病原菌的分离培养和纯化
普通植物病理学
实验十七、病原菌得分离壇养与纯化一、目得要求
⑴了解分离与纯化微生物得基本原理及方法。
(2)掌握倒平板得方法与组织分离、稀释分离、平板划线分离得基本操作技术。
(3)掌握在平板、斜而及液体培养基上培养病原菌及观察其培养性状得方法。
二、基本原理植物病原菌得分离培养,就是植物病理实验室工作中得基本技能。为了获得某微生物得纯培养，一般就是根据该微生物对营养、酸碱度、氧气等条件要求不同，而供给它们适宜得生活条件，即让病原菌生活在适宜得培养基上，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其她菌生长得环境，从而得到纯菌株。植物病原真菌得分离方法主要有组织分离法与稀释分离法两种。最常用得方法就是组织分离法，而稀释分离法主要用于病组织上产生大量抱子得病原真菌得分离。病原细菌得分离方法以划线分离法为最常用，在有些情况下也采用稀释分离法。为了获得分离菌得纯培养，必须要进行分离菌得纯化，纯化得方法类似于分离工作中采用得稀释分离法或划线分离法。
三、材料、仪器与用具
1?材料(依当地情况进行选择，下列材料供参考)
⑴稻瘟病叶、病节、病穗颈(pyricu 1 a ria orycae)。
(2)玉米大斑病叶(exserohilum t urcicum)。
⑶玉米弯抱菌叶斑病叶(c u r V u lar i a 1 u n ata)。
(4 )玉米小斑病叶(bipo I aris may d i s L
(5)番茄灰霊病果(botryt i s cinefc a )。
(6 )黄瓜菌核病果(scicrotinia s c 1 erolio r um)。
(7)黄瓜细菌性角斑病叶(pseu d 0 mon as syringa e p https://www.wendangku.net/doc/da9367414.html,ch r y mans)o
(8)水稻白叶枯病叶(xanth omonascampe s tmspv、o r ycuc)。
⑼大豆细菌性斑点病叶(psc U domonas syringacpv. g ly c i n ca)。
(10)白菜软腐病叶(e r u dnia c a r otovo ra su b sp.c a rotovora)^ 2 ?培养基pda培养基;肉胃蛋白腺培养基;加寄主组织煎汁得培养基等。
3 ?仪器与用品超镜工作台、培养箱、培养皿、吸管、吸水纸、三角玻璃棒、剪刀、解剖刀、檢子、接种铲（针）、接种环（银）、70%酒精、0?1 %升汞、酒精灯、火柴、记号笔、橡皮筋套、可调式电炉、铝锅等0 0」％升汞溶液配制:升汞1 e浓盐酸2. 5 ml蒸慵水1000m 1 o
先将升汞溶于盐酸中?待充分溶解后，再加水稀释。升汞就是剧毒药物，在操作时应待别小心。
四、实验操作
（一）病原貞?菌得分离
i?组织分离法按照以下步骤进行:
（1）取火菌培养皿一个?置于湿纱布上，在皿盖上用玻璃铅笔注明分离日期、材料与分离人得
姓名。提示:为了保证无菌操作，应注意下而几点：工作前最好将所需得物品都放在超净工作台内，工作中临时去取容易带来杂菌;保证工作人员自身得洁净,工作前用肥皂洗手：无菌操作前还要用7 0%酒精擦拭双手;工作中，特別在使用无菌操作间时，呼吸要轻，不要说话。
（2）用无菌操作法向培养皿中加入25%乳酸2滴（可减少细菌污染），然后将融化而冷至6
Oc左右得pda培养基倒人培养皿中，每皿倒10—15m 1，轻轻摇动使之成平面.凝固后即成
平板培养基。提示:加入25%乳酸1~2滴，可基本保证平板上不出现污染细菌苗落0除乳酸外，在培养基中加入适当得抗菌素抑制细菌得生长，也就是常用得方法。加青霉素（20ug/ml）可以抑制g+细菌生长：加多黏霉素b（5?0 ug/ml）可以抑制g—细菌生长;加链霉素（40 ? g/ml威氯霉素
（50ug/ni 1 ）可以抑制大部分细菌得生长。除了氯每素可在灭菌前加入外,
其她抗菌素都应在灭菌后并冷却到45c左右（以手背触三角瓶感到逐,但尚可以忍耐为宜）'时加入。倒平板过程中只要遵循“稳、轻、快"要领，不必在火焰上方，一般很少污染。
（3）取真菌叶斑病得新鮮病叶（或其她分离材料）?选择典型得单个病斑，用剪刀或解剖刀从
病斑边缘（病健交界处）切取小块（海边长3-?4mm）病组织数块。提示:选择新想病得组织作为分离得材料，可以减少腐生菌混入得机会。腐生菌一般在发病很久而已经枯死或腐败得部分滋生,因此，一般斑点病害应在临近健全组织得部分分离。
(4)将病组织放人70%洒精中浸3-5 S后,按无菌操作法将病组织務人0.1%升汞液中分别
表面消毒0?5、1、2. 3. 5rain(也可使用其她表而消毒剂)，如植物组织柔嫩?则表而消毒时
间宜短;反之则可长些。然后放入火菌水中连续漂洗三次，除去残留得消毒剂。提示：先用70% 得洒精浸2. 3s就是为了消除寄主表而得气泡,减少表面张力,70%得酒精亦用于表而消毒，处
理得时间较短(一般数秒至lmin)o升汞溶液消毒得时间因材料而异，可自30S至30min不等, 一般情况下，需时间3, 5mm。
(5〉用无菌操作法将病组织移至平板培养基上，毎皿内放4??6块。提示:在将病组织小块移放
到平板表面之前，应将其在无菌吸水纸上吸去多余得水,以大大减少病组织附近出现细菌污染。
(6)将培养皿倒置放人2512左右恒温箱内培养0 —般3—4d后观察待分离菌生长结果。
(7)若病组织小块上均长出较为一致得菌落，则多半为要分离得病原菌。在无菌条件下，用
接种针(铲)自菌落边缘挑取小块移入斜而培养基上，在25C左右恒温箱内培养，数日后,观察菌落生
长情况，如无杂菌生长，即得该分离病菌纯菌种，便可置于冰箱中保存。提示:除根据菌落得一致性
初步确定长出得菌落就是否目标菌外，还要在显微镜下检査,进一步确企。如果就是对未知病原菌得
组织分离，则要将长出得蕾落分别转出，通过进一步得接种实验明确哪一种为其病原菌。在组织分离
工作中?如果植物材料体积较大且较软(如患灰霉病得番茄果实)，在分离过程中可宣接挖取内部虑病
组织移人平板培养基上■完成分离工作。
2?稀释分离法
(1)取火菌培养皿三个，平放在湿纱布上，编号,并注明日期、分离材料及分离人姓名。
(2)用灭菌吸管吸取灭菌水，在每一皿中分别注入0?5~l?Oml。
(3)用移植环薩一滴泡子悬浮液■与第一个培养皿中得灭菌水混合，再从第一个培养皿移三环
到第二个培养皿中，混合后再移三环到第三个培养皿中。
(4)将熔化开冷却到45~50c得培养基，分别倒在三个培养皿中(为防止细菌污染，也可以向
毎个培养皿中事先加入1?2滴25%乳酸)?摇匀，凝固，要使培养基与稀释得菌液充分混匀?提示:倒平板时得培养基温度一泄要掌握好，过热易将病原菌盪死而使分离失败,过冷则倒入培养皿中后难以形成平板?而成为起伏不平得表而,不利于分离。为大体估计培养基温度,可将盛培养基得器皿靠在人手背上，如果手背感到烫但尚可以忍耐，则大体为4 5?5 Oco
(5)将培养皿翻转后置恒温箱(251 3 )中培养，数日后观察菌落生长情况。(6)挑菌。将培
养后长出较为整齐一致得单个菌落分别挑取,接种到斜而培养基上，置25°C左右培养。待菌长出后，检査菌就是否单纯，若有其她菌混杂，就要再一次进行分离纯化,直到获得纯株培养。
(二)病原细菌得分离病原细菌得分离方法以稀释分离法与划线分离法为最常用。在进行分离之前,
首先应对病组织材料进行细菌学初步诊断?即经过镜检确认有喷菌现象以后?才对该病组织作分离工
作。稀释分离法就是彊经典得标准分离法，方法同上述真菌分离。除去上述稀释分离法以外，较为方
便得就是划线分离法:
(1)预先把熔化好得肉膏蛋白腺培养基倒在培养皿中，凝成平板后，翻转放在30c恒温箱中2-4h?使表面无水滴凝结。也可凝成平板后宜接使用。
(2)将病组织先用0」％升汞表而消毒0?5-2mim再用无菌水换洗3次后，放在火菌培养皿
中得灭菌水中，用灭菌玻棒研碎，并让组织碎块在水中浸泡2 0-60m i n.让细菌释放到火
菌水中0
(3)用灭菌得接种钢(接种环)薩取浸泡液在干燥得培养基平板表而划线，尽量不要把平板表
而划破。划过第一批线后得接种环应放在火焰上烧灼.冷却后直接在第一批划线得末端向另一方向划线。灭菌后再划第三次线。提示：划过第一批线后接种弭放在火焰上烧过这一步骤非常重要，这样做可以使第一批线与第二批线上得细菌数量相差很大。
(4)用玻璃铅笔在培养皿上写上分离材料、日期打分离者姓名后，翻转培养皿，放在26~28c
悄温箱中培养。1 -3d后观察有无细菌生长，在哪些地方有单菌落生长出来?其中得优势单菌
落应为待分离菌形成得。
(5)仔细挑取病原菌得单菌落，并移植到斜而培养基上。同时，再把单菌落用灭菌水稀释成悬浮
液作第二次划线分离，经培养后出现得菌落在形态特征都趋于一致，并与典型描述得特征相一致时，
即表明已获得纯培养。最好要经过连续三次单菌落得分离，才能确保纯化。
(三)真菌、细菌培养性状观察
1?真菌培养性状观察取已分离、纯化得某种真菌菌种?按前述稀释分离法中(1)-(5)步骤进行，待某培养皿中形成单个菌落后观察。记载以下内容:菌落颜色、菌丛密集及繁茂程度、就是否有色素分泌出来而渗透到培养基中、菌落生长速度快慢等。同时要记载培养基种类(成分及ph)与培养温度、光照条件。
2 ?细菌培养性状观察
（1）仿照上述真菌菌落形成步骤，观察记载以下内容:菌落颜色、菌落边缘形状、菌落表面就是
光亮还就是粗糙或有皱折、菌落隆起情况、就是否有色素分泌到培养基中，菌落生长速度快慢,就是
否有特殊气味形成等。同时要记载培养基种类（成分及P h）与培养温度、光照条件。
（2）用接种银（环）醮细菌菌种后，通过无菌操作在肉膏蛋白陈等斜而培养基表面从下向上划一
直线，过2~3d后长出得细菌群体称为菌苔，可仿照观察记载细菌菌落得记载内容，记载菌苔颜色、
边缘形状、表而就是光亮还就是粗糙有皱折、隆起情况、就是否有色素分泌到培养基中, 就是否有特
殊气味生成，生长速度快慢等-也要记载培养基种类（成分及ph）与培养温度、光照条件0
（3）用接种钳（环）蘸取细菌菌种后，通过无菌操作，将实接种在某种液体培养基中，数日后观察
记载培养基中就是否变混浊、就是否有色素、气体、沉淀生成?培养液表而就是否可生成菌膜等。也要
记载培养基种类（成分及ph）与培养温度、光照条件。
五、所需时间流程
1.病原真菌分离组织分离：切取病组织，表而消毒，无菌水洗移人平板：lho稀释分离:配泡
子悬液?倒平板i I培养7-1 0 d分离菌移人斜面30min培养7-1 Od检査斜而上分离菌产
砲30mm保存菌种
2?病原细菌分离划线分离:倒平板沾菌悬液划线.12稀释分离3.病原真菌、细菌菌落培养性状观察平板上形成单菌落l??3d观察迦些写报告4?病原细菌菌苔培养性状观察斜而上形成菌苔i?3d观察30min写报告
5?病原细菌液体培养性状观察接菌于液体培养基30m i n培养2-3d观察3 0 min写报告
六、实验作业
1、上交分离得病原真菌、细菌菌种。
2.写出病原真菌、细菌培养性状观察得实验报告。
七、思考题
1?如果要分离得病原真菌就是鞭毛菌中得腐德菌、疫瞪菌等应当如何进行才会获得更好得效
果？
2?在分离病原?貞?菌时，向平板培养基中加人乳酸为什么会大大减少细菌得污染?
3?如果要从土壤中分离某种病原菌，应当采取什么样得分离方法会更有效?
4.观察记载頁?菌及细菌得培养性状有何意义？5?怎样才能知道您获得得病原真菌、细菌得
菌种就是否就是纯培养?
附1常用得几种典型得病原菌分离方法
1 ?斑点病原菌得分离。从病斑部分切取每边3-5mn］得小块组织，在70%洒精中浸数秒钟后，移人0」％得升汞水溶液中处理3-5 r aim以灭菌水冲洗3次，移置培养皿得培养基中，然
2.维管束组织内病原菌得分离。从根茎维管束组织分离病菌，可先将寄主病部表而用70%酒
精擦賦消毒，将表皮组织用火菌得解剖刀削去，然后切取其中小块变色得维管束组织，用升汞或漂白
粉液消毒后，用灭菌水冲洗几次，移脊培养基而上。
3.根腐病病原菌得分离。根腐或基腐病得分离，由材料得大小决定。材料小得可仿照斑点病
得分离法,材料大得则可以用维管束组织内病原得分离法。
4?肉质组织中病原菌得分离。多肉得根、茎及果实等，可以采用维管朿组织内病菌分离法除去
表面组织，切取小块病组织分离。如有杂菌感染可采用“直接接种"法，待出现症状后,用此法再行分离。
5 ?种子内病原菌分离。将整个种子或者种子得一部分进行表而消毒（升汞或漂白粉），用灭菌水洗涤后，移置培养基上。
6?抱子分离法。能产生大量抱子得病菌如青霉素、链格泡等，则可配制成泡子悬浮液以稀释法
或划线法分离之。
7 ?土壤带菌分离法。为了研究一些真菌在上壤中存活与分布得情形，从有病得土壤中分离它们就是必要得。分离方法就是将上壤取出少许，配制成悬浮液，然后用稀释法或划线法分离。
常见病原菌采样分离过程
金黄色葡萄球菌采样分离过程 1、样本采集及初步分离 （1）奶样的采集： 采集有乳房炎和隐形乳房炎症状较明显的奶牛，消毒挤奶人手、奶牛乳头，弃2-3把乳，以乳样收集管无菌收集每个乳区乳样10-30mL，编好编号，4个乳区按：左前LF、左后LH、右前RF、右后RH编号，采集后尽快返回实验室，如不能尽快返回，应放在低温环境中带回。 （2）乳房皮肤拭子 用0.5mL肉汤润湿的消毒棉球拭子从乳房皮肤檫拭到乳头顶端，如果乳房土较多的话先檫掉土。拭子放入5mL离心管中，再放入冰盒中，迅速带回实验室处理。 （3）鼻腔拭子 用消毒棉球拭子插入动物鼻腔中，取出后放到盛有0.5mL肉汤的5mL离心管中，放入冰盒中，迅速带回实验室处理。 菌种的初步分离 首次分离时，用接种环蘸取样品在科玛嘉金黄色葡萄球菌显色平板上涂布接种，37℃，16-18小时培养后，从显色平板上挑取红色的单菌落，用脑心浸液（BHI）肉汤35℃培养18小时左右。 需要注意的是金葡菌初次分离时，接种显色培养基后培养时间最好不超过18h进行观察，因为超过24h后所有的葡萄球菌属细菌皆会导致显色培养基变色，进而出现假阳性。 2、菌种的保存 2mL灭菌离心管中加入400μL新鲜菌液+200μL60%灭菌甘油，-80 ℃（长期）或-20 ℃（临时）冻存。 3、菌种的复苏 如需再次纯化，或进行进一步实验，可将甘油保种的菌液在显色平板或哥伦比亚血琼脂平板上划线培养，或者将保种的菌液直接接入液体培养基培养。 肠球菌采样分离过程 1、样本采集及初步分离 （1）肛门拭子 以灭菌长棉签采集猪肛门拭子或蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入肛门4-5厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。 （2）泄殖腔拭子 以灭菌短棉签采集鸡泄殖腔拭子或采集一段盲肠后蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入泄殖腔2-3厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。 首次分离时，将样品在6.5%NaCl营养肉汤中，45℃，18-24小时预增菌进行选择性培养后，将上述培养物以划线方式接种在肠球菌选择性培养基（叠氮钠-结晶紫-七叶苷培养基，BEA）上，37℃，培养18-24小时，从选择性培养基上挑取灰色，半透明，1-2mm大小的单菌落，用脑心浸液（BHI）肉汤37℃培养18小时左右。 2、菌种的保存 2mL灭菌离心管中加入400μL新鲜菌液+200μL60%灭菌甘油，-80 ℃（长期）或-20 ℃（临时）冻存。 3、菌种的复苏 如需再次纯化，或进行进一步实验，可将甘油保种的菌液在BEA琼脂平板上划线培养，或者将保种的菌液直接接入液体培养基培养。 需要注意的是由于BEA琼脂颜色的变化导致假阳性的发生，因此，可以将肠球菌疑似菌株在BEA琼脂上进行二次筛选，提高分离准确率。
常见物质的分离、提纯和鉴别方法总结
常见物质的分离、提纯和鉴别方法总结 一、物质的分离与提纯方法 1.混合物的物理分离方法 易溶物与难溶物分开漏斗、烧杯碰；②沉淀要洗涤； ③定量实验要“无损” 在互不相溶的溶 剂里，溶解度的不同，把溶质分离出来分液漏斗 ①先查漏；②对萃 取剂的要求；③使 漏斗内外 通;④上层 上口倒出 分离互不相溶液体分液漏斗2.混合物的化学分离法
二、物质的检验 物质的检验通常有鉴定、鉴别和推断三类，它们的共同点是：依据物质的特殊性质和特征反应，选择适当的试剂和方法，准确观察反应中的明显现象，如颜色的变化、沉淀的生成和溶解、气体的产生和气味、火焰的颜色等，进行判断、推理。 1.常见气体的检验 有水。不是只有氢气才产生爆鸣声；可点燃的气体不一定是氢气 可使带火星的木条复燃 黄绿色，能使湿润的碘化钾淀粉试纸变蓝(O 3.NO 2 也能使湿润的碘化钾淀粉试 无色有刺激性气味的气体。在潮湿的空气中形成白雾，能使湿润的蓝色石蓝试纸变红；用蘸有浓氨水的玻璃棒靠近时冒白烟；将气体通入 有白色沉淀生成。 无色有刺激性气味的气体。能使品红溶液褪色，加热后又显红色。能使酸性高锰酸钾溶液褪色。
2.几种重要阳离子的检验 (l)H+能使紫色石蕊试液或橙色的甲基橙试液变为红色。 (2)Na+、K+用焰色反应来检验时，它们的火焰分别呈黄色、浅紫色(通过钴玻片)。 (3)Ba2+能使稀硫酸或可溶性硫酸盐溶液产生白色BaSO 4 沉淀，且沉淀不溶于稀硝酸。 (4)Mg2+能与NaOH溶液反应生成白色Mg(OH) 2沉淀，该沉淀能溶于NH 4 Cl溶液。 (5)Al3+能与适量的NaOH溶液反应生成白色Al(OH) 3 絮状沉淀，该沉淀能溶于盐酸或过量的NaOH溶液。 (6)Ag+能与稀盐酸或可溶性盐酸盐反应，生成白色AgCl沉淀，不溶于稀 HNO 3 ，但 溶于氨水，生成［Ag(NH 3) 2 ］+。 (7)NH 4 +铵盐(或浓溶液)与NaOH浓溶液反应，并加热，放出使湿润的红色石蓝试纸 变蓝的有刺激性气味NH 3 气体。 (8)Fe2+能与少量NaOH溶液反应，先生成白色Fe(OH) 2 沉淀，迅速变成灰绿色，最 后变成红褐色Fe(OH) 3 沉淀。或向亚铁盐的溶液里加入KSCN溶液，不显红色，加入少量新 制的氯水后，立即显红色。2Fe2++Cl 2 ＝2Fe3++2Cl－ (9)Fe3+能与 KSCN溶液反应，变成血红色 Fe(SCN) 3 溶液，能与 NaOH溶液反应， 生成红褐色Fe(OH) 3 沉淀。 (10)Cu2+蓝色水溶液(浓的CuCl 2 溶液显绿色)，能与NaOH溶液反应，生成蓝色的 Cu(OH) 2 沉淀，加热后可转变为黑色的 CuO沉淀。含Cu2+溶液能与Fe、Zn片等反应，在金属片上有红色的铜生成。 3.几种重要的阴离子的检验 (1)OH－能使无色酚酞、紫色石蕊、橙色的甲基橙等指示剂分别变为红色、蓝色、黄色。 (2)Cl－能与硝酸银反应，生成白色的AgCl沉淀，沉淀不溶于稀硝酸，能溶于氨水， 生成[Ag(NH 3) 2 ]+。 (3)Br－能与硝酸银反应，生成淡黄色AgBr沉淀，不溶于稀硝酸。 (4)I－能与硝酸银反应，生成黄色AgI沉淀，不溶于稀硝酸；也能与氯水反应，生成I 2 ，使淀粉溶液变蓝。 (5)SO 42－能与含Ba2+溶液反应，生成白色BaSO 4 沉淀，不溶于硝酸。 (6)SO 32－浓溶液能与强酸反应，产生无色有刺激性气味的SO 2 气体，该气体能使品红 溶液褪色。能与BaCl 2溶液反应，生成白色BaSO 3 沉淀，该沉淀溶于盐酸，生成无色有刺激 性气味的SO 2 气体。
有机物分离和提纯的常用方法(实用)
有机物分离和提纯的常用方法 分离和提纯有机物的一般原则是：根据混合物中各成分的化学性质和物理性质的差异进行化学和物理处理，以达到处理和提纯的目的，其中化学处理往往是为物理处理作准备，最后均要用物理方法进行分离和提纯。 方法和操作简述如下： 1. 分液法��常用于两种均不溶于水或一种溶于水，而另一种不溶于水的有机物的分离和提纯。步骤如下： 分液前所加试剂必须与其中一种有机物反应生成溶于水的物质或溶解其中一种有机物，使其分层。如分离溴乙烷与乙醇（一种溶于水，另一种不溶于水）： 又如分离苯和苯酚： 2. 蒸馏法��适用于均溶于水或均不溶于水的几种液态有机混合物的分离和提纯。步骤为： 蒸馏前所加化学试剂必须与其中部分有机物反应生成难挥发的化合物，且本身也难挥发。如分离乙酸和乙醇（均溶于水）：
3. 洗气法��适用于气体混合物的分离提纯。步骤为： 例如： 此外，蛋白质的提纯和分离，用渗析法；肥皂与甘油的分离，用盐析法。 有机物分离和提纯的常用方法 1，洗气 2，萃取分液溴苯（Br2），硝基苯（NO2），苯（苯酚），乙酸乙酯（乙酸） 3， a，制无水酒精：加新制生石灰蒸馏 b，酒精（羧酸）加新制生石灰（或NaOH固体）蒸馏c，乙醚中混有乙醇：加Na，蒸馏 d，液态烃：分馏 4，渗析 a，蛋白质中含有Na2SO4 b，淀粉中KI 5，升华奈（NaCl） 鉴别有机物的常用试剂 所谓鉴别,就是根据给定的两种或两种以上的被检物质的性质,用物理方法或化学方法,通过必要的化学实验,根据产生的不同现象,把它们一一区别开来.有机物的鉴别主要是利用官能团的特征反应进行鉴别.鉴别有机物常用的试剂及特征反应有以下几种: 1. 水 适用于不溶于水,且密度不同的有机物的鉴别.例如:苯与硝基苯. 2. 溴水 (1)与分子结构中含有C=C键或键的有机物发生加成反应而褪色.例如:烯烃,炔烃和二烯烃等. (2)与含有醛基的物质发生氧化还原反应而褪色.例如:醛类,甲酸. (3)与苯酚发生取代反应而褪色,且生成白色沉淀. 3. 酸性溶液 (1)与分子结构中含有C=C键或键的不饱和有机物发生氧化还原反应而褪色.例如:烯烃,炔烃和二烯烃等. (2)苯的同系物的侧链被氧化而褪色.例如:甲苯,二甲苯等. (3)与含有羟基,醛基的物质发生氧化还原反应而使褪色.例如:醇类,醛类,单糖等. 4. 银氨溶液(托伦试剂) 与含有醛基的物质水浴加热发生银镜反应.例如:醛类,甲酸,甲酸酯和葡萄糖等. 5. 新制悬浊液(费林试剂) (1)与较强酸性的有机酸反应,混合液澄清.例如:甲酸,乙酸等. (2)与多元醇生成绛蓝色溶液.如丙三醇. (3)与含有醛基的物质混合加热,产生砖红色沉淀.例如:醛类,甲酸,甲酸酯和葡萄糖等. 6. 金属钠 与含有羟基的物质发生置换反应产生无色气体.例如:醇类,酸类等. 7. 溶液 与苯酚反应生成紫色溶液. 8. 碘水 遇到淀粉生成蓝色溶液. 9. 溶液 与酸性较强的羧酸反应产生气体.如:乙酸和苯甲酸等.
最新物质的分离与提纯知识总结
高考化学实验专题复习(二) 常见物质的分离、提纯和鉴别 1．常用的物理方法——根据物质的物理性质上差异来分离。 混合物的物理分离方法 i、蒸发和结晶蒸发是将溶液浓缩、溶剂气化或溶质以晶体析出的方法。结晶是溶质从溶液中析出晶体的过程，可以用来分离和提纯几种可溶性固体的混合物（原理是根据混合物中各成分在某种溶剂里的溶解度的不同，通过蒸发减少溶剂或降低温度使溶解度变小，从而使晶体析出）。加热蒸发皿使溶液蒸发时，要用玻璃棒不断搅动（防止局部温度过高，造成液滴飞溅）。当蒸发皿中出现较多的固体时，停止加热，如用结晶的方法分离NaCl和KNO3。 ii、蒸馏蒸馏是提纯或分离沸点不同的液体混合物的方法。用蒸馏原理进行多种混合液体的分离，叫分馏。 操作时要注意：①在蒸馏烧瓶中放少量碎瓷片，防止液体暴沸。 ②温度计水银球的位置应与支管底口下缘位于同一水平线上。 ③蒸馏烧瓶中所盛放液体不能超过其容积的2/3，也不能少于l/3。 ④冷凝管中冷却水从下口进，从上口出。 ⑤加热温度不能超过混合物中沸点最高物质的沸点，例如用分馏的方法进行石油的分馏。 iii、分液和萃取分液是把两种互不相溶、密度也不相同的液体分离开的方法。萃取是利用溶质在互不相溶的溶剂里的溶解度不同，用一种溶剂把溶质从它与另一种溶剂所组成的溶液中提取出来的方法。选择的萃取剂应符合下列要求：和原溶液中的溶剂互不相溶；对溶质的溶解度要远大于原溶剂，并且溶剂易挥发。 在萃取过程中要注意：①将要萃取的溶液和萃取溶剂依次从上口倒入分液漏斗，其量不能超过漏斗容积的2/3，塞好塞子进行振荡。
②振荡时右手捏住漏斗上口的颈部，并用食指根部压紧塞子，以左手握住旋塞，同时用手指控制活塞，将漏斗倒转过来用力振荡。 ③然后将分液漏斗静置，待液体分层后进行分液，分液时下层液体从漏斗口放出，上层液体从上口倒出。例如用四氯化碳萃取溴水里的溴。 iv、升华升华是指固态物质吸热后不经过液态直接变成气态的过程。利用某些物质具有升华的特性，将这种物质和其它受热不升华的物质分离开。如分离I2和SiO2，加热使碘升华。 v、过滤过滤是除去溶液里混有不溶于溶剂的杂质的方法。 过滤时应注意：①一贴：将滤纸折叠好放入漏斗，加少量蒸馏水润湿，使滤纸紧贴漏斗内壁。 ②二低：滤纸边缘应略低于漏斗边缘，加入漏斗中液体的液面应略低于滤纸的边缘。 ③三靠：向漏斗中倾倒液体时，烧杯的夹嘴应与玻璃棒接触；玻璃棒的底端应和过滤器有三层滤纸处轻轻接触；漏斗颈末端应与接受器的内壁接触。如用过滤法除粗盐中少量的泥沙。 ①常见气体的检验 （l）H+能使紫色石蕊试液或橙色的甲基橙试液变为红色。 （2）Na+、K+用焰色反应来检验时，它们的火焰分别呈黄色、浅紫色（通过钴玻片）。
植物病原菌分离方法
病原菌分离方法 一、实验原理： 植物患病组织内的真丝菌丝体，如果给予适宜的环境条件，除了个别种类外，一般都能恢复生长和繁殖。植物病原菌的分离就是指通过人工培养，重染病植物组织中将病原真菌与其他杂菌相分开并从寄主植物中分离出来，再将分离得到的病原菌于适宜环境内纯化，这个过程总称植物病原的分离培养。 二、实验用具： 酒精灯、手术剪、镊子、75%酒精、3%~5%次氯酸钠、灭菌水、培养皿、封口膜、乳酸等 三、实验前的准备工作： 1、煮培养基（PDA）：马铃薯200g,葡萄糖20g，琼脂粉(AGAR)20g（10:1:1）水1000ml （1）将去皮称量好的马铃薯切片后加水煮沸15~20min（水可以适量多加200ml 左右，因为在煮的过程中会蒸发一些），待土豆煮软即可。 （2）三层纱布滤去马铃薯后将过滤的水倒入洗净的锅中，加琼脂粉搅拌充分后再加热煮沸，小火使其充分融化。 （3）加入葡萄糖并不断搅拌，待其完全融化后双层纱布过滤，定容到1000ml，分装到500ml的玻璃瓶内，每个玻璃瓶最多装300ml，121℃湿热灭菌 30min。 2、培养皿干热灭菌170℃1h;蒸馏水、枪头等湿热灭菌121℃30min。 四、实验步骤： 1、用75%酒精擦拭超净工作台，所有器具用紫外灯灭菌30min,分离室要保持清洁。 2、取样，病斑大小约20个（含病缘线） 3、分装培养基：（1）融PDA，松盖在微波炉中加热约3min（看量多少而定） （2）待冷却至50℃后在超净工作台指示灯显绿灯时分装 (3) 分装时滴入一管乳酸约20滴（每10ml培养基中加3滴乳酸） （4）左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基 约15m1(300ml一瓶的培养基倒20多个平板)，加盖后轻轻摇动培 养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝
实验室常用实验方法
总RNA的提取（Trizol法提取） 在收集到生物材料之后，最好能即刻进行RNA制备工作。若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase的作用。 1.提取组织RNA时，每50～100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解；提取细胞RNA时，先离心沉 淀细胞，每5-10 ╳106个细胞加1ml Trizol后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞； 2.将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在室温15~30C下放置5分钟； 3.在上述EP管中，按照每1ml TRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿，盖上EP管盖子，在手中用力震荡 15秒，在室温下（15℃～30℃）放置2～3分钟后，12000g（2℃～8℃）离心15分钟； 4.取上层水相置于新EP管中,按照每1ml TRIZOL加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇，在室温下（15℃～30℃） 放置10分钟,12000g（2℃～8℃）离心10分钟； 5.弃上清，按照每1ml TRIZOL加1ml 75%乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g（2℃～8℃）离心5分钟， 弃上清； 6.让沉淀的RNA在室温下自然干燥； 7.用Rnase-free water 溶解RNA沉淀。 PCR 实验室常用DNA聚合酶有三种：TaKaRa Taq TM，TaKaRa E X Taq TM和Pyrobest TM DNA Polymerase。TaKaRa Taq TM 是一般的DNA聚合酶，保真性较差，但价钱便宜，一般用于基因表达的检测等。TaKaRa E X Taq TM是具有Proof reading活性的耐热性DNA聚合酶，具有一定的保真性，而且其扩增得到的PCR产物3’端附有一个“A”碱基，如果希望直接将产物克隆到T-vector可以用此酶。Pyrobest TM DNA Polymerase也是具有Proof reading 活性的耐热性DNA聚合酶，其特点是保真性极高，扩增得到的PCR产物为平滑末端。如果进行基因的扩增请使用此酶。 1.按下列组成在PCR反应管中调制反应液： TaKaRa Taq TM或TaKaRa E X Taq TM的配方
实验室常用器材使用方法及注意事项
实验室常用器材使用方法及注意事项
实验室常见仪器使用方法及注意事项 一、常见的仪器 （一）初中化学实验常见仪器 反应容器可直接受热的：试管、蒸发皿、燃烧匙、坩埚等能间接受热的：烧杯、烧瓶、锥形瓶（加热时，需加石棉网） 常存放药品的仪器：广口瓶（固体）、细口瓶（液体）、滴瓶 （少量液体）、集气瓶（气体） 用加热仪器：酒精灯 计量仪器：托盘天平（称固体质量）、量筒（量液体体积） 仪分离仪器：漏斗 取用仪器：药匙（粉末或小晶粒状）、镊子（块状或较大颗粒）、胶头滴管（少量液体） 器夹持仪器：试管夹、铁架台（带铁夹、铁圈）、坩埚钳其它仪器：长颈漏斗、石棉网、玻璃棒、试管刷、水槽 不能加热：量筒、集气瓶、漏斗、温度计、滴瓶、表面皿、广口瓶、细口瓶等 1、试管 （1）、用途： a、在常温或加热时，用作少量试剂的反应容器。 b、溶解少量固体。 c、收集少量气体的容器 d、用于装置成小型气体的发生
器。 （2）、注意事项： a、加热时外壁必须干燥，不能骤热骤冷，一般要先均匀受热，然后才能集中受热， 防止试管受热不均而破裂。 b、加热时，试管要先用铁夹夹持固定在铁架台上（短时间加热也可用试管夹夹持）。 试管夹应夹在的中上部（或铁夹应夹在离试管口的1/3处）。c、加热固体时，试管口要略向下倾斜，且未冷前试管不能直立，避免管口冷凝水倒流 使试管炸裂。 d、加热液体时，盛液量一般不超过试管容积的1/3（防止液体受热溢出），使试管与桌面 约成45°的角度（增大受热面积，防止暴沸），管口不能对着自己或别人（防止液体喷出伤人）。反应时试管内的液体不超过试管容积的1/2。 2、烧杯用途：①溶解固体物质、配制溶液，以及溶液的稀释、浓缩 ②也可用做较大量的物质间的反应 注意事项：受热时外壁要干燥，并放在石棉网上使其受热均匀（防止受热不均使烧杯炸裂）， 加液量一般不超过容积的1/3（防止加热沸腾使液体外溢）。
物质分离提纯方法总结
物质分离提纯方法总结 导读：分离提纯是指将混合物中的杂质分离出来以此提高其纯度。分离提纯作为一种重要的化学方法，为大家分享了物质分离提纯方法，一起来看看吧！ 一、结晶和重结晶 溶质从溶液中析出的过程（即晶体在溶液中形成的过程）称为结晶。而重结晶是指将晶体溶于溶剂（或熔融）以后，又重新从溶液（或熔体）中结晶的过程，又称再结晶。 重结晶主要针对固态晶体物质的分离提纯，效果与溶剂选择大有关系。溶剂最好满足以下任一条件： （1）、对主要化合物是可溶性的，对杂质是微溶或不溶的溶剂。滤去杂质后，将溶液浓缩、冷却结晶，即得较纯的物质。 （2）、物质的溶解度在该溶剂中受温度影响较为显著。 中学阶段最常见的实例是KNO3和NaCl的混合物。对于该混合物的分离，主要是利用它们在同一种溶剂中的溶解度随温度的变化差别很大。则可在较高温度下将混合物溶液蒸发、浓缩，首先析出的是溶解度升高不大的NaCl晶体，除去NaCl以后的母液再浓缩和冷却后，可得较纯KNO3。另一个实际例子就是选修5第一章提到的苯甲酸的重结晶实验。重结晶往往需要进行多次，才能获得较好的纯化效果。 二、蒸馏法 蒸馏是利用混合液体或液-固体系中各组分沸点不同，使低沸点
组分蒸发，再冷凝以分离整个组分的操作过程，是蒸发和冷凝两种单元操作的联合。与其它的分离手段，它的优点在于不需使用系统组分以外的其它溶剂,从而保证不会引入新的杂质。蒸馏是分离和提纯液态化合物常用的方法之一，是重要的基本操作。但蒸馏主要针对组分沸点相差大于30℃以上时，才有理想的分离效果。对于组分沸点相差不大的混合体系则采用分馏。而分馏装置由于要使用分馏柱，高中并不常见，故高中实际教学中很少提及。一个变通的思路，是“固定组分蒸馏法”。比如，乙醇-水混合物，单纯用蒸馏分离效果很不理想，可以先加入生石灰与水反应，将水“固定”住，然后蒸馏，可以得到较纯的乙醇。 三、萃取法 萃取是利用溶质在互不相溶的溶剂里溶解度的不同，用一种溶剂把溶质从另一溶剂所组成的溶液里提取出来的操作方法。萃取分离物质时，必须用分液漏斗。萃取的`关键是找到一个合适的萃取剂，被萃取的物质在两个溶剂中的溶解度差距越大，则萃取的效果就越好。萃取法在化工制药等领域属于常用手段，但高中阶段常见的是利用有机溶剂萃取水溶液中的物质，比如利用CCl4萃取碘水中的碘。萃取完得到的CCl4-I2混合体系，可以采用蒸馏的方法进行分离，从而得到较纯的碘单质。 四、升华法 某些物质固态时就有较高的蒸气压，因此受热后不经熔化就可直
植物病原菌分离方法
第四章植物病原菌分 离与纯化 植物病原菌 一、植物病原菌分离流程 二、分离的准备 ?分离的准备工作 无菌室操作前保持清洁无菌 接种工作准备 培养基的准备 ?分离材料选择 以收获的材料从病健交界处采样 果实腐烂从开始腐烂处分离 根腐和枯萎层可能从离土较远处分离
有些枯萎如野火病被固定在局部，从病斑边缘分不到等 有些材料污染严重时可先接种再分离：即将病组织接种到健康材料等 发病后分离 ?组织表面消毒 ⑴升汞：1‰ ◆升汞1g HCl(浓)25ml 水1000ml ◆升汞先溶于盐酸中，加水后稀释，也 可用NaCl 5g/L 代替盐酸，但易沉淀 ◆作用：盐酸，NaCl增加溶解度，HCl 能增强杀菌能力。 ◆处理时间：30’S-30min不等，常3 －5min；所需时间因材料不同而异， 消毒后灭菌水3－5次 附在组织表皮的气泡，含使消毒剂不能与寄生表面直接通气影响消毒 效果，除气泡抽气、70％酒精浸2 －3秒
⑵漂白粉 ◆常用表面消毒剂适用于病组织表面消 毒，也可处理种子 ◆成分：漂白粉10g，水140ml，过滤后使 用。 ◆最好现配现用，放久失效，有效成分 CaClO次氯酸钙 ◆好的消毒液易使有色纸褪色，且产生氯 气有强烈臭味。 ◆一般3－5min，时间长短因材料不同而 不同。处理种子5－10min，长的可达20 －30min。 优点：杀菌能力强，具有挥发性，不会遗留在组织上影响分离结果，其杀菌能力小于升汞。 （3）酒精：70％，浸很短时间（几秒到1min）灭菌水洗。 ◆较大的材料在酒精中浸或棉花 擦，然后在火焰烧去。 ◆幼嫩的病组织，表面用药剂消毒 时可能会同时杀死其中的病原真
实验室常用标准
1.GB21549-2008实验室玻璃仪器玻璃烧器的安全要求； 2.GB/T21784.2-2008实验室玻璃器皿通用型密度计第2部分：试验方法和使用； 3.GB/T21298-2007实验室玻璃仪器试管； 4.GB/T21297-2007实验室玻璃仪器互换锥形磨砂接头； 5.GB/T11414-2007实验室玻璃仪器瓶； 6.GB/T12804-2011实验室玻璃仪器量筒； 7.GB/T12805-2011实验室玻璃仪器滴定管； 8.GB/T12806-2011实验室玻璃仪器单标线容量瓶； 9.GB/T28211-2011实验室玻璃仪器过滤漏斗； 10.GB/T28212-2011实验室玻璃仪器冷凝管； 11.GB/T28213-2011实验室玻璃仪器培养皿； 12.GB/T22362-2008实验室玻璃仪器烧瓶； 13.GB/T22067-2008实验室玻璃仪器广口烧瓶； 14.GB/T11165-2005实验室pH计； 15.GB/T30431-2013实验室气相色谱仪； 16.GB4793.7-2008测量、控制和实验室用电气设备的安全要求第7部分：实验室用离心机的特殊要求； 17.GB12803-1991实验室玻璃仪器：量杯； 18.GB12807-1991实验室玻璃仪器：分度吸量管； 19.GB12808-1991实验室玻璃仪器：单标线吸量管； 20.GB21549-2008实验室玻璃仪器：玻璃烧器的安全要求； 21.GBT11414-2007实验室玻璃仪器瓶；
22.GBT12804-2011实验室玻璃仪器：量筒； 23.GBT12805-2011实验室玻璃仪器：滴定管； 24.GBT12806-2011实验室玻璃仪器：单标线容量瓶； 25.GB/T12807-1991实验室玻璃仪器：分度吸量管； 26GB/T12808-1991 实验室玻璃仪器：单标线吸量管； 27.GBT12809-1991实验室玻璃仪器：玻璃量器的设计和结构原则； 28.GBT12810-1991实验室玻璃仪器：玻璃量器的容量校准和使用方法； 29.GBT14149-1993实验室玻璃仪器：互换球形磨砂接头； 30.GBT15723-1995实验室玻璃仪器：干燥器； 31.GBT15724-2008实验室玻璃仪器：烧杯； 32.GBT15725.4-1995实验室玻璃仪器：双口、三口球形圆底烧瓶； 33.GBT15725.6-1995实验室玻璃仪器：磨口烧瓶； 34.GBT21297-2007实验室玻璃仪器：互换锥形磨砂接头； 35.GBT21298-2007实验室玻璃仪器：试管； 理化仪器类 1.GBT1914-2007化学分析滤纸； 2.GB24789-2009用水单位水计量器具配备和管理通则； 3.GBT11007-2008电导率仪试验方法；
分离定律特殊题型总结
基因分离定律的题型专项训练 题型一：孟德尔遗传实验的操作技术 1、（2009 江苏·高考）下列有关孟德尔豌豆杂交实验的叙述，正确的是（） A．孟德尔在豌豆开花时进行去雄和授粉，实现亲本的杂交 B．孟德尔研究豌豆花的构造，但无需考虑雌蕊、雄蕊的发育程度C．孟德尔根据亲本中不同个体表现型来判断亲本是否纯合D．孟德尔利用了豌豆自花传粉、闭花受粉的特性 题型二：交配类型及应用 2、依次解决①--④中的遗传问题可采用的方法是（） ①鉴定一只白羊是否是纯种②在一对相对性状中区分显隐性③不断提高小麦抗病品种的纯度④检验杂种F1基因型 A.杂交、自交、测交、测交 B.测交、杂交、自交、测交 C.杂交、测交、杂交、自交 D.杂交、杂交、杂交、测交 题型三：分离定律的实质：等位基因随同源染色体的分离而分离 3、基因型为Dd 的细胞进行有丝分裂时，一条染色体上的一条染色单体上有D 基因，那么与其共用一个着丝点的另一条染色单体上的基因应是（） A.d B.D C.D 或d D.D 和d 4、基因型为Dd 的个体，在生殖细胞形成过程中，基因DD、dd、Dd 的分离分别发生在① 减数第一次分裂过程中②减数第二次分裂过程中③有丝分裂过程中（） A .①①② B.③③① C.②②①D.③③③ 题型四：相对性状的区分 5、下列各组中属于相对性状的是（） A.兔的长毛和短毛 B.玉米的黄粒与圆粒 C.棉纤维的长和粗 D.马的白毛和鼠的褐毛 6、下列不属于相对性状的是（） A.水稻的早熟与晚熟 B.豌豆的紫花和红花 C.绵羊的长毛和细毛 D.小麦的抗病和易染病题型五：显、隐性状的判别 7、纯种甜玉米和纯种非甜玉米间行种植，收获时发现甜玉米果穗上有非甜玉米子粒，而非甜玉米果穗上却无甜玉米子粒，原因是（） A.甜是显性 B.非甜是显性 C.相互混杂 D.相互选择 小结：显隐性确定有“三法” （1）根据子代性状判断①具有一对相对性状的亲本杂交→子代只出现一种性状→子代所出现的性状为显性状。若子代出现两种表现型，则可进一步应用自交法或回交法判断。 ②相同性状的亲本杂交→子代出现不同性状→子代所出现的新的性状为隐性性状。 （2）根据子代性状分离比判断：具有一对相对性状的亲本杂交→F2性状分离比为3∶1→分离比占3/4 的性状为显性性状。 （3）假设推证法
实验室样品前处理常用方法
实验室样品前处理常用方法 【样品前处理要求】 1.样品是否要预处理，如何进行预处理，采样何种方法，应根据样品的性状、检验的要求和所用分析仪器的性能第方面加以考虑。 2.应尽量不用或少使用预处理，以便减少操作步骤，加快分析速度，也可减少预处理过程中带来的不利影响，如引入污染、待测物损失等。 3.分解法处理样品时，分解必须完全，不能造成被测组分的损失，待测组分的回收率应足够高。 4.样品不能被污染，不能引入待测组分和干扰测定的物质。 5.试剂的消耗应尽可能少，方法简便易行，速度快，对环境和人员污染少。 1 高温灰化法 高温灰化法是利用热能分解有机试样，使待测元素成可溶状态的处理方法。其处理过程是准确是准确称取0.5～1.0g(有些试样要经过预处理)，置于适宜的器皿中，zui常用的是适宜的坩锅，如铂坩锅、石英坩锅、瓷坩锅、热解石墨坩锅等，然后置于电炉进行低温碳化，直至冒烟近尽。再放入马弗炉中，由低温升至375～600℃左右(视样品而定)，使试样完全灰化。试样不同，灰化的温度和时间也不相同，冷却后，灰分用无机酸洗出，用去离子水稀释定容后，即可进行待测元素原子吸收法测定。 灰化法是有机试样zui常用的方法之一，其优点：操作比较简单，适宜于大量试样的测定，处理过程中不需要加入其它试剂，可避免污染试样，但灰化法也存在明显的缺点：在灰化过程中，引起易挥发待测元素的挥发损失，待测元素沾壁及滞留在酸不溶性灰粒上的损失。汞和硒等易挥发元素，灰化处理中挥发损失严重，不易采用。As、B、Cd、Cr、Fe、Pb、P、V、Zn等元素在灰化过程中有一定程度的挥发损失。Cu、Ni等形成某些有机复合物，在温度相对较低时，也会挥发。非金属元素能形成多种多样化合物，易于挥发。 应特别指出的是，为克服灰化法的不足，在灰化前加入适量的助灰化剂，可减少挥发损失和粘壁损失。常见的灰化剂有：MgO、Mg(NO3)2、HNO3、H2SO4等。其中HNO3起氧化作用，加速有机物的破坏，因而可适当降低灰化温度，减少挥发损失。加入H2SO4能使挥发性较大的氯酸盐转化为挥发性较小的硫酸盐，起到象基体改良剂的作用，硫酸可是使灰化温度升高到980℃，镉、铅未发现明显的损失。Mg(NO3)2有双重作用，其分解为NO2和MgO，前者促进氧化，后者可稀释灰分，减少灰分与坩锅壁的总接触面积，从而减少沾留。例如：As、Cu、Ag等在常规灰化时会有严重损失，如果加入Mg(NO3)2后，则能得到满意的结果。 2 湿法消化法 湿法消化法亦称湿灰化法，其实质是用强氧化性酸或强氧化剂的氧化作用破坏有机试样，使待测元素以可溶形式存在。其基本方法是：称取预处理过的试样于玻璃烧杯中(或石英烧杯、聚四氟乙烯烧杯)，加入适量消化剂，通常应在100～200℃下加热以促进消化，待消化液清亮后，蒸发剩余的少量液体，用纯水洗出，定容后即可进行原子吸收法测定。 湿法消化法中zui常用的试剂是HNO3、HClO4、H2SO4等强氧化性酸，以及H2O2、KMnO4 等氧化性试剂。实际上多用以一定比例配制的混合酸。在消化过程中避免产生易挥发性的物质，避免有新的沉淀形成。例如，HNO3：HClO4：H2SO4=3:1:1的混合酸适于大多数的生物试样的消化，但样品含钙高，则可不用H2SO4，以避免CaSO4沉淀形成。某些硫酸盐(如Pb2+、Ag+、Ba2+)和氯酸盐(Pb2+、Ag+如等)呈不溶性，因此测定这类样品时不宜使用HClO4或H2SO4。其它氧化剂如H2O2、高锰酸盐等也可用于消化试样，钼盐则能作催化剂加速氧化反应。
常见物质的分离提纯和鉴别方法总结
常见物质的分离提纯和鉴别方法总结 文档编制序号：[KKIDT-LLE0828-LLETD298-POI08]
常见物质的分离、提纯和鉴别方法总结 一、物质的分离与提纯方法 1.混合物的物理分离方法
2.混合物的化学分离法 二、物质的检验 物质的检验通常有鉴定、鉴别和推断三类，它们的共同点是：依据物质的特殊性质和特征反应，选择适当的试剂和方法，准确观察反应中的明显现象，如颜色的变化、沉淀的生成和溶解、气体的产生和气味、火焰的颜色等，进行判断、推理。
2.几种重要阳离子的检验 (l)H+能使紫色石蕊试液或橙色的甲基橙试液变为红色。 (2)Na+、K+用焰色反应来检验时，它们的火焰分别呈黄色、浅紫色(通过钴玻片)。 (3)Ba2+能使稀硫酸或可溶性硫酸盐溶液产生白色BaSO 4 沉淀，且沉淀不溶于稀硝酸。 (4)Mg2+能与NaOH溶液反应生成白色Mg(OH) 2沉淀，该沉淀能溶于NH 4 Cl 溶液。 (5)Al3+能与适量的NaOH溶液反应生成白色Al(OH) 3 絮状沉淀，该沉淀能溶于盐酸或过量的NaOH溶液。 (6)Ag+能与稀盐酸或可溶性盐酸盐反应，生成白色AgCl沉淀，不溶于稀 HNO3，但溶于氨水，生成［Ag(NH3)2］+。 (7)NH 4 +铵盐(或浓溶液)与NaOH浓溶液反应，并加热，放出使湿润的红色石蓝试纸变蓝的有刺激性气味NH3气体。 (8)Fe2+能与少量NaOH溶液反应，先生成白色Fe(OH) 2 沉淀，迅速变成灰绿色，最后变成红褐色Fe(OH)3沉淀。或向亚铁盐的溶液里加入KSCN溶液，不显红色，加入少量新制的氯水后，立即显红色。2Fe2++Cl2＝2Fe3++2Cl－ (9)Fe3+能与 KSCN溶液反应，变成血红色 Fe(SCN) 3 溶液，能与 NaOH 溶液反应，生成红褐色Fe(OH)3沉淀。
高中14种常见物质实验室制法学习资料
高中14种常见物质实验室制法 1、实验室制取氢气（H2） ⑴反应原理：Zn+H2SO4 === ZnSO4+H2↑ ⑵发生装置：固+液?→气（启普发生器） ⑶净化方法：浓硫酸（除水蒸气） ⑷收集方法：排水集气法/向下排空气法 ⑸尾气处理：无 ⑹检验方法：①点燃，淡蓝色火焰，在容器壁上有水珠 ②能使灼烧的CuO由黑色变为红色，气体产物使白色的CuSO4粉末变蓝 2、实验室制取一氧化碳（CO） ⑴反应原理：HCOOH?浓硫酸/?→CO↑＋H2O ⑵发生装置：固+液??→气（分液漏斗、圆底烧瓶） ⑶净化方法：浓硫酸（除水蒸气） ⑷收集方法：排水法 ⑸尾气处理：点燃法/收集法（塑料袋） ⑹检验方法：①点燃，淡蓝色火焰，无水珠，产生的气体能使澄清石灰水变浑浊。 3、实验室制取二氧化碳（CO2） ⑴反应原理：CaCO3＋2HCl===CaCl2＋CO2↑＋2H2O ⑵发生装置：固+液?→气（启普发生器） ⑶净化方法：饱和NaHCO3 溶液（除HCl）、浓硫酸（除水蒸气） ⑷收集方法：向上排空气法/排饱和NaHCO3 溶液法 ⑸尾气处理：无 ⑹检验方法：①通入澄清石灰水变浑浊，继续通又变澄清 ②能使燃烧的木条熄灭 4、实验室制取甲烷（CH4） ⑴反应原理：CH3COONa＋NaOH ?CaO/?→CH4↑＋Na2CO3 ⑵发生装置：固+固??→气 ⑶净化方法：浓硫酸（除水蒸气） ⑷收集方法：排水集气法/向下排空气法 ⑸尾气处理：无 ⑹检验方法：①点燃，淡蓝色火焰，燃烧产物是H2O和CO2 5、实验室制取乙烯（C2H4） ⑴反应原理：CH3CH2OH ?浓硫酸/170℃→CH2=CH2↑＋H2O ⑵发生装置：液+液??→气（分液漏斗、圆底烧瓶） ⑶净化方法：NaOH溶液（除SO2、SO3）、浓硫酸（除水蒸气） ⑷收集方法：排水集气法 ⑸尾气处理：无 ⑹检验方法：①点燃，明亮的火焰，冒黑烟，燃烧产物是H2O和CO2
病原菌的分离培养和纯化
普通植物病理学 实验十七、病原菌得分离培养与纯化 一、目得要求 (1)了解分离与纯化微生物得基本原理及方法。 (2)掌握倒平板得方法与组织分离、稀释分离、平板划线分离得基本操作技术。 (3)掌握在平板、斜面及液体培养基上培养病原菌及观察其培养性状得方法。 二、基本原理植物病原菌得分离培养,就是植物病理实验室工作中得基本技能。为了获得某微生物得纯培养，一般就是根据该微生物对营养、酸碱度、氧气等条件要求不同，而供给它们适宜得生活条件，即让病原菌生活在适宜得培养基上，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其她菌生长得环境.从而得到纯菌株。植物病原頁?菌得分离方法主要有组织分离法与稀释分离法两种。最常用得方法就是组织分离法，而稀释分离法主要用于病组织上产生大量砲子得病原真菌得分离。病原细菌得分离方法以划线分离法为最常用，在有些情况下也采用稀释分离法。为了获得分离菌得纯培养，必须要进行分离菌得纯化，纯化得方法类似于分离工作中采用得稀释分离法或划线分离法。 三、材料、仪器与用具 1?材料(依当地情况进行选择，下列材料供参考) (1)稻瘟病叶、病节、病穗颈(pyric u 1 a r ia orycae)。 (2)玉米大斑病叶(exserohilum t urcicum)0 ⑶玉米弯抱菌叶斑病叶(c u r v u lar i a 1 u n ata)。 (4 )玉米小斑病叶(bipo 1 aris may dis)。 (5)番茄灰霉病果(botryt i s cinefc a )。 (6 )黄瓜菌核病果(sclerotinia s c I erotio r um)? (7)黄瓜细菌性角斑病叶(pscu d omo n as syringa e p v .lac h r y mans)。 (8)水稻白叶枯病叶(xant h o mo n as canipc s tmspv、o r y eue)o
(word完整版)初中化学物质分离与提纯的常用方法小结
初中化学物质分离与提纯的常用方法小结 物质的分离是将几种物质通过物理或化学方法分开，提纯则要求把不纯物质中的杂质除去。提纯的原则是： ①不增：即在除掉杂质时不增加新杂质。 ②不减：即被提纯的物质不能减少或改变。 ③易分：即操作简便易行，杂质易分离除去。 ④最佳：即最好在除去杂质的同时能增加被提纯物质的量。 一、常用的物理方法 1. 过滤法：适用于固体与液体的混合物进行分离。 ①先将混合物溶于水。 ②过滤。 ③将滤液蒸发得某溶质。 2、蒸发：适用于可溶性固体溶质与溶剂的分离。 3、降温结晶（重结晶）法：适用于两种可溶性固体的溶解度受温度影响变化明显不同的混合物进行分离。溶解度变化大的那种物质被提纯出来。 可按如下步骤：①在高温下制成饱和溶液，②结晶，③过滤。 4、特殊性质法：利用混合物中某些物质的特性进行物质分离。如：Cu粉中混有Fe粉，可用磁铁吸出铁粉。 二、常用的化学方法 原理：所用试剂能与杂质反应，不能与提纯物反应，把杂质转化
成水；气体；沉淀除去，又不能引入新的杂质。 1、沉淀法：即加入一种试剂和杂质反应生成沉淀经过滤而除去。 如：HNO3中混有H2SO4，可加入适量的Ba(NO3)2溶液： 2、化气法：即加入一种试剂和杂质反应，使其生成气体而除去。如一般某盐中混有少量碳酸盐、碳酸氢盐等常用此法除去。 如NaCl溶液中混有Na2CO3，可加入适量的稀盐酸： 3、置换法：即在某盐溶液中加入某金属，把盐溶液中的金属置换出来，从而把杂质除去。 如Zn SO4溶液中含有CuSO4，可加入过量的锌： 4、转化法：即通过某种方法，把杂质转化为被提纯的物质。 如CO2气体中混有少量的CO，可将混合气体通过盛有足量灼热的CuO的试管：
物质分离和提纯的方法与技巧
物质分离和提纯的方法与技巧 物质的分离是通过适当的方法，把混合物中各组成物质彼此分开，并且恢复到各种物质原来的状态，分别得到纯净物；而物质的提纯是通过适当的方法把混入某物质的少量杂质除去，以便获得相对纯净的物质，又称除杂。 物质的除杂从内容上看，它包含着常见酸碱盐及其他重要物质的性质及特殊化学反应的知识；从过程上看，它是一个原理确定、试剂选择与实验方案确定、操作实施的过程，其考查热点和趋势是化学知识与实验操作的结合，理论与生产实践的结合。 1、主要方法 物质的分离和提纯常用方法有物理方法和化学方法两种，见下表： 2、用化学方法分离和提纯物质的原则 不增：在除杂的过程中不能引入新的杂质； 不减：在除杂的过程中，不能减少或损耗被提纯物质的质量； 不变：在除杂过程中，除杂剂不能使被提纯物质改变； 易分：被提纯物质与杂质或杂质转化成的新物质易于分离； 务尽：选择除杂剂要注意反应进行的程度，除杂越彻底越好。
3、酸、碱、盐溶液中的除杂技巧 ①被提纯物质与杂质所含阳离子相同时，选取与杂质中的阴离子不共存的阳离子，再与被提纯物中的阴离子组合出除杂试剂，如Na2SO4（NaOH）：可选用稀H2SO4为除杂剂（生成物为Na2SO4和H2O，达到目的）。KCl（K２SO４）：可选用BaCl２溶液为除杂试剂（生成物为BaSO KCl，达到目的）。 ４和 ②被提纯物质与杂质所含阴离子相同时，选取与杂质中的阳离子不共存的阴离子，再与被提纯物中的阳离子组合出除杂试剂，如NaCl（BaCl2）：可选用Na2SO4溶液为除杂试剂（生成物为BaSO4和NaCl，达到目的）。KNO3（AgNO3）：可选用KCl２溶液为除杂试剂（生成物为AgCl和KNO3 ，达到目的）。 ③被提纯物质与杂质所含阴、阳离子都不相同时，选取与杂质中的阴、阳离子都不共存的阴、阳离子组合出除杂试剂。如NaNO3（CuSO4）：可选用Ba（OH）2溶液为除杂试剂（生成物为 Cu（OH）2沉淀和BaSO4沉淀，达到目的）。 4、除杂方法的几个优化原则： ①若同时有多种方法能除去杂质，要选择那些简单易行、除杂彻底的方法； ②应尽量选择既可除去杂质，又可增加保留物质的方法，即“一举两得”； ③先考虑物理方法，再用化学方法。 5、除去食盐中可溶性杂质的方法 重结晶后的食盐中还含有硫酸钠、氯化镁、氯化钙等可溶性杂质，它们在溶液中主要以SO42-、 Ca2+、Mg2+ 的形式存在，为将这些杂质离子除净，应注意所加试剂要过量，过量试剂要除去，所以除杂时所加试剂顺序要求是：a、Na2CO3必须在BaCl2之后加；b、过滤之后再加适量盐酸。 试剂加入顺序有多种选择，如： （a）BaCl2、NaOH、Na2CO3、过滤、HCl （b）BaCl2、Na2CO3、NaOH、过滤、HCl （c）NaOH、BaCl2、Na2CO3、过滤、HCl
常见物质的实验室制法
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