生姜油治疗大鼠肝纤维化实验研究
肝纤维化指标检测的临床意义
肝纤维化指标检测的临床意义 发表时间：2011-12-05T13:58:27.850Z 来源：《中国健康月刊（学术版）》2011年第10期作者：武杰 [导读] 肝纤维化是指各种致病因素引起肝脏损害及炎性反应，在修复过程中导致肝脏细胞外基质异常增多。 武杰 (盘锦市传染病医院检验科辽宁盘锦124000)【中图分类号】R701.26【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)10-0395-02肝纤维化是指肝脏内弥漫性细胞外基质过度沉积，慢性肝病所致的持续或反复的肝实质炎症坏死可引起纤维结缔组织大量增生，而其降解活性相对或绝对不足，因此大量细胞外基质沉积下来形成纤维化。因此探讨慢性肝炎患者血清层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、Ⅳ型胶原（Ⅳ- C）、透明质酸（HA）水平及临床意义。采用化学发光法检测150例肝患者血清LN、PCⅢ、Ⅳ-C、HA水平，能反映肝纤维化及肝功能损害程度，对临床诊断及预后判断具有重要意义。 肝纤维化的诊断迄今仍以组织病理学检查最为可靠，但由于肝穿活检系有创性检查，所以标本有局限性，难以常规用于随访和动态观察。层粘连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）、透明质酸（HA）这四项指标是反映肝纤维化较好的血清学指标。本组检测了150例慢性肝炎患者LN、PCⅢ、Ⅳ-C、HA水平，现报道如下。 1 材料与方法 1.1一般资料: 抽取150例患者均为本院住院患者，男100例，女50例，平均年龄28~64岁，其中慢性轻度肝炎40例，男25例，女15例，年龄22~60岁；慢性中度肝炎50例，男35例，女15例，年龄25~65岁；慢性重度肝炎30例，男20例，女10例，平均年龄25~65岁；肝硬化30例，男20例，女10例，平均30~65岁。诊断标准符合全国病毒性肝炎及肝病会议修订标准［1］。对照组25例，为本院健康体检人员，男15例，女10例，年龄25~55岁。 1.2 仪器与试剂: 北京源德生物技术有限公司生产的化学发光仪与配套试剂，严格按照说明书操作。 1.3方法: 采用化学发光法，清晨空腹采静脉血5ml，离心分离血清。 1.4统计学处理: 各种慢性肝炎患者血清四项指标检测数据均用x±s表示并进行t检验。 2结果 4组慢性肝炎肝纤维化指标检测情况见表1。四项肝纤维化指标水平均随病情的加重以及病程的延长逐渐升高（p＜0.01）, PCⅢ、LN 在慢性肝炎重度组升高明显，HA、Ⅳ-C在肝硬化组升高明显，慢性肝炎轻度组血清LN水平与对照组差异无统计学意义（P＞0.05）. 表14组肝炎患者肝纤维化水平情况（x±s） 3 讨论 肝纤维化是指各种致病因素引起肝脏损害及炎性反应，在修复过程中导致肝脏细胞外基质异常增多。肝纤维化是大多数慢性肝病所共有的病理特性，是各种慢性肝炎向肝硬化发展的主要中间环节。血清肝纤维化标志物水平，肝组织纤维化程度及炎性反应活动度有良好的相关性，与肝脏损害程度及肝组织纤维化发展的阶段性密切相关［2］。 3.1 LN是基底膜的主要成分，主要存在于基底膜的透明层中，也是一种糖蛋白，血清LN增高，含量与组织纤维化程度平行。慢性活动性乙型肝炎和肝硬化及原发性肝癌时可明显增高。 3.2 PCⅢ与肝纤维化形成的活动程度密切相关，但无特异性，其他器官纤维化时，PCⅢ也增高，持续PCⅢ增高的慢性活动性乙型肝炎提示病情可能会恶化，并向肝硬化形成发展，而PCⅢ降至正常可提示病情缓解，PCⅢ不仅在肝纤维化早期诊断上有一定价值，在慢性肝病的诊断上也有重要意义。 3.3 Ⅳ-C是构成基底膜的主要成分，当肝纤维化发生时，Ⅳ型胶原可能是最早增生的纤维，反应基底膜胶原的更新率，含量增高可较灵敏地反映肝纤维化过程，是肝纤维化的早期标志之一。 3.4 HA由蛋白质于糖胺多糖共价结合形成的一类糖蛋白，肝硬变时可有大量糖胺合成并沉淀。HA是判定肝纤维化或肝硬化活动中较为敏感的指标。 本实验显示，慢性肝炎轻度组血清LN水平与对照组差异无统计学意义，慢性肝炎轻度、中度、重度及肝硬化患者LN、PCⅢ、Ⅳ-C、HA水平都有不同程度的增高，说明慢性患者病情加重，病程延长，HA、Ⅳ-C、LN水平逐渐升高，PCⅢ水平升高程度为：慢性肝炎重度＞慢性肝炎中度＞肝硬化，这与慢性肝炎重度、中度时肝内炎性反应，肝细胞坏死及纤维化形成最为活跃有关。 肝纤维化血清四项指标具备：肝脏特异性高，反映肝脏纤维化程度及肝脏实质和间质结构的紊乱。测定方法简便易行，联合应用有助于各种慢性肝炎的观察及检测形成肝硬化的可能性，具有重大意义。参考文献 ［1］中华医学会传染病与寄生虫病学分会，肝病学分会，病毒性肝炎防治方案。中华肝脏病杂志，2000，8(6):324-326 ［2］林少锐，郑晓丹等。慢性肝炎血清肝纤维化指标检测的临床意义。世界感染杂志，2005，6（3）：225-226
APJ拮抗剂Apelin13(F13A)对肝纤维化大鼠肝脏Beclin1、LC3和p62表达的影响
APJ拮抗剂Apelinl3 ( F13A)对肝纤维化大鼠肝脏 Beclin 1. LC3和p62表达的影响 刘明;曾斌;肖婷筑王珊;姚梦娜 【期刊名称】《医学信息》 【年(卷)，期】2015(000)025 【摘要】目的观察血管紧张素受体ATI相关的受体蛋白(APJ)拮抗剂Apelinl3(F13A)对肝纤维化大鼠肝脏中自噬相关基因Beclin 1、LC3和p62表达的影响。方法30只雄性SD大鼠随机分为对照组、肝纤维化模型组和Apelinl3(F13A)(100pg/kg)处理组。采用四氯化碳(CCI4)诱导大鼠肝纤维化模型。Apelinl3(F13A)通过腹腔注射给药。取肝左叶同一部位,苏木精-伊红(HE) 染色观察肝脏的病理形态学变化。Western blot检测肝脏中自噬相关基因Beclin 1、LC3和p62的表达。结果对照组大鼠肝脏的肝小叶结构完整，肝索排列整齐,结构完整,肝细胞排列整齐，没有发现明显的胶原纤维增生，纤维化程度分级为0级；肝纤维化模型组大鼠肝小叶结构破坏严重,肝细胞排列紊乱,汇管区发现明显的坏死细胞和炎性细胞，可见大量胶原纤维增生,形成纤维纵隔，纤维化程度分级为多为3-4级；与模型组比较,Apelinl3(F13A)组大鼠肝脏组织肝细胞变性和坏死明显减少，纤维化程度明显减轻,纤维化程度分级多为1-2级。与对照组t出交，肝纤维化大鼠Beclin 1和LC3的表达显著增加，而p62的表达显著降低(均＜0.05)。与肝纤维化模型组大鼠比较，Apelinl3(F13A)降低了Beclin 1和LC3的表达,而增加了p62的表达(均＜ 0.05)。结论APJ拮抗剂Apelinl3(F13A)抑制了CCI4诱导的大鼠肝纤维化，其机制可能与Apelinl3(F13A)抑制细胞自噬有关。
实验报告-大鼠
姓名：薛桂凤学号：132015200300 实验报告（二） 一、实验目的： 1.掌握大鼠的抓取和固定。 2.掌握大鼠的编号与标记方法。 3.掌握大鼠的常用实验方法。 4.掌握大鼠的常用麻醉方法。 5.掌握大鼠的安死术。 6.掌握大鼠的釆血方法。 7.了解小鼠的采尿、粪的方法。 8.了解小鼠各种脏器标本的采集方法。 二、实验器材：SD大鼠、电子称、手套、实验托盘、固定板、烧杯、注射器（3支）、 剪刀、镊子、灌胃针头、毛细管、酒精棉球、5%水合氯醛、生理盐水 三、实验内容 1.抓取：两种方法。第一种方法：右手食指和中指夹住大鼠颈部，使其头部固定，右 手拇指及无名指分别在大鼠前爪下抓住大鼠身体。第二种方法类似单手抓取小鼠的 方法，用右手拇指及其余四指并捏住大鼠颈部背部皮肤。 2.称重：小鼠放在烧杯中称重（去除烧杯重量），记录小鼠体重210g。 3.鉴别大鼠性别：观察生殖器雄性大鼠的阴囊非常明显。 4.编号：染色法：逆毛方向涂上有色斑点，顺序由左到右，由上向下，用两种颜色 可标记99只动物。 5.给药： （1）皮下注射小于1ml/100g（俯卧固定，左手拇指和食指捏住皮肤提起，右手持针沿纵轴方向刺入皮肤，阻力消失后回抽无血注入药物，拔针）（2）皮内注射小于0.1ml （麻醉后进行，先备皮）（俯卧固定，与皮肤平行刺入捏起的皮肤，阻力大，注射药物局部有皮丘后停留片刻后拔针）（3）腹腔注射0.01-0.02ml/g（仰面固定，在腹正中线两侧腹股沟平行的位置30-45°进针，挑起皮肤和肌肉，回抽无血，注药） （4）灌胃1-2ml/100g （大鼠固定身体呈一条直线，灌胃针头顺着上颚插入咽部，先少量注药证明未入气管后继续给药） 6.釆血：尾尖釆血法、眼眶静脉丛釆血法、心脏釆血法(麻醉后) 。 7.大鼠的采尿、粪的方法 （1）少量采集：在抓取固定时受到刺激排出少量尿液和粪便 （2）长期大量采集：使用代谢笼 8.麻醉：根据大鼠体重计算麻醉药物用量5%水合氯醛按300mg/kg，给药，计算药 量为 1.26ml，ip 麻醉小鼠，观察小鼠麻醉期。 (1)全身麻醉的第一期（随意兴奋期）：出现运动和运动失调；35秒 (2)全身麻醉的第二期（不随意兴奋期）：是由意识完全丧失至深而规则的自动 呼吸开始时止;2分30秒 (3)全身麻醉的第三期：角膜反射由迟钝渐趋消失，翻正反射消失，疼痛反射 消失； 9.安死术：颈椎脱臼法：用左手按住动物的头部于实验台上，右手抓住尾根部，快速、 不间断地向后、略向上使劲拉，以致脊椎脱臼，脊髓与脑干断离而死亡。 10.解剖：观察大鼠的脏器解剖结构
肝纤维化指标正常值
肝纤维化指标正常值 肝纤维化指标正常值，指的是对肝脏进行纤维化程度检查时，所参考的几个有意义的项目的正常范围。 具体来说，肝纤维化指标正常值就是：PCⅢ(即III型前胶原)的正常值、IV-C(即IV型胶原)的正常值、LN(即层粘连蛋白)的正常值、HA(即透明质酸酶)的正常值、CG (即甘胆酸)的正常值、PLD (即脯氨酸肽酶)的正常值、MAO (即单胺氧化酶)的正常值、PINP (即Ⅰ型前胶原氨端肽原)的正常值。 肝纤维化指标是对肝纤维化程度的一个评估标准。及早发现肝纤维化指标和正常值存在偏差，及早展开治疗，有利于遏制肝纤维化向更坏的趋势发展。因此，肝纤维化指标正常值相当重要。 想要得到肝纤维化指标正常值的准确数据，需要在检查前注意以下事项。 首先，检查前不能进食。肝脏抽血检查要求空腹，空腹时间一般为8—12个小时。 其次，检查前一天不能喝酒。喝酒会导致转氨酶升高，从而影响检查结果。 再次，检查前不要服用药物。有些药物会加重肝脏负担，造成肝功能暂时性损伤，从而引起肝纤维化指标检查结果的准确性。
第四，检查前要注意保证充足的睡眠，且不要进行剧烈运动。因为这些都有可能影响检查结果的准确性。 最后，接受肝穿刺活检时，一定要经过患者的同意。 在接受完静脉抽血后，就可以得到检查者的肝纤维化指标数据了。将这一数据和肝纤维化指标正常值相对比，就可以判断肝脏内的肝纤维化水平处于哪一阶段，以及是否需要治疗了。 肝纤维化指标正常值 指标具体项目正常值 PCⅢIII型前胶原低于18ng/mL IV-C IV型胶原30—140ng/mL之间 LN 层粘连蛋白50—180ng/mL之间 HA 透明质酸酶低于120ng/mL PLD 脯肽酶1107±19.5u/L之间 MAO 单胺氧化酶 3.3—15.1nmol/(s·L)之间有纤维化指标正常值，就有异常情况。肝纤维化指标的异常结果，主要有： PCⅢ超出纤维化指标正常值，连续上升，提示病情可能有恶化并向肝硬变发展。 IV-C超出纤维化指标正常值，能反映肝纤维化的程度逐渐加重。 LN水平超出纤维化指标正常值，数值越高，患者的食管
四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型改良的研究_邵佳亮
收稿日期:2011-05-18 基金项目:国家自然科学基金(30760230) 作者简介:邵佳亮(1980-),男,硕士,住院医师,主要从事肝纤维化的研究。 通信作者:胡国信,副教授,E -mail:hug uo x in8228@sina.co m 。 四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型改良的研究 邵佳亮,万赞燕,胡国信 (南昌大学第一附属医院感染科,南昌330006) 摘要:目的 构建肝纤维化大鼠模型,并对经典四氯化碳(CCl 4)复制模型方法进行适当改进。方法 取Sprague -Daw ley(SD)大鼠40只,雌雄各半,按随机数字表法分为A 组10只、B 组14只和C 组16只。B 组给予大鼠腹腔注射40%CCl 4花生油溶液2mL kg -1,2次 周-1,同时给予普通全价饲料喂养(改良方法);A 组为正常对照组,给予等量花生油腹腔注射,2次 周-1,同时给予普通全价饲料喂养;C 组给予大鼠腹腔注射40%CCl 4花生油溶液5mL kg -1,2次 周-1,同时给予添加10%猪油及2%胆固醇的饲料喂养(经典方法)。实验第8周末处死各组剩余大鼠:采用酶联免疫吸附法检测血清肝功能(A L T 、AST 、A L B 、T P 、A/G)水平;H E 及M asson 染色观察大鼠肝组织病理学变化。结果 实验第8周B 、C 组均可见明显肝功能损害表现。B 组可见部分标本肝脏假小叶形成,达到早期肝硬化,肝细胞少量脂肪变性,死亡率28.6%。C 组均已形成明显肝硬化,弥漫性肝细胞脂肪变性,死亡率43.7%。结论 低剂量CCl 4诱导并给予普通饲料喂养可成功建立大鼠肝纤维化模型,并明显降低大鼠死亡率,提高了模型质量及实验效率。 关键词:四氯化碳;肝纤维化模型;改良;动物,实验;大鼠 中图分类号:R-332 文献标志码:A 文章编号:1000-2294(2011)07-0040-03 Improved Rat Model of Liver Fibrosis induced by CCl 4 SHAO Jia -liang,WAN Zan -yan,HU Guo -xin (Dep ar tment of I nf ectious Diseases ,the First A f f iliated H osp ital of N anchang Univ ersity , N anchang 330006,China) ABSTRACT:Objective To establish a rat m odel of liver fibrosis,and to improv e the classical CCl 4induction method.Methods Forty SD r ats (20female and 20male)w ere r ando mly divided into three gro ups.Gro up B (n =14)w as given intraperitoneal injection of 2mL kg -1of 40%CCl 4solution (a mix ture of CCl 4and peanut oil)tw ice a w eek and the feeding of no rmal complete diet.Gro up A (n =10)w as given intraperitoneal injection of 2mL kg -1of peanut oil tw ice a w eek and the feeding of nor mal com plete diet.Gro up C (n =16)w as given intr aper ito neal injec -tion of 5mL kg -1of 40%CCl 4solution tw ice a w eek and the feeding of diet containing 10%lar d and 2%cholesterol.Rats w ere killed at the end of 8w eeks,and the levels o f ser um ALT ,AST ,Alb,T P and A/G w ere determined by ELISA.The patho logical changes in liver tissue w ere ob -served by H E and M asso n staining.Results Liv er function w as damag ed apparently by CCl 4in -jectio n.Some specimens in g roup B pro duced false flo cculus and achieved the ear ly stage of liver fibro sis,w ith fatty deg ener ation in a few liver cells.A ll specimens in gr oup C had cirrhosis w ith diffuse hepatic steato sis.The m ortality w as 28.6%and 43.7%in gro up B and g roup C,respec -tively.Conclusion Liv er fibrosis can be induced by injection o f low do ses of CCl 4and feeding of norm al co mplete diet in rats.In addition,the improved m ethod can reduce the mortality and im -40南昌大学学报(医学版)2011年第51卷第7期 Jou rnal of Nanch ang University(M edical Science)2011,Vol.51No.7
实验报告-大鼠
姓名：薛桂凤学号： 实验报告（二） 一、实验目的： 1.掌握大鼠的抓取和固定。 2.掌握大鼠的编号与标记方法。 3.掌握大鼠的常用实验方法。 4.掌握大鼠的常用麻醉方法。 5.掌握大鼠的安死术。 6.掌握大鼠的釆血方法。 7.了解小鼠的采尿、粪的方法。 8.了解小鼠各种脏器标本的采集方法。 二、实验器材：SD大鼠、电子称、手套、实验托盘、固定板、烧杯、注射器（3支）、 剪刀、镊子、灌胃针头、毛细管、酒精棉球、5%水合氯醛、生理盐水 三、实验内容 1.抓取：两种方法。第一种方法：右手食指和中指夹住大鼠颈部，使其头部固定，右 手拇指及无名指分别在大鼠前爪下抓住大鼠身体。第二种方法类似单手抓取小鼠的 方法，用右手拇指及其余四指并捏住大鼠颈部背部皮肤。 2.称重：小鼠放在烧杯中称重（去除烧杯重量），记录小鼠体重210g。 3.鉴别大鼠性别：观察生殖器雄性大鼠的阴囊非常明显。 4.编号：染色法：逆毛方向涂上有色斑点，顺序由左到右，由上向下，用两种颜色 可标记99只动物。 5.给药： （1）皮下注射小于1ml/100g（俯卧固定，左手拇指和食指捏住皮肤提起，右手持针沿纵轴方向刺入皮肤，阻力消失后回抽无血注入药物，拔针）（2）皮内注射小于（麻醉后进行，先备皮）（俯卧固定，与皮肤平行刺入捏起的皮肤，阻力大，注射药物局部有皮丘后停留片刻后拔针） （3）腹腔注射（仰面固定，在腹正中线两侧腹股沟平行的位置30-45°进针，挑起皮肤和肌肉，回抽无血，注药） （4）灌胃1-2ml/100g （大鼠固定身体呈一条直线，灌胃针头顺着上颚插入咽部，先少量注药证明未入气管后继续给药） 6.釆血：尾尖釆血法、眼眶静脉丛釆血法、心脏釆血法(麻醉后) 。 7.大鼠的采尿、粪的方法 （1）少量采集：在抓取固定时受到刺激排出少量尿液和粪便 （2）长期大量采集：使用代谢笼 8.麻醉：根据大鼠体重计算麻醉药物用量5%水合氯醛按300mg/kg，给药，计算药 量为，ip 麻醉小鼠，观察小鼠麻醉期。 (1)全身麻醉的第一期（随意兴奋期）：出现运动和运动失调；35秒 (2)全身麻醉的第二期（不随意兴奋期）：是由意识完全丧失至深而规则的自动 呼吸开始时止;2分30秒 (3)全身麻醉的第三期：角膜反射由迟钝渐趋消失，翻正反射消失，疼痛反射 消失； 9.安死术：颈椎脱臼法：用左手按住动物的头部于实验台上，右手抓住尾根部，快速、 不间断地向后、略向上使劲拉，以致脊椎脱臼，脊髓与脑干断离而死亡。 10.解剖：观察大鼠的脏器解剖结构
肝纤维化四项指标及其意义
肝纤维化四项指标及其临床意义 HA ,Hyaluronidase（透明质酸酶）： 为基质成分，可较准确灵敏地反映肝内已生成的纤维量及肝细胞受损状况，有认为本指标较之肝活检更能完整反映出肝全貌，是肝纤维化和肝硬变的敏感指标。 1）血清HA在急肝、慢迁肝时轻度升高；慢活肝时显著升高；肝硬化病人血清HA极度升高。 2）血清HA水平是反映肝损害严重程度、判断有无活动性肝纤维化的定量指标。 3）对慢迁肝与慢活肝的鉴别诊断，慢迁肝HA浓度与正常人无差别，而慢活肝的升高明显。 4）反映肝细胞功能，肝脏纤维化形成和程度，反映肝脏炎症性病变。 5）有助于估价肝病发展趋势，在急性肝炎→慢活肝→肝硬化发展中，血清HA逐步并优于其他肝硬化诊断指标等。 6）肝硬化时，有些病人HA却不升高，与其肝脏合成功能有关 LN ,Laminin （层粘连蛋白）： 为基底膜中特有的非胶原性结构蛋白，与肝纤维化活动程度及门静脉压力呈正相关，慢活肝和肝硬变及原发性肝癌时明显增高，LN也可以反映肝纤维化的进展与严重程度。另外，LN水平越高，肝硬变病人的食管静脉曲张越明 显。 1）反映肝纤维化：正常肝脏间质含少量LN，在肝纤维化和肝硬化时，→肌成纤维细胞增多→大量合成和分泌胶原、LN等间质成分→形成完整的基底膜（肝窦毛细血管化）。肝窦毛细血管化是肝硬化的特征性病理改变， LN与纤维化程度和门脉高压正相关，纤维化后期升高尤为显著。 2）可诊断酒精肝是否存在门脉高压 3）与基底膜相关疾病有关：如先兆子痫孕妇血清较正常妊娠者显著升高，提示可能与肾小球及胎盘螺旋动脉损伤有关。血清LN与糖尿病、肾小球硬化等疾病有关。 PCIII ,Procollagen Ⅲ（III型前胶原）： 反映肝内III型胶原合成，血清含量与肝纤程度一致。 1）PCIII与肝纤维化形成的活动程度密切相关，但无特异性，其它器官纤维化时，PCIII也升高。 2）持续PCIII升高的慢活肝，提示病情可能会恶化并向肝硬变形成发展，而PCIII降至正常可预示病情缓解，说明PCIII 不仅在肝纤维化早期诊断上有价值，在慢性肝病的预后判断上也有意义。 3）肝纤维化病变程度呈密切相关，反映肝纤维合成状况和炎症活动性，早期即显著升高，而陈旧性肝硬化和部分晚期肝硬变、肝萎缩患者血清PCⅢ不一定增高。
四氯化碳腹腔注射致大鼠肝纤维化机理研究
四氯化碳腹腔注射致大鼠肝纤维化 机理研究 【摘要】目的观察四氯化碳腹腔注射制作大鼠肝纤维化模型时相关细胞因子 的变化，初步探讨四氯化碳腹腔注射致大鼠肝纤维化的机理。方法以四氯化碳腹腔注射的方法[四氯化碳 mL (用花生油1∶6稀释)/次，每周3次，共14周]制作大鼠肝纤维化模型，设立正常、溶剂对照组，检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原含量;ELISA法检测转化生因子ββ1)、肿瘤坏死因子α);化学法检测血清氧化亚 氮(NO)。肝行HE和Masson胶原染色，光镜下观察病改变，并按SSS计分系统进行评分。免疫组化染色观察肝组织血小板源生长因子的变化，专业像分析进行图像分析。结果与正常对照组、溶剂对照组比较，模型组血清ALT、AST、HA、LN、、NO、β1 、α明显升高
()，大鼠肝组织肝纤维化评分明显升高()，肝组织表达明显增多()。结论促进相关细胞因子的表达可能是四氯化碳腹 腔注射致大鼠肝纤维化的机理之一。 【关键词】四氯化碳;肝纤维化;细胞因子 Abstract:Objective To investigate the variation of correlated cytokine when the rat models of hepatic fibrosis were induced by intraperitoneal injection of carbon tetrachloride,and to the relevant molecular mechanism. Methods Rat models of hepatic fibrosis were made by intraperitoneal injection of carbon tetrachloride at mL(diluted 1∶6 with peanut oil),three times a week,a total of 14 weeks. The normal and dissolvent groups were prepared as controls. Serum β1 and α were detected by ELISA method. Serum levels of NO were detected by
大鼠肝纤维化模型的制备
中文摘要 目的本文通过对SD大鼠腹腔注射四氯化碳以诱导大鼠肝纤维化动物模型。 方法取15只SD大鼠，180—220g，分为A组10只，B组5只，A组为模型组：40%CCL4橄榄油混合液按0.12ml/100g腹腔注射，一周两次，共八周。B组为对照组：纯橄榄油按0.12ml/100g腹腔注射，一周两次，共八周，八周后，禁食12小时处死全部大鼠，解剖取肝组织。病理学检测：HE染色，MASSON染色,PAS染色。基因学检测：1.3.4型胶原蛋白 结果八周试验期间B组大鼠全部存活，肝组织标本结构清晰，无异常情况；A组大鼠出现明显的病态，肝组织标本均已达到肝纤维化S3以上，多数标本可见小叶被纤维结构分割包围，假小叶形成，干细胞可见脂肪变性； 结论该方法肝损伤明显，死亡率低，周期短，能够成功作为慢性肝损伤，肝纤维化的模型。 关键词肝纤维化，四氯化碳，动物模型 Abstract Objective: Established animal model of hepatic fibrosis in rats induced by carbon tetrachloride. Methods: Take 15 SD rats,180-220g, divided into 10 group A, group B 5 只, A group of model group: 40% CCL4 0.12ml/100g by abdominal injection of a mixture of olive oil, twice a week, a total of eight weeks. Group B was the control group: pure olive oil press 0.12ml/100g abdominal injection twice a week, a total of eight weeks, eight weeks later, all rats were fasted for 12 hours were sacrificed, dissected liver tissue. Pathology: HE staining, MASSON staining, PAS staining. Genetics testing: 1.3.4 collagen Results: During the eight-week test group B rats survived, liver tissue specimens clear structure, no exceptions; significant morbidity A rat liver tissue fibrosis S3 have reached above, the majority of samples are split fiber structure visible lobular surrounded pseudo lobule formation, stem cell degeneration visible fat. Conclusion: This method obviously liver injury mortality, the period is short, to be successful as chronic liver damage, liver fibrosis model. Key words: Fibrosis, carbon tetrachloride, animal model 前言
实验动物学实验报告大鼠,小鼠,小鼠的基本实验操作,大鼠的基本实验操作
实验一小鼠的基本实验操作 一、实验目的:通过实际操作,掌握小鼠的一般操作方法,包括小鼠的抓拿、标记、给药(灌 胃、腹腔注射、皮下、肌肉、尾静脉注射)、取血(眶后静脉丛,摘眼球)、脊椎脱臼法处死、大体解剖。 二、实验动物:昆明小鼠2只(1雌1雄) 三、实验步骤 1、抓取与固定,标记 2、去毛 3、给药:消化道、腹腔注射、尾静脉注射 4、取血:眼眶后静脉丛、尾静脉、眼球摘除法、断头法 5、麻醉:氯胺酮腹腔麻醉 6、处死:脊椎脱臼法 7、解剖: 雄性:睾丸、附睾、输精管、鼠蹊腺(在膀胱下方,胶质状,透明) 雌性:双角子宫、卵巢 肾上腺、胆囊、甲状腺、胃、肝脏、脾、肺、肾、心脏、甲状腺 四、实验结果 1、抓取与固定标记: 抓取:抓小鼠的尾根部 固定:抓住小鼠的尾根部,让小鼠在粗糙平面上爬行,后拉尾跟部,右手的拇 指与食指抓住小鼠两耳及其间的颈部皮肤,小指与无名指将尾巴固定在手掌面。并标记: 2、灌胃法:左手抓取小鼠固定后,右手持特制灌胃针,沿一侧口角进针,紧贴咽后壁,头后仰以便伸直消化道,进针2/3后灌生理盐水0、5ml 3、注射给药: 腹腔注射: 从下腹部的两侧进针 ,进针时针与腹部成45°。进针后稍微晃动针,如无粘滞感则可注射药物 尾静脉注射:一人固定小鼠,另一人用左手中指与拇指将尾拉直,食指托住尾部,在尾动脉位置进针注射0、5ml生理盐水。注射完毕拔出针头,用无菌棉球压迫止血。 4、采血 从眼角内侧0、5cm处进针 眼球摘除法:左手抓取用固定小鼠,右手持弯头镊在眼球根部将眼球摘除,头朝下,眼眶内血迅速流出。 5、麻醉: 0、5%氯胺酮腹腔麻醉:本小鼠重22g,按100mg/kg的药量给药,2分钟麻醉成功 6、处死: 脊椎脱臼法:按住头部,将尾根部向后上方以短促的力量拉即可致死 7、解剖: 雄性:寻找到睾丸、附睾、输精管、鼠蹊腺 雌性:双角子宫、卵巢 3、7、2 肾上腺:米粒大小 胰腺:位于胃下方,类似于脂肪组织,浑浊状 3、7、4 ,胆囊:芝麻大小,浅绿色,半透明,
经方治疗肝纤维化研究进展
经方治疗肝纤维化研究进展 曹春辉1，潘 玲1，冯广帅1，冯全生2 （1.成都中医药大学2011级硕士研究生，四川 成都610075； 2.成都中医药大学基础医学院，四川 成都610075） ［中图分类号］R256.497.57 ［文献标识码］A ［文章编号］1004-2814(2013)11-970-03 ［基金项目］“十二五”国家科技重大专项项目（2012ZX10005001）；国家自然科学基金资助项目（81072718）；四川省科技支撑计划资 助项目（2010SZ0047）。［通讯作者］冯全生 肝纤维化（hepatic fibrosis）是肝脏对慢性损伤的修复反应，其化学本质是合成增加和（或）降解减少所导致的细胞外基质过度沉积，是肝硬化形成的病理阶段［1］。许多慢性肝脏疾病均可引起肝纤维化，常见的有病毒性肝炎、脂肪性肝病、胆汁淤积、自身免疫性肝病、遗传和代谢性肝病、化学或药物性肝损伤等［2］。 肝纤维化属中医“胁痛”、“黄疸”、 “臌胀”、“癥瘕”、“积聚”、“痞证”等范畴。正虚血瘀作为肝纤维化的病理特点成为共识［3］。小柴胡汤、四逆散、大黄虫丸、鳖甲煎丸是目前治疗肝纤维化的常用方剂，综述如下。1 临床研究1.1小柴胡汤 小柴胡汤治疗肝纤维化有疏肝利胆，调畅三焦气机的作用［4］，且小柴胡汤可和表解里，调和肝脾，可达调和阴阳的目的［5］。陈丹丹等［6］将常规护肝治疗的120例慢性乙型肝炎肝纤维化患者随机分为对照组（A 组）、大黄虫丸组（B 组）和小柴胡汤组（C 组），3组均治疗4个月。结果3组肝功能和血清肝纤维化指标均有明显改善，但C 组改善更明显，说明小柴胡汤治疗慢性乙型肝炎肝纤维化疗效确切。江山等［7］对照观察小柴胡汤治疗慢性乙型肝炎肝纤维化40例，亦得出相同结论。邓子德等［8］观察改良小柴胡汤对81例慢性肝病患者血清肝纤维化标志物的影响，发现改良小柴胡汤可使血清透明质酸和Ⅲ型前胶原肽明显下降。1.2四逆散 四逆散有疏肝理气、透达郁阳功效，主治肝脾气滞、阳郁致厥证［9］。张光华等［10］认为四逆散为治疗泄泻肝郁乘脾之方，且治疗肝郁胁痛效果理想，而肝郁是肝纤维化常见的证型。现代多用四逆散加味治疗肝纤维化，用原方的报道罕见。郭晓萍等［11］对照观察复方四逆散（四逆散加三七、黄芪、丹参）治疗慢性肝炎肝纤维化30例，发现复方四逆散可明显降低血清肝纤维化标志物水平，减轻肝纤维化程度，促进肝内增生的纤维组织降解和阻止慢性肝炎肝纤维化的进展，且复方四逆散尚有一定的抑制炎症反应、保护肝细胞的作用。王付等［12］观察四逆散加味治疗肝纤维化的临床疗效，治疗组和对照组均予常规保肝治疗，治疗组加用四逆散加味。结果3个月后治疗组与对照组总有效率分别为96%、81%，两组比较有极显著性差异（P ＜0.01），肝功能、肝纤维化指标及肝脾B 超等指标治疗组较对照组改善更明显（P ＜0.05或P ＜0.01）。孙守才等［13］发现加味四逆散能使肝纤维化过程中升高的PC-Ⅲ、HA、LN 含量明显下降，并能修复肝损害，保护肝细胞，减轻肝纤维化 的程度，改善肝功能。1.3大黄虫丸 大黄虫丸有缓攻瘀血，祛瘀生新作用，用于虚劳而内有干血的治疗［14］。余晶［15］观察大黄虫丸治疗慢性肝炎的有效性和对肝纤维化的影响，治疗组给予大黄虫丸3g、每日3次，对照组予常规保肝治疗。治疗12周后两组肝纤维化及肝功能指标均有不同程度好转，与治疗前比较，治疗组有极显著性差异（P ＜0.01），对照组无显著性差异（P ＞0.05），而两组间比较有极显著性差异（P ＜0.01）。邓丽宁等［16］发现大黄虫丸联合恩替卡韦治疗乙型肝炎肝纤维化疗效优于单用大黄虫丸或单用恩替卡韦治疗。1.4鳖甲煎丸 鳖甲煎丸能行气化瘀，除痰消癥，攻补兼施［8］。且其适应症“癥瘕”为肝纤维化常见临床指征［17］。陈瑞玉等［18］将慢性乙型肝炎118例随机分为治疗组60例和对照组58例，两组均予常规保肝降酶治疗，治疗组加用鳖甲煎丸治疗。检测两组治疗前及治疗6个月后肝功能及肝纤维化指标。结果总有效率治疗组86.7%，对照组60.3%，两组比较有显著性差异（P ＜0.05）。两组治疗后肝功能、肝纤维化各项指标比较有显著性差异（P ＜0.05或P ＜0.01）。谢鸿昌等［19］观察鳖甲煎丸治疗血吸虫病肝纤维化疗效，发现鳖甲煎丸结合西药常规治疗的效果优于单用西药治疗组。还有报道鳖甲煎丸用于肝癌介入治疗后所致的肝纤维化有确切疗效［20］。2 实验研究2.1小柴胡汤 马跃荣等［21］为探讨小柴胡汤对大鼠肝纤维化的作用，预防和治疗性用小柴胡汤，结果显示小柴胡汤可明显防止肝维生素A 丢失和促进其含量恢复，降低肝组织胶原含量，抑制肝前α-1型胶原的基因表达，减少肝脏组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的沉积和α-平滑肌原纤维阳性的伊东细胞的数目。帅峰［22］研究发现小柴胡汤有防治大鼠肝纤维化的作用，可能是通过下调TMP-1mRNA 的表达而发挥作用。有研究显示，小柴胡汤有抑制大鼠的肝星形细胞活化及增殖，使细胞质内维甲类化合物含有的脂肪滴减少，抑制α-SMA 的表达及Ⅰ型胶原产生，活化IFN-γ，降低自由基活性的作用，通过抗氧化反应提高机体的防御能力，发挥对细胞的保护作用［23］。2.2四逆散 党全伟等［24］研究发现，四逆散加味（四逆散加丹参、桃仁、当归等）水煎后浓缩剂可以降低肝纤维化大鼠的死亡率，显著降低肝纤维化大鼠血清的ALT、ALP、
肝纤维化大鼠模型的研究进展_王宪东
世界最新医学信息文摘 2016年 第16卷 第94期39 重视中医药在大肠癌治疗方面的研究，探索新思路，研讨新治法，增加新疗法，提高大肠癌患者生存率。 参考文献 ［１］ 关彤．《金匮要略》理论在大肠癌防治中的运用［Ｊ］．中华中医药学刊，２００７，２５（２）：３７１－３７２． ［２］ 余胜珠，杨光华，陈连生，付相建．补中益气汤联合四神丸加减治疗老年大肠癌术后腹泻１８例［Ｊ］． 中国药业，２０１３，２２（８）：９９－１００．［３］ 王学中，季秀海．健脾补肾活血方改善大肠癌术后化疗毒副作用临床观察［Ｊ］．新中医，２０１５，４７（８）：２１０－２１１．［４］ 薛建章，王瑞敏．中医药联合化疗对大肠癌根治术后复发、转移以及生存期的影响研究［Ｊ］．中国现代药物应用，２０１６，１０（５）：２５９－２６０． ［５］ 黄耀，唐晓玲．熊墨年教授治疗大肠癌的临证经验初探［Ｊ］．江西省２ ０ １ ４年中医、中西医结合肿瘤学术交流会暨中医苗治疗肿瘤新进展培训班，１８４－１８７． ［６］ 李晓琳，冯 妮．复方苦参注射液联合化疗治疗大肠癌术后３１９例患者的疗效分析［Ｊ］．中医中药，２０１５ ，１３（１４）：１９９－２００．［７］ 陈爱飞．清肠消癌方灌肠联合化疗治疗晚期大肠癌５６例观察实用［Ｊ］．中医药杂志，２０１１，２７（１２）：８４２－８４３． ?综述? 肝纤维化大鼠模型的研究进展 王宪东１，石安华２（导师），陈文玲３（通讯作者） （１．云南中医学院 基础医学院，云南 昆明 ６５０５００；２．云南中医学院 继续教育学院，云南 昆明 ６５００００； ３．云南中医学院 临床医学院，云南 昆明 ６５００００） 摘要：肝纤维化动物模型是研究肝纤维化发病机制的重要途径，本文对目前常用的肝纤维化大鼠模型进行阐述，主要综述了四氯化碳、二甲基亚硝胺、猪血清、刀豆蛋白、乙醇及胆管阻塞手术方等造模方法，同时探讨了每一种模型的造模方法和优缺点。 关键词：肝纤维化；动物模型；大鼠；机制 中图分类号：R657.3+1 文献标识码：A DOI：10.3969/j.issn.1671-3141.2016.94.028 0 引言 肝纤维化是肝脏内弥漫性纤维结缔组织沉积，机体对炎症组织损伤修复的反应［１］。肝纤维化是许多慢性肝病的中间环节，阻止延缓肝纤维化的发生发展是治疗的关键。肝纤维化动物模型的建立，既是研究肝纤维化发病机制的前提，也是研究肝纤维化治疗的先决条件。标准的肝纤维化动物模型应该具备如下条件：与人类的病变基本相似；肝纤维化的发生发展具有明显的分期的过程；动物的造模成功率高，死亡率低；造模方法简便，造模成本低廉，具有可重复性等。 1 四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠模型 四氯化碳（ＣＣＬ４）诱导的大鼠肝纤维化模型是应用最广泛的肝纤维化动物模型，其模型在临床上与人类的某些病理学变化极其相似。ＣＣＬ４经过灌胃或者腹腔注射后，通过门静脉流入肝脏，随着血液的循环由汇管区向中央静脉流动。在此过程中，ＣＣＬ４被肝细胞吸收，在肝细胞内经微粒体细胞色素氧化酶Ｐ４５０代谢生成大量的自由基，攻击肝细胞，使肝细胞发生凋亡或坏死。黄月红等［２］对大鼠腹腔注射生理盐水５０％与 ＣＣＬ４ 蓖麻油混合液，剂量为２ｍｌ／ｋｇ，每周两次，共四周，结果显示ＣＣＬ４造模４周早期肝纤维化已形成。ＣＣＬ４诱导的大鼠肝纤维化模型具有操作简便，价格低廉，耗费时间短等优点，但是动物的死亡率较高，而且停止注射一段时间后，肝纤维化有愈合的趋势。 2 二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化动物模型 二甲基亚硝胺（ＤＮＭ）是一种半挥发性的有机化学品，小剂量接触可能致癌，具有较强的肝毒性作用。ＤＭＮ通过肝微粒体代谢其中间产物与核酸、蛋白质等结合导致肝细胞损伤，同时产生的活性甲基化产物使核酸、蛋白质甲基化导致肝坏死［３］。梁晋川等［４］对大鼠腹腔注射ＤＭＮ１０μｌ／ｋｇ，连续３ｄ／周，连续３￣６周；或８ｍｌ／ｋｇ，连续３ｄ／周，连续五周，在注射２￣５周后肝纤维化程度逐渐加重。ＤＭＮ诱导的大鼠肝纤维化模型具有周期短，可重复性好，纤维化的程度高，停止给药后不宜反复等特点，而且ＤＮＭ本身就是致癌物，与临床上肝癌的病变特点有相似之处。但对ＤＭＮ注射的量不易掌控，动物的死亡率较高，ＤＭＮ本身就为一级致癌物，在操作中也要注意个人防护，防止中毒。 3 猪血清诱导的肝纤维化大鼠模型 猪血清是一种异种血清，血清中的白蛋白注入大鼠体内后变为异种抗原 ，诱导机体产生抗体从而形成抗原与抗体的复合物，沉积于门脉区肝血管和间质组织中，通过免疫复合物介导的细胞毒性反应活化枯否氏细胞而导致肝血管和间质组织结构的改变，最终引发肝纤维化。张艳等［５］对大鼠采用腹腔注射猪血清０．５ｍｌ／ｋｇ，每周两次，经观察腹腔注射猪血清四周时，肝纤维化已初步形成，八周时模型就已经复制成功。猪血清诱导的肝纤维化大鼠模型主要与免疫性肝纤维化的形成有关，与人类慢性肝炎中肝纤维化的发生相似。但其复制模型的周期较常长，动物肝脏的损伤常常具有自愈性，动物的死亡率也比较高。4 刀豆蛋白诱导肝纤维化的大鼠模型 刀豆蛋白Ａ（Ｃｏｎ Ａ）是从刀豆中提取的凝集素，其具有沉淀多种糖类、区分某些正常的细胞和肿瘤并促进其分裂等。Ｃｏｎ Ａ可以激活Ｔ细胞从而引起肝脏的损伤。梁洁等［６］经尾静脉注射１２．５ ｍｇ／ｋｇ剂量的Ｃｏｎ Ａ，每周１次，连续注射八周后的大鼠ＡＬＴ、ＡＳＴ指标显著增高，肝脏体积增大，肝脏指数升高，提示肝纤维化形成。Ｃｏｎ Ａ诱导肝纤维化大鼠模型，其病理过程与慢性肝炎的病理过程相似，可以更好的复制人类病毒性肝病的模型。Ｃｏｎ Ａ诱导肝纤维化大鼠模型造模的成功率高，动物死亡率低，简便易行。 5 乙醇诱导的肝纤维化动物模型 酒精中毒是西方国家肝硬化发病的主要原因，在我国，随着生活水平的提高，酒精性肝病的比例也逐渐升高。酒精在进 （下转第３０页） 基金项目：云南省科技厅应用基础面上项目（NO. 2013FZ091） 作者简介：王宪东，男，汉族，籍贯：辽宁省大连市，现在职务或职称：研究生在读，学位：硕士学位，研究方向：中西医结合防治疾病机制研究。
肝纤维化指标
肝纤维化指标 乙肝检查项目有很多，检查项目不同目的也不同，其中肝纤维化检查主要是用于检查乙肝患者是否有肝纤维化的可能，以预防肝硬化的发生，这对了解患者的病情有着积极的意义。相对来说，血清学治标在临床上应用比较广泛，对肝纤维的诊断也比较敏感。 检查指标： 1、PCIII，即III型前胶原，主要反映肝内III型胶原的合成，和血清r-球蛋白水平有关。 2、IV-C，即IV型胶原，主要反映基底膜胶原的更新率，它可以反映出肝纤维化的程度。 3、LN，即层粘连蛋白，主要反映肝纤维化的进展和严重程度。 4、HA，即透明质酸梅，主要反映肝纤维化的进展。 定期进行肝纤维化检查是很重要的，这样可以全面的了解患者的病情和康复情况;如果出现异常情况则需要注意及时的接受科学的治疗，避免病情发生恶化，威胁生命 肝纤维化如何治疗 (1)一般治疗：肝纤维化患者往往症状、体征不明显，多数人只有劳累后的疲乏无力、食欲减退、进食后腹胀，有时有肝区隐痛。因此，应注意劳逸结合，适当减少活动，注意合理营养，戒酒，避免使用或尽可能少用一切对肝脏有害的药物。 (2)心理治疗：肝纤维化患者大部分均存在不同程度的心理障碍，包括忧虑病情、悲观厌世、恐惧，以为自己患有不治之症等，这些消极的心理，对肝纤维化的预后将产生不良影响。因此，必须给予相应的心理治疗，提高患者对肝纤维化的认识，告知患者肝纤维化是可以恢复的，使患者建立起战胜疾病的信心，对于改善疾病的预后有很大帮助。 (3)病因治疗：肝纤维化的进展取决于导致肝损伤的因素是否存在及肝脏病变是否继续活动。如果消除了致病因素、肝脏病变活动停止，则绝大部分肝纤维化会自发恢复。基于这一认识，对肝纤维化的病因学治疗，是一个不可忽视的重要环节。 (4)抗纤维化治疗：药物抗纤维化治疗也是很关键的部分，科学的药物治疗可以阻断肝纤维化的发展，减轻症状。 (5)抗病毒治疗：相当一部分肝纤维化患者是由于乙肝等病毒性肝炎引起来的，科学正规的抗病毒治疗可以有效的防止肝纤维化进一步的发展。