45o角折叠纸条包住尖端，用左手捏住管身，右手将吸管压紧，在桌面上向前滚动，以螺旋式包扎起来，上端剩余纸条折叠打结后干热灭菌。 (3) 无菌水：取6支试管，分别装入4.5m1蒸馏水，加棉塞，灭菌。 2．样品稀释液的制备 (1) 编号 取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6(稀释度)各3套。另取6支盛有4.5m1无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
培养基的配制方法
实验一培养基的配制 生科三班李林40608143 2008.9.16 周二上午 一.实验目的： 1.明确配制微生物培养基的原理； 2.掌握配制微生物通用培养基的一般方法和操作步骤； 3.掌握是湿热灭菌法的原理和操作。 二.实验原理： 膏蛋白胨培养基是一种天然培养基。牛肉膏是牛肉浸液的浓缩物，含有丰富的营养物质，不仅能为微生物提供碳源、氮源，还含有多种维生素。蛋白胨是酪蛋白、大豆蛋白或鱼粉等经过蛋白酶水解后，中间产物，含有胨和氨基酸等丰富的含氮素营养物，再加入的NaCl为细菌所需的无机盐，加入的自来水可提供微量元素。 配置好的培养基用湿热灭菌法进行灭菌。 三.材料和仪器： 1.试剂：牛肉膏，蛋白胨，氯化钠，1mol/L NaOH,1mol/L HCl 2.器皿：台秤，玻璃烧杯，搪瓷烧杯，三角瓶，量筒，沙漏，试管，玻棒等 3.其他：PH试纸，牛角匙，牛皮纸，棉花，沙绳，灭菌锅等。 四.实验步骤： 1.配方及配量：牛肉膏0.9g蛋白胨3g，氯化钠 1.5g，琼脂条 4.5g,水 300mL,PH7.2~7.4。 2.称取药品：按培养基配方及配量分别称取各药品，取少量水于烧杯中，将各 培养基成分（除琼脂）逐一加入水中待溶。 3.加热溶解：将搪瓷杯放到电热炉上，用文火加热，病不断搅拌，促使各药品 快速溶解，然后补充水分至所需培养基的量。 4.调节PH:初配好的牛肉膏蛋白胨，培养液是微酸性的，故需用1mol/L NaOH 调PH7.2~7.4。 5.加琼脂：向调好的培养基中加入琼脂条。 6.加棉塞：用8层纱布纸杯成通气塞，灭菌前将方形纱布盖在瓶口，将其中间 部位用手指塞入瓶口内，再将四角折叠成塞子状后加纸套包扎好，然后灭菌。 7.包扎：在棉塞外再包上一层牛皮纸，以防灭菌时冷凝水直接沾湿棉塞及存放 中防止尘埃等污染。 8.灭菌：将待灭菌的培养基放入加压灭菌锅内，于121℃灭菌20min. 五.实验结果： 按照实验方法配制的培养基透明但有些发黄，说明说有物质均完全溶解，基本符合实验要求，颜色有些发黄可能是因为加入牛肉膏，也可能是因为加入牛肉膏的时候所用火温较高，使牛肉膏粘底了，稍有烧糊或烧焦了，致使培养基较黄。一周以后观察, 配制的无菌牛肉膏蛋白胨固体培养基中,无菌落生成,说明配制的培养基符合要求. 六.思考题：配制牛肉膏蛋白胨斜面培养基有哪些操作步骤，哪几步易出差错?如何防止 答：配方及配量，称取药品，加热溶解，调PH，加琼脂，加棉塞，包扎，灭菌。易出差错的步骤： （1）称药品的牛角匙不要混用，称完药品应及时盖紧瓶盖，瓶盖切莫张冠李戴，
常用培养基的配制
常用培养基的配制 （一）营养琼脂培养基 【用途】供细菌总数测定、保存菌种、细菌纯化、一般细菌培养、血琼脂培养基基础之用。 【成分】牛肉膏 3g NaCl 5g 蛋白胨 10g 琼脂 20g 【pH值】7.2±0.2 【制法】上述成分称取38g加蒸馏水1000ml，经121.3℃ 30min高压灭菌备用。 （二）蛋白胨水培养基 【用途】供细菌培养、吲哚试验之用。 【成分】蛋白胨 10g 氯化钠 5g 【pH值】7.6 【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中，过滤，分装于试管，每管2～3ml，经121.3℃20min高压灭菌备用。 （三）半固体培养基 【用途】供观察细菌动力、菌种保存、H抗原位相变异试验等。 【成分】蛋白胨 10g 氯化钠 5g 琼脂 2.5～3g 【pH值】7.6 【制法】上述成分加入1000ml蒸馏水中，加热溶解，分装于试管，每管3～4ml，经121.3℃ 20min高压灭菌备用。 （四）营养肉汤培养基 【用途】供一般细菌培养、转种、复苏、增菌等，也可用于消毒效果的测定。 【成分】蛋白胨 10g 氯化钠 5g 牛肉粉（牛肉浸汁） 3g 【pH值】7.2±0.2 【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中，分装小试管，每管2～3ml，经121.3℃ 20min 高压灭菌备用。 （五）葡萄糖蛋白胨水培养基 【用途】供甲基红试验及V-P试验之用。 【成分】蛋白胨5g 葡萄糖5g K2HPO4 (K2HPO4·3H2O) 5g (0.65g) 【pH值】7.0～7.2 【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中，过滤，分装试管，每管2～3ml，经112.6 ℃ 20min高压灭菌备用。 （六）伊红美蓝培养基（EMB培养基）
培养基配制标准操作规程【新版】
培养基配制标准操作规程 1.0目的 本规程规范了微生物实验室培养基的配制操作规程。 2.0范围 本规程适用于微生物实验室检验用的所有培养基 3.0职责 微生物检验员对本标准的实施负责，品管部经理负责监督。 4.0内容 4.1培养基定义 指人工配制的生物营养物质，即用人工方法将多种物质按各种微生物生长繁殖的需要配成的一种混合营养物。通常指干粉培养基和配制好的琼脂、肉汤、稀释液等等。
4.2培养基制备前准备工作 制备培养基所用的玻璃器皿，如吸管、试管、三角瓶和平皿等，新的玻璃器皿(首次使用)和再次使用的玻璃器皿分别按各自批准的规程洗涤、干燥。 4.3培养基的制备 4.3.1检验人员必须依据培养基生产厂家的操作说明进行配制，并填写《培养基配制记录》， 配制记录上注明所用培养基的批号;盛装配制好的培养基的容器外应贴《培养基标 签》，标签应注明:名称、批号、配制人、配制日期、有效期至等信息。 4.3.2配制好的培养基依据说明书规定时间进行灭菌，避免微生物滋生。 4.3.3必要时，灭菌后的培养基在配制后必须进行pH值
的测定以确保符合药典及生产厂家 的规定。 4.3.4倒平板用培养基温度应控制在50度。 4.3. 5.培养基的制备和使用应由专人进行。 4.3.6.培养基的使用尽量做到现配现用，剩余的培养基应放在冰箱中保存。 4.4培养基的保存 4.4.1环境条件:应在洁净的普通冰箱内冷藏保存，温度控制在2-25度。否则，融化后常 因理化条件改变而不能再用。 4.4.2按时检查培养基的外观，如失水、沉淀、过期等异常情况应及时处理。
4.5培养基配制清单 5.0附件 《培养基配制记录》《灭菌记录》 6.0修改历史
培养基配制的基本过程
培养基配制的基本过程 1.配制溶液 向容器内加入所需水量的一部分，按照培养基的配方，称取各种原料，依次加入使其溶解，最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热过程所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。 配制固体培养基时，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至完全融化。并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦。 2.调节pH值 用pH试纸（或pH电位计、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH进行调节，直到调节到配方要求的pH值为止。 3.过滤 用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。 4.分装 已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基，须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则须将培养基分装于锥形瓶内。 分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。 装入试管的培养基量，视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时，每只15×150毫米的试管，约装3～4毫升（1/4～1/3试管高度），如制作深层培养基，每只20×220毫米的试管约装12～15毫升。每只锥形瓶装入的培养基，一般以其容积的一半为宜。 5.加棉塞 分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。制作棉塞时，要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握，就会形成1个长棒形的棉塞。棉塞作成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内，上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。 6.制作斜面培养基和平板培养基 培养基灭菌后，如制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行。 (1)制作斜面培养基。在实验台上放1支长0.5～1米左右的木条，厚度为1厘米左右。将试管头部枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基。 (2)制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入10毫升，以铺满皿底为度。铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，再5个培养皿一叠，倒置过来，平放在恒温箱里，24小时后检查，如培养基末长杂菌，即可用来培养微生物。
巧克力色血琼脂平板说明书
巧克力色血琼脂平板培养基使用说明书 【产品名称】 通用名称：巧克力色血琼脂平板培养基 英文名称：Chocolate Blood Agar Plate Medium 【包装规格】 Φ90㎜和Φ70㎜，5块／包。 【预期用途】 主要用于奈瑟氏菌(如脑膜炎球菌，淋病球菌)、流感嗜血杆菌等的增菌培养。 【检验原理】 培养基（Medium）是指由人工方法配制而成的，专供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存用的混合营养制品。培养基按用途分为基础培养基、增菌培养基、选择性培养基、鉴别培养基和厌氧培养基等，按原料来源分为天然培养基、半合成培养基和合成培养基。按形态分为液体培养基、流体培养基、半固体培养基和固体培养基等。 本产品是以人工的方法配制而成的，除基础培养基外另外还添加了脱纤维羊血，以增加营养性能，并根据具体的要求经过特殊处理使成巧克力色，补加嗜血杆菌生长所须的各种生长因子，以适应营养要求苛 刻的微生物的特殊营养要求。 【主要组成成份】 巧克力色血琼脂平板培养基由蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉、琼脂等培养基原料经配制、高压灭菌，加入动物血和添加液定量灌入一次性塑料培养基内而成。 【贮存条件及有效期】 2-8℃，避光保存，有效期3个月，用前复温。 【样本要求】 标本可以是液体也可以是固体，液体标本可以直接使用，固体标本需用适量无菌生理盐水溶解后，取溶液使用。根据浓度需要决定是否采用10倍稀释法进行稀释。 【检验方法】 用接种环或棉签以无菌方法取标本直接画线接种于培养基中，或无菌吸取0.1ml适当浓度的标本溶液用玻璃涂布棒均匀涂布于培养基中，置35~37℃温箱中培养。 【检验结果的解释】 流感嗜血杆菌菌落微小，无色、透明、光滑整齐、似露滴状，48小时后达1.5mm，从血液或脑脊液中分离到的菌落往往形成液状，菌落较大，老培养物菌落中心凹陷；淋球菌菌落较小，菌落呈灰白色。【检验方法的局限性】 正确的标本采集及良好的细菌划线分离技术是检出细菌的基础，所检出细菌要经镜检、生化鉴定来确认。 【注意事项】 1．该培养基仅用于体外诊断。 2．使用前必须检查培养基，若培养基有污染迹象或超过有效期不得使用。
平板计数法
平板菌落计数法 平板菌落计数法，是种统计物品含菌数的有效方法。方法如下：将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液涂布到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞；统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。 目录 一、菌落总数介绍： 二、检验方法 三、说明 一、菌落总数介绍： 二、检验方法 三、说明 展开 但是，由于待测样品往往不宜完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2～3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位（cfu ：colony-forming units），而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。 [1] 编辑本段一、菌落总数介绍： 菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。 菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。因此菌
落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。 菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。 编辑本段二、检验方法 菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。 基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。 国内外菌落总数测定方法基本一致，从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同，只是在某些具体要求方面稍有差别，如有的国家在样品稀释和倾注培养进，对吸管内液体的流速，稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。 检验方法参见： GB4789.2-94 《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验菌落总数测定》 SN0168-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品菌落计数》 编辑本段三、说明 （一）样品的处理和稀释： 1．操作方法：以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1：10的均匀稀释液。 固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min 的速度处理1min，制成1：10的均匀稀释液。 用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。 另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管。
血琼脂平板说明书
血琼脂基础培养基使用说明书 【产品名称】 通用名称：血琼脂基础培养基 英文名称：Blood Agar Base Medium 【包装规格】 Φ90㎜和Φ70㎜，5块／包。 【预期用途】 本产品用于营养需求较高的细菌培养和保存菌种用。 【检验原理】 培养基（Medium）是指由人工方法配制而成的，专供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存用的混合营养制品。培养基按用途分为基础培养基、增菌培养基、选择性培养基、鉴别培养基和厌氧培养基等，按原料来源分为天然培养基、半合成培养基和合成培养基。按形态分为液体培养基、流体培养基、半固体培养基和固体培养基等。 本产品是以人工的方法配制而成的，除基础培养基外另外还添加了脱纤维羊血，以增加营养性能，适 应有些细菌的特殊营养要求。 【主要组成成份】 血琼脂基础培养基由脱纤维羊血、蛋白胨、氯化钠、牛肉浸粉、琼脂粉和玫瑰红酸原料经配制、高压灭菌，至45℃加入动物血定量灌入一次性塑料培养基内而成。 【贮存条件及有效期】 2-8℃，避光保存，有效期3个月，用前复温。 【样本要求】 标本可以是液体也可以是固体，液体标本可以直接使用，固体标本需用适量无菌生理盐水溶解后，取溶液使用。根据浓度需要决定是否采用10倍稀释法进行稀释。 【检验方法】 用接种环或棉签以无菌方法取标本直接画线接种于培养基中，或无菌吸取0.1ml适当浓度的标本溶液用玻璃涂布棒均匀涂布于培养基中，置35~37℃温箱中培养。 【检验结果的解释】 大肠埃希氏菌菌落白色，有时带黄白色，不同菌株的溶血作用变化很大，其中有致病力的菌株产生β-溶血环；葡萄球菌圆形，橙色至白色，其中金黄色葡萄球菌产生β-溶血环，而表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌无溶血作用；链球菌菌落圆形突起，透明或半透明，其中草绿色链球菌产生α-溶血环，化脓性链球菌产生β-溶血环，不溶血性链球菌没有溶血作用；脑膜炎奈瑟氏菌菌落圆形，凸起，透明，带兰灰色，不溶血；肺炎球菌菌落圆形，扁平，透明或半透明，在菌落周围有草绿色狭窄溶血环；产气荚膜梭菌菌落灰白色，圆形，多数菌株有双层溶血环。肺炎链球菌和化脓性链球菌生长良好。 【检验方法的局限性】 正确的标本采集及良好的细菌划线分离技术是检出细菌的基础，所检出细菌要经镜检、生化鉴定来确