全血RNA提取

Qtiangen的RNAprep pure 血液总RNA提取试剂盒

本试剂盒可从血液中快速提取总RNA，可同时处理大量不同样品。提取的总RNA 纯度高，没有蛋白和其它杂质的污染，可用于RT-PCR、Real Time RT-PCR、芯片分析、Northern blot、Dot blot、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析分子克隆等多种下游实验。

操作步骤：

1. 红细胞裂解液的稀释：根据处理血液样品的体积选取适当体积的10×红细胞裂解液（例如待处理的血液样品体积为200 μl，则取140 μl 10×红细胞裂解液），用RNase-free ddH2O 稀释至1×红细胞裂解液。

2. 向1 体积人类全血中加5 倍体积1×红细胞裂解液(需自备合适的干净管子)。注意：为获得最佳的混匀效果，血液和1×红细胞裂解液的混合液体积不应超过管子体积的3/4。如果血液中的白细胞含量较高，可按比例减小血液的使用体积，第6 步中的裂解液RL的使用体积也要进行相应调整。

3. 在冰上孵育10-15 分钟，在孵育过程中涡旋振荡混匀2 次。

注意：在孵育的过程中溶液将变成半透明状态，表明红细胞裂解。如果必要的话，孵育时间可延长至20 分钟。

4. 4℃ 2,100rpm (~400×g)离心10 分钟，将上清完全去除。

注意：离心后白细胞可能会形成小球，确保完全去除上清，痕量红细胞的存在，会使白细胞小球呈现红色，而该现象会在随后的漂洗步骤中消失。

5. 向白细胞沉淀中加入1×红细胞裂解液（加入1×红细胞裂解液的体积是第1 步中全血用量的2 倍），重悬细胞。

6. 4℃，2,100rpm (~400×g)离心10 分钟，将上清完全去除。

注意：如果上清去除不完全将会影响裂解及随后的RNA 与膜的结合，导致最后RNA产率降低。

7. 向白细胞沉淀中加入裂解液RL（使用前请加入β-巯基乙醇），具体加量按照下表进行，涡旋或使用移液器混匀。

注：如果血液不是健康人的全血，需要根据血液中白细胞的数量来确定所需裂解液RL的体积，此时细胞应完全裂解，块状细胞沉淀消失。

8. 将溶液转移至过滤柱CS 中（过滤柱CS 放在收集管中），12,000 rpm

(~13,400×g )离心2 分钟，弃去过滤柱CS，收集滤液。

注意：为避免气溶胶的形成，请将移液器调整到≥750μl以保证一次性将所有溶液转移到过滤柱上，如果细胞太多，将会出现裂解液粘稠的现象，造成难以吸取的情况。

9. 向滤液中加入1 倍体积70%乙醇（通常为350μl 或600μl），混匀（此时可能会出现沉淀），得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱CR2 中（吸附柱CR2 放入收集管中），12,000 rpm(~13,400×g )离心30-60 秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR2 放回收集管中。

注意：配制70%乙醇时请使用RNase-free ddH2O，如果滤液体积有所损失，请相应减少70%乙醇用量。将溶液和沉淀转移至吸附柱CR2 时，体积大于吸附柱容量，可以分两次完成。

10. 向吸附柱CR2 中加入350 μl 去蛋白液RW1，12,000 rpm(~13,400×g)离心30-60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR2 放回收集管中。

11. DNase I 工作液的配制：取10 μl DNase I 储存液放入新的RNase-free 离心管

中，加入70 μl RDD 溶液，轻柔混匀。

12. 向吸附柱CR2 中央加入80 μl 的DNase I 工作液，室温放置15 分钟。

13. 向吸附柱CR2 中加入350 μl 去蛋白液RW1，12,000 rpm(~13,400×g)离心

30-60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR2 放回收集管中。

14. 向吸附柱CR2 中加入500 μl漂洗液RW （使用前请先检查是否已加入乙醇），室温静置2 分钟，12,000 rpm(~13,400×g)离心30-60 秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR2 放回收集管中。

15. 重复步骤14。

16. 12,000 rpm(~13,400×g)离心2 分钟，倒掉废液。将吸附柱CR2 置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。

注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，离心后将吸附柱CR2 在室温放置片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的RT等实验。

17. 将吸附柱CR2 转入一个新的RNase-free 离心管中，加入30-50 μl RNase-free ddH2O 室温放置2 分钟，12,000 rpm(~13,400×g)离心2 分钟，得到RNA 溶液。注意：洗脱缓冲液体积不应少于30 μl，体积过小影响回收效率。RNA溶液请于-70℃保存。

biog全血rna提取试剂盒

BIOG 全血RNA 提取试剂盒说明书 运输条件：常温运输 货 号：51025:50次反应 51026:100次反应 储存条件：室温（15-25℃），消化液请于-20℃存放 产品特点 试剂盒组成 组分 50次 100次 吸附柱和收集管 各50个 各100个 结合液 60 mL 120 mL 裂解液 12 mL 24 mL 析出液 4.5 mL 9 mL 洗涤液 9 mL 18 mL 洗脱液 12mL 24 mL 消化液 1.2 mL 2.4 mL 说明书 1份 1份 产品介绍 BIOG RNA Blood Isolate Kit 是我公司研发团队在综合比较了国外同类优质产品的基础上反复研制优化而成，专门用于血液RNA 的提取纯化。本试剂盒可从新鲜或冷冻保存的全血中提取高质量的基因组RNA ，也可以提取得到血液中感染的细菌、病毒或转移的肿瘤细胞RNA 。BIOG RNA Blood Isolate 采用了最新的优质进口离子膜，结合液、裂解液和洗脱液经过多次优化，提取得到的RNA 产量更大，纯度更高，最大限度地去除了血红素、细胞碎片、脂类、DNA 等杂质污染，可以直接应用于Northern 杂交、RT-PCR 、Real Time RT-PCR 、 cDNA 文库构建、体外翻译等各种常规分子生物学实验。 操作步骤 1. 请自行准备：无水乙醇、无RNA 酶的1.5mL 离心管。 2. 取出析出液和洗涤液，按以下操作： a) 析出液：4.5mL 加入25.5mL 无水乙醇；9mL 加入51mL 无水乙醇。 b) 洗涤液：9mL 加入21mL 无水乙醇；18mL 加入42mL 无水乙醇。 c) 配制好的析出液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。 3. 取无RNA 酶的1.5mL 离心管，加入1mL 结合液，再加入已经解冻或新鲜的血液200μL ，震荡混匀 15秒，室温放置5分钟，5,000 rpm 离 心 3分钟。 4. 彻底移去上清，加入200μL 裂解液，充分混匀，加入20μL 消化液，震荡混匀，56℃水浴10 分钟至细胞完全裂解。 5. 加入500μL 析出液，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响RNA 的提取与后续实验。 6. 将吸附柱放入收集管内，将上述溶液转入吸附柱内，静置2 分钟，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。 7. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。 8. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心2 分钟，离去残留的洗涤液。 9. 取出吸附柱，放入新的无RNA 酶的1.5 mL 离心管内，加入50-200μL 洗脱液，静置3 分钟，12,000 rpm ，4℃ 离心2 分钟，收集RNA 溶液。 10. -70℃保存，或直接用于下一步实验。 注意事项 1. 为防RNA 酶污染，实验过程中最好戴一次性干净手套、口罩，使用处理过的无RNA 酶的容器和无RNA 酶的超纯水。 2. 析出液、洗涤液均含有刺激性化学物质，请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛，请立即用清 水或生理盐水冲洗，必要时请就医。 3. 血液标本用量在200-300μL 之间为宜，不要过多。 4. 裂解液如有白色絮状物析出属正常现象，置于37℃水浴中溶解即可。 储存、运输和有效期 本试剂盒可常温运输，室温（15-25℃）保存，有效期为12个月，消化液请于-20℃存放，避免反复冻融。 质量控制 本产品经严格的质量检验证明，无生物污染 注意 本产品仅用于科研 ◎操作简便快速，可在半小时内完成RNA 提取； ◎最大限度地去除了血红素、细胞碎片等杂质污染，提取的RNA 纯度高，A260/A280为1.8-2.0； ◎RNA 提取得率高，可在200-300 μL 的全血中提取RNA ； ◎不含苯酚和氯仿等有毒溶剂，安全无毒。

全血RNA提取

Qtiangen的RNAprep pure 血液总RNA提取试剂盒 本试剂盒可从血液中快速提取总RNA，可同时处理大量不同样品。提取的总RNA 纯度高，没有蛋白和其它杂质的污染，可用于RT-PCR、Real Time RT-PCR、芯片分析、Northern blot、Dot blot、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析分子克隆等多种下游实验。 操作步骤： 1. 红细胞裂解液的稀释：根据处理血液样品的体积选取适当体积的10×红细胞裂解液（例如待处理的血液样品体积为200 μl，则取140 μl 10×红细胞裂解液），用RNase-free ddH2O 稀释至1×红细胞裂解液。 2. 向1 体积人类全血中加5 倍体积1×红细胞裂解液(需自备合适的干净管子)。注意：为获得最佳的混匀效果，血液和1×红细胞裂解液的混合液体积不应超过管子体积的3/4。如果血液中的白细胞含量较高，可按比例减小血液的使用体积，第6 步中的裂解液RL的使用体积也要进行相应调整。 3. 在冰上孵育10-15 分钟，在孵育过程中涡旋振荡混匀2 次。 注意：在孵育的过程中溶液将变成半透明状态，表明红细胞裂解。如果必要的话，孵育时间可延长至20 分钟。 4. 4℃ 2,100rpm (~400×g)离心10 分钟，将上清完全去除。 注意：离心后白细胞可能会形成小球，确保完全去除上清，痕量红细胞的存在，会使白细胞小球呈现红色，而该现象会在随后的漂洗步骤中消失。 5. 向白细胞沉淀中加入1×红细胞裂解液（加入1×红细胞裂解液的体积是第1 步中全血用量的2 倍），重悬细胞。

6. 4℃，2,100rpm (~400×g)离心10 分钟，将上清完全去除。 注意：如果上清去除不完全将会影响裂解及随后的RNA 与膜的结合，导致最后RNA产率降低。 7. 向白细胞沉淀中加入裂解液RL（使用前请加入β-巯基乙醇），具体加量按照下表进行，涡旋或使用移液器混匀。 注：如果血液不是健康人的全血，需要根据血液中白细胞的数量来确定所需裂解液RL的体积，此时细胞应完全裂解，块状细胞沉淀消失。 8. 将溶液转移至过滤柱CS 中（过滤柱CS 放在收集管中），12,000 rpm (~13,400×g )离心2 分钟，弃去过滤柱CS，收集滤液。 注意：为避免气溶胶的形成，请将移液器调整到≥750μl以保证一次性将所有溶液转移到过滤柱上，如果细胞太多，将会出现裂解液粘稠的现象，造成难以吸取的情况。 9. 向滤液中加入1 倍体积70%乙醇（通常为350μl 或600μl），混匀（此时可能会出现沉淀），得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱CR2 中（吸附柱CR2 放入收集管中），12,000 rpm(~13,400×g )离心30-60 秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR2 放回收集管中。 注意：配制70%乙醇时请使用RNase-free ddH2O，如果滤液体积有所损失，请相应减少70%乙醇用量。将溶液和沉淀转移至吸附柱CR2 时，体积大于吸附柱容量，可以分两次完成。 10. 向吸附柱CR2 中加入350 μl 去蛋白液RW1，12,000 rpm(~13,400×g)离心30-60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR2 放回收集管中。 11. DNase I 工作液的配制：取10 μl DNase I 储存液放入新的RNase-free 离心管

rna提取步骤

RNA fast200 总RNA 极速抽提试剂盒 适用范围：细胞、组织、全血、骨髓、体液、细菌、病毒 Catalog no. 220010 50 次 保存条件：室温，保质期2年。 技术支持：使用中遇到任何问题或建议，请通过E-mail （question@https://www.wendangku.net/doc/bb19123923.html,）与我们的技术支持部门联系，部门的资 深分子生物学专家将在2个工作日内给予答复。 性能介绍： 样本量全血10-1,000μl，培养细胞<1×107，组织<30mg，细菌<1×109，体液（尿液、腹水、胸水、脑积液等）根据具体细胞量 试剂3种（提取细胞浆RNA为4种） 步骤4步：裂解，吸附，清洗，洗脱 耗时7-10min 柱容量200μg total RNA 洗脱体积25-50μl 得率>90% 产量1-5μg/ml全血，100-300μg/1×107细胞，1-6μg/ mg组织，50-200μg/1×109细菌纯度OD260/OD280: 1.9－2.1 特点 1.可能是目前国际上速度最快、步骤最少的总RNA提取方法 2.获得的RNA质量与Trizol提取相同，但操作更稳定，RNA不易丢失，不同 提取批次间变异小，较少发生DNA和蛋白质污染 3.获得的RNA完整性好，纯度高，得率高，可以满足目前所有的后继实验要 求 4.适用性广，可同时适用于动物组织、细胞、细菌、植物组织等的总RNA提

取 5.可直接处理血清、血浆及其它体液 6.非常适于临床标本病毒RNA抽提用于RT-PCR检测 7.生产全线除RNase处理及防护，所有容器及试剂除RNase处理 用途普通RT-PCR，定量RT-PCR，NASBA，表达芯片分析，cDNA合成，构建cDNA 文库，RPA，Northern Blot，mRNA筛选等 试剂盒组成：( Catalog no. 220010 50 次) RA1 10ml（仅提取细胞浆RNA时使用） RA2 30ml 洗液60ml（已加有15ml） 洗脱液10ml 内套柱，外套柱50套 钢网，平皿，研磨棒需要时另配（提取组织RNA时用） 说明书1份 操作流程： 实验操作前请先认真阅读“注意事项” 1．样本预处理 a．抗凝全血：离心管中先加入3ml淋巴细胞分离液，在上层小心加上2-3ml抗凝全血，1,500rpm 室温离心15min，吸取中间层细胞至1.5ml eppendorf管，加入生理盐水1ml，4,000rpm离心2min，倒去上清，加入生理盐水100μl，充分振荡形成细胞悬液，直至没有细胞团块（重要）； b．组织块：剪切成小块后放入平皿（置冰袋上预冷）中的钢网上，加入DEPC处理的PBS或生理盐水（约1ml/30mg组织），用研磨棒将组织研磨挤压过钢网，收集过网悬液，取100μl放入 eppendorf管中（也可采用液氮中捣碎或冰浴中匀浆的方法）； c．培养细胞：悬浮细胞离心后留下细胞团块和适量上清（100μl/2×106细胞），充分震荡直至没有细胞团块（重要）。取100μl放入eppendorf管中；贴壁细胞消化后处理同上。 d．采用细胞浆RNA提取方法时，取上述组织研磨液或各类细胞悬液离心（2,000rpm×2min），去除上清后充分振荡致细胞团松散，加入RA1液（100μl/1×107细胞或30mg组织），充分振荡混 匀30s，再离心30s，吸取100μl上清液放入新的eppendorf管中； e．体液及其它液体性样本：尿液、腹水、胸水、脑积液等根据需要取1-10ml，离心2min，留下沉淀及约100μl上清，充分震荡悬浮沉淀；有时也可以直接取样本100μl； f．细菌：培养良好的细菌菌液1ml，离心后留下细菌团块及大约100μl上清，充分振荡悬浮细菌，直至没有细胞团块（重要）。 2．处理好的样本中，加入RA2液500μl，充分颠倒混匀1min。

RNA提取

TOTAL RNA 提取 一、目的 掌握RNA的提取过程 二、概述 有亚硫氢胍及巯基乙醇时，制组织匀浆，可使内源的RNA酶失活，n-月桂肌氨酸将核蛋白复合物变性。用酸平衡的苯酚：氯仿：异戊醇抽提后，RNA脱离DNA及蛋白，从混合液中层析到水相。抽提后，用异丙醇将RNA沉淀浓缩 模板mRNA 的质量直接影响到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的结构特点,容易受RNA 酶的攻击反应而降解,加上RNA 酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA 酶的污染,并设法抑制其活性,这是本实验成败的关键。 三、材料及试剂 1. Invitrogen TriZOLRNA 提取试剂盒 2. 异丙醇 3. 70％酒精 4. DEPC 5. 低温离心机 四、操作步骤 1、全血标本0.1ml，加入PBS1.5ml，离心7000-8000转停。 2、取上清液弃之，尽量取尽，加入1mlTrizol提取液，混匀（用枪来回吸取打匀），加入氯仿/异戊醇200ul？ （细胞数多的话可以适当增加量），混匀（盖上瓶盖来回晃动），放入-20度，30min。 3、同时取600ul异戊醇放入-20度预冷，30min。 4、取出标本离心12000转，3min，取上清液加入之前预冷的异戊醇中（取液时，管壁的膜状物勿吸到， 为蛋白质)。混匀（盖上瓶盖来回晃动），放入-20度，可第二日取出。 5、取出离心12000转，3min，取上清液弃之，再加入无水乙醇，放入-70度保存。 RNA提取 总RNA（total RNA）和信使RNA(mRNA)的抽提（自己的总结） 总RNA纯化系统采用两种著名的RNA酶抑制剂,异硫氰酸弧(GTC)和β-巯基乙醇,加上整个操作都在冰浴下进行,这样就能显著降低RNA的降解速率。GTC和N-十二烷基肌氨酸钠的联合使用,将促使核蛋白复合体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。而进一步从复合体中纯化RNA,则根据Chomc zynski和Sacchi的一步快速抽提法进行,采用酸性酚-氯仿混合液抽提。低pH值的酚将使RNA进入水相,这样使其与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离。水相中的RNA可用异丙醇沉淀浓缩。进一步将上述RNA 沉淀复溶于GTC溶液中，接着用异丙醇进行二次沉淀，随后用乙醇洗涤沉淀，即可去除所有残留的蛋白质和无机盐，而RNA中如含无机盐,则有可能对以后操作中的一些酶促反应产生抑制。 4、mRNA的应用(了解内容)： RT-PCR, Northern杂交，cDNA文库构建, mRNA末端快速扩增(RACE)，差异表达(DDRT-PCR)，引物延伸反应(Primer Extension)，体外转录(In Vitro RNA Transcription), RNA标记(RNA labeling)，RNA酶保护试验(RNase and S1 Nuclease Protection Assay)，RNA微注射(RNA Microinjection) RNA提得比较好的话，电泳后28S rRNA和18S rRNA应当能清楚地在紫外灯下看到。甚至可以看到一条由tRNA, 5.8S rRNA和5S rRNA组成的，较模糊迁移较快的带。如果RNA

血液RNA提取

完全可以,我曾经全血标本6个小时后分离白细胞提RNA,结果很好.因为你提的是白细胞内的RNA,因而在细胞没破损前,一般情况下不会出现RNA的降解,当你开始加TIIZOL时,你的所有器材的处理尤其重要,因而放心的做吧, 本人长期从事白血病融合基因的检测，曾经使用4度保存3天的血液进行RNA提取，效果同样非常满意，目前使用的一次性耗材基本上不用DEPC水处理，只要注意规范操作，按TIIZOL说明书操作，提取的RNA 质量同样非常的高。附上本试验室的简易操作程序： 1．外周血及骨髓（抗凝）利用淋巴细胞分离液分离单个核细胞 （1）外周血送检需5-10ml抗凝血，骨髓需1-3ml抗凝，常温送检(样本量根据单个核细胞的数量来确定，一般需要5x106单个核细胞以上)。 （2）加入等体积无菌PBS于外周血及骨髓中充分混合，形成细胞悬液； （3）加入5ml淋巴细胞分离液于另一离心管。 （4）吸取5ml细胞悬液沿管壁轻轻加入到淋巴细胞分离液表面（注意勿与淋巴细胞分离液混合）。离心1500rpm 20min。 （5）用吸管轻轻吸出界面层（白膜）中的MNC入另一离心管中。无菌冷PBS洗2次，最后1次洗涤可以将细胞悬液移入EP管中，离心去上清直接或加入TRIzol混匀后-70℃冻存，或直接提取RNA（可以先进行细胞计数以保证细胞数）。 2．利用Trizol的方法提取细胞总RNA（参照Invitrogen公司Trizol说明书） 以下步骤要严格防止RNA酶降解RNA，所使用的离心管和枪头要用0.1% DEPC水处理24h，然后高压灭菌并烤干。尽量快地进行操作，减少RNA降解。 （1）先加1ml Trizol于1×107细胞中，若冻存细胞直接加入Trizol，不需解冻，吹打裂解后室温静置 5-10min。（可-70℃，1月） （2）加入0.2ml氯仿（三氯甲脘），剧烈震荡（vigorously）15s，室温静置2-3min。 （3）在4℃下1,2000g离心15min。 （4）小心吸出上清水相约500μl移入另一离心管（注意不要抽到蛋白层），加入500μl异丙醇（专用），颠倒混匀（不要太剧烈），室温静置10min（RNA沉到底部）。 （5） 4℃1,2000g离心10min，倒去上清液，底部可见针尖大小白色物质（RNA）。 （6）加入1ml 70%乙醇旋转洗涤，清洗异丙醇。 （7） 4℃7500 g离心5min，去除乙醇（尽量用枪头吸干净）后晾5-10min，不要太干,否则难以溶解。RNA可以在70%乙醇中-80℃保存1年。 最新血液RNA提取！！！！ 1、血液收集：最好用肝素抗凝，因为EDTA可能会对后续的pcr有影响，因为EDTA会螯合pcr 反应中的Mg2+，也可以根据实验的具体要求看选择怎么样的抗凝。 2、白细胞的分离：一般选择1.5ML新鲜的血液，或选取冷冻的5ML的血液（冷冻血液的保存：先液氮速冻，再置于-80°保存），或隔天的5ML的血液，就可以分离到比较多的白细胞了。可以选择溶红素（BD公司的）或红细胞裂解液按一定的比例（1：3或1：5）分离白细胞，一般在3500转离心6分钟即可，效果不好的话，可以重新裂解一次。分离得到的白细胞，立刻用质量好的TRIZOL裂解白细胞，如果不能马上提取的话，可以置于-20或-80°保存，过后抽提。 3、RNA抽提：选择一般的组织或细胞的RNA抽提试剂盒即可。

RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南

Trizol法RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南（破碎组织→分离RNA→沉淀RNA→洗涤RNA→融解RNA→保存RNA） 1 试剂： 三氯甲烷（氯仿），异丙醇，75℅乙醇，无RNase的水、Trizol reagent 2 材料与仪器：EP管匀浆器移液枪漩涡振荡器低温高速冷冻离心机冰 袋电泳仪琼脂糖凝胶超净工作台 3 操作步骤： 3.1 准备工作 A 玻璃匀浆器、75℅乙醇预冷，离心机预冷至4℃打开超净工作台紫外灯15分钟以 上 B 用酒精擦拭台面EP管标记 3.2. 匀浆处理 1 取一定量的纯化过的孢子悬浮液，12000rpm ，离心5min，弃上清 a 或者用匀浆仪进行匀浆处理，悬浮液不经离心，直接加0.5ml Trizol reagent于冰上充 分匀浆悬浮液样品体积一般不要超过Trizol体积的10%.，然后再加入0.5ml Trizol 冲洗匀浆器，转移至1.5ml EP管中 b 直接在悬浮液中加入Trizol裂解细胞，加1ml Trizol.用取样器吹打几次.（离心取细胞， 每5-10×106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml Trizol。加Trizol前不要洗涤细胞，以免降解mRNA。一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪处理） 2 1ml Trizol Reagent，震荡混匀 3. 将匀浆样品在15-30℃放置5mim，使得核酸蛋白复合物完全分离。 4. 可选步骤:4 ℃12 000rpm离心10min，取上清。 如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可离心去除。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂，应除去。取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。 5. 每使用1ml Trizol加0.2ml氯仿，盖好管盖，在漩涡振荡器上震荡15s，室温放置3min。如不能涡旋混匀，可手动颠倒混匀2min代替。 6. 4 ℃12 000rpm，离心10-15min，样品会分成三层：红色的有机相，中间层和上层无色的水相，RNA主要在水相中，把水相（约600ul，约为所用Trizol试剂的60%）转移到新管中。（如要分离蛋白质和DNA，可保留黄色的有机相） 7. 在得到的水相溶液中加入等体积（500ul）的异丙醇，上下颠倒混匀，-20℃放置20-30min。 （植物或动物组织RNA提取中，容易沉淀出大量的蛋白等污染物，导致电泳检测时看不到RNA。可以按以下步骤操作减轻污染：在上清中加入1/2体积的异丙醇，1/2体积的RNA助沉剂，然后进行以下操作。） 8 4 ℃12 000rpm离心10min，去上清。 （离心前RNA沉淀经常是看不见的，离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。）

rnablood超纯全血总rna快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书

RNAblood超纯全血总RNA快速提取试剂盒 目录号：RN25 50次 RN2502 ❖适用范围: 木试剂盒在室温储存12个丿J不影响使用效果。 储存事项： 1.所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直 -1 -

接使用，可在37C水浴加热几分钟，即可恢复澄清。 2.不合适的储存于低温(4C或者一20C)会造成溶液沉淀，影响使用效果，I対此运输 和储存均在室温下(15C—259)进行。裂解液RL可以常温运输•收到后JC避光保存. 3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖 紧盖子。 • 产品介绍： 1.第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定绘乙醇，加入后请及时 打钩标记已加入乙醇，以免多次加入！ 2.所有离心步骤如未加说明.均在室温进行。使用转速可以达到13, OOOrpm的传统台 式离心机.如Eppendorf5415C或者类似离心机。 3.裂解液RL和去贵白液RE中含有刺激性有害化合物.操作时要戴乳胶于•套，避免沾 染皮肤、眼睛和衣服.若沾染皮肤、眼睛时，要用大量淸水或者生理盐水冲洗。 4.考虑到环保问题，本试剂盒不含有实验室常用试剂氯仿.用户使用前需要自备氮仿。 5.常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用來分析RNA的质量。好的RNA产物 在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖休RNA带，分别为~5Kb(28S) • ~2Kb (18S),条带亮度比值约为2： lo有时候也可以看到~O」kb和O.3Kb(5S・ tRNA) 带。 但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4, 5条带也属于正常现彖, 如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA.小核RNA提収出來也可能看到介干7Kb和15Kb之间的不连续的高分子虽条带「 6.检测OD2W yOD28o吸光度比值时.RNA样品应该溶于TE后检测.如果用水稀释后检 测，由干一般水离子强度和PH值低，会使OD280升臥从而使比值降低。 7.加入裂解液RL匀浆后，加氮仿前•样品可在-609・70€保存一个丿J以上。 & 关于DNA的微址残留: 一般说來任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微虽残留.在大

全血提取rna步骤及注意事项

全血提取rna步骤及注意事项 全血提取RNA步骤及注意事项 引言： RNA是一种重要的生物大分子，它在细胞内参与了许多关键的生物过程。全血提取RNA是一种常用的实验方法，用于获取全血样本中的RNA，并进一步应用于分子生物学研究。本文将介绍全血提取RNA的步骤及注意事项。 一、全血提取RNA的步骤： 1. 样本采集： a. 使用无菌技术，采集全血样本，并将其转移到无菌离心管中； b. 保持样本无菌，避免污染。 2. 血浆分离： a. 将全血样本离心，将血浆和混浊的细胞沉淀分离开； b. 小心地将血浆转移到新的离心管中。 3. 细胞沉淀处理： a. 将细胞沉淀洗涤，去除血浆中的残留细胞； b. 加入适量的PBS缓冲液，轻轻混合，离心沉淀； c. 去除上清液，获得纯净的细胞沉淀。 4. 细胞破碎：

a. 加入适量的细胞破碎缓冲液，使细胞完全破碎释放RNA； b. 使用离心机离心，去除细胞碎片。 5. RNA纯化： a. 加入适量的RNA纯化试剂，使RNA与其他杂质分离； b. 使用离心机离心，将RNA沉淀下来； c. 去除上清液，使用酒精洗涤RNA沉淀； d. 最后用RNase-free水溶解RNA沉淀。 6. RNA质量检测： a. 使用比色计或生物分析仪检测RNA的浓度和纯度； b. 确保RNA质量良好，无降解和污染。 二、全血提取RNA的注意事项： 1. 样本处理： a. 采集全血样本时，注意样本的无菌和无污染； b. 在处理全血样本时，尽量避免样本的降解和污染。 2. 实验操作： a. 在操作过程中，使用无菌技术，保持实验环境的清洁； b. 使用RNase-free材料和试剂，避免RNA的降解； c. 注意各步骤的离心条件和时间，确保样本的分离和沉淀效果。 3. RNA质量检测：

全血RNA提取步骤

Trizol法提取全血总RNA 实验前准备: Trizol,氯仿，异丙醇，75％乙醇（用RNase—Free水配制），RNase-Free水，柠檬酸钠抗凝管。1ml注射器，1。5、3 ml EP管（DEPC处理过)，大、中、小号枪头（DEPC处理） 150~250 ul全血 加入10倍体积TRIzol（主要是异硫氰酸胍）（1.5 ml～2。5 ml），充分吹打混匀，室温静置5min（使核酸蛋白复合物完全分离）。 每1毫升的TRIzol试剂加入200 ul的氯仿（300 ul~500ul），静置3min，离心12000g,4℃，15min。 将上层水相转移到1。5 ml EP管中，加500 ul的异丙醇，上下颠倒混匀10 s，室温静置10min，离心12000 g，4℃，10 min,弃上清。 加入1 ml的75%乙醇，上下颠倒混匀10 s,离心7500 g，4℃，10 min，弃上清。 室温下干燥5—10 min（充分干燥不好溶解)，加入50 ul的RNase-free-water充分溶解RNA。 分光光度计测OD值。 (取2μl进行电泳，其余-80℃保存？) #加入TRIzol后可选步骤：如样品中 含有较多蛋白质，脂肪,多糖或胞外物 质（肌肉，植物结节部分等)可于2-8℃ 10000×g离心10分钟，取上清.离心 得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高 分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂 肪组织时，上层有大量油脂应去除。取 澄清的匀浆液进行下一步操作。

▲分光光度计检测质量 取出2 ul定量， 测量buffer： 10mM TrisCl（pH7.8）。 A260/A280=1.8~2。1，说明RNA质量可靠； A260/A280〈1。8，说明有蛋白污染； A260/A280〉2。1，说明RNA存在降解。 ▲电泳检测 RNA电泳检测RNA完整性：配制1%的凝胶，上样，120V电泳20min，紫外灯下观察结果，若能看到28S和18S两条带，且亮度约为2：1，说明RNA完整性较好。

全血RNA提取步骤

全血RNA提取步骤 1.试剂准备： a.梯度离心管：使用1.5mL或2mL的离心试管，也可以使用96孔板。 b.溶解缓冲液：使用含有酮糖、胱氨酸和EDTA的溶液。 c.溶液添加剂：包括蛋白酶、盐酸和异硫氰酸草酰胺。 d.RNase Free水：用于稀释试剂和洗涤的水。 e.异丙醇：用于沉淀RNA。 f.洗涤缓冲液：使用具有酒精干燥剂的净化缓冲液。 g.EasyMag Technology：用于自动提取RNA的工具。 2.样品收集： a.选择收集全血样品，将其收集到干净无菌的管中。确保样品不含有 抗凝剂。 b.避免样本在室温下暴露时间过长，以避免RNA降解。 3.初步处理： a.将收集到的样品尽快在冰上离心。最好在4°C离心10分钟。 b.将上清液转移至新的离心管中，避免沉淀。 4.RBC裂解： a.将上清液加入等体积的洗涤缓冲液，轻轻混合。 b.将混合液盖上萘醚盖，室温下慢慢翻滚混合10分钟。

c.离心混合液，将上清液转移至新的离心管中。 5.沉淀细胞： a.将上清液中的细胞用离心进行沉淀。在2000×g离心10分钟。 b.将上清液完全倒出，留下细胞沉淀。 6.裂解细胞膜： a.将沉淀的细胞加入溶解缓冲液中。低速颠倒混合10分钟。 b.加入溶液添加剂，并再次低速颠倒混合30秒。 7.沉淀RNA： a.加入异丙醇至混合液中，混匀。 c.将沉淀的RNA转移至新的离心管中。 8.洗涤RNA： b.在最后一次洗涤后，用RNase Free水重悬RNA。 9.储存RNA： a.将提取的RNA储存在-80°C的冰箱中，以避免RNA降解。 总结： 全血RNA提取是一项关键实验技术，在RNA研究中具有重要作用。以上步骤概括了全血RNA提取的主要过程，包括样品准备、细胞裂解、沉淀RNA和洗涤RNA等步骤。通过精确操作和合适的实验条件，可以获得高质量的全血RNA样品，用于后续的实验研究。

全血提取rna注意事项

全血提取rna注意事项 全血提取RNA是一种重要的实验技术，用于研究基因表达以及诊断各 种疾病。在进行全血提取RNA时，需要遵循一些注意事项，以确保提取到 高质量和高纯度的RNA。以下是关于全血提取RNA的一些重要注意事项： 1.选择血样处理方法：全血可以通过不同的方法处理，以便更好地提 取RNA。一种常用的方法是使用RNA保护液在提取前将全血稳定保存，在 保存过程中尽量避免RNA的降解。 2. 采集样品：在采集全血样品时，需要使用无菌技术，并确保所有 使用的工具都是干净的。避免使用存在RNase酶的试剂和材料。 3.快速处理样品：全血中的RNA易于降解，因此在采集后应尽快处理 样品。最好在收集和处理样品之间的时间内保持其在2-4℃的低温条件下。 4. 有效裂解红细胞：全血包含有大量红细胞，需要有效地裂解红细 胞以释放目标细胞中的RNA。强烈推荐使用RNA裂解试剂，如Trizol，以 最大程度地确保裂解红细胞。 5. 使用正确的裂解缓冲液：裂解缓冲液的选择对于提取RNA的质量 和纯度至关重要。一般来说，含有非离子型洗涤剂（例如SDS或Triton X-100）的裂解缓冲液可以更好地裂解细胞膜并保持RNA的完整性。 6. RNA保护剂的添加：添加RNA保护剂，如RNase抑制剂，可保护RNA免受RNase酶的降解。这可以通过在裂解缓冲液中添加RNase抑制剂 来实现。

7. 避免污染：在全血提取RNA的过程中，如果不小心将样品污染， 可能会导致RNA的降解。因此，严格遵守实验室的无菌技术，避免接触外 来RNase源。 8.使用适当的RNA纯化方法：提取到的总RNA中可能会存在DNA，残 留的RNA保护剂和其他杂质。使用RNA纯化试剂盒和纯化柱等纯化方法可 以有效去除这些杂质，以获得纯净的RNA。 9.RNA浓度和质量：在全血提取RNA之后，使用光谱仪或荧光分析仪 测定RNA的浓度和纯度。确保所提取到的RNA浓度适合所需的下游实验， 并且纯度高，没有明显的DNA或其他杂质。 10.存储和运输：提取到的RNA可以在-80℃的低温下长期保存。如果 需要运输，可以使用干冰或液氮携带RNA样本，以防止其降解。 总之，全血提取RNA是一项敏感的实验技术，需要密切遵循上述注意 事项以获得高质量和高纯度的RNA。这些措施可以帮助保护RNA免受降解，并避免外来RNase的污染，从而确保所提取到的RNA可以用于后续的分子 生物学实验和疾病研究。

磁珠法全血总RNA 提取详细步骤及方法

磁珠法全血总RNA 提取详细步骤及方法 注意事项： ◆样品应避免反复冻融，否则会导致提取的RNA降解且提取量也下降； ◆需要自备材料：无水乙醇、PBS缓冲液、磁铁或磁架、无RNase离心管； ◆整个过程请勿离心，以免磁珠不可逆聚集而影响提取效果。 ◆已加入抗凝剂的血液样品可在2-8℃储存不超过3天（推荐使用EDTA作为抗凝剂），长期贮存请置于-70℃； ◆全程使用无RNase的塑料制品和枪头，操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套； ◆玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌 实验准备 ◆磁珠用前一定要充分混匀； ◆37℃加热源； ◆Buffer BRL在使用前应加入2%的β-巯基乙醇（例如单个反应400 μl Buffer BRL，应加入8ulβ-巯基乙醇，充分混匀备用），且现配现用。 ◆配制Buffer BRW I：Buffer BRW I 使用前加入相应体积的无水乙醇； ◆配制1×红细胞裂解液：10×红细胞裂解液需用洗脱液(EB)稀释成1×红细胞裂解液，且需现配现用。 ◆配制DNase I 反应液：对于单个样品，取10 μl洗脱液(EB)，向其中加入35 μl DNase I缓冲液和30 μl DNase I，最终配置成终体积为75 μL的反应液(置于4℃备用)，按照样品的数量按比例放大。

◆冻存血液应在室温或37℃缓慢解冻，不可高温加热，以免血凝成块；将冻存的血液置于37℃摇床150-200 rpm融化，效果最佳；也可提前一天放在4℃解冻；新鲜和融化的冻存血液2500g离心5分钟后，沉淀备用； 操作步骤 1. 样本前处理：A、血液体积小于200 μl，可直接跳至步骤2进行提取B、血液体积大于200 μl，在血液中加入3倍体积的1×红细胞裂解液，颠倒混匀6-8次，室温放置10 min，期间不时颠倒轻弹混匀数次，500g离心3 min,倒弃红色上清,并小心的尽可能多的吸弃上清，不要吸走底部沉淀（沉淀有点呈红色），留下完整的管底白细胞团； 2. 裂解结合：在100-200 μL血液或细胞沉淀中，加入400 μLBuffer BRL重悬细胞、400 μl异丙醇和30 μl磁珠，颠倒混匀，室温放置10分钟（期间不时颠倒混匀，重悬磁珠），将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体。；注意：如果改变样品使用量，裂解液、磁珠悬浮液和异丙醇醇的使用量也需要按比例做相应的调整。 3. 漂洗: (1)将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入500 μl Buffer BRW 0,轻微振荡混匀（或用移液器吹打混匀）,重悬磁珠，将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体；(2)向离心管中加入500 μl Buffer BRW I,轻微振荡混匀（或用移液器吹打混匀）,重悬磁珠，将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体,重复上述洗涤步骤1次，第二次洗涤待磁珠完全吸附后充分吸弃液体（不要有残留），室温晾干5-10min。注意：要将上清尽量弃净，乙醇晾干，以免影响DNase I消化效果 4. DNA消化：将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入75 μl DNase I

全血RNA提取步骤

全血RNA提取步骤 1.样品采集和处理： a.选择全血样品，通常是静脉血。 b.尽可能快地将样品转移到稳定的离心管中。避免使用抗凝剂，因为抗凝剂可能会影响RNA的提取。 c.在转移样品前，准备好离心管，确保其无污染。 d.快速混合样品，以确保血液均匀。 2.红细胞淋滤和裂解： a. 将全血样品转移到含有裂解缓冲液（比如加入EDTA和TRIzol）的离心管中。 b.快速混合样品，以确保裂解液与细胞充分接触。 c.将样品离心，以分离红细胞沉淀。 d.扔掉上清，保留红细胞沉淀。 3.RNA裂解： a.将裂解液加入红细胞沉淀，彻底混合。 b.基于试剂盒的说明，使用超声波仪器或快速震动装置将样品裂解。 c.将裂解后的样品在低温下（4℃）保存（如果不能立即进一步处理）。 4.RNA提取：

a.加入适量的氯仿到裂解后的样品中，然后摇匀。 b.离心样品，使其分成上清（包含DNA和RNA）和下清（包含蛋白质）。 c.将上清转移到新的离心管中，然后加入相应的异丙醇。 d.快速摇动并离心样品，使RNA沉积到离心管底部。 e.倒掉上清，用75％的乙醇洗涤RNA沉淀。 f.空气干燥RNA沉淀（注意不要让RNA过干，以免产生降解）。 5.RNA溶解和纯化： a. 加入预先准备好的RNA溶解液（如RNase-free水）溶解RNA沉淀。 b.通过转染操作或在冰上进行短时间强制转位，使RNA完全溶解。 c.加入DNA酶和RNA酶抑制剂，防止RNA降解。 d.使用RNA纯化试剂盒，根据说明，使用柱子或直接沉淀法纯化RNA。 e.使用自旋柱或直接离心纯化RNA，并去除残留的DNA和蛋白质。 6.RNA质量和浓度检测： a.使用核酸分析仪测量RNA样品的浓度。 b.使用凝胶电泳或比色法检测RNA的完整性。 7.存储RNA样品： a.在低温下（-80℃）储存RNA样品，以确保其稳定性。 b. 准备工作液时，避免使用RNase污染物。

血浆rna提取方法

血浆rna提取方法 血浆RNA提取方法 引言： 血浆RNA提取是一项重要的实验技术，它可以从血浆样本中提取出RNA分子，为进一步的研究和分析提供了基础。本文将介绍血浆RNA提取的方法，包括样本采集、预处理、RNA提取和质量检测等步骤。 一、样本采集 在进行血浆RNA提取实验之前，首先需要采集血浆样本。常用的样本采集方法有离心法和血浆分离管法。离心法是将全血样本以高速离心，分离出血浆，再将血浆转移到离心管中。血浆分离管法是使用一种特殊的采血管，可以在采血的同时将血浆和细胞分离开来。无论使用哪种方法，采集的血浆样本都需要立即冷藏并尽快进行后续处理。 二、预处理 为了提高血浆RNA的提取效果，可以在提取之前进行一些预处理步骤。首先，将血浆样本从冰箱中取出，使其温度逐渐回升到室温。然后，将血浆样本转移到冰缸中，并缓慢搅拌，确保样本均匀。接下来，使用离心机将血浆样本离心，去除悬浮在上层的细胞残渣。最后，将离心后的上清液转移至新的离心管中，并再次进行离心，

去除可能残留的细胞。 三、RNA提取 RNA提取是血浆RNA提取的核心步骤，常用的方法有酚-氯仿法、硅胶柱法和磁珠法。酚-氯仿法是一种经典的RNA提取方法，它通过酚和氯仿的相分离，将RNA分离出来。硅胶柱法是一种基于硅胶膜的RNA提取方法，它利用硅胶膜的亲和性将RNA吸附在硅胶膜上，并通过洗脱的方式得到RNA。磁珠法是一种新兴的RNA提取方法，它利用磁珠的磁性将RNA与其他组分分离开来，具有操作简便、提取效果好等优点。 四、质量检测 为了确保提取的血浆RNA的质量和纯度，需要进行一系列的质量检测。常用的质量检测方法有比色法、凝胶电泳和实时荧光定量PCR。比色法可以通过检测RNA的吸光度来评估其浓度和纯度。凝胶电泳可以通过检测RNA在琼脂糖凝胶上的迁移情况来评估其完整性。实时荧光定量PCR可以通过检测RNA的扩增曲线和阈值周期数来评估其含量和质量。 结论： 血浆RNA提取是一项重要的实验技术，在生物医学研究和临床诊断中具有广泛的应用前景。通过采集样本、预处理、RNA提取和质量检测等步骤，可以得到高质量的血浆RNA，为后续的研究和分析

RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南

RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南 RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南 准备试剂：氯仿，异丙醇，75℅乙醇，无RNase的水或0.5℅SDS （溶液均需用DEPC处理过的水配制）。 操作步骤： 1. 匀浆处理 a. 植物组织: 以叶片RNA提取为例.取新鲜叶片在液氮中充分研磨或将叶片剪碎后直接在Trizol中研磨,研磨要迅速,最好不要超过1min.，大约100mg 叶片使用1 ml Trizol. b. 动物组织: 以鼠肝脏RNA提取为例.取新鲜或-70℃冻存组织,每50-100mg 组织加1ml Trizol,用匀浆仪进行匀浆处理.样品体积一般不要超过Trizol体积的10%. c. 单层培养细胞. 直接在培养板中加入Trizol裂解细胞,每10cm2面积加1ml Trizol.用取样器吹打几次. 注意:Trizol加量根据培养板面积决定,不是由细胞数决定.如果Trizol加量不足,可能导致提取的RNA中有DNA污染. d.细胞悬液: 离心取细胞，每5-10×106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml Trizol。加Trizol 前不要洗涤细胞，以免降解mRNA。一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪处理。 e.血液处理: 直接取新鲜的血液,加入3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10min，10 000rpm 离心1min。弃上清，收集白细胞沉淀。每1ml 血液收集的白细胞沉淀中加入1ml Trizol。 2. 将匀浆样品在15-30℃放置5mim，使得核酸蛋白复合物完全分离。

3. 可选步骤:4 ℃10 000rpm离心10min，取上清。 如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可离心去除。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂，应除去。取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。 4. 每使用1ml Trizol加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈震荡15s，室温放置3min。如不能涡旋混匀，可手动颠倒混匀2min代替。 5. 4 ℃10 000rpm离心10-15min，样品会分成三层：红色的有机相，中间层和上层无色的水相，RNA主要在水相中，把水相（约600ul，约为所用Trizol试剂的60%）转移到新管中。（如要分离蛋白质和DNA，可保留黄色的有机相） 6. 在得到的水相溶液中加入等体积的异丙醇，混匀，-20℃放置20-30min。 植物或动物组织RNA提取中，容易沉淀出大量的蛋白等污染物，导致电泳检测时看不到RNA。可以按以下步骤操作减轻污染：在上清中加入1/2体积的异丙醇，1/2体积的RNA助沉剂，然后进行以下操作。 7. 4 ℃10 000rpm离心10min，去上清。 离心前RNA沉淀经常是看不见的，离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。 8. 加入1ml 75%乙醇（DEPC水处理过的水配制）洗涤沉淀。每使用1ml Trizol至少加1ml 乙醇。 9. 4 ℃10 000rpm离心2min，弃上清；短暂快速离心，用移液器小心吸弃上清，注意不要吸弃沉淀。 10. 室温放置晾干（不要晾得过干，RNA完全干燥后会很难溶解，大约晾干2-3min左右即可）。加入适量DEPC水（根据实验需要，可加30-100ul水）或0.5%SDS，用枪头吸打几次，充分溶解RNA。如RNA用于酶切反应，勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲 酰胺溶解，-70℃保存。

不同血液保存方法对RNA提取的影响(简易版)

不同血液保存方法对RNA提取的影响 一、引言 1.1 探索血液RNA 保存方法的必要性 全血作为较易获取的人体标本，特别适用于实验室和临床检测。高质量的RNA 可以满足RT-PCR、qRT-PCR、Northern blot、基因表达谱、转录组测序、核酸酶保护实验和阵列分析等生物学下游实验的研究需求[1]。但由于 RNA 自身结构为单链状态，极不稳定，同时广泛分布的 RNase 时刻发挥着降解 RNA 的功能，其活性难以被抑制，因此使得从全血中提取 RNA 以及对 RNA 的保存相对困难。 1.2 常见的血液RNA 保存方法 第一种为分离白膜层[2]，加入 RNAlater 保护剂冻存-80℃。此种方法为目前样本库常用的血液 RNA 保存方法，采血后需在常温保存 4 小时内完成白膜层分离，或在采血 2 小时内放入 4℃冰箱保存，24 小时内 4 ℃低温分离，将分离获得的白膜层用 RNAlater 保护剂保存，RNAlater 的主要作用为提供高盐环境使细胞脱水，抑制核酸酶活性。此种方法的优势在于可将全血中大部分对于提取RNA 无用的成分去除，缩减了样本的体积，更加便于保存。但此种方法的弊端在于，首先分离白膜层的过程较为繁琐，需要多次离心，在临床医院或临时的采血点往往难以实施，其次高盐脱水后的细胞复性困难，提取 RNA 的难度增加，且高盐组分不易去除，提取的 RNA 纯度不高，最后血液在分离白膜层过程中，会有部分白细胞及 RNA 组分缺失。 第二种为专用的静脉真空采血管，其中添加了特殊的试剂，可以保护细胞内的 RNA，防止降解，但此方法核酸得率偏低，需大量血液来支撑下游实验研究。 本实验内容纵向地比较了两种血液保存方式下，RNA 保存效果的对比；并探索了在不同保存温度及不同保存时间下，RNA 的保存效果。希望本文可为广大的科研同胞们提供帮助。