叶绿体色素的提取和分离(纸层析法)

叶绿体色素的提取和分离(纸层析法)

叶绿体是植物细胞中重要的细胞质器之一，它们负责植物的光合作用，能够将光能转化为化学能，生产出有机物质和氧气。叶绿体中含有多种色素，包括叶绿素、类胡萝卜素和花青素等，它们的色彩不同，吸收光的波长也不同，能够促进光合作用的进行。

叶绿体色素的提取和分离是一项重要的实验技术，科研工作者可以通过这种方法研究叶绿体的结构和功能，探究光合作用的机制，还可以进一步研究色素的生物活性和作用机理。下面介绍纸层析法提取叶绿体色素的方法。

实验材料：

1.醋酸丙酮乙酯

2.正戊烷

3.氯仿

4.纯化水

5.三氯乙酸

6.薄层色谱板（取硅胶G板）

7.深磁杯

8.玻璃棒（或玻璃片)

9.分离漏斗

实验过程：

1.取新鲜叶片，用纯化水冲洗干净后，将叶片用三氯乙酸溶液浸泡5-10分钟，轻轻搅拌，直至叶绿体脱离。

2.将叶绿体用分离漏斗过滤干净，加入少量的纯化水，制备得到含叶绿体的溶液。

3.将叶绿体溶液与醋酸丙酮乙酯混合，并加入一定量的正戊烷作为流动相，混合均匀后，取一片薄层色谱板，仔细涂抹硅胶G，然后放入深磁杯中。

4.将混合物用玻璃棒（或玻璃片)沿着涂有硅胶的色谱板上的一个角从上往下涂抹成一条线，使其长度大约为2.5cm左右，以保证在移液的过程中色素的有效分离。

5.将涂抹好的薄层色谱板置于流动相中，使其上升，当流动相向上液面到达约10mm处时，将其取出晾干，然后在烘箱中烘干5-10分钟，直至洁白无色，取出备用。

6.利用紫外线灯照射薄层色谱板，色素就会显示出来，然后用扫描器或者其它检测方法，对其中的不同颜色区域进行分离。

7.进行分离后，将薄层色谱板中各区域的色素用氯仿溶液洗净，然后加入适量的正戊烷，将其中的花青素、叶绿素和类胡萝卜素分别收集起来，称重、干燥，制备得到不同色素的提取物。

总结：

叶绿素的提取与分离

叶绿体色素的提取、分离 及理化性质的测定 班级：11级生科2班 组员：XXX XX 实验名称：叶绿体色素的提取、分离及理化性质的测定

实验原理：叶绿体色素又称光合色素，在高等植物中可分为叶绿素和类胡萝卜素两大类，前者包括叶绿素a（蓝绿色）和叶绿素b（黄绿色），后者包括胡萝卜素（橙色）和叶黄素（黄色），它与们类囊体膜上的蛋白质结合形成色素蛋白复合体，不溶于水，易溶于酯，因此可用丙酮、乙醇、石油醚等有机溶剂进行提取。 层析的基本原理：在分离过程中，由一种流动相（即一种液体或气体）带动着试样经过固定相（一种支持物，如纸）向外扩散，由于试样在两相中的溶解度不同和固定相对试样中不同成分的吸附程度有别，当用适当的溶剂推动时，混合物中各成分在两相间具有不同的分配系数，所以它们的移动速度不同，经过一定时间层析后，可使试样中的各种组分得到分离，在做纸层析时，由于纸对光合色素中各种色素分子的吸附程度不同，以及这些色素分子在溶剂四氯化碳（推进剂）中溶解度也有差异，以致溶剂带动色素分子向四周移动时，各种色素分子沿纸扩散的速度也就不同，使混合色素分离，出现不同颜色的环。将提取的叶绿素溶液置于光下，在透射光呈绿色，在反射光下呈樱桃红色，种这现象称为荧光现象。在反射光下叶绿素溶液之所以呈樱桃红色，是因为叶绿色分子吸收光能后处于激状发态，激发态的叶绿素分子很不稳定，当它回到基态时，将所获得的能量以辐射能的形式发射出红光量子。叶绿素的化学性质很

不稳定，容易受强光、高温等的破坏，特别是当叶绿素与蛋白质分离以后，破坏更快，而类胡萝卜素则较稳定。叶绿素中的镁可以被H＋所取代而成褐色的去镁叶绿素，后者遇铜后，其中的氢（H＋）又被铜（Cu2＋）取代，形成了铜代叶绿素，便由褐色转变成蓝绿色，铜代叶绿素很稳定，且比原来的绿色还要稳定些，在光下也不易被破坏。 材料与设备试剂： 1. 材料 新鲜的菠菜或小白菜等其他绿色植物叶片。 2. 设备 电子天平、研钵、烧杯、量筒、培养皿、刻度试管、试管夹、试管架、酒精灯、剪刀、圆形滤纸、小漏斗等。 3. 试剂 丙酮、四氯化碳、无水硫酸钠、6mol/L 盐酸、醋酸铜粉末、碳酸钙等。 方法与步骤： 一、1. 叶绿体色素的提取 2. 取菠菜或其他植物新鲜叶片5g，洗净，擦干，去掉主脉后剪碎，放入研钵中。

实验六 叶绿素的提取、分离

叶绿素的提取、分离 一 、实验目的 1. 掌握从植物叶中提取叶绿素的方法。 2. 了解纸层层析的原理，掌握纸层析的一般操作和定性鉴定方法。 二、实验原理 1. 叶绿素提取原理：叶绿素等是脂溶性的有机分子，根据相似相溶的原理，叶绿体中含有叶绿体色素（叶绿素a 和b 、胡萝卜素及叶黄素）等色素分子溶于有机溶剂而不溶于有极性的水。故在研磨和收集叶绿色素时要用丙酮或乙醇等有机溶剂提取而不用水。 2. 色素分离的原理：纸层析是用滤纸作为载体的一种色层分析法，其原理主要是利用混合物中各组分在；流动相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分离。滤纸上吸附的水为固定相（滤纸纤维常能吸20%左右的水），有机溶剂如乙醇等为流动相，色素提取液为层析试样。把试样点在滤纸的滤液细线位置上，当流动相溶剂在滤纸的毛细管的作用下，连续不断地沿着滤纸前进通过滤液细线时，试样中各组份便随着流动相溶剂向前移动，并在流动相和固定相溶剂之间连续一次有一次的分配。结果分配比比较大的物质移动速度较快，移动距离较远；分配比较小的物质移动较慢，移动距离较近，试样中各组分分别聚集在滤纸的不同的位置上，从而达到分离的目的。 毛细管点样 薄层色谱展开 三 、仪器和药品

研钵、毛细管、漏斗、纱布、小烧杯、试管、培养皿等 95%酒精、丙酮、石油醚 碳酸钙，石英砂 四、实验步骤 （1）取菠菜或其他植物新鲜叶片20g左右，洗净，用滤纸擦干，去掉叶柄和中脉剪碎，放入研钵。 （2）研钵中加入少量碳酸钙和石英砂，加4-5ml 无水乙醇，研磨至糊状，再加10ml 无水乙醇充分混匀以提取叶片匀浆中的色素，15-20分钟后，过滤入50ml锥形瓶中加塞待用。 分离：（1）取圆形定性滤纸一张（直径15cm），将其剪成滤纸条（15cm×2cm），将其2cm一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条，并在滤纸剪口上方用铅笔画一条直线，作为画滤液细线的基准线（注意：滤液线必须距底边1-1.5cm）。用毛细管吸取乙醇叶绿体色素提取液，沿纸条的滤液线涂，等风干后，再重复操作数2-3次。（用滤液涂圆点状类似） （2）在层析缸中加入适量（约2ml）的丙酮作为推动剂，将滤纸条带有色素的一端轻轻插入层析缸中，使滤纸条下端浸入推动剂中。迅速盖好层析缸盖，静置40-60min。此时，推动剂借毛细管引力顺滤纸条向上扩散，并把叶绿体色素向上推动，不久即可看到各种色素的条带。 （3）当推动剂前沿接近滤纸边缘时，取出滤纸，风干，即可看到分离的各种色素，从上到下为：胡萝卜素为橙黄色、叶黄素为鲜黄色、叶绿素a为蓝绿色，叶绿素b为黄绿色，用铅笔标出各种色素的位置和名称。 五、数据记录

实验七：叶绿体色素的提取和纸层析

实验七：叶绿体色素的提取和纸层析 于路遥 121140072 一．实验目的： 了解叶绿素的提取和纸层析的方法 二．实验原理： 【1】叶绿体色素的提取、分离实验原理： 1.植物叶绿体色素是吸收太阳光能,进行光合作用的重要物质.它一般由 叶绿素a,叶绿素b,胡萝卜素和叶黄素组成，它们与类囊体膜上的蛋白 质相结合，而成为色素蛋白复合体。 2.绿色素（包括叶绿素a和叶绿素b）和黄色素（包括胡萝卜素和叶黄素） 这两类色素都很难溶于水，而易溶于有机溶剂,故可用乙醇,丙酮等有 机溶剂提取。 【2】叶绿体色素的提取原理： 1.由于光合色素位于叶绿体中的类囊体上，要把它提取出来必须破坏 叶表皮、细胞壁和细胞膜、叶绿体的双层膜，所以要剪碎后加二氧化 硅研磨，以便使色素充分被提取。又因为叶绿体的色素不溶于水，但 可溶于有机溶剂中，所以还要加入乙醇或其它有机溶剂使色素溶解， 来提取各种色素。 2.另外还要加碳酸钙以保护叶绿体中的色素，原因是加碳酸钙以调节液 体的pH，防止叶绿素被破坏。叶绿体中的色素溶解于有机溶剂如乙醇 或丙酮(相似相溶)，形成色素液。 三．实验材料： 1.菠菜或青菜叶片. 2.仪器设备：研钵，漏斗，冻存管，剪刀，滴管, 滤纸，脱脂棉（或尼龙布 或纱布），毛细管，吸水纸。 3.药品试剂： ①无水乙醇或丙酮; ②石英砂; ③碳酸钙粉; ④层析液: 石油醚10ml+丙酮2ml+苯1ml 四．方法与步骤： 1.叶绿体色素的提取 (1)取植物新鲜叶片2 g,洗净,擦干,去掉粗的叶脉，剪碎,放入研钵中； (2)研钵中加入少量石英砂及碳酸钙粉, 研磨至近乎糊状，加入10-15mL 无 水乙醇,再研磨片刻，提取3-5 min，然后用漏斗（内放一层薄的脱脂棉）过滤,即得色素提取液。

实验八叶绿体中色素的提取和分离

实验八叶绿体中色素的提取和分离 一．实验原理： 色素提取原理： 利用相似相溶原理，色素可以溶解于酒精、丙酮等有机溶剂中，形成色素液。 色素分离原理： 由于四种色素在层析液的溶解度不同，因而四种色素在滤纸上的扩散速度也不同，从而将它们分离开来。 二．实验材料： 新鲜的绿色叶片、干燥的定性滤纸、烧杯、研砵、玻璃漏斗、尼龙布、毛细吸管、剪刀、小试管、培养皿盖、药勺、量筒、天平。 药品：丙酮、层析液、二氧化硅、碳酸钙。 三．实验过程： （一）。制备色素滤液： 1．取叶： 称取5克新鲜的绿色植物叶片，然后剪碎，放入研砵中； 2。研磨： A．研砵中分别加入以下物质： 二氧化硅：为了使研磨充分； 碳酸钙：保护色素免受破坏； 丙酮：作为色素的溶剂。 思考题： （1）研磨时要使叶绿素能够提取出来，要破坏多少层膜？ 提示：应该是3层，一层细胞膜，两层叶绿体膜。 （2）碳酸钙保护色素的原理是什么？ 因为叶绿素极易分解，在研磨过程中，细胞结构被破坏，细胞液中的 有机酸释放出来，很容易破坏叶绿素分子，为了缓冲研磨液中的PH 值一，可以加入碳酸钙，来中和释放出来的有机酸，从而避免了叶绿 素被破坏。 B．充分迅速地研磨； 充分是为了彻底破坏细胞结构，迅速是为了防止丙酮挥发； 防止挥发采取的措施： 在研砵上加一个中间有洞的纸，把玻璃棒插在中间研磨可以减少挥发。

3．取滤液： 在一支试管上插入一个小漏斗，中间用脱脂棉或者尼龙布作为过滤用，迅速倒 入研磨滤液，进行过滤，然后在试管口用棉花塞紧。 思考题： 为什么要迅速倒入？为什么要用棉花塞紧试管管口？ 同样为了防止丙酮挥发； 同时由于色素极容易被光和空气所破坏，所以要避光和隔绝空气保存。（二）制备滤纸条： 1。干燥处理过的定性滤纸； 为何干燥处理？ 有利于层析液在滤纸上的扩散； 2．规格： 6㎝×1㎝ 3．处理： 在滤纸的一端，剪去两角，大约距1㎝处，角度约45°； 剪角的目的是什么？ 因为在靠近两侧的层析液扩散的速度比较快，剪去两角后，扩大 了两侧层析液扩散的距离，可以调整层析液扩散处于同一平面。 (4). 距1㎝处用铅笔画一条细线； 作为将来画滤液细线的标记； 不能用有机墨水笔来画，因为墨水会溶解于层析液中，而且有机墨 水也会在滤纸上扩散。 （三）画滤液细线： 1．用毛细吸管吸取色素滤液，沿铅笔细线处画滤液细线； 2．用力要均匀，细线要细、齐、直； 因为如果不细、齐，将来层析时会导致色素带的重叠； 3．待滤液干后，再重复画二到三次； 是为了增加滤液细线上色素的量，实验效果明显。 （四）纸层析： 1。层析液的量： 大约是3ml， 原则：烧杯中层析液的深度不得超过滤纸条上的滤液细线；

叶绿体色素的提取和分离(纸层析法)

叶绿体色素的提取和分离(纸层析法) 叶绿体是植物细胞中重要的细胞质器之一，它们负责植物的光合作用，能够将光能转化为化学能，生产出有机物质和氧气。叶绿体中含有多种色素，包括叶绿素、类胡萝卜素和花青素等，它们的色彩不同，吸收光的波长也不同，能够促进光合作用的进行。 叶绿体色素的提取和分离是一项重要的实验技术，科研工作者可以通过这种方法研究叶绿体的结构和功能，探究光合作用的机制，还可以进一步研究色素的生物活性和作用机理。下面介绍纸层析法提取叶绿体色素的方法。 实验材料： 1.醋酸丙酮乙酯 2.正戊烷 3.氯仿 4.纯化水 5.三氯乙酸 6.薄层色谱板（取硅胶G板） 7.深磁杯 8.玻璃棒（或玻璃片) 9.分离漏斗 实验过程： 1.取新鲜叶片，用纯化水冲洗干净后，将叶片用三氯乙酸溶液浸泡5-10分钟，轻轻搅拌，直至叶绿体脱离。 2.将叶绿体用分离漏斗过滤干净，加入少量的纯化水，制备得到含叶绿体的溶液。 3.将叶绿体溶液与醋酸丙酮乙酯混合，并加入一定量的正戊烷作为流动相，混合均匀后，取一片薄层色谱板，仔细涂抹硅胶G，然后放入深磁杯中。 4.将混合物用玻璃棒（或玻璃片)沿着涂有硅胶的色谱板上的一个角从上往下涂抹成一条线，使其长度大约为2.5cm左右，以保证在移液的过程中色素的有效分离。

5.将涂抹好的薄层色谱板置于流动相中，使其上升，当流动相向上液面到达约10mm处时，将其取出晾干，然后在烘箱中烘干5-10分钟，直至洁白无色，取出备用。 6.利用紫外线灯照射薄层色谱板，色素就会显示出来，然后用扫描器或者其它检测方法，对其中的不同颜色区域进行分离。 7.进行分离后，将薄层色谱板中各区域的色素用氯仿溶液洗净，然后加入适量的正戊烷，将其中的花青素、叶绿素和类胡萝卜素分别收集起来，称重、干燥，制备得到不同色素的提取物。 总结：

冲刺2020高考生物实验突破专题：绿叶中色素的提取和分离(附答案及解析)

绿叶中色素的提取和分离 1.提取绿叶中的色素 ①原理：绿叶中的色素能够溶解在有机溶剂无水乙醇中。 ②步骤 取材：称取5 g 新鲜绿叶 ↓ 研磨：剪碎叶片，放入研钵中，加少许二氧化硅和碳酸钙，再加入10 mL 无水乙醇， 迅速、充分研磨 ↓ 过滤：漏斗基部放一块单层尼龙布，将研磨液迅速倒入玻璃漏斗中进行过滤 ↓ 收集：用小试管收集色素滤液，及时将试管口用棉塞塞严 2.分离绿叶中的色素 ①原理：不同色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得快，反之则慢。 ②步骤 制备滤纸条⎩⎪⎨⎪⎧ 剪滤纸条：将干燥的定性滤纸剪成长与宽略小于试管长与直径的 滤纸条，并在一端剪去两角 ↓ 铅笔画线：在距滤纸条去角的一端1 cm 处用铅笔画一条细的横线 ↓ 画滤液细线⎩⎪⎨⎪⎧ 取滤液：用毛细吸管吸取少量滤液 ↓画线：沿铅笔线均匀地画出一条细线 ↓重复画线：待滤液干后，重复画细线1～2次 ↓ 分离绿叶中的色素：将适量的层析液倒入试管中，将滤纸条(有滤液细线的一端朝下) 轻轻插入层析液中，随后用棉塞塞紧试管口 ↓ 观察并记录结果：滤纸条上出现4条色素带

3.实验中的材料试剂及操作目的 考点一：实验的基本原理和过程分析 例一、甲、乙、丙、丁四位同学，在利用新鲜绿色菠菜叶为实验材料，用层析法进行叶绿体中色素的提取和分离实验时，由于操作不同，得到了四种不同的层析结果(如图所示)。下列分析错误的是()

A．甲可能误用蒸馏水作提取液和层析液 B．乙可能是因为研磨时加入无水乙醇过多 C．丙可能是正确操作得到的理想结果 D．丁可能是研磨时未加入CaCO3 考点二：实验异常现象分析 例一．在做提取和分离叶绿体中的光合色素实验时，甲、乙、丙、丁四位同学对相关试剂的使用情况如下表所示(“＋”表示使用，“－”表示未使用)，其余操作均正常，他们所得的实验结果依次应为() A．①②③④B．②④①③ C．④②③①D．③②①④ 易错点一收集到的滤液绿色过浅的原因分析 ①未加石英砂(二氧化硅)，研磨不充分。 ②使用放置数天的绿叶，滤液色素(叶绿素)太少。 ③一次加入大量的无水乙醇，色素溶液浓度太低(正确做法：分次加入少量无水乙醇提取色素)。 ④未加碳酸钙或加入过少，色素分子被破坏。 易错点二滤纸条色素带重叠：没经干燥处理，滤液细线不能达到细、齐、直的要求，使色素扩散不一致。

绿叶中色素的提取和分离

绿叶中色素的提取和分离 一、学习目标 1理解叶绿中色素的提取和分离的原理 2 •掌握提取和分离叶绿体中色素的基本方法 3•描述各种试剂的作用，并能分析实验中出现的各种现象 （一）实验原理 绿叶中的色素是有机物，能溶解在有机溶剂无水乙醇（或丙酮）中，所以用无水乙醇可 提取叶绿体中的色素。层析液也是有机溶剂，不同的色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上扩散得快，溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上扩散得慢，因而可用层析液将不同色素进行分离。 （二）主要实验材料： 1. 新鲜的绿叶（如菠菜的绿叶） 2. 干燥的定性滤纸，试管，棉塞，试管架，研钵，玻璃漏斗，尼龙布，毛细吸管，剪刀，药勺，量筒（10 mL）,天平。 3 •无水乙醇（如果没有无水乙醇，也可用体积分数为95%勺乙醇，但要加入适量的无 水碳酸钠，以除去乙醇中的水分），层析液（由20份在60〜90C下分馏出来的石油醚、2份丙酮和1分苯混合而成。93号汽油也可代用），二氧化硅和碳酸钙。 （三）方法与步骤： 1. 提取绿叶中的色素 （1）称取5 g的绿叶，剪碎，放入研钵中。 （2）向研钵中放入少许二氧化硅和碳酸钙，再加入10 mL无水乙醇，进行迅速、充分 的研磨。（二氧化硅有助于研磨的充分，碳酸钙可防止研磨中色素被破坏。）（3）将研磨液迅速倒入玻璃漏斗（漏斗基部放一块单层尼龙布）中进行过滤。将滤液收集到试管中，及时用棉塞将试管口塞严。 2. 制备滤纸条 将干燥的定性滤纸剪成长与宽略小于试管长与宽的滤纸条，将滤纸条的一端剪去两角，并在距这一端1 cm处用铅笔画一条横线。 3. 画滤液细线 用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线均匀地画出一条细线。待滤液干后，再画一两次。 4 •分离绿叶中的色素 将适量的层析液倒入试管中，将滤纸条（有滤液细线的一端朝下）轻轻插入层析液中，随后用棉塞塞紧试管口。注意，不能让滤液细线触及层析液。（也可用小烧杯代替试管，用 培养皿盖住小烧杯。） 5.观察与记录 观察试管内滤纸条上出现了几条色素带，以及每条色素带的颜色。将观察结果记录下来。

叶绿素的提取及理化性质的鉴定

植物生理学实验 叶绿体色素的提取分离及其理化性质

摘要：本实验以新鲜的提取菠菜叶片为实验材料，对叶片中叶绿体中的色素进行了提取、分离和理化性质的鉴定。实验采用纸层析法进行分离，并从叶绿体色素的荧光现象、皂化作用、Mg2+的取代以及色素光谱对其理化性质进行了鉴定。纸层析法分离色素的实验在滤纸上分离出了5条色素带；荧光实验中在透射光下叶绿素提取液为蓝绿色，反射光下为紫红色；造化反应中出现了明显的分层现象；Mg2+的取代实验中颜色由蓝绿变为棕褐色，再变为墨绿色，由上述实验可以鉴定叶绿体色素的理化性质。 一、实验原理及实验目的 实验原理： 1、提取: 叶绿体中含有叶绿素(叶绿素a与b)和类胡萝卜素(胡萝卜素和叶黄素)，这两类色素均不溶于水，而溶于有机溶剂，故常用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。 2、分离: 当溶剂沿支持物不断向前推进时，由于叶绿体中不同色素分子结构不同，在两相(流动相与固定相)间具有不同的分配系数，因此它们移动速率不同。对叶绿体色素进行层析可将不同色素分离。 3、理化性质的观察: 叶绿素是一种二羧酸酯，在碱作用下，发生皂化反应；在弱酸作用下，叶绿素中镁可被氢原子取代而成为褐色的去镁叶绿素，后者遇铜则成为绿色的铜代叶绿素，叶绿素具有荧光，故从与入射光相垂直的方向观察叶绿素溶液呈血红色。叶绿素的化学性质不稳定，易受强光氧化，特别是当叶绿素与蛋白质分离后，破坏更快。 分子吸收光能后，从基态转变到激发态。叶绿素分子有两种单线激发态，对应两个主要的光吸收区。 分子在激发态停留的时间不超过数纳秒（10-9秒） 由激发态回到基态的过程称为衰变（Decay)。 叶绿素a：C55H72O5N4Mg，MW=893.4891 叶绿素b：C55H70O6N4Mg，MW=907.4727 胡萝卜素：C40H56，MW= 536.8726 叶黄素：C40H56O2，MW=568.8714 实验目的： 以植物叶片组织为材料,提取叶绿体色素;以纸层析法分离其成分;鉴定叶绿体色素的理化性质. 二、实验材料和方法 1、实验材料：菠菜 2、实验用具：天平、研钵、三角漏斗、滤纸、层析缸、毛细管、分光镜、量筒、烧杯、试 管等 3、实验试剂：丙酮、碳酸钙、层析液（石油醚：丙酮=25：3)，20%KOH-甲醇、乙醚、1%HCl、 醋酸铜 三、实验步骤 1、叶绿体色素的提取 （1）取新鲜菠菜叶片2克,擦干,去中脉,剪碎放入研钵; （2）加入少许石英砂和CaCO3,再加入无水丙酮10ml,研磨成匀浆,再加丙酮15ml;

(完整word)叶绿体色素的提取与纸层析

实验七:叶绿体色素的提取与纸层析 一、实验目的 ①、提取叶绿体色素 ②、对叶绿体色素进行纸层析 二、实验原理 纸层析：是层析中最简便的一种。一般的被分离物质在两相中都能溶解的纸层析属于分配层析,它实际上是以滤纸纤维的结合水为固定相，以有机溶剂为流动相，当流动相沿纸经过样品时，样品点上的溶质在水和有机相之间不断进行分配，一部分样品随流动相移动，进入无溶质区,此时又重新分配,一部分溶质由流动相进入固定相（水相）。随着流动相的不断移动，各种不同的部分按其各自的分配系数不断进行分配，并沿着流动相移动,从而使物质得到分离和提纯。当层析溶剂不断从纸上流过时，由于混合物(叶绿素提取液)中各种成分在固定相和流动相间溶解度和吸附能力不同而具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过一定时间后,可将各种色素分开. 叶绿体色素的提取、分离实验原理：植物叶绿体色素是吸收太阳光能，进行光合作用的重要物质。它一般由叶绿素a，叶绿素b，胡萝卜素和叶黄素组成,它们与类囊体膜上的蛋白质相结合,而成为色素蛋白复合体. 绿色素（包括叶绿素a和叶绿素b）和黄色素（包括胡萝卜素和叶黄素)这两类色素都很难溶于水,而易溶于有机溶剂，故可用乙醇，丙酮等有机溶剂提取。 三、实验器材

菠菜或青菜叶片. 仪器设备 研钵，漏斗，冻存管，剪刀，滴管，滤纸，脱脂棉（或尼龙布或纱布),毛细管，吸水纸. 药品试剂：①无水乙醇和丙酮;②石英砂；③碳酸钙；④层析液:石油醚10ml+丙酮2ml+苯1ml。 四、实验步骤 1.叶绿体色素的提取 (1）取植物新鲜叶片2 g,洗净，擦干，去掉粗的叶脉，剪碎，放入研钵中； (2）研钵中加入少量石英砂及碳酸钙粉, 研磨至近乎糊状,加入10—15mL 无水乙醇,再研磨片刻,提取3—5 min,然后用漏斗（内放一层薄的脱脂棉）过滤,即得色素提取液。 2.叶绿体色素的分离 （1)制备滤纸条：剪去一端两角，在距离剪角一端1～ 1.5 cm处用铅笔画线（或简单做个记号）。 （2) 画滤液细线：用毛细吸管吸收少量滤液，沿铅笔线（记号）处均匀地画一条直的滤液细线。干燥后，连续重复3～5次，至滤液细线呈绿色。 （3)分离色素：倒入层析冻存管2～3 ml层析液，适当调节层析液液面，以放入滤纸条后样品线至少稍稍高出滤液为宜。以将滤纸条尖端朝下略微斜靠烧杯内壁,轻轻插入层析液,旋紧盖子 3.(1)取圆形定性滤纸一张(直径11cm）， 在其中心戳一圆形小孔（直径约3mm)。 另取一张滤纸条(5cm×1.5cm），用毛细管吸取叶绿体色素提取液沿纸条的长度方向涂 在纸条的一边，使色素扩散的宽度限制在0.5cm以内，风干后，再重复操作数次,然后 沿长度方向卷成纸捻,使浸过叶绿体色素溶液的一侧恰在纸捻的一端。

[高中生物叶绿体中色素的提取和分离知识点]叶绿体色素分离

［高中生物叶绿体中色素的提取和分离知识点］叶绿体色 素分离 、为什么要选新鲜绿色的幼嫩叶片 因为叶绿色含N、Mg，而老叶中这两种矿质元素很多已经分解转移, 所以鲜绿色的幼叶中叶绿素的含量高，适合于实验. 二、制备滤纸条要剪去两角 实验中需将滤纸条的一端剪去两角，为什么这样做，如果不会怎么样呢原来若不剪去滤纸条的两角，色素带的两边和中间不是在一条直线上。这是由于滤纸条两边水分子可以向三个方向散失，向上“跑”的速度快。而滤纸条中间的水分子只能向两个方向散失，分别是向内和向外，因而会“跑”得慢一些。而现在剪去滤纸条的两个角，可以在一定程度上加快中间色素的扩散速度，减慢两边色素的扩散速度，从而真正意义上使这些色素从同一起点 随层析液扩散. 三、为什么研磨时加无水乙醇或丙酮 因为色素是有机物，根据相似相容性原理，无水乙醇或丙酮能溶解色素 四、为什么加入少许二氧化硅 在提取色素的过程中，要加人少许二氧化硅。原来是为了研磨得充分二氧化硅就是石英沙子，研磨时可以增大强度，加快细胞和叶绿体的破裂而使叶绿体中的色素释放出来。 五、为什么加入少许碳酸钙 在提取色素的过程中，要加人少许碳酸钙。原来是为了防止在研磨时叶绿体中的色素受到破坏。叶绿体中的色素原本所处的环境具微碱性。在实验

中，研磨会使细胞结构遭到破坏，细胞液中有机酸流出，酸性的细胞液就会接触到叶绿体中的色素，致使叶绿素的分子结构遭到破坏，使叶绿素失镁，呈黄褐色，如同我们看到到腌制的黄瓜会变色一样，而碳酸钙是强碱弱酸盐，碳酸钙在水中的溶解度很小，但还是有一部分得到溶解，中和细胞液的酸性，制造了一个弱碱环境，保护了色素。 六、为什么用单层尼龙布过滤 在过滤时，漏斗基部放一块单层尼龙布，老教材中是用滤纸来过滤的过滤的目的是去掉不需要的杂质如破碎的细胞、二氧化硅、碳酸钙等，相对而言，单层尼龙布可以让色素溶液更好地通过效果比滤纸要好。 七、为什么用棉塞塞紧试管 将色素收集在试管中后，要用棉塞塞紧。原因是色素很容易迅速地被空气中的氧气氧化分解乙醇酸和甘氨酸，从而使实验失败。 八、为什么滤纸预先干燥处理 这是因为干燥的滤纸，使层析液在滤纸上能快速扩散，所以预先干燥处理。 九、为什么滤液细线要直、细、匀 因为滤液细线只有画得细而直，才能使色素随层析液扩散的起点一致这样使分离出的色素带平整不发生重叠. 十、为什么滤液细线干燥后再画一两次 这样可以分离到更多的色素，使分离出的色素带清晰分明。 一、为什么滤液细线不触及层析液

叶绿体色素提取与分离实验色素带成分分析

叶绿体色素提取与分离实验色素带成分分析 “叶绿体色素提取和分离”是高中生物学必做实验之一。通过纸层析法分离通常有四条叶绿体色素带，自上而下分别为胡萝卜素、叶黄素、叶绿素 a 和叶绿素b。教学过程中发现，有时层析后在纸条上呈现五条色素带，除下面蓝绿色的叶绿素 a 和黄绿色的叶绿素 b 以外，上方还有三条色素带。为了弄清这些色素带的成分，通过与标准品迁移率和吸收光谱等性质的对比，以确定胡萝卜素和叶黄素在层析带上的位置，为今后相关实验教学提供实验依据。 1.研究方法 1．1实验材料 新鲜菠菜、白菜、冬青卫矛、苦荬菜。 1．2化学药品 无水乙醇、石油醚、丙酮、苯、CaCO3、石英砂等。以上药品均为分析纯。层析液按照石油醚∶丙酮∶苯= 20 ∶ 2 ∶1 进行配制。β胡萝卜素标准品(纯度＞98%)、α叶黄素标准品( 纯度＞90%)。 1．3实验仪器及用具 仪器: 电子天平、紫外可见分光光度计。用具: 剪刀、研钵、量筒、漏斗、纱布、毛细管、层析管、橡胶塞、曲别针、新华一号滤纸、铅笔、直尺等。

1．4色素提取 取新鲜叶片 5 g 剪碎放入研钵，加入少量二氧化硅和CaCO3粉末，加入10mL 无水乙醇研磨至糊状，过滤收集提取液。1．5色素层析 取剪去下端两角的滤纸条，用铅笔在近底端处画一条点样线，在远端同样画线作为层析终点。用毛细管吸取色素提取液点样，干燥后，重复操作6—7 次。之后将滤纸条挂在层析管中层析，观察现象并计算迁移率。每种样品设置5 组平行实验。 1．6色素标准品的层析 将β胡萝卜素标准品和α叶黄素标准品分别溶于无水乙醇，按2．5 中方法层析分析。配制相同浓度的两种标准样混合液，进行层析分析。每种处理设置五组平行实验。 1．7吸收光谱的测定 层析结束后，分别剪取橙黄色和黄色色素带，用无水乙醇重新溶解色素。待溶液呈现黄色时，取2 mL 测定吸收光谱。同时测定β胡萝卜素和α叶黄素标准品在无水乙醇溶液中的吸收光谱作为对照。 2.研究结果 2．1叶绿体色素的层析 首先以菠菜叶片为材料进行实验，结果发现层析滤纸条上确实存在五条色素带(图1A)。通过对色素的颜色、含量和迁移率等因素综合判断，可以确定最下面两条色素带分别为叶绿素a、

叶绿体中色素的提取与分离实验教案

叶绿体中色素的提取与分离实验教案

叶绿体中色素的提取与分离实验教案 实验4.3 叶绿体中色素的提取和分离 教学目标： 1. 基本知识与技能： 了解叶绿体中的色素组成、颜色了解纸层析法的原理。 2. 方法与过程: 通过实验掌握叶绿体中色素的提取和分离的基本操作方法。 3. 情感与态度 14培养学生严谨的科学态度，学会根据实验的现象和 结果，进行分析，推出结论。 实验结束完成整理工作。 二、实验重点与难点 重点：初步掌握提取和分离叶绿素中色素的方法、探索

叶绿素色素在滤纸上层析的情况。 难点：分离叶绿体色素中绿叶细线的画法。 三、材料用具： 1、材料：新鲜的绿叶（如菠菜的绿叶）。 2、用具：干燥的定性滤纸、试管、试管架、研钵、漏斗、棉塞、尼龙纱布、毛细吸管、剪刀、量筒、药匙、天平、铅笔、直尺。 3、试剂：无水乙醇、层析液、二氧化硅（石英沙）和碳酸钙。 四、教学方法： 师生合作（以学生操作为主、教师讲解为辅） 五、课时安排： 2课时 六、教学过程:

板书设计——实验4.3叶绿体中色素的提取与分离 一、实验原理 1. 叶绿体的色素能溶解在有机溶剂无水乙醇中，所以可用无水乙醇提取叶绿素中的色素。 2. 叶绿体中的色素在层析液中的溶解度不同。 溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得快。溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。 二、实验目的与要求 1. 初步掌握提取和分离叶绿素中色素的方法。 2. 探索叶绿素中有几种色素，观察和区别叶绿素中的色素的种类及颜色。 实验材料用具新鲜绿色叶片、滤纸、研钵、漏 斗、脱脂棉、毛细管、剪刀、试管、量筒、层析 液、无水乙醇、石英沙、碳酸钙 四、实验方法与步骤 1 •提取色素

生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》

实验八叶绿体中色素的提取和分离 教学目的 1．初步掌握提取和分离叶绿体中色素的方法。 2．探索叶绿体中有几种色素。 实验原理 1．叶绿体中的色素能溶解在丙酮（有机溶剂，酒精、汽油、苯、石油醚等）中，所以用丙 酮可提取叶绿体中色素。 2．色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得快，溶 解度低的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得慢，因而可用层析液将不同的色素分离。 实验程序 1）称取5g绿色叶片并剪碎提取色素 2）加入少量sio2、caco3和5ml丙酮收集到试管内并塞紧管口 1）将干燥的滤纸剪成6cm长，1cm宽的纸条，剪去一端两角（使层析液同时 到达滤液细线） 制滤纸条 2）在距剪角一端1cm处用铅笔画线 1）用毛细管吸少量的滤液沿铅笔线处小心均匀地划一条滤液细线 滤液划线 2）干燥后重复划2-3次 1）向烧杯中倒入3ml层析液（以层析液不没及滤液细线为准） 纸上层析（2）将滤纸条尖端朝下略微斜靠烧杯内壁，轻轻插入层析液中 3）用培养皿盖盖上烧杯 观察结果：滤纸条上出现四条宽度、颜色不同的彩带（如下图） 最宽：叶绿素a； 最窄：叶绿素b； 相邻色素带最近：叶绿素a和叶绿素b； 相邻色素带最远：胡萝卜素和叶黄素。 实验关键 1．选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的叶片。如菠菜叶、棉花叶、洋槐叶等。 2．画滤液细线时，应以细、直、颜色浓绿为标准，重复画线时必须等上次画线干燥衙再进 行，重复2-3次。 3．层析时不要让滤液细线触及层析液。 注意事项 1．因丙酮和层析液都是易挥发且有一定毒性的有机溶剂，所以研磨要快，收集的滤液要用 棉塞塞住，层析时要加盖，尽量减少有机溶剂的挥发。 2．在研磨时要加少许二氧化硅，目的是为了研磨充分，有利于色素的提取；加少许碳酸钙 的目的是为了防止研磨过程中，叶绿体中的色素受到破坏。

叶绿素提取和分离实验

植物叶绿体中色素的提取与分离 实验原理： 1、色素不溶于水，易溶解在无水乙醇等有机溶剂 2、色素的溶解度不同，随层析液在滤纸上扩散速度不同，从而达到分离目的。 操作步骤： 1．称取新鲜叶子2g，放入研钵中加丙酮5ml，少许碳酸钙(防止叶绿素被破坏）和石英砂（帮助研磨），研磨成匀浆，再加丙酮5ml，然后以漏斗过滤之，即为色素提取液。 2．取准备好的滤纸条（2×20cm），将其一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条，并在滤纸剪口上方折叠出一条直线，作为画滤液细线的基准线。 3．用毛细吸管沾少许滤液在折线上描绘4~5次，注意要画得匀、直、细，每次画完细线要等其自然变干后再画第二根线。 4．在大试管中加入四氯化碳3梍5ml及少许无水硫酸钠（即层析液）。然后将滤纸条固定于软木塞上，插入试管内，使窄端浸入溶剂中（色素点要略高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁），盖紧软木塞，直立于阴暗处进行层析。 经过0.5—1小时后，观察分离后色素带的分布。最上端橙黄色为胡萝卜素，其次黄色为叶黄素，再下面蓝绿色为叶绿素a，最后的黄绿色为叶绿素b。 注意事项 纸层析法中所用的有机溶剂如丙酮等，一般有挥发性、并有一定毒性，使用时要注意密封层析，避免吸入过多有害挥发物。 纸层析法依据极性相似相溶原理，是以滤纸纤维的结合水为固定相，而以有机溶剂作为流动相。由于样品中各物质分配系数不同，因而扩散速度不同，从而达到分离的目的。 纸层析法又称纸色谱法。以纸为载体的色谱法。固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分离的斑点。将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。 纸层析法 纸层析法是以纸上所吸附的水作固定相，用与水不相溶的溶剂作展开剂。将欲分离的样品液体点在纸条上晾干。当流动相沿纸条移动时，带动组分中的各组分以不同的速率向前移动，在移动时间内，不同的组分被带到纸上的不同部位，出现层析现象，以达到分离的目的。

绿叶中色素的提取与分离实验操作过程(图文)

绿叶中色素的提取与分离实验 一、 实验原理 1、提取的原理：利用色素溶于有机溶剂无水乙醇而不溶于水的性质。 2、分离的原理：利用各种色素在层析液中的溶解度不同，随着层析液在滤纸上扩散的速度不同。（纸层析法） 二、目的要求 1、进行绿叶中色素的提取和分离； 2、探究绿叶中含有几种色素 三、材料用具 1、材料：新鲜的绿叶（如菠菜、韭菜的绿叶）。 2、用具：剪刀、药匙、研钵、量筒、漏斗、试管、棉塞、尼龙纱布、盖玻片、试管架、干燥的定性滤纸、铅笔、直尺、烧杯、穿针的细线、滴管。 3、试剂：无水乙醇、层析液、二氧化硅（石英沙）和碳酸钙。 四、方法步骤 1、提取绿叶中的色素 （1）取深绿色的植物叶片，洗净，抹干水分，并称取5g ，剪成小块置于研钵中。 （2）在研钵中加入少许二氧化硅（SiO 2）、碳酸钙（CaCO 3），再加入6ml 无水乙醇。 （3）迅速、充分地研磨成糊状。 （4）在漏斗基部放一小块单层尼龙纱布，将研磨液迅速倒入玻璃漏斗中进行过滤。将滤液收集到试管中，及时用棉塞将试管口塞严。 剪碎绿叶 加二氧化硅、碳酸钙， （迅速）研磨成糊状 再加入10ml 无水乙醇 过滤 收集滤液，棉塞封口 2、制备滤纸条（如下图） 3、画滤液细线（如下图） 滤纸条：长6cm ，宽1cm ， 用盖玻片一端蘸取滤液，沿铅笔线画线， 距一端1cm 处用铅笔和直尺 等滤液细线风干后，再画下一道细线，重复 画一条细的横线。 2—3次。画线要求：细、直、齐。 4、分离色素 将3ml 层析液倒入小烧杯中，将滤纸条（有滤液细线的一端朝下）轻轻插入层析液中，随后用培养皿盖盖住小烧杯。注意：不能让滤液细线接触到层析液。 5、观察与记录 观察烧杯中滤纸条上出现了几条色素带，以及每条色素带的 颜色和宽度。 将观察结果记录下来，并将层析结果的分离结果贴在上面。 “培养皿法” 五、讨论 橙黄色 黄色 蓝绿色 黄绿色