植物内生真菌的分离

植物内生真菌的分离

一、实验目的

1．理解内生真菌存在的普遍性和多样性

2.掌握常规的微生物分离纯化方法

3.掌握分菌过程中的一些基本操作技能

二、实验原理

植物内生真菌( Ｅnｄophｙte) 是指那些在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的各种组织和器官内部的真菌或细菌，而宿主植物一般不表现出外在的症状。所有植物中几乎都存在内生菌. 由于植物内生真菌与宿主在长期的进化过程中形成了特殊的生态关系,因而内生真菌能产生与宿主相同或相似的具有生理活性的次生代谢产物，从内生菌中寻找和发现新的活性化合物越来越成为微生物次生代谢产物的研究热点之一。

采用微生物学常规的组织分离法从植物中分离内生真菌

三、实验材料

板蓝根新鲜健康的叶片

试剂:次氯酸钠、无水乙醇、葡萄糖、琼脂、青霉素、链霉素

培养基：PDA培养基、分离培养基

四、实验步骤

（一)、配制PDA培养基

10月27号晚上：

(1）配置ＰDA培养基,用电子称称取去皮的土豆10０g，煮沸30min，4层纱布过滤，滤液加热,加入琼脂７.5克，琼脂完全融化后加入葡萄糖10g，待稍冷却后加水至5０0毫升。

(2)准备1０瓶无菌水，每瓶150ml左右。

(3)包好烧杯,培养皿，涂布棒等实验仪器，等待消毒。

(二)、配制分离培养基

28号中午：

（1）配置分离培养基，将PDA培养液均分成两份，一份备用,另一份待高温灭菌后,加入青霉素１0０mg／L、链霉素200mg/L的混合液20mｌ，即得到分离培养基。

（2）用消毒后的培养皿在通风橱中倒平板,注意在整个过程中保证无菌操作。

(三)、采集新鲜板蓝根叶片

２8号晚上到实验室外采集新鲜健康叶片完整的板蓝根叶片。(四)、植物组织表面消毒

2８号晚上将新鲜、健康的板蓝根叶片于自来水下冲洗干净，用吸水纸吸干表面水分后剪成小段(片）做如下表面消毒处理:75%酒精漂洗3ｍin，无菌水冲洗4~5次,5％次氯酸钠溶液漂洗叶3ｍin,无菌水冲洗4~5次，无菌滤纸吸干水分。

（五）、接种并培养

28号晚上:

(1）将上述表面消毒后的材料剪切成0.５ｃm 2 小块,放入含

有分离培养基的平板中(3块／每板)28℃恒温培养3～15天。最后一次洗涤水涂布平板作为对照。

（2)取备用PDＡ培养液高温灭菌后,加入青霉素100mg/L、链霉素２00ｍg/L的混合液2０mｌ,在通分橱中倒平板。

（六）、分离真菌

29号晚上：接种培养24小时后,观察对照组无细菌产生，说明实验成功。

３1号中午：继续培养2天后,实验组组织块边缘没有菌丝产生，放入恒温箱继续培养。

１1月1号中午:观察到实验组组织块边缘没有菌丝产生，放入恒温箱继续培养。

1１月2号晚上:观察到实验组组织块边缘有少量菌丝产生,及时采用菌丝尖端挑取法将其转入另一ＰDＡ平板培养。

（七）、纯化

待分离培养基中长出真菌后，挑入斜面培养基中培养。

植物内生菌的分离

植物内生菌的分离 钱昆121140041 一、实验目的 1、掌握对植物内生菌的分离处理方法。 2、熟练掌握对细菌、真菌的染色观察技术。 3、了解微生物分子实验的基本操作流程。 二、实验原理 在植物的生态环境中，存在着各种各样的微生物,它们有的附着于植物的表面，有的则生活于植物体内。对于附着于植物表面和根际的微生物已有很多研究，而对于植物体内微生物的研究却刚刚起步。但有资料显示, 一些植物内生微生物与宿主发生关系时，可明显增强宿主的抗病性，提高植物的生产力。因此，合理利用植物的内生微生物具有重要的理论意义和实用价值。植物内生菌作为微生物研究领域之一，近年来一直备受关注。 内生菌概念在1866年首先由Bary提出的，指那些在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的组织或器官内部的微生物（主要为真菌和细菌）。其后的很长时间内，内生菌研究进展缓慢。直到1993 年，美国蒙大拿州立大学Strobel等从短叶红豆杉的韧皮部位分离到一株产新型抗癌物质紫杉醇的内生真菌，从而启发人们可从植物内生菌寻找与植物产生的相同或相似的化合物，由此促进了植物内生菌的研究。植物内生菌为植物组织内的正常菌群，包括植物内生真菌、内生细菌和内生放线菌，广泛分布于各种陆生及水生的低等植物和高等植物中。 内生真菌是在宿主植物的茎和叶内生存并完成生活周期的真菌。这类真菌中，有许多种类很少形成孢子，或者在宿生植物上形成孢子（或者孢子果），不容易识别。真菌感染植物组织，菌丝存在于细胞内和细胞间。与病原菌不同，这些真菌对宿主植物几乎没有害处，它们和植物之间或者是相互依存的共生关系，或者是不太密切的共生关系。 对于现已分离得到的植物内生细菌，一般可分为专性内生细菌与兼性内生细菌，前者指至今只能在植物体内分离得到的细菌；后者指能在植物根际与土壤中分离得到，也能在植物体内分离得到的细菌，而且种类居多。根据内生细菌对宿主植物生长发育的影响可以将其分成三类：第一类对植物的作用是中性的，即尚未发现它们的内生定殖对宿主植物生长与繁殖有影响；第二类对植物生长发育有促进作用，如能提高宿主植物抗病、抗逆能力，或能通过固氮与分泌激素促进植物生长发育等；第三类对植物生长具有负面影响，在特别条件下接种到原宿主植物或另外的宿主植物会诱发植物病害。但需要注意的是，同种细菌定殖于不同宿主植物可能对宿主植物产生不同的影响。 除根瘤菌外，还有放线菌侵入多种被子植物宿主，形成根瘤的共生固氮体系。早在十九世纪后期，人们就发现了这类非豆科的根瘤，并发现根瘤内有生微生物，1881年布隆科斯特将它称为Frankia，但当时并不知道它是什么微生物。确定内

药用真菌开发研究及最具开发前景的主要药用真菌概述

药用真菌开发研究及最具开发前景的主要药用真菌概述 药用真菌是指能治疗疾病、具有药用价值的一类真菌，是中草药的重要组成部分。它的医疗和保健作用得到了国内外的重视和肯定。在中国加入WTO以后，药品生产面临着极其严峻的挑战，大力开展药用真菌的科学研究和新药开发，具有重要和迫切的意义。 1 药用真菌的发展史 真菌类药物的药用历史悠久，在我国远古时代，对其就有了较深的了解。古代对真菌入药应用有两种类型：一类是直接用某一种真菌的子实体、菌核入药，现称为药用真菌，始见于公元1世纪至公元1500年左右。明代的《本草纲目》收载的药用真菌包括木耳、香菇、马勃等大约20余种；清代又增加冬虫夏草与银耳，到本世纪60年代药用真菌总数达到30余种。另一类是经一种或者多种真菌在各种培养基质上自然发酵形成各种曲、酒入药，共约10种，可以称为真菌药物，例如唐代《药性论》记载“神曲”，清代《纲目拾遗》记载的“酒酿”也有300年历史。但是直到本世纪60年代历经1900余年，药用真菌有名可查的也仅有40种左右，其中有些已经失传。 从人工栽培的历史看，中国在世界上是最早的。在历代本草农书中可以看到药用真菌栽培技术的有关记载。如中药“八珍”之一的茯苓，其栽培起源于南北朝；中国人工栽培香菇已经有1000多年历史；对于灵芝、黑木耳等药用真菌栽培在一些古籍中也都有记载。这都是华夏祖先对人类的贡献。 2 药用真菌开发研究的意义 2.1 药用真菌在医药中的应用 药用真菌在中国现代医药中起着重要作用，是中草药的一个重要的组成部分。药用真菌的种类多、分布广、繁殖快。近年来已经陆续发掘出一些新品。但目前大量用于医疗临床的只有几十种，在中国加入WTO，医药行业面临十分严峻挑战的形势下，大力进行药用真菌的研究开发，为中国医药行业尽快地提供尽可能多的、拥有自主知识产权的各类药品，具有十分重要的现实意义。 2.2 药用真菌在保健食品中的应用 药用真菌是公认的高蛋白、低脂肪、高维生素的保健食品。其在提高人体免疫功能、抗衰老及其他许多保健功能已经收到各国的高度重视目前市场以灵芝、冬虫夏草、茯苓、猴头、蜜环菌等药用真菌及其多糖等提取物制成的保健品为热销。 2.3 药用真菌在药理临床的应用 2.3.1 抗肿瘤上的应用 药用真菌以抗肿瘤为特色。在已经研究的品种中，多数具有抗肿瘤活性，这在当今抗癌药缺乏、疗效不明显而且副作用大的医药界，药用真菌无疑是一个福音。这类真菌代谢产物

几种药用植物内生真菌抗真菌活性的初步研究

几种药用植物内生真菌抗真菌活性的初步研究 #64#微生物学通报 2001年28(6) 参考文献 [1]MasatoshiGOTO,EijiKUWANO,WerasitKANLAYAKRIT,ShinsakuHAYASHIDA,BiosiBiotechB iochem,1995,59: 16~20. [2]MASTOSHGOTO,TSUYOSHISEMIMARU,KENSUKEFURUKAWA,SHINSAKUHAYASHIDA,APPLENVIRONM I- CROBIOL,1994,60:3926~3930. [3]KeijiKAINUMA,HiroshiISHIGAMI,ShoichiKOBAYASHI,JJpnSoc.Starchsci,1985,31:136 ~141. [4]ShinsakuHAYASHIDA,andPerfectoQ.FLOR,AgricBiolChem,1981,45:2675~2681. [5]Cheor-lHoKim,Suk-TaeKwon,HajimeTaniguchi,Dae- SilLee,BiochimicaetBiophysicaActa,1992,1122:243~ 250. [6]HiroshiMorita,KouheiMizuno,MayumiMatsunage,YusakiFujio,JApplGlycoci,1999,46 :15~21. [7]Jun-ichiABE,SusumuHIZUKURI,JJpnSocStarchSci,1988,35:p.43~47. [8]TomokoTAKAHASHI,KeikoKATO,YoshioIKEGAMI,MasachikaIRIE,JBiochem,1985,98:663-671. [9]KohsaiFukuda,YujiTeramoto,M.Goto,J.Sakamoto,S.Mitsuiki,Hayashida,BiosciBiot echBiochem,1992, 56:556~559.

分离植物内生真菌操作流程

分离植物内生真菌操作流程 1.材料准备：植物样本、剪刀、镊子、70%乙醇、3%次氯酸钠（本实验用4%84）、 酒精灯、计时器、平板、锥形瓶，无菌水，离心管（带盖，灭菌）、打开无菌操作台灭菌30min。 （1）植物样本的采集：选取生长状态良好，不要有病斑或者枯枝烂叶，每种植物采取三株标本，要带有叶子、叶柄和枝条及其他部位，将样本名字写在 小纸条上放在装标本的袋子里，采下来的标本与写有名字的纸条一同拍照，样本上有脏东西时，请用纸轻轻擦掉，若不清楚植物名字，请将整棵植物 拍照留用于鉴定，并做好相关记录。 （2）制作PDA固体培养基，在无菌操作台中倒平板，每瓶250ml的培养基大概倒15个板，待其凝固后用于接种。 2.清洗：认真用清水将标本洗净，洗去标本表面的灰尘，去除枯叶，备用。 3.取样： （1）在叶片的左上、右上、左下，右下和正中五个部位进行取样，剪取5mm*5mm的叶片，如果是叶柄或枝干，则剪取5~10mm，若是比较 粗的枝干或圆圆的果实之类的，总之比较大的，则将它切开，再剪取 样本，样本不要剪的太大或太小。 （2）每种植物的叶子，叶柄，枝干等其他部位，每种部位接种两块板，大板每个要接种五个样本即左上、右上、左下，右下和正中，小板每个 接种四个样本即左上、右上、左下，右下，计算好所要剪的样本数， 尽量多剪几个，以免后面的表面灭菌中冲洗时被冲掉。 （3）若植物标本有剩余，且是没有洗过的，重新装好，放到冰箱里，备用，洗过的扔掉。 （4）每种植物标本所剪的样本放在一个50ml的离心管中，放在试管架上，并且每个离心管上要标好所对应的植物标本。 4.表面灭菌：在无菌操作台中进行 （1）先向各离心管内倒入适量（10~20ml）70%乙醇，拧紧盖子，用计时器开始计时1min,每10秒钟晃动离心管几次，使其充分灭菌。 （2）1min后，拧松盖子，将乙醇倒入事先准备的锥形瓶中，注意不要将管

黄连内生真菌分离培养条件筛选

黄连内生真菌分离培养条件筛选 摘要：本试验采用压贴法通过对黄连根、茎、叶在不同次氯酸钠浓度及不同表面消毒时间的PDA培养基上的培养，选出黄连内生真菌的适宜培养条件；在获得适宜培养条件后重新培养所有部位，待其长菌后挑选菌落边缘菌丝再培养，如此反复，直到获得纯培养物为止。通过培养筛选在主根、须根、叶柄、叶片四个部位共获得了60多种菌株，并对分离出的菌株进行保种，为后续的菌株鉴定、菌株抗菌活性的测定做准备。 关键词：黄连，内生真菌，分离条件，培养条件 Endophyticfungi of Coptis separation and culture conditions screening Abstract: The test select the suitable cultivation condition of endophytic fungi ,using pressure stick method cultivate roots, stems and leaves on PDA medium at different concentrations of sodium hypochlorite and different surface sterilization time.Recultivate all parts after acquising suitable cultivation,then select ege colonies and recultivate when they grow fungi,then circulate the procedure,until get pure culture.By cultivating and selecting the roots,fibrous roots,petiole and leaves, more than 60 kinds of fungi are found ,and isolated strains are breed,which is preparation for subsequent strains of identification, the determination of strains antimicrobial activity. Keywords:Coptis, Endophytic fungi, Separation conditions, Culture conditions 黄连（Coptis chinensis Franch）是我国名贵中药材之一，含有大量的异喹啉类生物碱[1]（小蘖碱、黄连碱、甲基黄连碱、小蘖红碱、药根碱、阿魏酸等）。尤其是小蘖碱对人体病原细菌和皮肤真菌[2]具有广谱的抗菌活性，在医药中被广泛应用；同样，小蘖碱对许多植物病原真菌和细菌也有显著的抑制作用。Hirano, H.等用硫酸小蘖碱处理大麦种子减轻了大麦条纹花叶病毒病（BBMV）的发生[3]。 黄连的药理研究主要以小蘖碱和黄连解毒汤为重点，主要包括抗微生物作用（抗菌、抗病毒）[4]、镇静作用、止泻作用、健胃作用[5]、对心脏心率[6]和心律作用等[7]。黄连及复方

植物内生真菌

植物内生真菌 一、内生真菌的概念 内生真菌是在宿主植物的茎和叶内生存并完成生活周期的真菌。这类真菌中，有许多种类很少形成孢子，或者在宿生植物上形成的孢子（或者孢子果）不容易识别。真菌感染植物组织，菌丝存在于细胞内和细胞间。与病原菌不同，这些真菌对宿主植物几乎没有害处，它们和植物之间或者是相互依存的共生关系，或者是不太密切的共生关系。 草本植物内生真菌侵染种子内部，播种后，真菌随着幼苗的生长和植株的发育成熟而生长，这些真菌没有吸器，出现在茎、叶、花序组织，而不出现在根内，这一点与菌根真菌不同。受侵染的植株在营养生长阶段不表现出被内生真菌侵染的特点，但是，当植物开花的时候，就可以观察到浸染的真菌。 与内生真菌容易混淆的一个概念是内生菌根，菌根是高等植物的根与真菌形成的共生联合体，内生苗根是菌根当中的一种类型，内生菌根的共同特征是根的表面不产生菌套，仅有稀疏的外生菌丝，菌丝在根部皮层组织的细胞间延伸，但不产生哈蒂氏网，菌丝体可侵入细胞内部，并形成不同形状的吸器，而宿主植物的根一般无形态及颜色的变化。故内生菌根用肉眼很难识别。 二、内生真菌的一般特征 内生真菌存在于根以外的植物组织细胞，可以用显微镜观察，也可以通过纯培养把它们分离出来进行研究。分离内生真菌时要对植物组织进行表面消毒，然后切成小片放在培养基上培养3～5天，内生真菌就生长在培养基上，可根据孢子和菌丝的特征，对它们进行分类鉴定。 可以按常规方法把内生真菌从多种植物上分离出来，已经发现的内生真菌包括许多子囊菌和半知菌、一些担子菌及少量的卵菌。主要的内生真菌包括药用Chloroscypha和Lophodermium（散斑壳属）中的一些种类以及Cryptoxline、Cryptosporriopsis（拟隐孢菌属）、Phomopsis（拟茎点霉属）和 Phyllosticta（叶点霉属）中的一些种类。其中许多可以从植物组织中偶然分离到。这类真菌的共生生活方式与其占主导地位的腐生生活方式来讲，似乎是次要的。比如说，担子菌中有许多种类生长在木头上或粪堆上，但有时也可在植物细胞内发现。 苔鲜植物、蕨类植物、裸子植物和被子植物中都发现有内生真菌。Petrini（1986）在对热带、温带和阿尔卑斯山地区的200多种植物调查之后发现，几乎所有生活的植物体内均有内生真菌的存在。在内生真菌中，宿主的专一性变化很大，一些真菌能够从生长在不同的生态和地理条件下的属于不同科属的多种宿主植物内分离出来，但是其它一些内生真菌仅限于某一特殊种属的几种宿主植物，仅有少数几种内生真菌专一地出现在某一种特定的植物中。 内生真菌在一些植物及农作物中广泛传播具有重要意义，农业科学家对牧草的内生真菌有特别的兴趣，因为这些真菌会产生真菌毒素，从而对动物产生毒性。此外这些真菌也有潜在的应用价值，例如利用抗、感品种的植株或器官对病原真菌毒素的敏感性反应上的差异，人们可以应用毒素进行快速、准确地鉴定大批的品种资源，一则可以直接发现抗病材料，在生产上推广应用；二则可以选出一些农艺性状虽然不太理想，但具有抗病性的材料，作为今后常规育种的亲本材料。 三、草本植物的内生真菌 l．草本植物内生真菌的形成许多草本植物的内生真菌都是属于麦角菌科（Clavicipitaceae）的真菌，其中传播最广的可能是香柱菌（Epichloe typhina），它寄生在禾本科牧草上，在70多种草坪植物中均存在，它的无性世代是半知菌类的顶孢霉属（Acremonium）。香柱菌属真菌子座淡色，平铺状，包围在禾本科植物茎和叶上，像一个套子；子囊壳理生在子座内，子囊细长，单膜；顶端加厚，具有折光性的顶帽；子囊孢子丝状，无色，有隔膜。 麦角菌属（ Claviceps）内生真菌，寄生在禾本科植物的子房内，后期在子房内形成圆形到香蕉形的黑色或白色的菌核，菌核越冬后，产生子座；子座直立，有柄，可孕头部近球形，子囊壳埋在整个可孕头部的表层内；子囊孢子无色，丝状，无隔膜。麦角菌（C．purpurea）寄生的患病植物在种子上形成紫色、弯曲的菌核，即表角；麦角内含有生

植物内生真菌的分离

植物内生真菌的分离 一、实验目的 1．理解内生真菌存在的普遍性和多样性 2.掌握常规的微生物分离纯化方法 3.掌握分菌过程中的一些基本操作技能 二、实验原理 植物内生真菌( Ｅnｄophｙte) 是指那些在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的各种组织和器官内部的真菌或细菌，而宿主植物一般不表现出外在的症状。所有植物中几乎都存在内生菌. 由于植物内生真菌与宿主在长期的进化过程中形成了特殊的生态关系,因而内生真菌能产生与宿主相同或相似的具有生理活性的次生代谢产物，从内生菌中寻找和发现新的活性化合物越来越成为微生物次生代谢产物的研究热点之一。 采用微生物学常规的组织分离法从植物中分离内生真菌 三、实验材料 板蓝根新鲜健康的叶片 试剂:次氯酸钠、无水乙醇、葡萄糖、琼脂、青霉素、链霉素 培养基：PDA培养基、分离培养基 四、实验步骤 （一)、配制PDA培养基 10月27号晚上：

(1）配置ＰDA培养基,用电子称称取去皮的土豆10０g，煮沸30min，4层纱布过滤，滤液加热,加入琼脂７.5克，琼脂完全融化后加入葡萄糖10g，待稍冷却后加水至5０0毫升。 (2)准备1０瓶无菌水，每瓶150ml左右。 (3)包好烧杯,培养皿，涂布棒等实验仪器，等待消毒。 (二)、配制分离培养基 28号中午： （1）配置分离培养基，将PDA培养液均分成两份，一份备用,另一份待高温灭菌后,加入青霉素１0０mg／L、链霉素200mg/L的混合液20mｌ，即得到分离培养基。 （2）用消毒后的培养皿在通风橱中倒平板,注意在整个过程中保证无菌操作。 (三)、采集新鲜板蓝根叶片 ２8号晚上到实验室外采集新鲜健康叶片完整的板蓝根叶片。(四)、植物组织表面消毒 2８号晚上将新鲜、健康的板蓝根叶片于自来水下冲洗干净，用吸水纸吸干表面水分后剪成小段(片）做如下表面消毒处理:75%酒精漂洗3ｍin，无菌水冲洗4~5次,5％次氯酸钠溶液漂洗叶3ｍin,无菌水冲洗4~5次，无菌滤纸吸干水分。 （五）、接种并培养 28号晚上: (1）将上述表面消毒后的材料剪切成0.５ｃm 2 小块,放入含

药用真菌学资料

药用真菌学(个人整理、仅供参考！) 药用真菌是指能治疗疾病、具有药用价值的一类真菌，即在菌丝体、子实体、菌核或孢子中能产生诸如氨基酸、蛋白质、维生素、多糖、苷类、生物碱、甾醇类、蒽醌类、黄酮类及抗生素等多种物质，对人体有保健作用，对疾病有预防、抑制或治疗作用的真菌。 药食兼用1.医治疾病2.美味佳肴 药用功能多样性 思考题 1.五界分类法：原核生物界、原生生物界、真菌界、植物界和动物界。 2.真菌的特点：（1.具有完整的细胞核 2.细胞质中含线粒体，但无叶绿体，不进行光合作用，无根茎叶的分化 3.）主要存在有性和无性两种繁殖方式 4.营养方式为营养型，好氧 5.由多细胞连接成菌丝，许多菌丝交织在一起而组成菌丝体 3.药用真菌的概念 4.试述中国药用真菌的种类及其药用功能 5.子囊菌亚门分类的主要依据是子囊果的有无、子囊果的类型和子囊的特点、子囊孢子的形态特征。 药用真菌的形态分为菌丝体和子实体两部分。 菌丝体又称营养体（相当于叶）功能：分解基质，吸收营养和水分 子实体又称繁殖体（分化菌丝组成）功能：产生孢子，繁殖后代，供人们食用的部分 菌丝：孢子在适宜条件下萌发形成细管状的丝状体，每根细丝称菌丝 特点：多细胞，细胞呈管状、壁薄、透明；再生能力很强；对低温具有强烈的耐受力 菌丝分类 1.有无隔膜无隔菌丝有隔菌丝 2.生长空间不同基内菌丝气生菌丝（生长在培养基物表面空间） 3.发育阶段不同初生（每个细胞只含有一个细胞核的菌丝，又称单核菌丝，由孢子萌发 而来特点：菌丝非常纤细，染色体为单倍体，一般不能形成子实体） 次生（由两个初生菌丝体的单核细胞通过质配形成的双核菌丝发育形成的菌丝体，又称双核菌丝特点：粗壮、分支、生长速度快，能形成子实体； 在双核菌丝的顶端常发生锁状联合） 三生（次生菌丝在到达生理成熟或环境条件不良时，菌丝紧密扭结分化。 如菌核、菌索特点：组织化、有一定的排列和结构） 特殊菌丝组织体 菌丝束：又称菌绳，由大量平行菌丝排列在一起，由正常细胞发育而来的简单结构。 菌索：某些真菌的菌丝体集合在一起，形成具有更高级组织并是顶生生长的根状组织；由许多不分枝平行菌丝组成生长较正常菌丝快5-6倍。 两者是某些菌体出现集群现象而形成的特殊的运输结构。 菌核：某些真菌的菌丝密集成坚实的平行菌丝组织和纵横交错的菌丝组织，形成球状、块状

药用植物内生真菌研究现状及其应用前景

药用植物内生真菌研究现状及其应用前景 发表时间：2018-11-07T14:26:43.093Z 来源：《中国误诊学杂志》2018年第26期作者：代娇朱卫波代雨通讯作者 [导读] 简要综述了近年来在内生真菌的分离鉴定、发酵、次生代谢产物、与宿主的关系等方面的研究进展。 曲靖医学高等专科学校云南曲靖 655000 摘要：随着对药用植物内生真菌研究的深入，从药用植物内生真菌中寻找新的生物活性成分已成为研究热点。内生真菌对药用植物的生长及活性成分的形成都有影响，内生真菌活性成分已成为发现新颖结构化合物及新药物的潜在资源。简要综述了近年来在内生真菌的分离鉴定、发酵、次生代谢产物、与宿主的关系等方面的研究进展。 关键词：内生真菌；分离鉴定；发酵；代谢产物；药用价值 1 药用植物内生真菌研究现状 内生真菌（endophytic fungi）是指生活在健康植物的各种组织和器官内部的真菌，被感染的植物不表现明显的外在病症，可通过组织学方法、从严格表面消毒的植物组织中分离的方法，以及从植物组织内直接扩增微生物 DNA 的方法来证明其内生性。内生真菌不但可以自身合成药物活性成分，还具有促进宿主植物合成活性成分的能力[1]。药用植物内生真菌代谢产物的多样性和新颖性，将为利用其进行工业发酵，生产新型活性化合物开辟新的途径。 2 药用植物内生真菌的多样性 内生真菌的分离培养是菌株鉴定及其活性物质研究的基础。由于环境的改变，内生真菌的生长及次生代谢产物的数量、种类等都会受到影响[2]。通过形态学观察和繁琐的生理生化实验，以及分子生物学鉴定方法进行分类鉴定。 3 内生真菌的次生代谢产物及生物活性 3.1抗肿瘤活性物质 某些抗肿瘤药用植物中部分内生真菌能够产生与宿主相同或相似的生理活性成分，已有不少学者从具有抗肿瘤作用的药用植物中寻找能产生抗肿瘤成分的内生真菌，并从中发现了一些具有潜在应用前景的抗肿瘤化合物。1993 年 Stierle 等[11]首次从短叶红豆杉（Taxus brevifolio）的韧皮部分离到一株能产紫杉醇的内生真菌，随后许多学者从不同种红豆杉中也分离得到产紫杉醇的内生真菌。除紫杉醇外，人们还研究了可以产其他抗肿瘤活性物质的内生真菌，陆续从长春花（Catharanthus roseus）、桃儿七（Sinopodophyllum hexandrum Ying）、美登木（Maytenus hookeri）等药用植物中分离出了能产生抗肿瘤活性物质的内生真菌菌株。这为药用植物内真菌发酵生产抗肿瘤药物奠定了基础。 3.2抗生素类活性物质 药用植物内生真菌可产多种抗生素，能抑制病原体、细菌、真菌、病毒等。李雅等发现，杜仲内生真菌对植物病原真菌有抑制作用。Castillo 等从蛇藤（Kennedia nigriscans）中分离到一株能抑制多种致病霉菌的内生真菌。Thongchai 等从 Zingiber officinale Rosc 中分离到的内生真菌能够产生明显的抑菌活性，并得到了具有该抑菌活性的单体化合物[3]。 3.3其他活性物质 研究发现内生真菌还能产生其他活性物质，如降血糖活性物质、免疫抑制剂、抗氧化剂等。Salituro 等从非洲热带雨林植物的内生真菌 Pseudomassaria sp.中分离到一种非肽类代谢物，可使人的胰岛素受体酪氨酸 β- 亚基磷酸化，并使胰岛素受体的作用底物也磷酸化，从而激活蛋白激酶 B，具有模拟胰岛素的作用，能明显降低血糖浓度。周生亮发现4株薯蓣（Dioscorea zingiberensis）菌丝和发酵液具有不同的抗氧化活性。 4 内生真菌与宿主的相关性 4.1药用植物内生真菌与宿主的相互关系 内生真菌长期生活在植物体内的特殊环境中，植物以其内生真菌的组织、细胞及其代谢产物为内环境；而内生真菌则以宿主植物的组织、细胞及其代谢产物为外环境，吸收宿主植物的营养，并得到保护。内生真菌能够参与植物活性成分的合成，或通过诱导物胁迫宿主植物产生丰富的次生代谢产物，是天然活性产物的重要来源。内生真菌在体外培养时可产生植物生长激素，内生真菌可促进宿主植物对氮、磷等营养元素的吸收，内生真菌也可通过与病原菌竞争营养和空间或直接产生拮抗物质而抑制病原菌，从而促进植物生长。此外，内生真菌还能增强宿主植物的抗逆性[4]。 4.2内生真菌产生与宿主相同或相似成分机制的探索 药用植物内生真菌是一个多样性十分丰富的生物类群，其产生的次级代谢产物也十分丰富，很多实例证明内生真菌能够产生与宿主相同或相似的代谢产物。目前，解释内生真菌能产生与宿主相同或相似成分机制的理论主要有二：一是生物间的“基因水平传递”，即认为具有相同次级代谢产物生物合成的途径，是获得了相关基因的直接传递；另一个是“内共生理论”，认为在共生体生物相互作用过程中，一旦在其次级代谢中出现了有用生化的途径，它就能被其他生物所利用，表现出相互作用和“协同进化”。 5 内生真菌在药用植物发育中的应用 一些内生真菌与植物的生长、发育、抗病性有关，深入研究可能对药用植物的人工种植有重要作用。由于内生真菌对植物的促进生长作用，可将相应内生真菌接种于生长缓慢、自然繁殖困难、濒危的药用植物中，促进其生长，提高药用植物产量。开唇兰小菇、石斛小菇、兰小菇等 3 种小菇属植物的内生真菌对兰科濒危药用植物铁皮石斛、金线莲的生长具有促进作用，对铁皮石斛和金线莲的成功栽培具有实际应用价值。一些珍稀名贵中药的形成也与其体内的内生真菌有关。沉香、降香等名贵药材的形成也与内生真菌有关。由此可见，将植物内生真菌接种于与微生物关系密切的中药，可以提高中药有效成分含量和产量，克服传统中药有效成分含量低的问题和资源不足的限制。 6 内生真菌研究开发新药的前景与展望 近年来化学合成药物所带来的毒副作用使人们望而却步，人类对天然药物的需求愈来愈大。目前超过40%的临床药物是天然产物或是

川芎内生真菌的分离与鉴定

川芎内生真菌的分离与鉴定 汪杨丽，严铸云，郭晓恒，宋杰，陈新，万德光 成都中医药大学药学院中药材标准化实验室，四川成都 (610075） E-mail：wangyangli27@https://www.wendangku.net/doc/2d16426733.html, 摘要：目的：探讨川芎内生真菌类群与川芎品种和产地的关系。方法：采用平板分离法分离川芎的内生真菌，采用点植法对分离菌株进行分类鉴定。结果：从6个产地的川芎根茎样品共获得内生真菌50株，经形态观察分类鉴定为1纲、3目、4科、13属。结论：不同产地及不同品种川芎的内生真菌在数量、分布、种群及其组成存在差异，推测川芎的道地性可能和川芎内生真菌种群有关。 关键词：川芎，内生真菌，分离鉴定 川芎为伞形科（Umbelliferae）藁本属植物川芎（Ligusticum chuanxiong Hort.）的干燥根茎，具有活血行气、祛风止痛的功效，是著名的川产道地药材。四川都江、彭州为川芎的主要产区。此外，云南丽江、甘肃庄浪和华亭、江西等地也产，分别称“云芎”、“西芎”、“抚芎”[1～3]。有关不同产地及不同品种川芎的化学成分品质、药理、药效的研究报道较多[4]，但至今未见从川芎根茎分离内生真菌及其内生真菌种群多样性的研究报道。根据内生真菌和植物互惠共生的关系[5，6]，本文对不同产地及不同品种的川芎进行内生真菌的分离，探讨川芎在特定生境中的微生物群落结构的特征。 1. 材料与方法 1.1材料 1.1.1植物来源（见表1） 1.1.2 培养基 PDA培养基[7]（马铃薯葡糖糖培养基）＋青链霉素混合液[8]（用于分离）；PDA 培养基；促孢培养基（KH2PO41g、KNO31g、MgSO4.7H2O 0.5g、KCl 0.5g、淀粉0.2g、葡萄糖 0.2g、蔗糖 0.2g、琼脂15～20g、蒸馏水 1000ml、PH自然)。 表1 各种川芎的样品情况 药材名原植物部位采集地采集时间 川芎Ligusticum chuanxiong Hort. 根茎四川彭州敖平2006.5.20 川芎L. chuanxiong Hort. 根茎四川都江堰石羊2006.5.22 山川芎L. chuanxiong Hort. 根茎四川彭州小鱼2006.7.24 山川芎L. chuanxiong Hort. 根茎四川汶川水磨2006.8.10 西芎L. sinense Oliv. 根茎甘肃平凉市华亭马峡2006.9.14 云芎L. chuanxiong Hort. cv. Jinxiong根茎云南丽江泸沽湖2006.8.17注：以上品种经成都中医药大学严铸云副教授鉴定 1.2方法 1.2.1. 内生真菌的分离先去掉新鲜川芎的须根，用自来水将川芎根茎表面洗净，用5%的NaClO溶液浸泡5min，用自来水反复的漂洗，稍干后切成适宜大小的小块，在无菌的条件下，用75％酒精中浸泡5 min，用无菌水冲洗3～4次，无菌滤纸吸干，然后用无菌刀片将表皮削去，分别切成5 mm×5 mm×1 mm的小块种植于PDA培养基内，每个培养皿中放7小块，每个样品6个培养皿，置28℃恒温箱中培养3～15d，观察到培养基上从各植物组织块内部向周围

植物内生细菌3

植物内生细菌3 冯永君①　宋　未② ①博士生,首都师范大学生物系,北京100037 ②研究员,博士生导师,首都师范大学生物系,北京100037 3国家自然科学基金资助项目(批准号:39770023) 关键词　植物内生细菌　植物微生态学　内共生固氮 植物内生细菌是指能定殖在健康植物组织内,并与植物建立了和谐联合关系的一类微生物,有生物防治、植物促生和内共生固氮作用.在农业生产过程中,由于农药和化肥的大量使用以及农田耕作的单一化,使植物和土壤中微生物的多样性大为减少.在人们日益重视人与自然和谐相处的今天,研究和利用植物内生细菌对于替代或减少农药和化肥的使用,改善农业生态系统,保持植物微生态系统的生物多样性以及维护农田生态平衡实现可持续发展都有重要意义. 一、引　言 植物内生细菌名称的由来是经历了几十年的发展才逐渐形成的.起初,人们对健康植物组织中存活的微生物并未引起重视,但后来越来越多的微生物(特别是细菌)从植物的根、茎、叶、穗中分离出来,人们才意识到这些从植物中分离的微生物可能与植物存在某种相互关系.随着对这类微生物研究的不断深入,1992年克洛珀[1]第一次提出了“植物内生细菌”(endophytic bacteria)的概念.植物内生细菌是指能定殖在健康植物组织内,并与植物建立了和谐联合关系的一类微生物.内生细菌在植物体内的定殖是一个主动过程,定殖细胞必须是活的和能增殖的;定殖后的内生细菌不会对植物造成实质性的危害症状[2]. 虽然植物内生细菌概念提出的时间尚短,然而这一概念一经提出就立刻引起了微生物学家、植物学家和微生态学家以及作物学家的广泛关注.首先,这是因为内生细菌概念的提出完全打破了人们对植物组织的传统认识:传统的观念一直认为健康的植物组织内是无菌的.虽然在1992年克洛珀提出内生细菌的概念之前的几十年的发展时间里,已从植物组织内越来越多地分离了许多微生物,但人们还是认为这是一些潜在的植物病原菌,因而始终未引起广泛关注和高度重视.克洛珀总结了前人的工作将这些“内生细菌”作为一个概念提出后,才使人们意识到不得不抛弃以前的所谓“潜在的植物致病菌”的片面性见解,重新面对这个新鲜事物.因而可以说植物内生细菌概念的提出是植物微生物学学科发展的一次革命.内生细菌的研究已成为植物微生态学和微生物学学科交叉的新的生长点. 其次,人们不禁要问,为什么植物体内要含有这些细菌呢?它们的行为是怎样的,有何应用价值?一些初步的研究已经证实,内生细菌在植物体内不仅积极地生存着,而且还能产生多种生物学作用,如固氮作用,促进植物生长作用和对病虫害的防治作用等[3].这些研究结果的公布立即让生态学家和作物学家兴奋起来.人们注意到植物-内生细菌这种和谐共生,互利共栖的生命形式,可能是未来生态型农业发展的一条重要思路.所以,开展植物内生细菌的研究不仅对植物微生物学科的基础研究有重要的理论价值,而且对农业可持续发展也有重要的实践意义. 二、植物内生细菌和植物之间的关系 目前关于植物内生细菌和植物之间的关系的认识上,主要有两种观点.一种是传统的观点,认为植物内生细菌是潜在的植物致病菌.研究者从植物病理学的角度着手,研究重心是单个微生物及其致病性,目的在于分离内生细菌,鉴定致病性,阻止其进入周围环境.通过这方面的研究发现,多数植物内生细菌有潜在的植物致病性,它们在侵染健康植物时,不表现实质性的致病症状,但当无病症的健康植物偶然受到来源于生物的或非生物的胁迫条件的威胁,以及受到突然恶劣的环境变化的冲击而造成植物自身的防御功能严重削弱时,一部分内

中国药用真菌的药用价值

中国药用真菌的药用价值 (2014-03-12 14:16:56) 转载▼ 分类：学说 标签： 癌症 陈康林 健康 抗肿瘤 文化 真菌被用作药物, 在我国已有悠久的历史, 它不但是我国天然药物资源和中草药的一个极为重要的组成部分, 而且已成为当今探索和发掘抗癌药物的重要领域。二千多年前东汉末, 世界上第一部药物专著《神农本草经》中就记载了灵芝、茯苓、猪苓、雷丸等真菌的药效. 至明代, 著名医药学家李时珍的巨著《本草纲目》, 收载药用真菌已达20多种。清初, 汪昂的《本草备要》中, 首次报道了冬虫夏草作为药用真菌的效果. 1974年, 刘波著的《中国药用真菌》搜集了78 种药用真菌。再版介绍了117 种真菌。 自1929 年英国细菌学家亚历山大·弗莱明第一次从青霉菌中发现青霉素后, 真菌的药用价值在国际上日益受到重视.。青霉素广泛应用已近50 多年。60 年代发展起来的新抗菌素叫头孢霉素, 又称先锋霉素, 已广泛应用于临床。自1930 年德国人发现担子菌有抑瘤活性以来, 特别是日本千原于1968 年报道了桑黄子实体的提取物对小鼠肉瘤的抑制率为96.7%之后, 全世界掀起了从真菌中寻找抗癌药物的热潮, 证明500多种真菌具有显著的抑瘤活性。 我国真菌资源十分丰富, 可药用的真菌就达上千种。目前，中国药用及包括实验有效的大型真菌就有500多种。民间利用真菌入药有着悠久的历史, 具有丰富而宝贵的经验, 已有许多真菌被用作生药或制成中成药应用。现将真菌的药用价值按主要的药理作用分述如下。 1 抗癌作用 我国民间利用某些真菌治疗癌症, 如木蹄层孔菌、烟色烟管菌、桑黄、黄柄笼头菌和树舌、云芝、桦褐孔菌、粗褐孔菌、薄皮纤孔菌、黑盖木层孔菌等。自从L ucasE . H . (1957)发现美味牛肝菌可抑制小白鼠肿瘤之后, 引起世界各国科学家的重视, 研究发现许多真菌具有抗肿瘤活性。陈康林等人编著的《中国抗肿瘤大型药用真菌图鉴》一书中收集抗肿瘤药用真260种, 其中有18个种的真菌对小白鼠肉瘤S-180和艾氏腹水瘤的抑制率达100 %。 真菌抗肿瘤物质主要是多糖和蛋白多糖体。在日本, 香菇多糖、云芝多糖和裂褶菌多糖已在临床上应用。国内已在临床上应用的有香菇多糖、云芝多 糖、树舌多糖、云芝多糖、猪苓多糖和槐蛾多糖。还有更多的药用真菌也证明了抗肿瘤活性。真菌多糖是一种生物反应修饰剂, 能增强机体免疫功能, 间接地抑制肿瘤生长, 起扶正固本作用。 某些真菌产生抗肿瘤抗生素。从链霉菌WK-2057中分离出新的抗肿瘤抗生素苯锌霉素，体外具有抗革兰氏阳性菌活性，对海拉S3、P388和耐阿霉素细胞P388具有直接的细胞毒素活性, 对实验鼠肿瘤具有体内抗肿瘤活性。竹小肉座菌含有竹红甲素, 它是一种新型花醌光疗药物, 临床上治疗外阴白色病变和疤痕疙瘩获得明显疗效, 它对癌细胞亦有明显的抑

药用植物内生真菌研究现状及其应用前景

药用植物内生真菌研究现状及其应用前景 摘要：随着对药用植物内生真菌研究的深入，从药用植物内生真菌中寻找新的 生物活性成分已成为研究热点。内生真菌对药用植物的生长及活性成分的形成都 有影响，内生真菌活性成分已成为发现新颖结构化合物及新药物的潜在资源。简 要综述了近年来在内生真菌的分离鉴定、发酵、次生代谢产物、与宿主的关系等 方面的研究进展。 关键词：内生真菌；分离鉴定；发酵；代谢产物；药用价值 1 药用植物内生真菌研究现状 内生真菌（endophytic fungi）是指生活在健康植物的各种组织和器官内部的 真菌，被感染的植物不表现明显的外在病症，可通过组织学方法、从严格表面消 毒的植物组织中分离的方法，以及从植物组织内直接扩增微生物 DNA 的方法来证 明其内生性。内生真菌不但可以自身合成药物活性成分，还具有促进宿主植物合 成活性成分的能力[1]。药用植物内生真菌代谢产物的多样性和新颖性，将为利用 其进行工业发酵，生产新型活性化合物开辟新的途径。 2 药用植物内生真菌的多样性 内生真菌的分离培养是菌株鉴定及其活性物质研究的基础。由于环境的改变，内生真菌的生长及次生代谢产物的数量、种类等都会受到影响[2]。通过形态学观 察和繁琐的生理生化实验，以及分子生物学鉴定方法进行分类鉴定。 3 内生真菌的次生代谢产物及生物活性 3.1抗肿瘤活性物质 某些抗肿瘤药用植物中部分内生真菌能够产生与宿主相同或相似的生理活性 成分，已有不少学者从具有抗肿瘤作用的药用植物中寻找能产生抗肿瘤成分的内 生真菌，并从中发现了一些具有潜在应用前景的抗肿瘤化合物。1993 年 Stierle 等[11]首次从短叶红豆杉（Taxus brevifolio）的韧皮部分离到一株能产紫杉醇的内生 真菌，随后许多学者从不同种红豆杉中也分离得到产紫杉醇的内生真菌。除紫杉 醇外，人们还研究了可以产其他抗肿瘤活性物质的内生真菌，陆续从长春花（Catharanthus roseus）、桃儿七（Sinopodophyllum hexandrum Ying）、美登木（Maytenus hookeri）等药用植物中分离出了能产生抗肿瘤活性物质的内生真菌菌株。这为药用植物内真菌发酵生产抗肿瘤药物奠定了基础。 3.2抗生素类活性物质 药用植物内生真菌可产多种抗生素，能抑制病原体、细菌、真菌、病毒等。 李雅等发现，杜仲内生真菌对植物病原真菌有抑制作用。Castillo 等从蛇藤（Kennedia nigriscans）中分离到一株能抑制多种致病霉菌的内生真菌。Thongchai 等从 Zingiber officinale Rosc 中分离到的内生真菌能够产生明显的抑菌活性，并得 到了具有该抑菌活性的单体化合物[3]。 3.3其他活性物质 研究发现内生真菌还能产生其他活性物质，如降血糖活性物质、免疫抑制剂、抗氧化剂等。Salituro 等从非洲热带雨林植物的内生真菌 Pseudomassaria sp.中分 离到一种非肽类代谢物，可使人的胰岛素受体酪氨酸β- 亚基磷酸化，并使胰岛素 受体的作用底物也磷酸化，从而激活蛋白激酶 B，具有模拟胰岛素的作用，能明 显降低血糖浓度。周生亮发现4株薯蓣（Dioscorea zingiberensis）菌丝和发酵液

药用真菌论文

药用真菌药理成分与功效概述 (西南林业大学林学院云南昆明) 摘要：药用真菌是指作为药物用以治疗疾病的真菌。是具有保健和治疗疾病作用的一类真菌,我国国土辽阔,药用真菌资源丰富,具有广阔的发展前景,研究与利用药用真菌的历史悠久，而且是利用真菌治病最早的国家, 随着科学研究的不断深入,药用真菌将在医学领域发挥愈来愈大的作用, 具有很大的开发潜能。大力开展药用真菌的科学研究和新药的开发具有非常重要和迫切的意义。介绍了我国现阶段报道有药用价值的主要种类,药用真菌的历史, 药用真菌研究开发的意义,概述了药用真菌的主要化学成分以及生物功效。 关键词：药用真菌；药理成分；功效；治疗 The main chemical components and bio-effects of Medical Fungi Abstract:Medical fungi (MF) as a drug for the treatment are to point to the fungal disease. It is kindsof fungipossessing healthcare and therapeutic effects. China is abundant inMFresources, it isalsoamong the earliest countriesutilize fungito cure illnesses. Asthedeepeningof the scientific study, MFwill play more andmore role inmedical fieldand possesses very broad development potential.Mainkindsof fungipossessingmedicalvalues inChina at present stage andthe history of medicinal fungi, research and development significanceof medicinal fungi and theirmainchemicalcomponentsandbio-effectswere introduced inthis article. Key words:Medical fungi; main chemical components; effect; treatment 1.前言 药用真菌是指能治疗疾病，具有药用价值的一种真菌，是中草药的重要组成部分。即在菌丝体、子实体、菌核或孢子中能产生诸如氨基酸、蛋白质、维生素、多糖、苷类、生物碱、甾醇类、蒽醌类、黄酮类及抗生素等多种物质对人体有保健功能，对疾病有预防抑制或治疗作用的真菌[1]。 它的医疗和保健作用不仅在中国和东南亚地区得到一致的肯定，而且近年来也开始得到世界各国的重视。特别在中国加入WTO以后, 药品生产将面临极其严峻的挑战, 大力开展药用真

灯盏花内生真菌分离及其产黄酮内生真菌的初步研究

西岛表业学板2018年31卷2期318S o u t h w e s t C h i n a J o u r n a l of Agricultural S c i e n c e s Vol. 31N o. 2 文章编号：l〇〇l -4829(2018)2 -0318 -04D O I：10. 16213/https://www.wendangku.net/doc/2d16426733.html,ki.scjas.2018. 2. 017 灯盏花内生真菌分离及其产黄酮内生真菌的初步研究杨梦莉1’2，赖泳红1’3*，郭凤根4，崔晓龙1’3，王永霞1’3，肖炜1’3，李治滢1’3 (1.云南大学生命科学学院/云南省微生物研究所，云南昆明650091;2.中国医学科学院医学生物学研究所，云南昆明 650118;3.云南大学省部共建云南生物资源保护与利用国家重点实验室，云南昆明650091;4.云南农业大学农学与生物技术学院，云南昆明650201) 摘要：【目的】本研究对昆明市寻甸县人工栽培的大田灯盏花的根、茎、叶、花的内生真菌进行分离鉴定，旨在筛选产黄酮的内生 真菌菌株。【方法】釆用纯培养方法分离植物内生真菌，利用形态鉴定及显色反应筛选产黄酮内生真菌。【结果】共获得内生真菌 40株，经显微形态观察40株内生真菌初步分类鉴定为14个属。通过黄酮类物质特异颜色反应，筛选到7株内生真菌产黄酮类物 质，这7株内生真菌经初步鉴定为交链孢属（Akemaria sp.)、镰孢霉属（Fusarium sp.)、痕格孢属（Sirosporium sp.)，根中内生菌产 黄酮最高质量浓度为2.625 mg/L。【结论】灯盏花不同部位内生真菌的数量、分布和种群存有差异性，从根部分离到的内生真菌产 黄酮类质量浓度最高。 关键词：灯盏花；内生真菌；多样性;黄酮 中图分类号:Q93-331 文献标识码：A Isolation and Selection of Flavones-forming Endophytic Fungi from Erigeron breviscapus Y A N G M e n g-l i1'2 ,L A I Y o n g-h o n g1'3 * ,G U O F e n g-g e n4 ,C U I X i a o-l o n g1'3 ,W A N G Y o n g-x i a1'3 ,X I A O W e i1'3 ,L I Z h i-y i n g1'3 (1. Y u n n a n Institute of M i c r o b i o l o g y,S c h o o l of Life S c i e n c e s,Y u n n a n U niversity, Y u n n a n K u n m i n g650091,C h i n a；2.Institute of M e d i c a l B i o l o g y C h i n e s e A c a d e m y of M e d i c a l S c i e n c e s,Y u n n a n K u n m i n g650118 ,C h i n a；3.State K e y L a b o r a t o r y for C o n s e r v a t i o n a n d Utilization of B i o-R e s o u r c e s in Y u n n a n,Y u n n a n U n i v e r s i t y,Y u n n a n K u n m i n g650091, C h i n a；4.C o l l e g e of A g r o n o m y a n d B i o t e c h n o l o g y,Y u n n a n A g r i- cultural U niversity, Y u n n a n K u n m i n g650201,C h i n a) A b s t r a c t:【O b j e c t i v e】 In o r d e r to s c r e e n e n d o p h y t i c fu ngi w h i c h c a n p r o d u c e f l a v o n o i d s,the e n d o p h y t i c f u n gi in r o ot s,s t e m s,leaves a n d flowers o f似 w e r e isolated a n d identified. [ M e t h o d] E n d o p h y t i c fun g i w e r e isolated b y u s i n g p u r e culture a n d selects d u c e d f l a v onoids s u b s t a n c e s b a s e d o n m o r p h o l o g y a n d specific color reaction. [ R e s u l t]40e n d o p h y t i c f u n gi w e r e isolated f r o m6re- viscapus a n d identified to fo ur te en g e n e r a b a s e d o n m o r p h o l o g y a n d s c r e e n e d s e v e n strains p r o d u c e d flavon oi ds s u b s t a n c e s b y m e a n s of specif-ic color reaction. S e v e n strains p r o d u c e d fl avonoids s u b s t a n c e s w e r e identified as Alternaria sp. ,Fusarium sp. , a n d Sirosporium sp. T h e hig he s t quality co nc e n t r a t i o n of f lav onoids s u b s t a n c e s f r o m e n d o p h y t i c fu n g i roots w a s 2. 625m g/L.【C o n c l u s i o n】 It h a s s h o w n that q u a n t i t y, spe ci e s a n d distributing of the e n d o p h y t i e fungi varied in different parts of Erigeron breviscapus,a n d the c o n c e n tr at io n of flavono i ds s u b-sta nc e s f r o m e n d o p h y t i c f u n g i roots w a s the highest. K e y w o r d s： Erigeron breviscapus；E n d o p h y t i c fungi ；Diversity ；F l a v o n o i d s 【研究意义】灯盖花又名灯盖细辛[￡^妒「〇?/^- iiiscapiM (Vant. )Hand. -Mazz.],属菊科紫竞族飞蓬 属多年生草本植物[1]，主要分布于云南、贵州、广 西、湖南、西藏等地。作为一种药用植物，它具有散 寒解表、止痛舒络、除湿祛风等功效M。黄酮是灯收稿日期=2017-01-16 基金项目：国家自然科学基金（31660089);云南省科技条件平 台建设计划项目（2〇〇9D A O〇2);云南省教育厅基金（2〇15Y O〇2) 作者简介:杨梦莉（1987 -),女，硕士，云南永善人，主要从事微 生物资源研究，E-m a i l:y a n g m e n g l i7@163. c o m,*为通讯作者，瓦- m a i l:l a i y h l996@a l i y i m.c o m。盏花重要的药效成分之一[3]，目前，临床上灯盏花 主要用于治疗中风、治疗脑梗塞、心绞痛及冠心病 等[4]。灯盏花是一种需求量大的重要药用植物，值 得深入研究。【前人研究进展】内生菌能促进植物 的生长、增加植株的抗逆性、产生多种代谢活性产 物、增加宿主植物的他感作用等[5]。研究发现植物 内生菌的代谢产物与植物的药用物质表现出一致 性[6]，因此，若能筛选出产活性物质的内生真菌，就 能利用发酵技术生产有效的代谢物质。【本研究切 入点】目前，关于灯盏花的研究大量集中在灯盏花