RIPA裂解液说明书

北京百泰克生物技术有限公司

BioTeke Corporation

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RIPA裂解液（变性型）

目录号：PP1901 50ml, PP1902 100ml 储存：4℃避光

产品描述:

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种，本产品RIPA裂解液的主要成分为50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS 以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA ，等多种磷酸酶抑制剂。

注意事项：

1.裂解得到的蛋白样品，由于含有较高浓度的去垢剂干扰，不能用

Bradford法测定蛋白浓度，可以选用本公司生产的BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。

2.用户使用前需加入蛋白酶抑制剂如PMSF或者根据需要再加入

leupeptin，aprotinin等其它抑制剂。

3.裂解液中SDS 4℃保存易沉淀析出，使用前应该37℃水浴重新溶解完全后

回复到室温使用。

4.裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

操作方法:

对于培养细胞样品：

1.取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓

度为1mM。

2.对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗

一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞，离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必须分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

3.充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的

PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。

对于组织样品：

1.把组织剪切成细小的碎片。

2.取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最

终浓度为1mM。

3.按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。

(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度

的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)

4.用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

5.充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后

续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

6.如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液

裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。