病毒载量检测有助于排除人免疫缺陷 病毒抗体可疑结果中 …

空望塑堕医望盈查！！塑垩ｌ爿星盟鲞箜ｌ坦些ｉ！』旦旦丛型，』些！型！Ｑ竖：！业！：。—盟吐

病毒载量检测有助于排除人免疫缺陷

病毒抗体可疑结果中的非感染者

黑发欣张启云孙伟东张琴叶景荣刘海林卢红艳

【摘要】目的研究病毒载量检测是否能够辅助排除人免疫缺陷病毒（ｈｕｍａｎ?一ｕｎｏｄ胡ｃｉｅｎｃｙｖ血ｓ，ＨＩＶ）抗体可疑样本中的非感染者。方法选择在筛查实验中两种酶联试剂检测结果不一致

（一阴一阳、样本ｓ／ｃＯ比值＜６）、且确认实验检测结果为“ＨＩＶ抗体可疑”的样本】９份测定病毒载量。对这些个体的感染状况进行跟踪随访，观察６个月后抗体进展情况。结果１９份筛查实验结果不一致的抗体可疑样本的病毒载量检测均为阴性，随访复查条带无进展，均排除感染ⅢＶ的可能。结论在抗体筛查实验和确认实验反应均很弱的条件下，病毒载量检测阴性有助于排除非ⅢＶ感染原因造成的抗体检测中的可疑结果。

【关键词】ＨＩＶ；病毒载量；诊断，鉴别

ｖｉｒａｌｌ∞ｄｔ既ｔ咖ｄｕｄｖｅｔ０既ｃｌｕｄｉｌＩｇ珊ｇ础ｖｅｓｕｂｊｅｃｔｓｆｒｏｍ

ｓ１１ｓｐ忧ｔｓｉｎＨⅣａ曲ｂｏｄｙ

ｄ咖ｃ廿。璐

疗肼砌一ｚ汛，ｚ删，ｖＧＱ扛ｍ，ｓ删眈ｉ一南增，删ⅣＧＱ讯，硒胁哥，ｏ增，ⅡＥ，舶川ｎ，工ｕ舶增?弦ｍ删＃蝌Ｃｅ眦ｅｒ如ｒＤ如ｅ础ｅｃｏｎ拍￡ｄ础Ｐ俐ｅ“幽ｎ．＆￡“蝌加００１３，ＣＭ魁

ｃ邮℃５即”击昭Ⅱｕ如０７：舾，Ｆｈ一西ｚ，蜘ｆ：ｋ缸＠扣如ｏｗ

【ＡｂｇｈＨｃｔ】Ｏｂｊｅ删ｖｅＴ０ｓｔｕｄｙｗｈｅｔｈｅｒｐ１聃眦ｖｉ耐１０ａｄｔｅＢｔｉ“ｇｉｓｈｅｌｐｆｕｌｔｏｅｘｃｌｕｄｅ帆ｅｓｆｒｅｅｆ舢Ｈｕｍａｎｉｍｍ枷ｏｄ胡ｃｉｅ唧ｖｉｒｌｌｓ（ＨＩＶ）ｉｒ血ｃｔｉｏｌｌｓ如ｍｇｕｓｐｅｃｔｓｉｎＨＩＶａ１１曲ｏｄｖｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ

１９ＳｐｅｃｉｍｅＩｌｓ．ｗｈｉｃｈｓｈｏｗｅｄｄｉｓｃｏｎｃｏｒｄ眦ｔｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｌＩｅ¨ｏＨⅣＥＩＡｔｅ出ｎｇ（ｓ／ＣＯ＜６）ａｎｄｉｎｄｄｅ皿ｉｍｔｅｄ瑚１】ｌ缸０ｆｗｅ８ｔｅｍｂ１０ｔ（ｗＢ）ｔｅ８ｔ．ｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄＩＶ１ｒａｌ１０ａｄ０ｆｔｈｅｓ口ｅｃｉｍｅｎｓｗ料ｅｄｅｔｅｃｔｅｄＡｓｉｘ—ｍｏｎ山ｆｏⅡ０ｗｕｐｓｕｎ∞ｙｉｎｄｅｔｅｃｔｉｎｇＨⅣａｍｉｂｏｄｖｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄｉｎ山ｅｓｅｓｌｌｂｌｅｃｔｓ．Ｒ怖ｌｌＩｔｓＮ０ｎｅ０ｆｔｈｅｓｅ１９ｃ船ｅｓｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄｔｏｂｅｐｏｓｉｔｉｖｅＨＩＶｖｉｒ丑ｌｌｏａｄｓａｎｄｔｈｅｒｅｗａｓｎｏａｎｖｐｒｏｇ，℃ｓｓｉｎＷＢｂ蚰ｄ吕ｄｅｖｃｌ叩ｍｎｔｄｕ五ｎｇｔｈｅｆｏｌ】删一ｕｐｐｅ五ｄｎｅｐｏｓｓｉｂｄｉ竹ｏｆＨＩＶｌｍｃｎｏｎｃ砌ｄｂｅｅｘｃＩｕｄｅｄＣｏｎｃ№ｉ帅ｗｈｅｎｔｈｅｓｐｅｃｉｍｅｎｓｒｅａｃｔ埘血ｖｅ珂ｌ州ｉｍｅｎｓ时ｉｎｂｏ山ＥＩＡａｎｄＷＢ．ｎｅｇａｔｉｖｅｖｉ脚Ｉｏａｄｒｅｓｕｈｉｓｃｏｒｌｄｕｃｉｖｅｔｏｅ∽ｌｕｄｅｎｅｇａｔｉｖｅｓｕｂｉｅｃｔｓｆ南ｍｓｕ８ｐｅｃｔｓｉｎＨⅣａｎｔｉｂｏｄｖｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓ

【№ｙｗｏｒｄｓ】ＨＩＶ；Ｖｉ“ｌｏ础Ｄｉａ舯８ｉ８，ｄｉ雎ｒｅｎｄａｌ

艾滋病的诊断依赖于人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）抗

体检测，程序为：先筛查实验［一般为酶联免疫吸附

实验（ｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｍａｓｓａｙ，ＥｕｓＡ）］，

后确认实验［免疫印迹实验（ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ，ｗＢ）］。

目前国内ＨＩＶ抗体的确认实验依赖于ｗＢ一种方

法，而ｗＢ实验结果有３种：ＨＩＶ抗体阳性、ＨＩＶ抗

体阴性、ＨＩＶ抗体可疑。

造成抗体可疑样本检出数量和检出率逐年上升

有多种原因，从方法学、试剂及检测人群来看：（１）

ｗＢ方法中硝酸纤维膜上的ＨＩＶ抗原（共有１０种抗

原）与人体血液中的某砦成分是共同抗原，发生交

叉免疫反应而出现ｗＢ条带（对应１０条带）。有研

究证明：由于ｗＢ实验固有的敏感性，即使在无高危

作者单位：１０００１３北京市疾病预防控制小心性病艾滋病防治所

通信作者：黑发欣，ＥＩＤａⅡ：ｈｄ＆＠ｂｊ州＆ｏ蜡论著．

行为的普通人群中，也可以有ｌＯ％～３２％的个体表现为ｗＢ可疑。（２）ＧｅｎｅｈｂＤｉａｇｎｏｓｔｉｃ８ＨＩＶ—ｌ及ＨＩｖ＿２检测试剂盒的敏感性在不断提高，更容易出现ｗＢ条带。（３）随着国家艾滋病防治政策的深入，艾滋病抗体检测人群在不断扩展，从高危人群向普通人群延伸。因为医疗行为和血源筛查”。等原因而检测艾滋病抗体的情况越来越多，这部分人群更容易出现ｗＢ条带。

从检测者自身免疫状况及临床角度分析，抗体可疑结果常见的原因有：（１）ＨＩＶ感染急性期；（２）晚期艾滋病（ＡＩＤｓ）病人；（３）ＨＩＶ疫苗接种；（４）自身免疫病；（５）肾衰竭和血液透析；（６）遗传性胰腺囊肿；（７）多次怀孕或输血；（８）肝病；（９）注射用药；（１０）乙肝、狂犬等疫苗注射，等等“…。其中原因，ＨＩＶ疫苗接种目前局限于参加疫苗实验者；ＨＩＶ

?Ｅ望亟堕医堂盘查！业！生！旦塑塑鲞蔓！翅￡！坐』旦璺＝塑！ｄ：地！！受！塑！：塑ｌ望：№：！

感染急性期、晚期ＡＩＤｓ病人通过核酸检测均能检出血浆中存在大量病毒”’；其他的第４—１０条为临床极为常见的原因，均可造成ｗＢ实验出现条带，干扰Ｈ１ｖ感染的诊断，而通过核酸检测，就可以排除这些原因造成的可疑结果”…。

核酸检测技术中应用最广泛、结果最可靠的就是病毒载量。本研究就测定病毒载量是否有助于排除ＨＩｖ血清学实验出现的不确定结果进行探讨。

材料与方法

所有的实验在北京市疾病预防控制中心艾滋病确认中心实验室内完成。检测程序如下：各ＨＩＶ抗体筛查实验室迭检的样本首先同时用两种酶联试剂筛查，其一为阳性或两者均阳性的样本经ＷＢ方法确认。

１．一般情况：从我实验室的检测数据来看，抗体可疑样本的检出数量和榆出率２００３至２００６年均呈上升趋势：２００３年，共完成３９９人次ＨＩＶ抗体ｗＢ检测，其中４６人份结果可疑，检出率为１１．５％；２００４年，共完成７８７人次抗体ｗＢ检测，其中１２２人份结果可疑，检出率为１５．５％；２００５年，共完成１１２４人次抗体ｗＢ检测，其中１７８人份结果可疑，检出率为１５．８％；２００６年，共完成１６３７人次抗体ｗＢ检测，其中３２３人份结果可疑，检出率为１９．７％。本研究选择在筛查实验中两种酶联试剂检测结果不一致（一阴一阳）、且确认实验检测结果为“ＨＩＶ抗体可疑”的１９份样本作为研究对象，测定病毒载量，并随访复查其ＨＩＶ感染情况。

２．实验方法与试剂：（１）筛查实验采用双抗原夹心一步法，同时用阿克苏ＨＩＶ－ＡｂＥＬＩｓＡ检测试剂盒（荷兰生物梅里埃有限公司）三代（简写为ＥＩＡ－３）和四代（简写为Ｅｎ＿４）两种试剂。（２）确认实验采用ｗＢ法，新加坡ＧｅｎｅＩａｂＤｉａ掣１０ｓｔｉｃｓｍＶ－１及ＨⅣ＿２检测试剂盒。（３）ＨＩＶ—ｌ病毒载量测定采用美国Ｒｏｃｈｅ公司提供的ｃＯＢＡｓＡｍｐｌｉｃｏｒ型全自动核酸扩增与检测系统。所有试剂均在有效期内使用，并严格按试剂盒说明书操作。

３．被检血样：本研究样本人选标准为：（１）在筛查实验中，ＥＩＡ－３和ＥＩＡ＿４结果不一致，而且样本ｓ／ｃＯ比值［注：样本的Ａ值与临界值（ｃｕｔｏｆｆ值）的比值简称为：ｓ／ｃｏ比值］均＜６；（２）在确认实验中，均出现了ｗＢ免疫条带（图１），其检测结果均报告为“ＨＩｖ抗体可疑”；（３）个人信息完整，能完成每３个月１次、共２次的随访和抗体复查工作。

４．仪器：Ｄｓｘ全自动酶标仪（美国Ｔｈｅｍｏｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ），Ａｕ协ｂｌｏｔ叫ｓｔｅＩｎ３６免疫蛋白确认仪（Ｇｅｎｅｌａｂｄｉ８印ｏｓｔｉｃｓ）、生物安全柜（美国ｎｅｍｏｆｏｎｎａ），核酸提纯仪（Ｍａ刚ＡＰｕｒｅＬｃ，美国Ｒｏｃｈｅ公司），核酸扩增与检测仪（ｃ０ＢＡｓＡｍｐｌｉｃｏｒ，美国Ｒｏｃｈｅ公司）。

结果

共有１９份样本人选本研究，其流行病学背景、抗体ＥＩＡ筛查、ｗＢ确认及病毒载量检测结果见表１。可以看出，从带型分析来看，ｐ２４是表达的主要条带。表明１９份样本的抗体反应都比较弱，但由于ＨＩＶ检测的特殊性，检测人员均谨慎地作了条带判断，出具了“ＨＩＶ抗体可疑”的报告。

对１９份样本的病毒载量检测结果表明：它们中无一样本出现阳性（均＜４００拷贝／Ⅱｄ的检出下限），提示并不是处于ＨＩＶ感染的窗口期。７１。按照《全国艾滋病检测技术规范（２００４年版）》的要求，对这些样本均完成了６个月的随访和抗体复查，其ｗＢ带型均无进展，证实并未感染ｍＶ。

综合以上分析可以看出，在抗体筛查实验和确认实验反应均很弱的情况下，病毒载量检测阴性有助于排除ＨＩＶ感染。

带型１为阳性对照，２一“所对应的样本编号参照袁ｌ

图ｌ样本的ｗＢ条带分析

生坚亟堕匿堂苤查；螋§堡！旦翌望鲞篁ｌ姻￡！！！！』些！丛型：』型坚垫堕：迎！壑：盟些！

表ｌ样本的流行病学背景、抗体ＥＩＡ筛查、ｗＢ确认及病毒载量检测结果注：‘表示阴性；“是指带型基本与图】中“条带２”相同；。＜ＬＤＬ（１ｗｄｅｔｅｎｉｏｎｋｖｄ）表示低于检出下限

讨论

对于ＨＩｖ抗体检测出现的可疑样本，按照《全国艾滋病检测技术规范（２００４年版）》的要求，作“３个月后复检”的处理，３个月后复检１次，连续２次，共６个月。其转归有２种可能：仍呈现可疑或阴性，则诊断为ＨＩＶ抗体阴性；带型发生进展，符合ＨＩｖ抗体阳性判断标准，则诊断为ＨＩＶ抗体阳性。后者是真正的窗口期感染者，只占很小的比例；大多数为ＨＩｖ抗体阴十牛者，但由于ｗＢ反应的敏感性而出现非特异性反应”ｏ。有研究证明：即使在无高危行为的普通人群中，也可以有高达３２％的个体表现为ｗＢ可疑…１。

如果依赖于ＨＩｖ抗体检测的ｗＢ确认方法，所产生的大量可疑样本要经历长达６个月的时间才能确定是否感染”…，这给被检者带来了严重的心理负担。一部分人在发生了性乱（见表１，如０５－７６０，０５—１３６３，０５?１８５７，０５—１８７１，０５一“３６，０５—３３２，０５＿４１７，０６－３４９等）、吸毒（见表ｌ，如０５—８９９等）等高危行为后，“ＨＩＶ抗体可疑”的结果让他们以为自己处于ＨＩＶ感染的窗口期，６个月的时间才能排除感染，严重折磨他们的身心健康。一些到医院就医的患者（见表１，如０５．７４８，０５＿９８６，０５—１８４６，０６＿４７３，０６一１６９，（）５－１２４８等）在手术治疗前要做ＨＩＶ抗体检测，由于其自身的疾病或用药原因很容易出现ｗＢ条带，给其临床治疗增添了麻烦。另外，孕妇很容易产生“ＨＩＶ抗体可疑”的结果，如果不能及时有效地诊断是否感染，不但影响孕妇的健康，还会出现“错误终止妊娠”的严重后果。所以，有必要增加检测手段，有效排除抗体可疑样本中的假阳性结果，提前解放被检者的思想压力““。

在ＨⅣ感染机体后，一般要经过２—３个月的窗口期才能产生抗体，因此在ＨＩＶ感染早期无法查到抗体或者抗体可疑。而在这段时间内，苗先会出现病毒血症，因此通过病毒载量检测不但可以发现早期感染，而且有助于排除非感染者”“。从表ｌ可以看出，１９份ＥＩＡ一３和Ｅｊ＿Ａ＿４检测结果不一致（一阴一阳、Ｓ／ｃ０＜６）的样本，确认实验结果为“ＨＩＶ抗体可疑”，病毒载量检测结果均为阴性，判断他们并不是处于ＨＩＶ感染的窗口期，其ｗＢ条带的出现是由于自身免疫病、怀孕、血液透析、肝病、注射用药、疫苗接种等临床常见原因造成的，在提供免费咨询的时候，向其表达了良好的预期，减轻了他们的焦虑”…。在随访和抗体复查工作中，其带型均无进展，证明他们均未感染ＨⅣ。通过研究，笔者认为病毒载量检测可以作为ＨＩＶ抗体检测的有效补充，辅助诊断ＨＩＶ感染”４。１“。尤其是在抗体筛查实验和确认实验反应均很弱的情况下，病毒载量检测阴性可以大大增加诊断未感染ＨＩＶ的效力和信心”…，值得推广应用，以提高艾滋病诊断及服务水平。

参考文献

生垡塑陵医生壁查！尘竖生１旦墓塑鲞箜！塑！！坐』！型丛型：地！型！鲤！：！！！：壑，盟！！

［１］张淑萍．献血标奉中艾滋病抗体检测情况分析－ｆｔ华预防朕

学杂志，２００７，４ｌ：７８

［２］Ｍ山ｎａｋｉｓＥ，ＰａｋｕＭ，Ｒ曲ＪＤ．Ｐｌａ８眦ｖｍｂｄｔｅ８ｄ碍ｍｔｈｅ

ｍａｎａ舭ｍ皿ｔｏｆＨⅣｉｆ出ｃｔｉ鲫（Ｒｅｖｌｅｗ）ＡｍＦ啪Ｐｈｖｓｉｃｉａｎ．

２００１，６３：４８３．４９０，４９５．４９６

［３］Ｄ０ｍ＿１１，ＰａＨａＥＦⅡｌｓｅ－ｐｏｓｉｄｖｅａｎｄｍｄｅｔｅ啪ｉⅡｍｅｈｕｍ蚰

ｉ㈣０ｄｅ６ｄｅｎ。ｙｖｉｒＩｌｓｔｅｍｒｅｓｕｈｓｉ“ｐ陀驴ａｎｔｗｏｎｌｅⅡ（Ｒｅｖｉｃｗ）

Ａ咒ｈＦ啦Ｍｅｄ，２０００，９：９２４＿９２９．

［４］Ｍ面Ⅲ，ｓｕｅｄ０，Ｐｌ姐ａＭ．ｅｔａＬＡｄｖ蛐ｃｅ８ｉｎｔｌ】ｅｄｉａ料。日ｓ蚰ｄ

ｔ弛砒ｆｌ姆Ⅱｔ０ｆ腑ｕ忱ｈｕｍａｎｉ㈣ｏｄｅｆｉｃｉ朋胛ｖｈｓｏⅡ”ｌ（ＨＩｖ－】）

ｉｎ屉ｃｂｏｎ．Ｅ耐盯ｍＩＩｌｆｅｃｃＭｉｃｒ０ＫｏｌＣｌｉｌｌ，２００４，２２：６４３＿６５９

［５］Ｍ订栅止ｂＥ，Ｐ甜ｊｏｕＭ，Ｇｆｅｅｎｂ删ｇｂＴｃ，对止Ｒ印ｏｎｏｆａ脚月ｅ—

ｐｏ出ｉｖｅＨｌＶＩｅｎｒｔｇｌｄｔ矾ｄ血８ｆ毗Ⅲｊ址ｕｓｅｄＨｄｄｉｔ曲ｄｔｅｎＢｉｎ

ｅｍ舢出衅ＨＩＶｓ唧ｓｔ“加日Ａ弛ｈＩｒ岫ｍＭ甜．２０００．１６０：２３８６—２３８８

［６］ｖｉ如ｎｅＦ．ＧｌｂｅｌｌｉＩｌｉＤ，ｓｃｈｉａｖｏｎｅＰ，ｍａＬＨ唧叩Ｔ—ｌｙｍｐｈｏ唧ｋｖｉｍｓ‘ｙｐｅ１（哪ＬＶ－１）ｐｍｖ山ｎ傀ａｎｄｑｕａｎ蛳㈣抵ｅｃ曲ｎ缸ＤＩ恤Ｐｍｖｉ商１０ａｄ｜ｎｍｄｉｖｌｄｕ出呐血ｉｎｄｅｔｅ砌ｉｎｎ∥ｐｏｓｉｔｉｖｃｓｅｒｏｌ０画ｃｄｒｅｍ山ｓＢＭｃ

Ｊｎ№ｔＤ１ｓ，２００６，６：４１

［７］ｓｃｈｏｐｂａｃｈ工ｓＨｃｓａｎｄｔｈｅ１８ｂ啪‘唧ｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆＨＩＶｉⅡｆｅｃｔｉｏｎ：ｆｍｍ‰ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｔｈｅＩⅡＶ‰Ｂｔ㈣ｂｌｏｔｔｏｖｉ硼ｑｕ丑Ｔｌｔ血ｃ鲥ｏｎａｎｄｄｊｎｍａⅡｙｒｅｌｅｖ眦ｔｉｎ出ｖｉｄｕｄ

…ｓｃｈｍｍｄ删ｍｎｅｒＵｍｓｃｈ，２００４，６１：６０３瑚７

［８］黑发欣，张启云，孙伟东，孥Ｈｌｖ抗体筛查实验阳性一确认实验“可疑”和“阴性”样本的对比分析中国艾滋病性病，２００６，１２４＿６

［９】ＭｉｄｔｈｕｎＫ，Ｇ劬ｉｓｏｎＬ，

ｃｌｅ唧【ｓ

ＭＬ，Ｈ出Ｆｒ。ｑｕｅｎｃｖ０ｆ

ｌⅡｄｅｔ盯ⅡＩｉｎａｔｅｗｅ自ｔ—ｈｌｏｔ【ｅｓｂｉｎｈｅａｈｈＹａｄｕｋＢ砒ｌａｗｎ８ｋ如ｒｈ㈣ｉ皿ｕｎｏｄｅｎｄｅｎｃｖⅥｍｓⅢｋｃｄｏｎ．ＴｈｅＮＩＡＩＤＡ】ＤＳＶａｃｃｌｎｅＣ１ｉｎｌｃｄＴ“ｌｓＮｄｔｗｏｒｋＪＩｎｋｔＤｉｓ，１９９０．１６２：

１３７９—１３８２

［１０］ｓ出ａｈｕｄｄｉｎｓｚ，Ｇ∞ｏｐ咖ｎ丁Ｅ，ＭａｒｋｈａｍＰＤ，耽吐ＨＴＬｖ—ＩⅡｌｎ盯“平ｔｏｍ—ｆ弛ｅｓｅｍｎ。ｇｍｉ＂ｐｅ日ｏｎＢＩ血Ｉ∞ｔ，１９８４，２（８４１７－８４１８）：１４１８—１４２０

［１１］ＤａｘＥＭ，ＡｍｏｔｔＡ

Ａｄｖａｎｃ引ｎ

ｌ曲ｏｒ砒。珂ｔｅ出“ｇｒｏｒＨＩｖ

Ｐ“山ｏｋ盯，２００４，３６：５５１ｊ６０

［１２］ｃ㈣ｎｅ五Ｄ，Ｍ铸ｑｕｎａＰＥ，Ｂｏｍ如ＭＭ．ｄｄ．Ｐｒ竹出ｅｎｃｅ《ｌｎｄｅｔｅｎ血Ⅱａ’ｅｈｕ皿趼曲ｕｎｏｄｅ６ｃｉｅｌｌｃｖ

ｖｉｒｕ㈣ｆｅⅢｂｌ毗ｒｅ９ｕｌｔｓ

ｉＩｌｐ唧ａＩｌｔｗｏｍｅｎｍｔ皿ｄｅｄａｔ８Ｐｕｂｌｉｃｈｏｓｐｉ叫ｊｎＰ陀ｓｉｄｅｎｔｅＰｒｌｌｄｅｎｔｅ，Ｂｒ鲋ｉ】＿Ｂ挑ＪＩｒ如ｃｔＤ１日，２００５，９：５０６｛０９

［Ｊ３］尉ｃｈＪＤ，Ｄｊ吐抽鲫】ＢＰ，ｓ睥ｕｊｄｉ口ｇＡ，科吐Ｉｎ枷ｐ聊ｌａｎ彻ｄｍ岫盯幽ｎｅ蜘Ｖ

Ｂｅｒｏｌｏ册他ｓｕｋ１ｎａⅡ．ｎｃ日ｒｃⅡｎｅｄｐ盯ｐｌ】１ａ“啪】Ａｃｑｕｉｒ

Ｉ姗衄ｅＤ商ｃＳｍｄｒＨｕｍＲｅｔｒｏｖｉｒ０１．１９９８，１７：３７６０７９［１４］ｃｏｎｓｔ明ｔｉｎｅＮＴ，ｚｉｎｋＨＨＩＶ把ｓｔｉＩｌｇｔ。ｃｌｌｌｌｄ啊ｅｓａｆｔｅｒ咐ｏｄｅｃａｄｅｓ０ｆｅｖｏｌｕｔＩｏｎ（Ｒｅｄｅｗ）ｌｎｄｌａｎＪＭｅｄＲｅｓ，２００５，１２１：５１９｛３８

【１５．ＭｏｒｅＤ，Ｏ’Ｂｉ叫Ｋ，ｗ“ｒＥｕｔ崎０ｆａｒＩＨ州－１ＲＮＡａｓｇａｙｍ山ｅｄｉ８印删ｒ越ｕｋ幽订ｄｓｙｒＩｄｍｍｅＳｏｕⅡｌＭ甜Ｊ，２０００，９３－１００４．１００６

ｎ６］ｓｈａｌｌＩ陆ｃａｃｙｏｆＨⅣＰｃＲ帆ｈ血叩ｅｓｔｏｄｉａ舯０８ｅＨＩｖＩｎ１１１ｈｎｂｂｏｍｍＨＩＶｉｒ如ｃｔｅｄｍｏｔｈｅ８：ａｎＩｎｄｉ趼口ｅｍｐｅｃｔｉ’ｅＪＡ洲ＰｈｖｓｉｃｌａｎｓＩＩｌｄ拓．２００６．５４：１９７—１９９

（收稿日期：２００７＿０１—１６）

（本文编辑：薛爱华）

全军疾病监测会议暨现场流行病学培训班在京举办

由总后卫生部主办，解放军疾病预防控制所承办的全军

疾病监铷会议暨现场流行病学培训班Ｒ前在京结束，来自四

总部防疫部门、各大单位及武警疾控中心桐关人员共６０余

人参加了会议。开幕式上，总后卫生部防疫局局长主皓大

校、全军疾病预防控制中心副主任王玉民少将出席开幕式，ｆ：

讲话，解放军疾病预防控制所所长黄留玉、政委李庆甫，全军

疾病预防控制中心疾病预防控制办化验室主任钱军等参加

了会议。会上，国家ｎ生部卫生应急办公室主任陈贤义，国消息

家疾病预防控制中心公共卫生监测与信息服务中心主任马

家奇、鹿急办不明原因疾病处置组主任倪大新等分别作了

《周家卫牛应急体系建设和应急Ｔ作的开展》、《军队疾控信

息系统建设有关同题》、《国家公共卫生信息系统建设与发

展》、《突发公共■生事件现场处置及案倒分析》的专题报

告。会上还安排了疫情流行分析，疚病监测工作讨论交流及

军队传染病情报告管理规定的学习等内容。

（郭术红）“２００８年全国代谢综合征研究进展高层研讨会”征文通知

为推动我国代谢综合征及其相关疾病的研究，《中华预防医学杂志》编委会与首都儿科研究所拟于２００８年９月下旬在北京联合举办“伞国代谢综台征研究进展高层研讨会”（具体时间及地点待后续通知）。该研讨会为国家级继续医学教育项目，与会代表可获得国家继续医学教育学分证书。

１．征文范围：肥胖、血脂异常、血压升高、胰岛素抵抗（伴或不伴糖耐异常）、代谢综合征的机制研究。临床诊断与治疗措施、目ｌｉ订的研究状况和将来的研究方向，代谢综合征及其相关疾病的研究、预防与治疗。

２．格式要求：详见《中华预防联学杂志》２００７年出版的杂志。投稿需附３００字左右的中文结构式摘要（包括目的、方法、结果、缔论）。

请将稿件电子版发至ｈｚ＠ｃｍａ，ｏｒｇ．ｃｎ，邮件主题标明“代谢综合征会议投稿”。截止时间：２００８年５月３１日。联系人：吕相征，电话：０１０＿８５１５８３６５。围绕会议主题，将出版《中华预防医学杂志》（增刊），同时评选优秀论文，在《中华预防医学杂志》正刊上刊登，并颁发优秀沧文证书。

本刊编辑部

人类免疫缺陷病毒(I型)HIV-RNA核酸定量检测SOP

人类免疫缺陷病毒（I型）核酸定量检测系统标准操作程序1. 目的：规超敏PCR仪器配置系统及人类免疫缺陷病毒（HIV-I RNA）的检测过程，确保检测结果的准确性和重复性。 2. 检测方法和原理 2.1 检测方法：TaqMan探针荧光定量PCR法。 2.2 检测原理：人类免疫缺陷病毒（I型）核算定量检测试剂盒（PCR-荧光法）采用核酸扩增技术，定量检测人血浆中HIV-I RNA。该方法包括三个主要步骤：（1）样品制备以分离HIV-I RNA；（2）靶RNA的逆转录形成互补DNA（cDNA）；（3）靶（cDNA）的PCR扩增以及裂解的、靶特异性的、双标记寡核苷酸探针的检测。 3. 标本要求 3.1 标本类型：血浆（EDTA抗凝）。 3.2 标本的采集与处理 3.2.1 标本采集量：采集患者静脉血6 mL（EDTA抗凝真空采血管）。 3.2.2 标本处理：标本采集后应在2小时送至实验室，实验室收到标本后在1小时处理标本。 3.2.2.1签收：门诊、住院以及CDC标本签收条码，并做好相关登记工作。 3.2.2.2编号：对标本进行唯一编号，容如下：“年月日6位数字+标本号3位数字”，例如2018年1月1日收到一个HIV-RNA标本即编号为：“180101401”。 3.2.2.3离心：800-1600g,20min离心标本。 3.2.2.4标本保存：血浆在室温（25-30℃）最多存储1天；2-8℃最多存储6天；-20℃—-80℃可存储6周。将待检血浆以2管每管1200 uL量存储于2.0mL戴螺旋盖的无菌聚丙烯管，在管壁编写如3.2.2.2的编号。未检标本放置于专用样本盒中，冻存于-80 ℃冰箱。已检血浆置-80oC冰箱保存2个月，到期后按科室有关程序作废弃标本处理。 4.仪器和试剂 4.2 试剂：（配套封闭试剂） 4.2.1 试剂盒（包含核酸提取试剂、质控品及阳性定量参考品组分、PCR 检测试剂组分）保存于2-8℃环境下，有效期22个月。 4.2.3试剂开瓶后，在室温条件下放置时间不应超过72小时；2-8℃条件下不超过30天。 4.2.4 主要组成成份：

人类免疫缺陷病毒(HIV)的发现

人类免疫缺陷病毒(HIV)的发现 ——2008年诺贝尔生理学或医学奖的思考 谢亚南(3100000304) 摘要 2008年诺贝尔生理学或医学奖授给了弗朗索瓦丝·巴尔‐西诺西、吕克·蒙塔尼等3人，其中弗朗索瓦丝·巴尔‐西诺西、吕克·蒙塔尼的获奖原因是发现人类免疫缺陷病毒（HIV）。本文介绍了他们的获奖成果及其意义，并重点介绍了笔者对该项成果的思考。 关键词 诺贝尔生理学或医学奖 人类免疫缺陷病毒 艾滋病防治 人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）是一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒，属反转录病毒的一种。普遍认为，人类免疫缺陷病毒的感染导致艾滋病，艾滋病是后天性细胞免疫功能出现缺陷而导致严重随机感染及/或继发肿瘤并致命的一种疾病。艾滋病自1981年在美国被识别并发展为全球大流行至2003年底，已累计导致两千余万人死亡，死亡率几乎达到100%，2008年感染人数已达3340万人。人类免疫缺陷病毒的发现对艾滋病传播的防控以及治疗有着重大的意义。弗朗索瓦丝·巴尔‐西诺西和吕克·蒙塔尼因为人类免疫缺陷病毒的发现获得了2008年诺贝尔生理学或医学奖。 1人类免疫缺陷病毒的发现 1981年，美国加利福尼亚州和纽约市先后报道了一种新的医学综合症[1]，这种新的医学综合症也就是我们现在所说的艾滋病。但其早期的病人都是男同性恋者，因此艾滋病曾一度被认为仅仅是一种性传播疾病，并被称作“同性恋病（gay disease）”，没有得到当时里根保守政府的足够重视[2]。 后来发现血友病人通过输血竟也能够感染这种疾病，立刻引起了科学界的极大重视。美国疾病控制与预防中心（CDC）立即成立了一个特别工作组对该疾病进行调查与研究，确定了这是一种新的疾病，并根据其特征首先将其命名为获得性免疫缺陷综合症(Acquired Immunodeficiency Syndrome)，简称为艾滋病(AIDS)。 这种疾病传播很快，在美国首次被发现后很快在欧洲也有发现。很多科学家都开始研究这种疾病的病因。1983年，法国巴斯德研究所肿瘤疾病研究室主任蒙塔尼

人类免疫缺陷病毒抗体检测试剂胶体金法技术参数

人类免疫缺陷病毒抗体检测试剂（胶体金法）技术参数 1. 试剂盒：50人份/盒； 2. 灵敏度：100%； 3. 特异性：99.0%以上； 4. 测定时间：≤30分钟； 5. 检测标本：全血/血清/血浆； 6. 产品有效期：不少于16个月； 7. 认证及注册：通过世界卫生组织WHO和联合国艾滋病规划署、美国FDA、中国国家食品药品监督管理局等认证及注册； 8. 质量评估：连续三年参加中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心参比实验室组织的全国艾滋病病毒（HIV）抗体诊断试剂临床质量评估，连续三年灵敏度不低于100%、特异性不低于99.0%； 9. 其他：按用户计划分批供货和结算，计划收到后7个工作日内交货。 梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒（胶体金法）技术参数 1. 试剂盒：50人份/盒； 2. 灵敏度：99.5%以上； 3. 特异性：99.0%以上； 4. 测定时间：≤20分钟； 5. 检测标本：全血/血清/血浆；

6. 产品有效期：不少于18个月； 7. 认证及注册：通过美国FDA、中国国家食品药品监督管理局等认证及注册； 8. 其他：按用户计划分批供货和结算，计划收到后7个工作日内交货。 促凝采血管技术参数 1、容积：5ml； 2、材质：塑料管； 3、管内添加促凝剂，促凝剂均匀喷涂于采血管内壁上，使血液可快速凝固，析出高纯净度的血清； 4、胶塞类型：安全帽胶塞（塑料盖帽），管内真空、无菌； 5、采血管标贴：刻度、双码、条形码一体化标贴； 6、其他：按用户计划分批供货和结算，计划收到后7个工作日内交货。 抗凝采血管技术参数 1、容积：5ml； 2、材质：塑料管； 3、抗凝剂：EDTAK2； 4、胶塞类型：安全帽胶塞（塑料盖帽），管内真空，无菌； 5、采血管标贴：刻度、双码、条形码一体化标贴； 6、其他：按用户计划分批供货和结算，计划收到后7个工作日内交货。 采血针技术参数 1、规格：7号；

人类免疫缺陷病毒检验

人类免疫缺陷病毒检验 发表时间：2009-08-03T11:16:23.700Z 来源：《中外健康文摘》2009年第19期供稿作者：陈虹 (黑河市人民医院黑龙江黑河 164300) [导读] 人类免疫缺陷病毒检验 人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency vi-rus，HIY）又称艾滋病毒，是获得性免疫缺陷综合征即艾滋病（acpuired immunodeficiency syndrome，AIDS）的病原体，属逆转录病毒科（retroviridae）的慢病毒（lentivinrs）亚科，形态为典型的D病毒，主要通过性传播途径、血液传播途径和母婴传播途径传播。HIV有HIV-1和HIV-2两种类型，目前在世界广泛流行的是HIV-1型。HIV基因有高度的变异性，目前在全球流行的HIV-1毒株已出现3个组，即M组、O组和N组，其中M组又分为A到J十个基因型。HIV-2是逆转录病毒中的另 一个病毒，也可引起人患上艾滋病，但症状多较HIV-1引起的为轻，HIV-2主要在西非国家流行，其与HIV-1在血清学上有一定的交叉反应。 艾滋病是以机会感染及局部肿瘤为特点的致死性传染病。截止2000年底，我国累计报告HIV/AIDS22517例（AIDS880例），死亡496例，估计实际感染人数远超过已发现的感染者人数，加强艾滋病的预防与控制是我国以及全世界面临的一个紧迫的问题。 1 样本采集 1.1血清（浆）样本 1.1.1抗原、抗体检测静脉采血，血液样品应在l2h内做到：①送到初筛实验室；②分离出血清；③装入一干净试管内，盖上试管盖； ④按标准编号贴上标签。 分离出的血清应立即进行筛查实验。若因故不能立即检测，应将血清放置－20℃低温保存；无条件时亦可放置4℃，但不得超过3d。检测后的血清应于－20℃或更低温保存，以用于确认实验。 1.1.2核酸检测使用EDTA抗凝血浆标本，抗凝后6h内分离血浆；如使用血清标本，则需在2h内分离血清，标本的保存应在－70℃下，并避免反复冻融。 1.2全血标本 全血标本主要用于提取基因组核酸和病毒核酸，静脉取血后可于4℃下短期保存，如用于提取病毒RNA，则应在取血后尽快提取。 1.3淋巴细胞 淋巴细胞主要用于提取核酸，可从抗凝全血制备，主要有两种方法：一是使用淋巴细胞分离液分离制备；二是使用红细胞裂解液，裂解全血中的红细胞，经生理盐水数次洗涤，即可得到淋巴细胞。淋巴细胞如暂不提取核酸，可保存于－70℃下。 1.4样品采集的注意事项 1.4.1用于ELISA法检测的血浆或血清样本勿用叠氮化钠防腐。 1.4.2本应无微生物污染，避免溶血。 1.4.3核酸检测用的血液标本严禁使用肝素抗凝，因其对PCR扩增有抑制，且无法在核酸提取过程中去除。 2 检验方法 HIV感染最直接的检查方法是从受检者的血液中分离培养HIV或检测HIV特异性抗原、HiV核酸。但HIV分离培养操作繁琐，费用较高，技术难度大，实验场地要求严格（P3实验室）；HIV抗原检测的敏感性不如抗体检测；核酸检测需要较高的实验操作水平和实验室条件。因而，目前最常用的HIV检测技术是抗体检测。 HIV感染后的检测存在“窗口期”，“窗口期”是指从HIV感染后到用现有方法能检出HIV抗原、抗体和核酸前的一段时间。个体差异、检测方法的种类和试剂的敏感性是影响“窗口期”长短的主要因素。每种检测都要等到“窗口期”之后再进行，否则会得到假阴性结果。 2.1 HIV分离培养 用脐血或已建立的T淋巴细胞，经PHA刺激后培养，3～5d后接种标本，每周加强PHA刺激。如有病毒生长可观察到细胞病变，用电镜观察病毒颗粒，也可用ELISA或免疫荧光法检查病毒抗原，或测定细胞培养上清液中逆转录酶的活性来判断标本中是否存在感染性HIV。病毒分离培养检测HIV的“窗口期”约为7d左右，对于HIV感染的早期诊断有重要意义。 2.2 HIV抗原检测 P24抗原是人体感染HIV后最早出现于血液中的病毒成分，通常在感染后2周即开始出现，因此，P24抗原检测可以在感染者血清抗体阳转前即作出早期报告，大约可以使“窗口期”缩短一周。P24抗原检测在新生儿感染的早期诊断和AIDS病程进展的监测上有重要作用。但应该注意到，P24抗原作为HIV-1的感染指标的作用是有限的，因为在HIV感染者血液中检测到P24抗原的比例不高，因而，P24抗原检测目前只是HIV辅助诊断手段。 2.3 HIV抗体检测 HIV抗体检测是卫生部认可的HIV感染诊断方法，由于HIV检测中任何漏诊、误诊都可能导致极为严重的后果和法律纠纷，为了防止检测工作可能出现的问题，卫生部专门制定了《全国艾滋病检测工作规范》，对开展HIV抗体检测的单位、人员、场地和检测试剂等制定了严格的标准。 HIV抗体检测分为初筛试验和确认试验两个阶段，初筛试验阳性的血清一定要进行确认试验，确认试验为阳性的才能肯定为被HIV感染。HIV初筛试验要求敏感性接近100％，不能出现假阴性，对特异性要求不太严格。初筛试验由取得资格的HIV抗体初筛实验室或确认实验室进行，初筛呈阳性反应的标本不得向受检者公布其结果。

人类免疫缺陷病毒抗体诊断指导书(胶体金)

××××××医院 Policy No.：Effective Date：January 01,2006 Revision No.：00 文件编号：实施日期：2006年01月01日修订号：00 Generated department：Total Pages：Three 编制部门：检验科总页数：3 人类免疫缺陷病毒抗体诊断指导书（胶体金法） Prepared by : 编制 --------------------------------------------- Name: 姓名： Position: 职务: Date: December 16,2005 日期：2006年01月01日 Audited by: 审核 --------------------------------------------- Name: 姓名： Position: 职务： Date: December 16,2005 日期：2006年01月01日 Approved by 批准 --------------------------------------------- Name: 姓名： Position: 职务： Date: December 16,2005 日期：2006年01月01日 TOTAL COPIES: TWO 共 2 份 COPY TO: 分发至：检验科、质控科。

文件编号：页码：2/2 文件标题：人类免疫缺陷病毒抗体诊断指导书实施日期：2006.01.01 1.0 目的 规范人类免疫缺陷病毒抗体检测（胶体金法）的操作标准，确保检测结果的准确性。 2.0 范围 适用于本医院实验室对待检标本中人类免疫缺陷病毒抗体（胶体金法）的检测。 3.0 参考 3.1《人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（胶体金法）使用说明书》 4.0 程序 4.1采集静脉全血或血浆样本。必须在无菌条件下操作，并避免样品溶血。如果标本在收集后7天内检测， 样品须放在2－8℃保存，如果大于7天须冷冻保存。 4.2将待测标本从储存条件下取出并编号，如有低温保存则应平衡至室温。 4.3将胶体金试剂从包装盒中取出，打开铝箔包装袋，平置于台面上。 4.4用微量加样器取50μL样本血清，加到试剂的加样处。 4.5加样后，阳性标本可在1～30分钟内检出，超过30分钟将对实验结果的观察造成影响，建议30分钟最终观察并记录实验结果。 5.0 结果判断： 5.1阳性：试剂在检测区和对照区位置各出现一条紫红色带，如果检测区的紫红色条带隐约可见，建议对 该样本重复测试，并使用其他方法确认。 5.2阴性：试剂只在对照区位置出现一条紫红色条带。 5.3失效：对照区未出现紫红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已变质损坏或者是样本中的抗体含 量过高。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并将待测样本稀释后用新的试剂重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。 5.4注意：测试区内的紫红色条带可呈现颜色深浅的现象。但是，在规定的观察时间内，不论该色带颜色 深浅，即使只有非常弱的色带也应判定为阳性结果。 6.0注意事项 6.1实验环境应保持一定湿度、避风。避免在过高温度下进行实验。 6.2试剂从包装中取出后，应尽快进行实验，避免放置于空气中过长时间，导致受潮。 6.3试剂可在室温下保存，谨访受潮。低温下保存的试剂应平衡至室温方可使用。 7.0 附件 7.1实验结果记录单

人类免疫缺陷病毒抗体

湖南省职业病防治院 作业指导书 标题：人类免疫缺陷病毒抗体（酶联免疫法） 修改记录

湖南省职业病防治院作业指导书文件编号： 标题：人类免疫缺陷病毒抗体（酶联免疫法）版号：第 1 版页码1/2 1、目的 用于临床人类免疫缺陷病毒感染的辅助诊断。 2、范围 适用于献血员筛查与临床病例。 3、职责 检测人员按照本规程进行检测操作。 4、原理 采用纯化基因工程人类免疫缺陷病毒“1”型和“2”型（HIV-1/HIV-2）抗原包被的微孔板和酶标记的HIV-1/HIV-2抗原及其他试剂组成，应用双抗原夹心法原理检测人血清或血浆中的HIV-1和HIV-2抗体。 5、样本要求 仅限于检测人体血清或血浆。 常规方法采集。 血清：采血后，室温放置1-2小时，待血液凝固，再于3000转/分钟离心15分钟。 血浆：采血后，样品与抗凝剂反复轻摇混匀，再3000转/分钟离心15分钟。 如果样品没有在8小时内测定，应将其保存于2℃-8℃。如果样品不能在7天内测定，应将血清或血浆与血细胞分离， -20℃保存，避免反复冻融。 6．分析系统 分析仪器：Thermo Mk3型酶标仪，检测波长450nm，参考波长630nm。 37℃恒温箱。 振荡器用于样品、试剂的混匀。 微量加样枪。 试剂准备： 试剂盒于冰箱保存，使用前应取出置37℃。 取试剂盒内洗涤液用蒸馏水作25倍稀释，置洗瓶中备用。 质控试剂：-20℃保存，溶解后随试剂一起冷藏，每天随样品一起检测并保存质控结果，每月一次质控小结，失控要有记录及纠正的结果。 7、分析步骤 样品编号：从6号开始编号。

设阴性对照3孔，Anti-HIV-1阳性对照1孔，Anti-HIV-2阳性对照1孔，分别加入阴、阳对照各50微升。 每个标本待测孔加入标本血清50微升，充分混匀，封板，置37℃孵育60分钟。 手工洗板：弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置30~60秒，甩干，重复6次后拍干。 每孔加酶标工作液50微升，充分混匀，封板，置37℃孵育30分钟。 手工洗板：弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置30~60秒，甩干，重复6次后拍干。 每孔加显色剂A液，显色剂B液各50微升，充分混匀，封板，置37℃孵育10分钟。 每孔加入终止液50微升，混匀。 选取相应的程序号，用酶标仪双波长比色。 8、计算 Cutoff值=阴性对照平均A值+。 9、参照区间 阴性对照A值应≤ Anti-HIV-1阳性对照A值应≥ Anti-HIV-2阳性对照A值应≥ 10.临床意义 样品A值≥临界值为HIV抗体阳性 样品A值＜临界值为HIV抗体阴性 11.注意事项 从冷藏环境中取出试剂盒应置37℃平衡30分钟后方可使用，余者应按前述方法保存和使用。在平衡试剂的同时，待测样品需置室温平衡30分钟后再行测试。 使用前试剂应摇匀。 须确保样品加样量准确，如果加样量不准确，可能会导致错误的结果，建议使用微量移液器加所有组份；用滴瓶滴加时，应先弃去1~2滴，垂直匀速地滴加。避免在加样过程中，将液体接触到或溅到微孔边缘上。 封片不能重复使用。 结果判断须在反应终止后10分钟内完成。 不同批号的试剂不可混用。 本试剂盒应视为有传染物质，请按传染病实验室检查规程处理。 12.支持性文件 全国临床检验操作规程（第3版）

人类免疫缺陷病毒抗体检测(乳胶法)

人类免疫缺陷病毒（HIV1/2）抗体检测试剂盒（乳胶法） 说明书 【检测原理】 人类免疫缺陷病毒（HIV1/2）抗体检测盒（乳胶法）采用了高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析乳胶标记技术原理。试剂上含有事先固定在膜上检测区（T）的重组HIV-1和HIV-2型抗原。检测时，将样本滴入试剂的加样孔中，样本中的HIV-1，2型抗体与预包被在膜上的重组抗原--乳胶颗粒标记结合物反应，然后，混合物在毛细效应下向上层析，在检测区（T）与固定在膜上的重组HIV-1和HIV-2型抗原反应。如果样本中含有HIV抗体，在检测区内（T）会出现红色条带，检测区内出现红色线条表明是阳性结果。如果在检测区内（T）没有出现红色条带，则样本中不含有HIV抗体，表明的是阴性结果。无论抗HIV抗体是否存在于样本中，混合物都会继续向上层析至质控区(C),出现一条红色的条带。质控区内（c）所显示的红色条带是判定层析过程中是否正常的标准，同时也是检测试剂的内控标准。 【主要组成成份】 本试剂主要原材料包括：包被用重组HIV1型、包被用重组HIV2型抗原、标记用重组HIV1型、标记用重组HIV2型抗原、链霉亲和素结合物、生物素、乳胶颗粒、硝酸纤维塑膜、聚酯纤维塑膜。 检测需要已提供的材料 注意：不同批号试剂中各组份不可互相使用，以免产生错误结果。 检测时另需准备样本收集容器和计时器。 【样本要求】 静脉采血后离心获得血清/血浆样本，不同的抗凝剂如柠檬酸钠，肝素钠，EDTA，草酸钠，枸橼酸钠的血浆标本均可。在2—8℃条件下可保存一周，长期保存需-20℃冷冻，以避免反复冻融。发臭、溶血等异常样本请勿使用。 【检验方法】 在进行检验前必须先完整阅读使用说明书，并将试剂、样本、和缓冲液恢复至室温（20℃-30℃）。 1.从原包装铝箔袋中取出试剂。 2.将试剂放在干净的平台上，用一次性塑料管吸取1滴血清/血浆（25μl）于加样孔（S） 中，随后加入1滴缓冲液（约40μl），开始计时。 3.等待红色条带的出现，检测结果应在15~20分钟判读，20分钟后判读结果无效。

人类免疫缺陷病毒检测试剂临床研究讲解

附件3 人类免疫缺陷病毒检测试剂临床研究 注册技术审查指导原则 一、前言 人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，HIV）检测试剂是指利用免疫学及分子生物学等方法原理对人血清、血浆或其他体液中的特定的HIV生物学标记物，包括HIV 1型（HIV-1 ）p24抗原、HIV抗体、HIV核酸、HIV基因耐药突变等进行定量或定性分析的试剂。据《体外诊断试剂注册管理办法（试行）》（国食药监械〔2007〕229号）的分类原则，该类产品作为第三类体外诊断试剂（In Vitro Diagnostic,IVD）管理，属高风险管理产品。本指导原则制定的主要目的是让申请人明确在注册申报过程中对本类试剂在临床研究方面重点关注内容，同时规范注册申请人对于注册申报资料中有关临床研究资料的要求。 本指导原则是对HIV检测试剂临床研究的一般性要求，申请人应依据具体产品的特性对临床研究资料的内容进行充实和细化。申请人还应依据具体产品的特性确定其中的具体内容是否适用，若不适用，需具体阐述其理由及相应的科学依据。 本指导原则只是针对HIV检测试剂的特点，强调需重点考虑的问题，临床试验的基本要求应符合《体外诊断试剂临床研究技术指导原则》（国食药监械〔2007〕240号）的规定，包括临床试验协议、方案、报告的撰写等。 本指导原则不包括行政审批要求，不作为法规强制执行。本指导原则是申请人和技术审评人员的指导文件，如果有能够满足适合的法规要

求的其他方法，也可以采用，但是需要提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定，随着法规和标准的不断完善、科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将进行适时的调整。 二、适用范围 HIV生物学标记物是指机体在感染HIV后，在不同的感染阶段出现的生物学标记物，包括：HIV抗体、HIV-1p24抗原、HIV核酸、HIV基因耐药突变等。 就方法学而言，本指导原则主要适用于利用免疫印迹法、化学发光法、时间分辨免疫荧光法和微粒子酶联免疫法、胶体金法等免疫学方法对HIV抗原和/或抗体进行定量或定性检测的体外诊断试剂，以及应用核酸检测的方法（如实时荧光聚合酶链反应等）对HIV 核酸（核糖核酸/脱氧核糖核酸）以及基因耐药突变等进行检测和分析的体外诊断试剂，适用于首次注册产品及申请许可事项变更的产品。 本指导原则不适用于国家法定血源筛查用HIV检测试剂。 三、基本要求 （一）临床试验方案及方案中应关注的问题 临床试验实施前，研究人员应从流行病学、统计学、临床医学、检验医学等多方面考虑，设计科学合理的临床研究方案。各临床研究机构的方案设置应基本一致，且保证在整个临床试验过程中遵循预定的方案实施，不可随意改动。整个试验过程应在临床研究机构的实验室内并由本实验室的技术人员操作完成，申报单位的技术人员除进行必要的技术指导外，不得随意干涉实验进程，尤其是数据收集过程。各临床研究单

人免疫缺陷病毒(HIV)与糖基化

5生物工程进展62001,Vol.21,No.1 专 论 人免疫缺陷病毒(HIV)与糖基化 张树政 (中国科学院微生物所 北京 100080) 图1 HIV 模式图1) 自从1981年在美国发现艾滋病以来,世界各地发现艾滋病病例或带病毒者与日俱增。为了医治这种给人类造成巨大危害的病症,全世界范围内很多研究机构的研究人员都在研究开发更为有效的抗H IV 药剂。多年来已经积累了不少有价值的关于人免疫缺陷病毒的信息资料。但至今仍未设计出一种长效抗御这一迅速变异的逆转录病毒。以HIV 基因逆转录酶和宿主蛋白酶抑制剂和化学药物相配合的制剂(或称/鸡尾酒疗法0)治疗艾滋病虽然能够缓解病情,但最终不能彻底防御其抗药性的发展。尽管在多剂并用时,在H IV 感染者血液中检测不到H IV,但仍有H IV 隐藏在感染者淋巴结内。因此必须开发在不同部位起作用的新型抗HIV 药物。采用糖生物工程技术,特别是对糖链在H IV 感染过程中所起的作用,以及以糖链为靶抑制H IV 或艾滋病发病的研究,近年来取得了飞速的发展。HIV 的结构 图中外层为H IV 的糖蛋白,包括包膜糖蛋白 gpl20和跨膜糖蛋白gp41。病毒内核主要含有两种蛋白亚基,pl8和p24,还有RNA 基因及数个分子的逆转录酶。 HIV 糖蛋白gpl20的结构 H IV 的糖蛋白gpl20和gp41是病毒基因组上env 基因编码的共同前体gpl60经宿主蛋白酶降解为位于膜表面并能结合受体的包膜糖蛋白gpl20和跨膜糖蛋白gp41。gpl20分子中有24个N 2糖链的结合部位,其分子中约一半为糖链。糖蛋白的多肽部分通常折叠成为致密的一团,而糖链则展开在蛋白质的表面上。可以想像gpl20分子是由糖链包起来的,也可以说表面带有这种gpl20分子HIV 自身也是由糖链覆盖着的(图2)2)。HIV 包膜糖蛋白gpl20示意图中示出含有高甘露糖及一些复合或杂交型糖基化部位,其中二硫键连接区域用罗马数码标出,高变区(hyper 2variable regions)则以方块中V12V5标示。 N 2糖链的合成过程及相应的酶抑制剂3) N 2寡糖生物合成包括从长萜醇载体上将Glc 3Man 9GlcNac 2与翻译同步转移到蛋白质具有Asn 2X 2Ser/T hr 序列位点的天门冬酰胺残基上形成G 2寡糖。其末端的葡萄糖残基很快被内质网上的A 2葡萄糖苷酶切除。A 2葡萄糖苷酶有两个明显不同的活力;葡萄糖苷酶?切除未端A 21,2位连接的葡萄糖残基;葡萄糖苷酶ò水解遗留下来的两个A 21,3位连接的葡萄糖残基,进一步经位于内质网和高尔基体常驻糖基转移酶作用,使后续加工成复合型和杂交型结构。 已经证实,有些化合物可抑制纯化的葡萄糖苷酶。在这些抑制剂存在下,复合型寡糖的合成被阻止。但是在许多系统中显示出,当用这类化合物处理细胞时,某些复合型寡糖的合成仍然生成。这里面应有一定原因。原因中包括抑制剂在内质网中未能达到一定的高浓度,以及内切甘露糖苷酶活力的 4

英科新创人类免疫缺陷病毒抗体检测试剂盒(胶体金法)操作规程

人类免疫缺陷病毒抗体检测试剂盒（胶体金法）操作规程 英科新创（厦门） 操作步骤 1.将待测标本从存储条件下取出，平衡至室温并编号 2.将所需数量的测试试剂从包装盒取出平衡至室温 3.用微量加样器取60μl待检血清/血浆标本滴加到试剂加样处 4.加样后，阳性标本可在1-30分钟内检出，超过30分钟将对实验 结果造成影 响。因此建议30分钟内最终观察并记录实验结果 结果判读 1.阳性结果：测试条在测试区和对照区位置各出现一条紫红色条带。 如果检测区的紫红色条带隐约可见，建议对实验重复检测，并使用 其他方法确认 2.阴性结果：测试条只在对照区位置出现一条紫红色条带 3.无效结果：对照区未出现紫红色条带，表明不正确的操作或试剂 已 变质损坏或是试剂中抗体含量过高。在此情况下，应再次仔细阅读 说明书，并用新的试剂条重新测试。如果问题依然存在，应立即停 止使用此批号产品，并与当地供应商联系 注意事项 1.本试剂用于体外诊断，仅用于人全血、血清或血浆样品，其它体 液样本可能 得不到准确结果 2.本试剂用于定性检测人全血、血清或血浆样品中HIV1/2型抗体，对于所有使 用本试剂条检测的结果必须进一步验证

3.样品的加样建议用微量加样器准确加入 4.实验环境应保持一定湿度、避风，避免在过高温度下进行试验 5.测试条从包装取出后，应尽快实验，避免放置于空气中过长时间，导致受潮 6.对于那些含有感染源和怀疑含有感染源的物质应有合适的生物安 全保证程序 下列有关注意事项： （1）带手套处理样品和试剂 （2）不要用嘴吸样 （3）在处理样本时不能吸烟、吃食物、喝饮料、美容和处理隐形 眼镜 （4）用消毒剂对溅出的样品进行消毒 （5）使用后的试剂和样本等废弃物应按国家相关规定妥善处理 （6）超出有效期的试剂不能使用 7.检测线颜色深浅的程度与样品中抗体滴度没有一定的必然联系 8.任何一种测试都不能绝对保证样品中没有低浓度抗体存在，任何 时候都不能 排除暴露和感染的可能 9.对于下列物质在所给出的浓度下对测试结果不造成影响：胆固醇200mg/ml；血红蛋白≤178g/L；甘油三酯≤200mg/ml；胆红素≤ 1.6mg/100ml

人类免疫缺陷病毒抗体检测胶体金法

人类免疫缺陷病毒抗体检测胶体金法 试剂厂家：英科新创（厦门）科技有限公司 检测原理：采用胶体金免疫技术和层析原理，定性检测人全血，血清或血浆样本中的HIV1／2型抗体。检测阳性样本时，样本中HIV抗体与胶体金标记抗原（大肠杆菌中表达）结合形成复合物，由于层析作用复合物没纸条向前移动，经过检测线时与预包被的重组HIV-Ag（大肠杆菌表达）结合形成金标记重组“Au-HIV（1+2）-Ag-HIV-Ab-HIV（1+2）-Ag”夹心物而凝聚显色，游离的胶体金标记重组Au-HIV（1+2）-Ag 则在对照线处与鼠抗HIV单克隆抗体结合而富集显色。阴性标本则仅在对照线处显色，30分钟内观察结果即可。 检测方法：一，血清血浆样本： 将待测标本从储存条件下取出，平衡至室温并编号。 将所需数量的测试试剂从包装盒中取出平衡至室温，打开铝箔包装袋，平置于台面上。 用微量加样器取60Ul血清腻味血浆样本，滴加至试剂的加样处。 加样后，阳性标本可在1-30分钟内检出，经过试验确证，反应时间（从加样后计算起）超过30分钟将对实验结果的观察造成影响，因此，建议30分钟内最终观察并记录实验结

果。 二，全血样本： 1将待测标本从储存条件下取出，平衡至室温并编号。 2将所需数量的测试试剂从包装盒中取出平衡至室温，打开铝箔包装袋，平置于台面上。 3用微量加样器取60Ul全血样本，或用试剂盒内所配塑料滴管吸取样本，垂直滴加两滴于试剂的加样处，随即加一滴金标全血样本稀释液。 4加样后，阳性标本可在1-30分钟内检出。经过试验确证，反应时间（从加样后算起）超过30分钟将对实验结果的观察造成影响，因此，建议30分钟内最终观察并记录实验结果。 检验结果的解释 阳性：测试条／卡在检测区和对照区位置各出现一条紫红色条带。如果检测区的紫红色条带隐约可见，建议对该样本重复试验，并使用其他方法确认。 阴性：测试条／卡在对照区位置出现一条紫红色条带。 失效：对照区示出现紫红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已变质损坏或者是样本中抗体的含量过高。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并将待测样本稀释后用新的测试条／卡重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用 止批 号产品，并与当地供应商联系。

人类免疫缺陷病毒抗体检测

人类免疫缺陷病毒抗体检测（ELISA） 1. 原理 在微孔条上预包被纯化基因工程人类免疫缺陷病毒I型和II型（HIV-1/HIV-2）抗原（合成肽或基因重组蛋白），采用双抗原夹心法检测血清或血浆中人类免疫缺陷病毒抗体。样品加入包被抗原反应孔，在随后的温育过程中，若样品中含特异抗体，则该抗体与包被抗原形成抗原抗体复合物被吸附到固相，再加入酶标记的HIV-1/HIV-2抗原，最终形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，洗涤除去未结合的游离酶，加入显色剂后显色。 2. 标本采集 2.1 采集前病人准备：受检者应空腹 2.2 标本种类：血清或血浆 2.3 标本要求：采集病人静脉血2ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。 3. 标本储存：2-8°C保存不应超过48小时，-20°C不应超过3个月，-70°C 长期保存，应避免反复冻融。 4. 标本运输：密封，室温运输。 5. 标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。 6. 试剂 6.1 试剂名称：人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒 6.2 试剂生产厂家：北京万泰生物工程有限公司。 6.3 包装规格：96Test/Kit 6.4 试剂盒组成：包被反应板，HIV酶标记物，阳性对照血清，阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，密封袋。 6.5 试剂储存条件及有效期：2-8°C避光保存，有效期6个月。 7. 仪器设备 7.1 仪器名称：自动酶标仪 7.2 仪器厂家：Rayto 7.3 仪器型号：RT-6100 8. 操作步骤 8.1 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25°C），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。 8.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。 8.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。 8.4 加样：用加样器在微孔反应条板孔中加入样品100l；空白孔不加任何液体；阴性对照孔和阳性对照孔，每孔分别加入阴阳对照各100l，标好位置。对照应在所有标本加完以后再加，以保证阈值准确性。 8.5 温育（一）：充分混匀，加上封板膜，置37℃温育60分钟。 8.6 洗涤（一）：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。 8.7 加酶：分别在每孔中加入酶标记物100l，轻拍混匀。 8.8 温育（二）：充分混匀，加上封板膜，置37℃温育30分钟。 8.9 洗涤（二）：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。 8.10 显色：每孔加入底物A、B各50l，轻拍混匀，置37℃暗处30分钟。

人类免疫缺陷病毒(HIV12)抗体诊断试剂(胶体金法)

人类免疫缺陷病毒（HIV1+2）抗体诊断试剂（胶体金法）Diagnostic kit for Antibody to Human lmmunode ficiency Virus （Colloidal Gold） [ 产品名称] 通用名称：人类免疫缺陷病毒（HIV1+2）抗体诊断试剂(胶体金法) 英文名字：Diagnostic kit for Antibody to Human lmmunode ficiency Virus （Colloidal Gold） [包装规格] 单支/袋，25/盒；10支/袋，5袋/盒；25支/袋，8袋/盒。 [临床意义] 检测人血清或血浆中的HIV-1、HIV-2特异性抗体。用于无偿献血的现场筛查，及临床术前的筛查。 [检验原理] 应用免疫层析式双抗原夹心法原理。 [主要组成成分] 由纯化的基因重组HIV-1和HIV-2区段抗原，免抗HIV抗体，固相硝酸纤维膜，胶体金标记的基因重组HIV-1和HIV-2区段抗原及其他试剂组成。 [储存条件及有效期] 4℃-30℃避光干燥处密封储存，切勿冰冻。有效期24个月。[样本要求] 采取静脉血1-2ml于干净容器中分离得到血清或血浆样本。 如不及时测试可置4℃冰箱贮存，超过3天应加入0.1%硫柳汞防腐，测试前注意恢复至室温。不可使用冻干样本。 [使用方法] 1、被检样本和测试卡等在室温平衡。 2、沿缺口撕开铝箔袋，取出测试卡。 3、将80微升血清或血浆样本（用吸管滴加2-3滴）加入测试卡加样孔，平置于温室，20 分钟内观察显示结果。 [检验结果的解释] 阳性：在检测区上、下两端先后出现反应线，即对照线（C）和检测线（T）。 阴性：仅测试区上端有一条反应线，下端无反应线出现。 无效：测试区上、下两端均无红色反应线出现或仅在检测去（T）出现一条红色反应线，表明实验失败或试剂失效。请用新测试卡重试。如果问题仍然存在，请停止使用本批产品，并于当地经销商联系。 [检验方法局限性] 1、本品仅用于人血清或血浆样本中的HIV抗体检查，其检测结果必须结合其他对于医师有 用的临床信息。在所有的临床和试验进行评价后，只有医师才可以给出确切的临床诊断结论。

HIV人类免疫缺陷病毒危害评估

人类免疫缺陷病毒（HIV）病毒特异性地侵犯CD4+T淋巴细胞，造成机体细胞免疫受损。临床上初始表现为无症状病毒感染者，继续发展为持续性全身淋巴结肿大综合征和艾滋病综合征，最后并发各种严重机会性感染和恶性肿瘤，成为AIDS，病死率极高。到目前为上，还没有找到一种治愈该病的方法。 1．病原学 1．1 HIV是单链RNA毒，属逆转录毒科，慢病毒属，包括HIV－1型和HIV －2型，两者均能引起起AIDS（但多数AIDS乃由HIV－1型引起，HIV既有嗜林巴细胞性又有嗜神经性，主要感染CD4+T淋巴细胞，也能感染单核巨细胞，B细胞和小神经胶质细胞、骨髓干细胞等。 1．2 HIV的抵抗力 HIV对外界抵抗力较弱，对热敏感，56°30分钟能灭活。25％度以上的酒精即能灭活病毒，70%效果最好；5%～8%甲醛及有机氯溶液等均能灭活病毒。但对0.1%甲醛溶液、紫外线和γ射线不敏感。在实验室条件下，HIV在干燥环境中很快失去活性，在厚血块中可存活十几天，在干燥的玻璃上可维持几天。美国CDC证明干燥环境中的HIV浓度在几小时内降低90％-99％。 2. 流行病学 2．1传染源：病人和无症状病毒携带者是主要的传染源，前者的传染性最强后者在流行病学上意义更大，病毒主要存在于血液、精液、子宫和阴道分泌物中；乳汁、唾液、泪水等均能检出病毒。 2．2传播途径：世界公认的传播途径有三种，即性传播、血液传播及母婴传播。 2．3人群易感性：各个年龄均可感染，但同性恋和性乱交者，静脉毒瘾者，血友病患者，接受血、血制品或器官移植者，父母是HIV感染者的儿童，受感染的危险性比较大，属高危人群，发病年龄主要为40岁以下的青壮年。 3．临床表现 本病潜伏期较长，HIV-1侵入机体后2～10年左右可以发展为AIDS，HIV-2所需的时间更长。HIV感染人体后分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四期，HIV对CD4+T淋巴细胞有特殊的亲嗜性，发病与HIV含量、毒力、变异及CD4+T淋巴细胞数量功能和机体免疫状况有关。临床上可表现为原因不名的免疫缺陷，往往以淋巴结肿大、厌食、慢性腹満、体重减轻、发热、乏力等全身症状起病，逐渐发展至各种机会性感染、继发性肿瘤、精神神经障碍而死亡。 4．实验模式及危害因素分析 4．1HIV抗体和抗原检测：最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血。HIV的主要传播途径就是血液传播，，在进行采样和检测等过程中，都可能接触到血液，因此对于未知样品的检测具有潜在危险性；而对于直接接触HIV感染者或艾滋病病人血液和体液时，实验危险性较高，更应注意个人防护。 4．2 HIV核酸检测：样品有全血、血浆、组织和其他分泌物，有时还包括生物制品，此类标本具有潜在危险性，对于HIV感染者或艾滋病病人的样品，实验危险性较高。 4．3HIV病毒培养：培物中含大量的HIV，对于实验人员具有相当高的传染危险性。应该在P3实验室进行操作，同时格做好个人防护工作。 5．安全保障措施 5．1个人防护 5．1．1高标准的个人保健对于减少感染的危险性很重要。皮肤受损、生病

人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)

人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法） 人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus HIV）是导致人类获得性免疫缺陷综合征（Acquired Immunodeficiency Syndrome AIDS）的病原体。HIV通过血液传播、性传播和母婴传播三种途径在人群中流行和扩散。1981年美国报道第一例艾滋病病例，至2009年年底，全球有存活的HIV感染者大约3330万例。我国1985年报告第一例艾滋病传入病例，截止2009年12月，估计有存活的HIV感染者74万人。 HIV进入人体以后，感染和破坏人体的CD4+T淋巴细胞，快速复制繁殖，病毒数量迅速增加。在感染的初期，病毒载量的水平很高，传染的危险大，急性期以后，病毒载量下降到相对稳定的定点（Set point）水平，在长达5～10年的临床潜伏期内，病毒载量和CD4+T淋巴细胞数量都保持相对稳定，这实际上是一种动态平衡，身体内每天有上亿个病毒被清除，也有相同数量的病毒产生，同样也有大约上亿个CD4+T淋巴细胞被破坏，有相同数量的细胞再生。到了病程晚期，免疫细胞被耗竭，病毒大量复制，病毒载量升高，免疫功能崩溃，病人因发生各种机会性感染或肿瘤而死亡。 人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒是艾滋病防治的有力工具，广泛应用于献血员筛选、临床诊断和流行病学调查。1985年3月美国FDA批准了第一种人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒，这是艾滋病防治进程中重要的里程碑、开启了科学防治艾滋病的时代。 一、人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus HIV） HIV在分类上属于逆转录病毒科、慢病毒属、灵长类慢病毒群。病毒呈球形颗粒，被来自宿主细胞膜的脂质双层膜包裹，基因组结构大致是5’LTR，gag，pro，pol，env，3’LTR，5’端有帽状（cap）结构，3’端有多聚腺苷酸Poly (A) 序列，如果去掉Poly (A)，基因组全长9100bp。HIV基因及其编码的蛋白至少有9种，可以大致分为三组：主要结构基因和结构蛋白（Gag、Pol和Env）、调节基因和调节蛋白（Tat 和Rev）、附属基因和附属蛋白（Vpu、Vpr、Vif和Nef）。 HIV是迄今为止发现的人类最大遗传变异的病原体，可以分为HIV-1型和

人免疫缺陷病毒抗体测定

人免疫缺陷病毒抗体测定 1．样品的接收、登记和处理 1.1 采血3-4ml，收集到促凝管中（可采用常规用量的肝素或枸橼酸钠抗凝） 1.2检查样品的状况，有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。如果污染过重或者认为样品不能被接受，要将样品情况立即通知送样人。 1.3仔细核对样本与送检单,然后编号 1.4样品为全血（抗凝），用3.000r/min离心15min，血清/血浆备用。打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。样品处理时若内容物有可能溅出，则应在生物安全柜中戴手套进行。同时应戴口罩、防护眼镜，以防皮肤或粘膜污染。 1.5 每天上午进行样品的检测。节假日（短期1周内）进行检测的样品存放于2～8℃，需长期存放的样品，应置于-20℃以下。需保存的血清在采集、保存过程中应注意无菌操作。 2.检测方法和步骤 2.1检测方法（一） 酶联免疫吸附试验（ELISA） 2.1.1 基本原理 以珠海丽珠试剂股份有限公司的ELISA（双抗原夹心法）为例。

采用双抗原夹心ELISA方法检测血清或血浆中人类免疫缺陷病毒HIV（1+2）型抗体。在微孔条中预包被高纯度HIV（1+2）抗原，通过检品中抗HIV抗体桥连作用，与后面加入的HRP 标记抗原结合，HRP对底物TMB作用显色。通过酶标仪检测吸光度（OD值）从而判定检品中是否存在抗HIV抗体。 2.1.2检测步骤 实验准备：试验开始前将试剂和样品放置在室温(18～23℃)，平衡30分钟后使用。 配液：将浓缩洗液用蒸馏水或去离子水20倍稀释备用 备好试剂盒、待检样品和外部对照质控血清后，按试剂盒说明书以及质控和安全防护要求进行筛查检测。 准备实验原始记录表 2.1.3 实验操作 2.1. 3.1装好所需使用数目的孔条,每孔均加入50μl样品稀释液。留一孔作空白对照,暂不加任何液体。另设3个阴性对照孔，1个HIV-1阳性对照孔，若需要可再设1个HIV-2阳性对照孔。 2.1. 3.2每孔加入50μl待检样品及对照（对照要后加），加样时吹打混匀则效果更佳。在反应板上加盖封板膜,振荡混匀,置37±2℃温箱或水浴锅中，孵育40min。 2.1. 3.3置洗板机上洗涤6遍, 每次静置30～60S, 洗完后