电泳常见问题及处理方法

电泳常见问题及处理方法

电泳是一种常用于分离生物分子的实验技术，但在实验过程中常常会遇到一些问题。以下是电泳实验中常见问题及相应的处理方法：

**1. ** 电流不稳定或电流为零：

- **可能原因：** 电源故障、电极接触不良、电极泄露或电极材料老化。

- **处理方法：**

-检查电源设备，确保其正常工作。

-检查电极接触情况，确保良好接触。

-替换老化的电极材料。

**2. ** 样品移动过快或过慢：

- **可能原因：** 缓冲液浓度、电场强度、电泳时间等因素影响。

- **处理方法：**

-调整缓冲液的浓度，确保适当的离子浓度。

-调整电场强度。

-控制电泳时间，确保合适的分离时间。

**3. ** 电泳带模糊或扩散：

- **可能原因：** 样品浓度过高、电场强度过大、电极材料老化等。

- **处理方法：**

-减少样品浓度。

-降低电场强度。

-更新电极材料。

**4. ** 电泳带畸变：

- **可能原因：** 缓冲液PH值不合适、电极材料污染、样品准备不当等。

- **处理方法：**

-调整缓冲液PH值。

-清理电极材料。

-重新准备样品。

**5. ** 电泳槽泄露：

- **可能原因：** 电泳槽密封不良、槽体老化等。

- **处理方法：**

-检查槽体密封情况。

-更换老化的槽体。

**6. ** 电泳带粘在电极上：

- **可能原因：** 电极表面污染、电场强度过大等。

- **处理方法：**

-清理电极表面。

-降低电场强度。

**7. ** 电泳结束后凝胶上有色斑：

- **可能原因：** 染色不充分、凝胶中存在异物等。

- **处理方法：**

-加强染色过程。

-小心操作，避免在凝胶中引入异物。

**8. ** 凝胶破裂：

- **可能原因：** 凝胶制备不当、电场强度过大等。

- **处理方法：**

-仔细制备凝胶，确保无气泡。

-降低电场强度。

电泳实验中出现问题时，及时采取正确的处理方法是确保实验成功的关键。通过检查设备、调整实验条件和注意样品制备，可以有效避免或解决电泳过程中的常见问题。

电泳常见问题及解决方法

3. 1 滑橇底部油泥污染导致电泳缩孔及其解决办法在车身经手工预清理完后，进行洪流冲洗前，需要将车身承载在滑橇上并锁紧，再装挂在自行葫芦系统的吊架上，然后依次通过电泳涂装各工艺槽。当滑橇第一次通过电泳槽时，滑橇表面会泳涂上一层电泳漆膜，形成绝缘层。而当滑橇承载车身再一次通过电泳槽时，滑橇表面因有绝缘层的存在而不会泳涂上新的电泳漆膜，但会一次次附上一层新的电泳浮漆。由于电泳后的水洗工艺主要是针对车身，而位于车身底部的滑橇不可能被冲洗干净。因此，当附有电泳浮漆的滑橇在电泳后工位(如电泳烤房、电泳烤后存放)的输送链上前行时，滑橇底部的电泳浮漆和已泳涂上的电泳漆膜与输送链上的滚子不断接触、摩擦，就会粘附滚子上的润滑油，形成油泥。由于这些油泥位于滑橇底部，并且有很强的粘附性，即使在通过脱脂和水洗等工艺槽时，也不能完全被清除干净，从而污染磷化槽液、电泳槽液及电泳烤房。油泥污染引起的直接后果就是造成电泳漆膜缩孔。经观察发现，在每次对电泳滑橇通过的输送链加油润滑后，电泳漆膜缩孔明显增加。电泳漆膜缩孔不仅加大了电泳底漆打磨的工作量，也明显影响整车涂膜的质量和抗腐蚀性能。 人工擦除滑橇底部油泥，以避免电泳漆膜缩孔是一种解决办法，但费时费力；在预脱脂槽里增加喷嘴，利用高压脱脂液对滑橇底部油泥进行冲洗也是一种办法，但这样做需要对预脱脂槽进行较大的改造，并且还会加快预脱脂槽液的更新周期，从而造成成本上升；第3 种办法是在车身吊装进槽前的滚床间安装油泥清洗机。清洗机带有一对呈滚轮状的毛刷，通过电机减速驱动毛刷对滑橇底部油泥进行刷洗。该方法简便可行。为加强对油泥的清洗效果，利用该方法并采用3 套清洗机，通过其6 个呈滚轮状、用以粘附滚轮下面清洗液的毛刷对在清洗机上面通过的滑橇底部的油泥进行连续滚刷。清洗机安装调试完毕，经过2 周的试运行后发现，清洗机工作稳定可靠，清洗效果明显提高。 滑橇底部油泥在经过3 次连续的滚刷后基本被清除，再经过后续的洪流冲洗、脱脂、水洗等流程，油泥被清除得更为彻底，不再对磷化槽液、电泳槽液形成污染，从而避免了因油泥而造成的车身电泳漆膜缩孔的问题。虽然，滑橇通过电泳槽时，滑橇表面仍然会粘附新的电泳浮漆，而且滑橇底部的电泳浮漆在接触电泳烤房输送链上的润滑油后，也会形成油泥，但由于烤房输送链使用的是高温润滑油，不易挥发，故在烤房里形成的油泥，不会导致车身电泳漆膜缩孔。这样车身电泳漆膜缩孔问题便得到有效的控制。 3. 2 车身顶篷吸顶及其消除 在车身所有的部位中，车身顶篷的强度和刚性都是最弱的。笔者所在公司生产的车型为轻型越野车，尽管在顶篷内设计了加强筋，但比起车身其它部位，其强度和刚性还是稍差。于是，在电泳涂装过程中，当车身从浸入的各工艺槽中上升出槽时，受槽液压力影响，会在顶篷处造成局部凹陷，这就是通常所说的吸顶。轻微的吸顶经修复后，对车身质量不会造成太大的影响；如果吸顶严重，则会造成顶篷报废。在所生产的两款车型中，有一款是PAJERO 系列车型(CK 车)，车身外形长4 650 mm、宽1 780 mm、高1 450 mm，其顶篷长、宽尺寸也分别为2 400 mm 和1 200 mm。由于车身顶篷面积大，导致CK 车车身在电泳涂装线上试生产时，每台车都发生吸顶现象，而未开天窗的车身发生吸顶的情况尤为严重。因此，吸顶现象成为该车型生产亟待解决的问题。 起初，解决的措施是加大车身后仰出槽的倾斜角度，同时在不影响生产节拍的情况下，适当降低车身上升出槽时的速度，以减轻槽液对车顶的压力。采取上述措施后，取得了初步的成效，即：开有天窗的CK车在通过前处理电泳生产线的各工艺槽后，只有很少比例的车发生轻微的吸顶，而且稍加修复即可消除，对车身质量不会造成影响；但未开天窗的CK 车在通过前处理电泳生产线的各工艺槽后，仍然发生一定程度的吸顶。 研究发现，未开天窗的CK 车车身顶篷面积大，强度和刚性差，因此容易发生吸顶。此时，若继续加大车

SDS-PAGE(聚丙烯凝胶电泳)常见问题及解决方案.

1.配胶缓冲液系统对电泳的影响? 在SDS-PAGE不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统,浓缩胶是pH6.7,分离胶pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中,其pH 环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而CL离子却很高,两者之间形成导电性较低的区带,蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比,这一区带便形成了较高的电压剃度,压着蛋白质分子聚集到一起,浓缩为一狭窄的区带。当样品进入分离胶后,由于胶中pH的增加,呈碱性,甘氨酸大量解离,泳动速率增加,直接紧随氯离子之后,同时由于分离胶孔径的缩小,在电场的作用下,蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。 所以,pH对整个反应体系的影响是至关重要的,实验中在排除其他因素之后仍不能很好解决问题的情况,应首要考虑该因素。 2.样品如何处理? 根据样品分离目的不同,主要有三种处理方法:还原SDS处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理。 1还原SDS处理:在上样buffer中加入SDS和DTT(或Beta巯基乙醇后,蛋白质构象被解离,电荷被中和,形成SDS与蛋白相结合的分子,在电泳中,只根据分子量来分离。一般电泳均按这种方式处理,样品稀释适当浓度,加入上样Buffer,离心,沸水煮5min,再离心加样。 2带有烷基化作用的还原SDS处理:碘乙酸胺的烷基化作用可以很好的并经久牢固的保护SH基团,得到较窄的谱带;另碘乙酸胺可捕集过量的DTT,而防止银染时的纹理现象。100ul样品缓冲液中10ul20%的碘乙酸胺,并在室温保温30min。 3非还原SDS处理:生理体液、血清、尿素等样品,一般只用1%SDS沸水中煮3min,未加还原剂,因而蛋白折叠未被破坏,不可作为测定分子量来使用。 3.SDS-PAGE电泳凝胶中各主要成分的作用?

电泳常见问题及处理方法

电泳常见问题及处理方法 1.缩孔 这类缺陷在湿的漆膜上看不见，当烘干后漆膜表面出现直径通常为0.5-3.0mm漏底微孔、不漏底的火山口状的凹陷，称为陷穴、凹洼，露底者为缩孔，中间有颗粒但不刮手的称为“鱼眼”。由于电泳漆湿膜中或表面有尘埃、油渍或与电泳涂料不相容的粒子，成为陷穴中心，因而产生涂膜缺陷。很多情况下这类缺陷还与被涂物的材质有关，如金属底材上存在微裂纹和微孔等。 原因1:外来油污污染电泳漆膜，油污附着在工件表面，使电泳漆成膜受到影响。这种原因引起缩孔的几率较大。 解决方法:可检查输送机构、挂具,防止油滴污染漆膜。从电泳设备制造安装开始就要避免上述物质污染，每一种新零件投入电泳前最好进行相关检验，防止受油、硅油、蜡、脂性碳化物、胶水等污染物对工件，电泳设备及电泳槽液的污染。 原因2:前处理除油不干净，造成润湿性不良，使电泳漆烘干后漆膜有缩孔。 解决方法:加强前处理清洗。 原因3:槽液有油污、异物混入，影响电泳漆膜外观。 解决方法:用吸油纸吸去油污，清除槽液内异物，同时避免异物混入，保持电泳槽液清洁 原因4:加漆时有电泳漆没搅拌均匀，使槽液无完全熟化，引起漆膜不良。 解决方法:确保加入的电泳漆搅拌均匀，加强槽液循环，使槽液完全熟化 原因5:电泳后水洗中含油分或烘干室内不洁净，循环风含油分，使油分附著在漆膜上面烘干后有缩孔。 解决方法:水洗经常更换,烤箱经常清理.烤箱链轨用油可选用耐高温,不会高温挥发为最佳 2.针孔 工件上有露底针状小孔，称为针孔，它与缩孔的区别是孔径小，中心无异物，且四周无漆膜堆积凹起。由漆膜再溶解而引起的针孔，称为再溶解针孔；由电泳过程中产生的气体、湿膜脱泡不良而产生的针孔，称为气体针孔； (1)湿膜针孔:工件未进行烘烤,在空气中凉干,可看到的针孔 原因1: 电泳电压过高，电流冲击反应过剧，产生气泡过多，或升压速度过快。 解决方法:适当降低电压,加长软启动时间 原因2:溶剂含量偏低。 解决方法:添加溶剂，每次添加不能超过1%

电泳常见问题及处理方法

电泳常见问题及处理方法 电泳是一种常用于分离生物分子的实验技术，但在实验过程中常常会遇到一些问题。以下是电泳实验中常见问题及相应的处理方法： **1. ** 电流不稳定或电流为零： - **可能原因：** 电源故障、电极接触不良、电极泄露或电极材料老化。 - **处理方法：** -检查电源设备，确保其正常工作。 -检查电极接触情况，确保良好接触。 -替换老化的电极材料。 **2. ** 样品移动过快或过慢： - **可能原因：** 缓冲液浓度、电场强度、电泳时间等因素影响。 - **处理方法：** -调整缓冲液的浓度，确保适当的离子浓度。 -调整电场强度。 -控制电泳时间，确保合适的分离时间。 **3. ** 电泳带模糊或扩散： - **可能原因：** 样品浓度过高、电场强度过大、电极材料老化等。 - **处理方法：** -减少样品浓度。 -降低电场强度。 -更新电极材料。 **4. ** 电泳带畸变： - **可能原因：** 缓冲液PH值不合适、电极材料污染、样品准备不当等。 - **处理方法：** -调整缓冲液PH值。 -清理电极材料。 -重新准备样品。 **5. ** 电泳槽泄露： - **可能原因：** 电泳槽密封不良、槽体老化等。 - **处理方法：** -检查槽体密封情况。 -更换老化的槽体。 **6. ** 电泳带粘在电极上： - **可能原因：** 电极表面污染、电场强度过大等。 - **处理方法：** -清理电极表面。

-降低电场强度。 **7. ** 电泳结束后凝胶上有色斑： - **可能原因：** 染色不充分、凝胶中存在异物等。 - **处理方法：** -加强染色过程。 -小心操作，避免在凝胶中引入异物。 **8. ** 凝胶破裂： - **可能原因：** 凝胶制备不当、电场强度过大等。 - **处理方法：** -仔细制备凝胶，确保无气泡。 -降低电场强度。 电泳实验中出现问题时，及时采取正确的处理方法是确保实验成功的关键。通过检查设备、调整实验条件和注意样品制备，可以有效避免或解决电泳过程中的常见问题。

电泳缺陷分析及对策

电泳缺陷分析及对策 虽然电泳涂装是大量操作变量的动态平衡，操作人员不时地对电泳涂装工艺的控制参数进行监控和调整，就可以获得良好的外观、膜厚和物理特性。因此，当检测出漆膜缺陷时，就应对它进行一系列准确、可靠的分析，然后及时提出解决办法。电泳施工中最常见的漆膜缺陷有涂膜粗糙、缩孔、针孔、花斑、涂膜过薄、涂膜过厚、水痕、工件内表面涂膜过薄等，造成这些缺陷的原因不是单一的因素，下面简单介绍一下漆膜缺陷的原因及防止办法。 （一）漆膜粗糙（肉眼可见小颗粒） 1.产生原因 ①槽液颜基比过高。 ②进入电泳槽的被涂工件及挂具不干净。 ③电泳槽由于过滤不良，使槽液杂质离子过多，电导率偏高。 ④槽液中助溶剂含量偏低。 2.防治方法 ①与供应商协商，提供低颜基比涂料，以便调整槽液。 ②加强前处理液的过滤，降低磷化液的残渣含量，严格控制磷化后冲洗的水质，以及浮在工件表面上的磷化残渣；定时清洗挂具疏松污垢等。 ③加强电泳槽液的过滤。定期清洗、更换过滤装置，严格控制槽液的PH值和碱性物质的带入，防止树脂析出。 ④定期检测槽液溶剂的含量，若偏低应及时补加溶剂。以确保槽液的稳定。 （二）缩孔、陷穴 1.产生原因 ①槽液颜基比失调，颜料含量低。 ②被涂工件前处理不良或清洗后磷化膜上面落上油污、尘埃等。 ③槽液中混入油污、尘埃、油飘浮在槽液面或乳化在槽液中。 ④电泳后冲洗液混入油污。 ⑤外来油污污染电泳涂膜。 ⑥烘干室内不干净、循环风内含油。

2.防止方法 ①调整槽液的颜基比，补加色浆提高颜料含量。 ②加强被涂工件脱脂工序的管理，确保磷化膜不被二次污染。 ③在槽液循环系统安装除油过滤装，同时检查油污染来源，以便彻底清除油法。 ④加强后冲洗液水质的检测，定期清洗更换过滤袋，以确保后冲洗水过滤质量。 ⑤保持涂装环境洁净，清除对涂装有害的物质，尤其是含有机硅物质源（如电缆、拉延油、防锈油、防焊渣粘结剂、密封胶等），涂装车间及相关车间的设备及工艺介质所使用的原材料和辅助材料都不能含有酯酮。 ⑥按工艺规定，定期清扫烘干室，保持烘干室和循环热风的清洁。 （三）针孔 1.产生的原因 ①槽液中杂质离子含量过高，施工电压偏高，电解反应加剧，被涂工件表面产生气体等。 ②槽液温度偏低，或搅拌不充分，助溶剂含量偏低。 ③电泳涂装后被涂工件出槽清洗不及时，湿涂膜产生再溶解现象。 ④工件带电入槽、槽液液面流速低、有气泡堆积，泡沫随着被涂工件表面上形成针孔。 2.防止方法 ①加强控制槽液中的杂质离子的浓度，定期检测槽液各种离子浓度，若超过工艺规定值，应排放UF液、补加纯水，降低杂质离子含量，根据槽液的工艺参数调整涂装电压。 ②控制槽液温度在工艺规定范围，加强槽液搅拌。 ③被涂工件离开槽液应立即用UF液或纯水进行冲洗。时间最好不超过1min。 ④为消除带电入槽易产生针孔，一定要控制好槽液表面流速介于0.2~0.25m/s，以防止泡沫堆积，控制好运输链速度不应低于工艺要求。 （四）花斑 1.产生原因 ①工件表面处理不好，磷化膜不均匀。 ②磷化后的水质不好，水洗不充分。

电泳常见问题及解决方法

阴极电泳常见问题及解决方法 、颗粒 (1)现象 在烘干后的电泳涂膜表面上有手感粗糙的、较硬的粒子，或肉眼可见的细小痱子，往往被涂物的水平面较垂直面严重，这种漆膜病态称为颗粒。 (2)产生原因 ①CED槽液PH值偏高，碱性物质混入，造成槽液不稳定，树脂析出或凝聚。 ②槽内有沉淀死角”和裸露金属处。 ③电泳后清洗液脏、含漆量过高，过滤不良。 ④进入的被涂物面及吊具不洁，磷化后水洗不良。 ⑤在烘干过程中落上颗粒状污物。 ⑥涂装环境脏。 ⑦补给涂料或树脂溶解不良，有颗粒。 (3)防治方法 ①将CED槽液的PH值控制在下限，严禁带入碱性物质，加强过滤，加速槽液的更新。 ②消除易沉淀的死角”和产生沉积涂膜的裸露金属件。 ③加强过滤，推荐采用精度为25 am的过滤元件，养活泡沫。 ④确保被涂面清洁，不应有磷化沉渣，防止二次污染。 ⑤清理烘干室和空气过滤器。 ⑥保持涂装环境清洁，检查并消除空气的尘埃源。

⑦确保新补涂料溶解良好，色浆细度在标准范围内。 (1)现象 在湿的电泳涂膜上看不见，当烘干后漆膜表面出现火山口状的凹坑，直径通常为 0.5~3.0mm,不露底的称为陷穴、凹洼、露底的称为缩孔，中间有颗粒的称为鱼眼”产生这一弊病的主要原因是电泳湿涂膜中或表面有尘埃，油污与电泳涂料不相溶的粒子，成为陷穴中心，使烘干初期的湿漆膜流展能力不均衡，而产生涂膜缺陷。 (2)产生原因 ①被涂物前处理脱脂不良或清洗后又落上油污、尘埃。 ②槽液中混入油污，漂浮在液面或乳化在槽液中。 ③电泳后冲洗液混入油污。 ④烘干室内不净，循环风内含油分。 ⑤槽液的颜基比失调，颜料含量低的易产生缩孔。 ⑥涂装环境脏、空气可能含有油雾、漆雾，含有机硅物质等污染被涂物或湿涂膜。 ⑦补给涂料有缩孔或其中树脂溶解不良，中和不好。 (3)防治方法 ①加强被涂物的脱脂工序，确保磷化膜不被二次污染。 ②在槽液循环系统设除油过滤袋，同时查清油污源，严禁油污带入槽中。 ③提高后清洗水质，加强过滤。 ④保持烘干室和循环热风的清洁。 ⑤调整槽液的颜基比，适当加色浆提高颜料含量。

电泳仪六大常见问题处理方案

电泳仪六大常见问题处理方案 电泳仪是一种广泛应用于分离、纯化和分析生物大分子的仪器设备。在实际应 用中，电泳仪可能会遇到一些问题，影响到实验的准确性和可靠性。本文将介绍电泳仪六大常见问题的处理方案。 1. Buffer 溶液异常 Buffer 溶液是电泳过程中必不可少的一部分。如果 Buffer 溶液出现问题，会直 接影响电泳的结果。Buffer 溶液的问题可能有以下几种： 1.1 Buffer 溶液异常导致电迁移出现偏移 解决方案：检查 Buffer 溶液配制是否正确，是否出现过期、变质等情况。如有 异常，应及时更换 Buffer 溶液并重新配制。通常情况下，Buffer 溶液的 pH 值和离 子浓度是导致电迁移偏移的主要原因。因此，在实验过程中，应尽可能严格按照配制方法进行操作，并注意 Buffer 溶液的质量情况。 1.2 Buffer 溶液盐度过高或过低 解决方案：检查 Buffer 溶液配制过程中是否有误，盐度是否超出了所需范围。 如果 Buffer 溶液盐度过高，可以适当减少溶液中的盐量或者改用更适合的 Buffer 溶液。如果 Buffer 溶液盐度过低，则可以适当增加盐量或者加入一些协同剂以提 高 Buffer 溶液的离子浓度。 1.3 离子浓度变化过大 解决方案：检查电泳过程中是否有电泳缸的漏电现象，避免 Buffer 溶液中溶解 的离子浓度发生明显变化。此外，也可以适当加大电场或增加Buffer 溶液的用量，以提高 Buffer 溶液中离子浓度的稳定性。 2. 电泳缸温度过高 在电泳实验过程中，电泳缸的温度过高可能导致电泳结果不准确，需要及时解决。 解决方案：降低电泳缸的温度。可以采用以下方法： •检查冷却水路线是否通畅，电泳缸的冷却水是否充足。 •提高冷却水流量，以降低电泳缸内的温度。 •检查电泳缸内的电泳盐离子是否过多，它们可能会影响电泳缸的冷却效果。

凝胶电泳技术中的常见问题与故障排除

凝胶电泳技术中的常见问题与故障排除 凝胶电泳技术是一种常用的生物分离与分析技术，广泛应用于分子生物学、遗 传学、病毒学、蛋白质研究等领域。然而，在进行凝胶电泳实验时，常会遇到一些问题和故障，这可能会影响实验结果的准确性和可靠性。本文将介绍凝胶电泳技术中的一些常见问题，并提供相应的故障排除方法，以帮助解决实验中的困惑和难题。 1. 样品未呈现预期的电泳结果 当样品未呈现预期的电泳结果时，可能存在以下原因和解决方法： (1) 样品加载量不足或过多：检查加载体积是否符合实验方案中的要求；如果 加载量过多，可能导致电泳带模糊或扩散；如果加载量不足，可能导致电泳带的强度过低。 (2) 样品处理不当：确保样品在电泳前已经完成相应的处理步骤，如DNA片段 的酶切、RNA的逆转录等。 (3) 缺乏合适的分子量标记物：使用合适的分子量标记物可以更好地确定待测 样品的大小。 (4) 凝胶浓度选择不当：根据待测分子大小选择合适的凝胶浓度，以保证分离 效果。 (5) 电场强度设置不合适：根据待测分子大小和凝胶浓度设置合适的电场强度，以避免分子过快地跑出凝胶。 2. 凝胶溶液聚合不完全或聚合杂质过多 凝胶溶液聚合不完全或聚合杂质过多可能导致凝胶电泳过程中的故障。以下是 一些常见原因和解决方法： (1) 预聚合剂过期或质量不好：确保使用新鲜且质量良好的预聚合剂。

(2) 常温下保存预聚合液：预聚合液需在4℃下保存，避免过热导致聚合不完全。 (3) 预聚合液pH不适宜：根据所需凝胶的pH要求，调整好预聚合液的pH并 进行彻底混合。 (4) 预聚合液中存在气泡：在配制和混合预聚合液时，尽量避免气泡的产生。 (5) 预聚合液中存在杂质：用滤膜过滤预聚合液，去除杂质。 3. 凝胶电泳带模糊或扩散 当凝胶电泳带出现模糊或扩散时，可能是以下原因导致的： (1) 电场不稳定：检查电源和电极，确保电场稳定和均匀。 (2) 凝胶浓度选择不当：根据待测分子大小选择合适的凝胶浓度，低浓度凝胶 适用于分离长DNA分子，高浓度凝胶适用于分离短DNA片段。 (3) 电极间距不合适：根据凝胶浓度和待测分子大小设置适当的电极间距。 (4) 卷曲或折叠凝胶：确保凝胶平整、无折叠或卷曲现象，以保证电流的均匀 传导。 (5) 缓冲液浓度不合适：调整缓冲液浓度，使其适应待测分子的离解需求。 4. 臭气或噪音 如果在凝胶电泳过程中出现臭气或噪音，需要进行以下检查和处理： (1) 电源或电极存在问题：检查电源和电极的接触和质量，确保电流通过完好 的通路。 (2) 凝胶溶液中存在有机物或杂质：使用新鲜的凝胶溶液，去除可能存在的有 机物或杂质。

凝胶电泳仪4大故障排除

凝胶电泳仪4大故障排除 一、胶片和凝胶电泳的问题 问题描述： 电泳后，胶片和凝胶出现不同程度的问题，如凝胶没有漂移，胶片上没有带， 凝胶没有分离，等等。 问题原因： 这些问题可能是由于凝胶电泳操作中的一些错误导致的，包括： •未正确加热和制备缓冲液 •凝胶制备不好或者是老化的凝胶 •样品或者试剂污染 •胶片没有完全浸泡 解决方法： •在凝胶制备之前，确保已经充分混合缓冲液，并将其加热至适当温度。 •制备好用于凝胶电泳的新鲜凝胶，或者使用已知运行良好的凝胶。 •实验样品和实验室操作应保持干净，并确定用于样品加载的提示正确。 •在使用胶片之前，请确保每个胶片完全浸泡在染料中，以充分均匀染色。 二、电源模块问题 问题描述： 凝胶电泳机在电源模块上插入电源后无法工作，或者是该模块在使用过程中断 电或发生其他问题。 问题原因： 这可能是由于电源模块所连接的电源线路问题导致的，例如： •电源线路或插头损坏 •电源过载 •电源模块损坏 解决方法： •检查电源线路和插头是否损坏或者受到振动/拉扯。

•确保凝胶电泳机不超过其电源所能承受的负载。 •检查电源模块的熔断器是否被保险丝保护，是否还存在故障。 •如果以上措施没有解决问题，请联系有关制造商或经销商以进行维修。 三、反应室温度问题 问题描述： 凝胶电泳的反应室温度不按照所设定的温度工作，导致实验失败。 问题原因： 可能发生以下情况： •温控器故障 •反应室传感器故障 •反应室及冷却系统不平衡 解决方法： •检查温控器是否正确设置，如故障请更换或修理 •检查传感器的状况，确保其工作正常 •请调整冷却系统，并确保它能够保持恒定的温度 四、运行电流问题 问题描述： 凝胶电泳的运行电流达不到所需值或是变化不稳定。 问题原因： 这个问题可能是由以下原因导致的： •电极板和凝胶之间的联系不良 •非标准或者腐蚀性标本 •电池维护不良或电源损坏 解决方法： •确保电极板已经充分和凝胶接触紧密，这样可以保证电荷载体的更换和转移。 •选择适合的缓冲液和冷却液，以确保实验和操作的质量。 •维护电源系统，包括更换和保护电源。

电泳仪的使用注意事项与维护和修理保养及解决方案

电泳仪的使用注意事项与维护和修理保养及 解决方案 电泳仪于1937年研发，常用支持物体有滤纸、醋酸纤维薄膜等。电泳技术是分子生物学讨论不可缺少的紧要分析手段。电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳两大类，自由界面电泳不需支持物，如等电聚焦电泳、等速电泳、密度梯度电泳及显微电泳等，这类电泳目前已很少使用。 一、电泳仪的使用注意事项： 1、电泳仪/电泳槽通电进入工作状态后，禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分，也不能到电泳槽内取放东西，如需要

应先断电，以免触电。同时要求仪器必需有良好接地端，以防漏电。 2、仪器通电后，不要临时加添或拨除输出导线插头，以防短路现象发生，虽然仪器内部附设有保险丝，但短路现象仍有可能导致仪器损坏。 3、由于不同介质支持物的电阻值不同，电泳时所通过的电流量也不同，其泳动速度及泳至尽头所需时间也不同，故不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。 4、在总电流不超过仪器额定电流时（zui大电流范围），可以多槽关联使用，但要注意不能超载，否则简单影响仪器寿命。

5、某些特别情况下需检查仪器电泳输入情况时，允许在稳压状态下空载开机，但在稳流状态下必需先接好负载再开机，否则电压表指针将大幅度跳动，简单造成不必要的人为机器损坏。 6、电泳仪/电泳槽使用过程中发觉异常现象，如较大噪音、放电或异常气味，须立刻切断电源，进行检修，以免发生意外事故。 二、电泳仪常见问题及其解决方法： 1、电泳仪的输出达不到设定值

答：电泳仪的输出值状态遵“循欧姆定律”：电压U=电流I （电泳槽）电阻R，电阻R相对不变的情况下，U、I、P（功率P=电流I电压U）中任意1个参数恒定，其他参数也随之恒定；而任意1个参数变化，其他参数也随之正比变化。假如电泳仪的输出电压U 达不到预置值，应首先察看I或P是否已经恒定，或者已经达到电泳仪所规定的zui大I或P（JY电泳仪均有明确指示灯标志）。假如尚未达到极限值，将已经恒定I或P的设置调大（有必要的话限值），才能够提高电压输出。假如电泳仪的电流I达不到预置值，可调整电压U或功率P。假如电泳仪的功率P达不到预置值，可调整电压U或电流I。 2、电脑掌控电泳仪过压报警

电泳常见问题及解决方法

一、颗粒 （1）现象 在烘干后的电泳涂膜表面上有手感粗糙的、较硬的粒子，或肉眼可见的细小痱子，往往被涂物的水平面较垂直面严重，这种漆膜病态称为颗粒。 （2）产生原因 ①CED槽液PH值偏高，碱性物质混入，造成槽液不稳定，树脂析出或凝聚。 ②槽内有沉淀“死角”和裸露金属处。 ③电泳后清洗液脏、含漆量过高，过滤不良。 ④进入的被涂物面及吊具不洁，磷化后水洗不良。 ⑤在烘干过程中落上颗粒状污物。 ⑥涂装环境脏。 ⑦补给涂料或树脂溶解不良，有颗粒。 （3）防治方法 ①将CED槽液的PH值控制在下限，严禁带入碱性物质，加强过滤，加速槽液的更新。 ②消除易沉淀的“死角”和产生沉积涂膜的裸露金属件。 ③加强过滤，推荐采用精度为25μm的过滤元件，养活泡沫。 ④确保被涂面清洁，不应有磷化沉渣，防止二次污染。 ⑤清理烘干室和空气过滤器。 ⑥保持涂装环境清洁，检查并消除空气的尘埃源。 ⑦确保新补涂料溶解良好，色浆细度在标准范围内。 二、缩孔（陷穴） （1）现象 在湿的电泳涂膜上看不见，当烘干后漆膜表面出现火山口状的凹坑，直径通常为~,不露底的称为陷穴、凹洼、露底的称为缩孔，中间有颗粒的称为“鱼眼”。产生这一弊病的主要原因是电泳湿涂膜中或表面有尘埃，油污与电泳涂料不相溶的粒子，成为陷穴中心，使烘干初期的湿漆膜流展能力不均衡，而产生涂膜缺陷。 （2）产生原因 ①被涂物前处理脱脂不良或清洗后又落上油污、尘埃。 ②槽液中混入油污，漂浮在液面或乳化在槽液中。 ③电泳后冲洗液混入油污。 ④烘干室内不净，循环风内含油分。 ⑤槽液的颜基比失调，颜料含量低的易产生缩孔。 ⑥涂装环境脏、空气可能含有油雾、漆雾，含有机硅物质等污染被涂物或湿涂膜。 ⑦补给涂料有缩孔或其中树脂溶解不良，中和不好。 （3）防治方法 ①加强被涂物的脱脂工序，确保磷化膜不被二次污染。 ②在槽液循环系统设除油过滤袋，同时查清油污源，严禁油污带入槽中。 ③提高后清洗水质，加强过滤。

蛋白质电泳分析常见问题以及解决方法

蛋白质电泳分析常见问题以及解决方法 一、SDS-PAGE电泳过程中常见问题以及解决方法 几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行，而所有条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并进可能减少其相互间的聚集，最常用的就是SDS－PAGE电泳技术，关于大家在此过程中经常遇到的问题进行一些讨论： Q：SDS－PAGE电泳的基本原理？ A：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠），SDS会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与1.4g去污剂结合。当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。 Q：配胶缓冲液系统对电泳的影响？ A：在SDS－PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris－HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9；而电泳缓冲液使用的Tris－甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低；而CL离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高的电压剃度，压着蛋白质分子聚集到一起，浓缩为一狭窄的区带。当样品进入分离胶后，由于胶中pH的增加，呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速率增加，直接紧随氯离子之后，同时由于分离胶孔径的缩小，在电场的作用下，蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。 所以，pH对整个反应体系的影响是至关重要的，实验中在排除其

阴极电泳漆常见问题及解决方法

阴极电泳漆常见问题及解决方 法(总7页) -CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1 -CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除

1.缩孔 这类缺陷在湿的漆膜上看不见，当烘干后漆膜表面出现直径通常为0.5-3.0mm漏底微孔、不漏底的火山口状的凹陷，称为陷穴、凹洼，露底者为缩孔，中间有颗粒但不刮手的称为“鱼眼”。由于电泳漆湿膜中或表面有尘埃、油渍或与电泳涂料不相容的粒子，成为陷穴中心，因而产生涂膜缺陷。很多情况下这类缺陷还与被涂物的材质有关，如金属底材上存在微裂纹和微孔等。 原因1:外来油污污染电泳漆膜，油污附着在工件表面，使电泳漆成膜受到影响。这种原因引起缩孔的几率较大。 解决方法:可检查输送机构、挂具,防止油滴污染漆膜。从电泳设备制造安装开始就要避免上述物质污染，每一种新零件投入电泳前最好进行相关检验，防止受油、硅油、蜡、脂性碳化物、胶水等污染物对工件，电泳设备及电泳槽液的污染。 原因2:前处理除油不干净，造成润湿性不良，使电泳漆烘干后漆膜有缩孔。 解决方法:加强前处理清洗。 原因3:槽液有油污、异物混入，影响电泳漆膜外观。 解决方法:用吸油纸吸去油污，清除槽液内异物，同时避免异物混入，保持电泳槽液清洁原因4:加漆时有电泳漆没搅拌均匀，使槽液无完全熟化，引起漆膜不良。 解决方法:确保加入的电泳漆搅拌均匀，加强槽液循环，使槽液完全熟化 原因5:电泳后水洗中含油分或烘干室内不洁净，循环风含油分，使油分附着在漆膜上面烘干后有缩孔。 解决方法:水洗经常更换,烤箱经常清理.烤箱链轨用油可选用耐高温,不会高温挥发为最佳2.针孔 工件上有露底针状小孔，称为针孔，它与缩孔的区别是孔径小，中心无异物，且四周无漆膜堆积凹起。由漆膜再溶解而引起的针孔，称为再溶解针孔；由电泳过程中产生的气体、湿膜脱泡不良而产生的针孔，称为气体针孔； (1)湿膜针孔:工件未进行烘烤,在空气中凉干,可看到的针孔 原因1: 电泳电压过高，电流冲击反应过剧，产生气泡过多，或升压速度过快。 解决方法:适当降低电压,加长软启动时间 原因2:溶剂含量偏低。 解决方法:添加溶剂，每次添加不能超过1% 原因3:槽液温度过低。 解决方法:控制槽液温度在25—30℃ 原因4:涂料的PH值过低及溶剂过多，使漆膜抵抗杂质能力变弱。 解决方法:提高涂料的PH至4.3—5.3，并将漆膜厚度控制在必要的范围内。

SDSPAGE电泳过程中常见问题以及解决方法

SDS－PAGE电泳过程中常见问题以 及解决方法 几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行,而所有条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并进可能减少其相互间的聚集,最常用的就是SDS－PAGE电泳技术,关于大家在此过程中经常遇到的问题进行一些讨论： Q：SDS－PAGE电泳的基本原理 A：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS十二烷基硫酸钠, SDS会与变性的多肽,并使蛋白带负电荷,由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关,因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关,在达到饱和的状态下,每克多肽可与1.4g去污剂结合;当分子量在15KD到200KD之间时,蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系,符合下式：logMW=K-bX,式中：MW为分子量,X 为迁移率,k、b均为常数,若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图,可获得一条标准曲线,未知蛋白质在相同条件下进行电泳,根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量; Q：配胶缓冲液系统对电泳的影响 A：在SDS－PAGE不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris－HCL 缓冲系统,浓缩胶是,分离胶；而电泳缓冲液使用的Tris－甘氨酸缓冲系统;在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低；而CL离子却很高,两者之间形成导电性

较低的区带,蛋白分子就介于二者之间泳动;由于导电性与电场强度成反比,这一区带便形成了较高的电压剃度,压着蛋白质分子聚集到一起,浓缩为一狭窄的区带;当样品进入分离胶后,由于胶中pH的增加,呈碱性,甘氨酸大量解离,泳动速率增加,直接紧随氯离子之后,同时由于分离胶孔径的缩小,在电场的作用下,蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离;所以,pH对整个反应体系的影响是至关重要的,实验中在排除其他因素之后仍不能很好解决问题的情况,应首要考虑该因素; Q：样品如何处理 A：根据样品分离目的不同,主要有三种处理方法：还原SDS处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理; 1、还原SDS处理：在上样buffer中加入SDS和DTT或Beta 巯基乙醇后,蛋白质构象被解离,电荷被中和,形成SDS与蛋白相结合的分子,在电泳中,只根据分子量来分离;一般电泳均按这种方式处理,样品稀释适当浓度,加入上样Buffer,离心,沸水煮5min,再离心加样; 2、带有烷基化作用的还原SDS处理：碘乙酸胺的烷基化作用可以很好的并经久牢固的保护SH基团,得到较窄的谱带；另碘乙酸胺可捕集过量的DTT,而防止银染时的纹理现象;100ul样品缓冲液中10ul 20％的碘乙酸胺,并在室温保温30min; 3、非还原SDS处理：生理体液、血清、尿素等样品,一般只用1％SDS沸水中煮3min,未加还原剂,因而蛋白折叠未被破坏,不可作为

电泳常见问题解答

1. 配胶缓冲液系统对电泳的影响？ 在SDS－PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris－HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9；而电泳缓冲液使用的Tris－甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低；而CL离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高的电压剃度，压着蛋白质分子聚集到一起，浓缩为一狭窄的区带。当样品进入分离胶后，由于胶中pH的增加，呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速率增加，直接紧随氯离子之后，同时由于分离胶孔径的缩小，在电场的作用下，蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。 所以，pH对整个反应体系的影响是至关重要的，实验中在排除其他因素之后仍不能很好解决问题的情况，应首要考虑该因素。2. 样品如何处理？ 根据样品分离目的不同，主要有三种处理方法：还原SDS处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理。 1）还原SDS处理：在上样buffer中加入SDS和DTT（或Beta 巯基乙醇）后，蛋白质构象被解离，电荷被中和，形成SDS与蛋白相结合的分子，在电泳中，只根据分子量来分离。一般电泳均按这种方式处理，样品稀释适当浓度，加入上样Buffer，离心，沸水煮5min，再离心加样。 2）带有烷基化作用的还原SDS处理：碘乙酸胺的烷基化作用

可以很好的并经久牢固的保护SH基团，得到较窄的谱带；另碘乙酸胺可捕集过量的DTT，而防止银染时的纹理现象。100ul样品缓冲液中10ul 20％的碘乙酸胺，并在室温保温30min。 3）非还原SDS处理：生理体液、血清、尿素等样品，一般只用1％SDS沸水中煮3min，未加还原剂，因而蛋白折叠未被破坏，不可作为测定分子量来使用。 3. SDS-PAGE电泳凝胶中各主要成分的作用？ 聚丙烯酰胺的作用：丙烯酰胺与为蛋白质电泳提供载体，其凝固的好坏直接关系到电泳成功与否，与促凝剂及环境密切相关； 制胶缓冲液：浓缩胶选择pH6.7，分离胶选择pH8.9，选择tris －HCL系统，TEMED与AP：AP提供自由基，TEMED是催化剂，催化自由基引起的聚合反应进行；十二烷基硫酸钠（SDS）：阳离子去污剂，作用有四：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠。 4. 提高SDS-PAGE电泳分辨率的途径？ 聚丙烯酰胺的充分聚合，可提高凝胶的分辨率。建议做法：待凝胶在室温凝固后，可在室温下放置一段时间使用。忌即配即用或4度冰箱放置，前者易导致凝固不充分，后者可导致SDS结晶。一般凝胶可在室温下保存4天，SDS可水解聚丙烯酰胺。 一般常用的有氨基黑、考马斯亮蓝、银染色三种染料，不同染料又各自不同的染色方法，具体可参照郭尧君编著的《蛋白质电泳技术手册》P82-103。

SDS-PAGE电泳过程中常见问题以与解决方法

SDS－PAGE电泳过程中常见问题以及解 决方法 几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进展，而所有条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并进可能减少其相互间的聚集，最常用的就是SDS－PAGE电泳技术，关于大家在此过程中经常遇到的问题进展一些讨论： Q：SDS－PAGE电泳的根本原理？ A：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS 〔十二烷基硫酸钠〕， SDS会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在到达饱和的状态下，每克多肽可与1.4g去污剂结合。当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-b*，式中：MW为分子量，*为迁移率，k、b均为常数，假设将分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在一样条件下进展电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。 Q：配胶缓冲液系统对电泳的影响？ A：在SDS－PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris－HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，别离胶pH8.9；而电泳缓冲液使用的Tris －甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低；而CL离子却很高，两

者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高的电压剃度，压着蛋白质分子聚集到一起，浓缩为一狭窄的区带。当样品进入别离胶后，由于胶中pH的增加，呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速率增加，直接紧随氯离子之后，同时由于别离胶孔径的缩小，在电场的作用下，蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进展别离。所以，pH对整个反响体系的影响是至关重要的，实验中在排除其他因素之后仍不能很好解决问题的情况，应首要考虑该因素。 Q：样品如何处理？ A：根据样品别离目的不同，主要有三种处理方法：复原SDS处理、非复原SDS处理、带有烷基化作用的复原SDS处理。 1、复原SDS处理：在上样buffer中参加SDS和DTT〔或Beta巯基乙醇〕后，蛋白质构象被解离，电荷被中和，形成SDS与蛋白相结合的分子，在电泳中，只根据分子量来别离。一般电泳均按这种方式处理，样品稀释适当浓度，参加上样Buffer，离心，沸水煮5min，再离心加样。 2、带有烷基化作用的复原SDS处理：碘乙酸胺的烷基化作用可以很好的并经久结实的保护SH基团，得到较窄的谱带；另碘乙酸胺可捕集过量的DTT，而防止银染时的纹理现象。100ul样品缓冲液中10ul 20％的碘乙酸胺，并在室温保温30min。 3、非复原SDS处理：生理体液、血清、尿素等样品，一般只用1％SDS沸水中煮3min，未加复原剂，因而蛋白折叠未被破坏，不可作为