牛磺酸对阿霉素所致大鼠心肌损伤的保护作用
牛磺酸对阿霉素所致大鼠心肌损伤的保
护作用
（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）
作者：赵丽晶范红艳沈楠王艳春
【摘要】目的探讨牛磺酸( Taurine,Tau) 对阿霉素(adriamycin,ADR)所致心肌损伤的保护作用。方法Wistar大鼠60只，随机分为正常对照组、模型组（ADR组）、Tau剂量组（高400 mg·kg-1·d-1、中200 mg·kg-1·d-1、低100 mg·kg-1·d-1），每组12只。除正常组外，其他各组腹腔注射ADR 2.5 mg·kg-1·w-1，连续4 w，制备大鼠心肌损伤模型。各Tau剂量组腹腔注射ADR第2天灌胃给予相应剂量Tau，连续30 d。应用自动生化分析仪测定血清中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、谷草转氨酶（GOT）含量，采用硫代巴比妥比色法测定丙二醛（MDA）含量，采用改良的黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）含量，ELISA法测定转化生长因子β1(TGFβ1)及肿瘤坏死因子α(TNFα)的含量。结果Tau各治疗组的LDH、CK、GOT及MDA的含量明显低于ADR模型组；TGF β1蛋白及TNFα含量均低于ADR模型组(P0.001)。结论Tau可通
过提高SOD的活性，并抑制TGFβ1蛋白及TNFα的表达对ADR 所致心肌损伤发挥保护作用。
【关键词】牛磺酸；阿霉素；心肌损伤
阿霉素（adriamycin，doxorubicin，ADR）是临床上常用的广谱化疗药物，对多种恶性肿瘤均有较好的疗效，但在杀伤癌细胞的同时ADR对正常组织亦有损伤，其中对心肌的损害较为明显。牛磺酸（Taurine,Tau）又称α氨基乙磺酸，是人体内的非必需氨基酸，通过调节钙稳态、维持细胞渗透压及稳定细胞膜等多种机制发挥细胞保护作用〔1〕。本研究采用阿霉素建立心肌炎模型，着重观察Tau对心肌炎的保护作用。
1 材料与方法
1.1 动物
Wistar大鼠60只，清洁级，雌雄兼用，由吉林大学基础医学部实验动物中心提供。随机分为对照组、模型组、Tau剂量组（高400 mg·kg-1·d-1、中200 mg·kg-1·d-1、低100 mg·kg-1·d-1），每组12只。
1.2 方法
1.2.1 药品、试剂与仪器
Tau（中国医药上海化学试剂公司，批号20081024），阿霉素（浙江海正药业股份有限公司，批号20090412）。LDH、GOT、CK、CK MB、SOD和MDA试剂盒均购于南京建成生物工程公司；TGF
β1、TNFαELISA试剂盒购于晶美生物工程有限公司。电子天平（型号SF400，赛博机电技术研究所生产），台式离心机（型号TGL16G,上海安亭科学仪器厂生产），可见分光光度计（型号722，上海欣茂仪器有限公司生产），半自动生化分析仪（型号WP21E，上海维世康医用电子有限公司生产）。
1.2.2 模型制备
除对照组外，其余各组大鼠腹腔注射ADR （2.5 mg·kg-1·w-1），连续4 w，制备大鼠心肌损伤模型。以大鼠心肌组织CK、LDH和GOT活性明显增加，同时电镜观察心肌损伤已经出现标志模型成功。对照组腹腔注射相同体积的蒸馏水。
1.2.3 给药方法
Tau各剂量组自腹腔注射ADR后第2天开始灌胃给予相应剂量Tau，连续30 d，每日1次，同时对照组和模型组每日给予相同体积的蒸馏水。各组动物于末次给药后禁食不禁水，24 h后用10％的水合氯醛腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，3 500 r/min，离心10 min，分
离血清。
1.2.4 测定指标
取血清严格按照LDH、GOT、CK试剂盒说明应用自动生化分析仪测定血清LDH、GOT、CK含量。应用可见分光光度计测定MDA 含量（采用硫代巴比妥比色法）和SOD 活性（采用改良的黄嘌呤氧化酶法）。采用酶标仪双抗体夹心ABC ELISA法检测血清TGFβ1、
TNFα含量。
1.3 统计学分析
所有数据以x±s表示，组间比较采用方差分析及q检验进行。
2 结果
2.1 各组大鼠血清SOD活性，MDA、TGFβ1和TNFα含量
与模型组比较，Tau大、中剂量组大鼠血清SOD活性增强，MDA含量减少（P0.01）。Tau各剂量组大鼠血清中TGFβ1、TNF α含量减少，且随剂量增加作用依次增强，与模型组比较具有明显或显著差异（P0.05或P0.01）。见表1。表1 各组大鼠血清中SOD活性，MDA、TGFβ1和TNFα含量比较(略)
2.2 各组大鼠血清LDH、GOT、CK含量
Tau大、中剂量组大鼠血清LDH、GOT、CK含量减少，与模型组比较具有显著差异（P0.05或P0.01）。见表2。表2 各组大鼠血清中LDH、GOT、CK含量比较(略)
3 讨论
Tau是广泛存在于人体内的含硫β氨基酸，在心肌组织中含量丰富，对维持心血管功能有重要意义。Tau能稳定细胞膜、清除自由基及抗脂质过氧化，在充血性心力衰竭、高血压和心肌缺血等心血管疾病治疗中有较为理想的疗效〔2，3〕。
血清GOT、LDH、CK是反映心肌损害程度的心肌酶指标，其释放量越大，说明心肌损伤越严重，临床上常通过检测三者的含量来
反映心肌损害的程度。本研究显示，中、高剂量Tau可明显降低GOT、LDH、CK含量，说明中、高剂量牛磺酸明显改善了心肌损伤情况。本研究还表明，Tau中、高剂量均可提高大鼠心肌组织SOD 的活性，降低心肌组织MDA的含量，说明牛磺酸可以清除氧自由基，提高大鼠抗氧化酶超氧化物氧化酶的活性，表明牛磺酸可通过有效抑制脂质过氧化反应提高机体的抗氧化能力，从而减轻心肌损伤。
TGFβ1是启动和终止组织修复的重要细胞因子，在炎症修复及纤维化中起着非常重要的作用〔4〕。组织损伤后，血小板释放TGF β1进入损伤部位并被活化，TGFβ1适时地增高表达是组织损伤后修复的正常反应，若持续增高则导致组织纤维化。心肌分泌TNFα具有双重生物学活性，生理状态下TNFα可调节免疫应答、促进细胞生长分化、参与机体免疫反应；在病理状态下则引起炎症反应、器官损害、使心肌细胞收缩力下降、心肌肥大及心肌细胞纤维化，最终导致心功能不全〔5〕。本研究发现，心肌损伤后TGFβ1与TNFα的含量明显增加，而经牛磺酸治疗后则明显下降，提示牛磺酸可通过抑制TGF β1与TNFα的表达，从而对心脏损伤之后继发性心肌纤维化的发生有缓解和抑制作用。因此，认为心肌炎发展至心功能不全过程中TGF β1、TNFα可能是作为炎性细胞因子而参与其中，Tau可通过降低TGFβ1、TNFα的水平而发挥抑制心室纤维化的作用，减轻心肌炎的进一步加重。
【参考文献】
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【CN109938870A】一种大鼠重症脑出血合并脓毒症复合模型的建立方法及其应用【专利】
(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910214737.6 (22)申请日 2019.03.20 (71)申请人 复旦大学附属华山医院 地址 200040 上海市静安区乌鲁木齐中路 12号 (72)发明人 宫晔 邓水香 朱宏达 冯圣捷 田觅 金朋 (74)专利代理机构 上海申新律师事务所 31272 代理人 俞涤炯 (51)Int.Cl. A61D 1/00(2006.01) A61D 7/00(2006.01) (54)发明名称 一种大鼠重症脑出血合并脓毒症复合模型 的建立方法及其应用 (57)摘要 本发明涉及一种大鼠重症脑出血合并脓毒 症复合模型的建立方法，其包括：大鼠注射麻醉 后，断尾取血匀速注入右侧尾状核，获得脑出血 大鼠模型；脑出血大鼠模型制备成功后，采用盲 肠结扎穿孔法获得重症脑出血合并脓毒症复合 模型。本发明还涉及上述复合模型在制备预防/ 治疗重症脑出血合并脓毒症的药物中的应用。本 发明成功构建了重症脑出血合并脓毒症复合模 型，更好的模拟临床重症脑出血并发感染以及脓 毒症的临床表现，为进一步探索重症脑出血合并 感染和脓毒症的发病机制和干预措施提供理论 基础；并将其具体应用于治疗重症脑出血+脓毒 症的药物的筛选，对防治重症脑出血合并感染和 脓毒症的发生及后期的康复治疗及预后具有重 要的意义。权利要求书1页 说明书5页 附图2页CN 109938870 A 2019.06.28 C N 109938870 A
权 利 要 求 书1/1页CN 109938870 A 1.一种大鼠重症脑出血合并脓毒症复合模型的建立方法，其特征在于，包括如下步骤： 步骤一、脑出血大鼠模型的制备； 大鼠注射麻醉后，断尾取血匀速注入右侧尾状核，留置预定时间，缓慢拔针，防止反流，获得脑出血大鼠模型； 步骤二、重症脑出血合并脓毒症模型的制备； 步骤一的脑出血大鼠模型制备成功后，大鼠注射麻醉后仰卧固定，腹部手术区域皮肤杀菌后铺无菌孔巾，沿正中线剪开皮肤、肌肉、腹膜后牵出盲肠，以无菌丝线测量盲肠全长后取该段丝线对折处所对应的盲肠部位以无菌丝线结扎，扎紧前将盲肠内容物向降部挤压，扎紧后用无菌不锈钢针沿结扎远端肠管外侧缘穿刺两孔并将穿刺针来回抽动后退出穿刺针；轻轻挤压结扎盲肠降部，挤出少量粪质后将肠管还纳腹腔，确认腹腔内无活动性出血后以无菌丝线逐层缝合腹壁，获得重症脑出血合并脓毒症复合模型。 2.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述步骤一中，大鼠采用10％水合氯醛320～380mg/kg腹腔注射麻醉，其断尾取血量为50～180ul，其血液注入方法为：2次注入法，先注入一半，留置8～12min后，再注射另一半血量；注入完成后，留置12～18min后拔针。 3.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述步骤一中，所述右侧尾状核的注入位置为：前囟中线旁开2.8～3.2mm，冠状缝前0.8～1.2mm，深度5～7mm。 4.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述步骤一中，在拔针后，采用骨蜡封闭颅骨创口，缝合头皮，局部皮肤用复合碘消毒液消毒，防止局部感染。 5.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，在脑出血模型制备成功20～28h后制备重症脑出血合并脓毒症复合模型。 6.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述步骤二中，大鼠采用10％水合氯醛腹腔注射麻醉；皮肤杀菌采用安尔碘涂搽；无菌不锈钢针的尺寸为外径2～4mm，其来回抽动的次数为2～5次。 7.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述步骤二中，腹壁缝合完毕后，即刻注射生理盐水15～25毫升/千克体重于大鼠后腿根部皮下。 8.根据权利要求1～7中任一项制备的大鼠重症脑出血合并脓毒症复合模型在制备预防和治疗重症脑出血合并脓毒症的药物中的应用。 2
阿霉素心脏毒性的药物防护+
?６０?中国癌症防治杂志２０１０年３月第２卷第１期ＣｈｉｎＪｏｆＯｎｅｏｌＰｒｅｙａｎｄＴｒｅａｔ，Ｍａｒ２０１０，ＶｏＬ２，Ｎｏ．１ 阿霉素心脏毒性的药物防护 何晓华△何并文唐步坚 作者单位：５３００２１南宁广西医科大学肿瘤医院；△广西医科大学研究生学院 【摘要】阿霉索可治疗众多实体瘤及白血病，但其临床应用受到了心脏毒性的限制。阿霉索一ｔＬ，脏毒性的机制主要与自由基、钙超载、细胞凋亡和线粒体损伤等有关。针对ＡＤＭ心脏毒性发生的机制，目前研究者对防护药物在自由基清除剂、钙拮抗剂、细胞凋亡抑制剂、线粒体保护剂和中药等方面进行探讨并取得了较大进展，从而为提高ＡＤＭ的临床应用安全性提供了一定的科学依据。 【关键词】阿霉索；心脏毒性；药物预防 【中图分类号】Ｒ９７９．１【文献标识码ｌＡ【文章编号】１６７４－５６７１（２０１０）０１－０３ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉＭｎ．１６７４－５６７１．２０１０．０１．２１ 随着Ｌｅｆｒａｋ于１９７３年首次报告抗癌药物阿霉素（Ａｄｒｉａ－ｍｙｃｉｎ，ＡＤＭ）的心脏毒性以来，越来越多的研究发现，ＡＤＭ可导致剂量依赖性不可逆转的心肌病和充血性心力衰竭等，因而临床应用ＡＤＭ时人们对可能发生的心脏毒性受到了普遍关注。近年来，国内外学者从不同的角度对ＡＤＭ进行了有意义的研究，包括引起心脏毒性的临床表现、发生机制、危险因素和评估方法以及预防措施等，旨在拓宽其应用范围、减轻毒副反应和提高用药的安全性。现将ＡＤＭ心脏毒性的药物防护研究进展综述如下。 １ＡＤＭ心脏毒性的作用机制 目前对ＡＤＭ心肌毒性的机制尚未彻底清楚，可能包括自由基、钙超载、细胞凋亡和线粒体损伤等多因素共同作用的结果，多因素之间互相联系、互为因果，形成ＡＤＭ心脏毒性的恶性网络，共同导致心脏毒性的发生和发展。 １．１氧化应激作用及自由基的形成 由于ＡＤＭ与心肌组织的亲和力明显高于其他组织，使心肌组织更易受到损害。ＡＤＭ进入心肌细胞后，在代谢过程中产生的自由基引起线粒体膜和内脂网的脂质过氧化，导致心肌细胞损伤。产生自由基的通路有酶学途径及非酶过程两种：①酶学途径是指ＡＤＭ进九Ｄ肌细胞后，其蒽醌基团还原为半醌由基并与氧作用产生超氧离子（Ｑ?），０２?经歧化酶歧化生成氧（０２）和过氧化（Ｈ２０２），Ｈ２０２裂解产生的羟自由基（ＯＨ?）较０２?更加活泼。这些自由基可以引起线粒体和微粒体脂质过氧化，对多种细胞产生强烈的损伤作用…②非酶过程涉及到ＡＤＭ－Ｆｅ“复合物形成，通过Ｈａｂｅｒ－Ｗｅｉｓｓ反应或Ｆｅｎｔｏｎ反应产生大量自由基瞄Ｊ。生理状态下的心肌细胞处于氧化与抗氧化平衡状态．具有正常活性的ＳＯＤ、ＧＰｘ是维持心肌细胞处于氧化与抗氧化平衡状态的重要因素。ＡＤＭ降低ＧＳＨ—Ｐｘ及ＳＯＤ在心肌中的含量，使ＡＤＭ产生的自由基及超氧化物不能被充分清除而损伤心肌细胞ｐ】。 １．２钙超载 心肌细胞调节Ｃａ２＋功能障碍，致细胞浆中游离ｃａ２＋浓度增高即为心肌细胞钙超载。正常心肌细胞中Ｃａ２＋大部分储存于线粒体、肌浆网及肌膜上，Ｃ矿＋在维持心肌细胞兴奋－收缩偶联中起重要作用，且细胞内Ｃａｚ＋浓度显著低于细胞外ｃａ２＋浓度。Ｋｉｍ等发现ＡＤＭ激活肌浆网膜上的ｃａ２＋通道，使ｃａ２＋释放增加与心肌形态学改变有良好相关性，且早于心肌形态学的改变，提示ｃａ２＋浓度升高参与了心肌损伤过程ＨＪ。ＡＤＭ能破坏心肌细胞膜结构的完整性，影响膜的渗透性，使膜磷脂镶嵌蛋白解聚，形成新的钙通道，诱发胞外Ｃａ２＋内流；ＡＤＭ抑制Ｎａ＋．Ｋ＋．ＡＴＰａｓｅ的活性，使Ｎａ＋．Ｋ＋交换减少，Ｎａ＋－Ｃ，＋交换增加而加速ｃａ２＋内流，从而诱发钙超载；同时ＡＤＭ还能刺激线粒体和肌浆网，将ｃａ２＋释放至胞质。加重Ｃａ２＋超载瞄Ｊ。１．３细胞凋亡 细胞凋亡是指由体内外因素触发细胞内预存的死亡程序而导致的细胞自杀过程。在ＡＤＭ心肌病发病过程中，细胞凋亡发挥极其重要的作用，心肌细胞和内皮细胞即使暴露在低于微摩尔浓度的ＡＤＭ中也会发生细胞凋亡¨Ｊ。细胞凋亡途径主要通路分别是死亡受体介导的凋亡途径（或外在）途径和线粒体凋亡途径（或内在）途径。外在途径典型的死亡受体是飚（又称为ＣＤ９５或Ａｐｏ?１）和肿瘤坏死因子受体。死亡受体与其配体结合后启动致死性信号转导，最终引起细胞一系列特征性变化，使细胞凋亡。内在途径是由线粒体细胞色素ｃ的释放介导的。这个过程是通过ｂｃｌ－２＇蛋白家族（抗凋亡因子ｂｃｌ－２、ｂｃｌ－ＸＬ、ｍｃｌ一１）调节的。凋亡前体ｂａｘ、ｂａｋ和仅含ＢＨ３区域蛋白Ｂａｄ、Ｂｉｄ、Ｎｉｘ和１３Ｎｉｐ３，它们通过抑制抗凋亡ｂｅｌ－２蛋白或激活ｂａｘ、ｂａｋ凋亡前体引起细胞凋亡¨Ｊ。两条凋亡通路最终都要激活共同的凋亡效应物特异的胱冬酶（ｃａｓｐａｓｅ）。胱冬酶被活化，随后发生凋亡蛋白酶的层叠级联反应，引发不可逆的凋亡。其它途径包括ＮＡＤＰＨ氧化酶途径【ｌＪ、血红素氧化酶一１下行性调节等ｐＪ。 １．４线粒体损伤 【基金项目】：广西科技厅留学回国人员基金资助项目（桂科回０９９１０１８）通讯作者：何并文。Ｅ－ｍａｉｌ：ｂｉｎｇｗｅｎｈｅ＠ｙａｈｏｏ．ＣＯＬＤ．ｃｒｌ 万方数据
西地那非对阿霉素心肌病的保护作用的实验研究
西地那非对阿霉素心肌病的保护作用的实验研究 摘要目的探讨西地那非对小鼠阿霉素所致心肌病的保护作用及其机制。方法选取32只雄性10周龄C57BL/6J小鼠，随机分为阿霉素组（DOX组）与阿霉素加西地那非组（DOX+SIL组），每组16只。DOX组单一腹腔内注射阿霉素15 mg/kg；DOX+SIL组单一腹腔内注射阿霉素的同时，给予西地那非10 mg/kg 灌胃。正常饲养2周后计算存活小鼠心室体重比，并对其进行心脏超声检查；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测心肌组织中环磷酸鸟苷（cGMP）的表达情况。结果2周后DOX组存活16只小鼠，DOX+SIL组存活16只小鼠，DOX组心室体重比、左室舒张末期内径（LVEDD）、左室收缩末期内径（LVESD）、左室射血分数（LVEF）和短轴缩短率（FS）、cGMP分别为（0.41±0.15）%、（3.270±0.260）mm、（2.560±0.097）mm、（47.90±0.01）%、（18.53±1.10）%、（0.051±0.006）mmol/L，与DOX+SIL组的（0.32±0.05）%、（2.900±0.180）mm、（2.180±0.120）mm、（53.70±0.16）%、（26.50±1.70）%、（0.940±0.006）mmol/L比较差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论西地那非对阿霉素所致心肌病具有保护作用，可能通过cGMP通路，明显改善阿霉素诱导的小鼠左心室功能障碍。 关键词阿霉素；心肌病；西地那非；纤维化 【Abstract】Objective To investigate the protective effect of sildenafil on doxorubicin induced cardiomyopathy in mice and its mechanism. Methods A total of 32 male 10 week old C57BL/6J mice were randomly divided into doxorubicin group （DOX group）and doxorubicin and sildenafil group （DOX+SIL group），with 16 mice in each group. DOX group received single intraperitoneal injection of doxorubicin 15 mg/kg，and DOX+SIL group received gavage administration of sildenafil 10 mg/kg，on the basis of intraperitoneal injection of doxorubicin. After 2 weeks of normal feeding，ventricular weight ratio of the surviving mice was calculated and the heart ultrasonic examination was performed. The expression of cyclic guanosine monophosphate （cGMP）in the myocardium was detected by enzyme linked immunosorbent assay （ELISA）. Results After 2 weeks，DOX group had survived mice，and DOX+SIL group had survived mice. DOX group had statistically significant difference in ventricular weight ratio，left ventricular end diastolic diameter （LVEDD），left ventricular end systolic diameter （LVESD），left ventricular ejection fraction （LVEF）and fraction shortening （FS）and cGMP respectively as （0.41±0.15）%，（3.270±0.260）mm，（2.560±0.097）mm，（47.90±0.01）%，（18.53±1.10）% and （0.051±0.006）mmol/L，comparing with （0.32±0.05）%，（2.900±0.180）mm，（2.180±0.120）mm，（53.70±0.16）%，（26.50±1.70）% and （0.940±0.006）mmol/L in DOX+SIL group （P＜0.05）. Conclusion Sildenafil shows protective effect for doxorubicin induced cardiomyopathy，ang it can significantly improve doxorubicin induced left ventricular dysfunction in mice through the cGMP pathway.
脓毒症大鼠肝组织基因表达变化的研究
脓毒症大鼠肝组织基因表达变化的研究 摘要】目的应用基因芯片技术初步分析脓毒症大鼠肝脏组织细胞基因表达谱的 变化。方法健康Wistar 大鼠40 只，随机分为模型组和假手术组，每组各20 只。通过盲肠结扎穿孔术（CLP）制备大鼠脓毒症模型，应用含有22523 个大鼠基因cDNA 克隆的表达谱基因芯片进行检测，筛选差异表达基因，用计算机软件分析 脓毒症大鼠肝脏组织术后24 小时的基因表达变化。结果与假手术组比较，共筛 选出差异表达基因共285 条，占基因芯片总点数的1.26%，其中已知基因180 条，93 条基因表达上调，87 条基因表达下调。涉及到一系列与细胞生长调节相关基因，物质能量代谢相关基因，信号转导、炎症、应激反应相关基因，转录调控及 蛋白质翻译、修饰、加工、降解相关基因等相关的基因异常表达。结论脓毒症导 致的多脏器功能不全（MODS）是多种基因作用的结果，采用基因芯片技术全面 揭示脓毒症肝脏基因表达的模式，有利于发现新的研究目标和治疗途径。 【关键词】脓毒症肝基因表达基因芯片 【中图分类号】R394 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）08-0053-03 脓毒症(Sepsis) 及其所导致的多脏器功能不全（MODS），在临床上发病率高，病死率高，临床救治棘手，源于其发病机制非常复杂。目前多数认为是过度的炎 症反应与代偿性抗炎反应失衡，出现免疫系统功能紊乱的病理生理过程，并与机 体多系统、多器官病理生理改变密切相关，涉及感染、炎症、免疫、凝血及组织 损害等一系列基本问题[1]。国内外已有学者运用基因芯片技术对经C L P 或腹腔 注射脂多糖制备小鼠脓毒症模型的多个脏器组织的基因差异表达分别进行研究， 其结果初步显示了这些组织中部分基因表达的特异性改变，但并未对脓毒症机制 和治疗的研究提出新的看法。本实验再次运用基因芯片技术研究分析脓毒症时肝 脏相对应的基因表达谱变化，旨在进一步探讨脓毒症的研究治疗新途径。 1 材料和方法 1.1 实验动物及模型制备 雄性健康Wi s t a r 大鼠40 只，体重180 － 220g，购自上海斯莱克实验动物 有限公司。实验前在清洁级环境下饲养2 周，常规饲料喂食、正常饮水。按随机 数字表法分组：假手术组（n ＝ 20 只）、模型组（n ＝ 20 只）。模型组：采用 盲肠结扎穿孔术（CLP）方法建立大鼠肠源性脓毒症模型。实验前大鼠禁食过夜，自由饮水，称体重后以氯胺酮（100mg/ kg）腹腔麻醉固定，消毒铺巾，沿中下腹正中线切开2cm 开腹提出盲肠，7 号丝线距盲肠根部1c m 处血管弓内结扎盲肠；用9 号无菌针头刺穿盲肠3次，使肠内容物流出，避免伤及肠系膜血管，然后将 盲肠放回腹腔，缝合腹部切口。假手术组：不结扎和穿刺盲肠外，其余操作同CLP组。两组术毕皮下注射平衡液5ml/kg以补充术中丢失的体液并抗休克治疗， 术后正常饮食、自由饮水。 1.2 肝组织的留取和处理 两组大鼠（n＝40只）24h断颈活杀迅速开腹摘取肝脏，置入液氮罐中骤冷保存，温度－70℃，备用。 1.3 基因芯片杂交及检测分析 用一步法总RNA提取试剂（Trizol）抽提液氮中肝组织总RNA。反转录并标记探针，与RatRef-12大鼠表达谱基因芯片(由联合基因技术有限公司制作，每个芯 片含有22523个大鼠基因cDNA克隆)杂交过夜，洗片、晾干后扫描，采用Scan
炎调方干预脓毒症大鼠模型的效果研究
炎调方干预脓毒症大鼠模型的效果研究 发表时间：2019-09-23T16:25:49.893Z 来源：《医师在线》2019年5月9期作者：张燕婷1 朱佳琳1 李淑芳2 熊旭东2 [导读] 目的探讨炎调方对脓毒症大鼠的作用机制。张燕婷1 朱佳琳1 李淑芳2 熊旭东2通讯作者（1上海三林康德社区卫生服务中心，中医科；2上海中医药大学附属曙光医院，感染科；上海200000）摘要：目的探讨炎调方对脓毒症大鼠的作用机制。方法将SD雄性88只大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、炎调方组、对照组(炎调方减去大黄、芒硝)，采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症大鼠模型。术后分别于12h、24h、36h致死大鼠，测定血清IL-1β水平及观察各组肺病理切片的变化。结果血清方面：假手术组与正常组相比，血清IL-1β水平无统计学意义(P>0.05)；与正常组相比，12h模型组的血清IL-1β水平与24h的血清IL-1β水平比较升高 (P<0.05)；造模后12h炎调方组血清IL-1β水平和模型组对比，有显著降低(P<0.01)，差异在24h 无统计学意义(P>0.05)；对照组(炎调方去掉大黄和芒硝)与模型组对比，12h和24 h均无统计学意义(P>0．05)；炎调方组血清IL-1β水平和对照组对比在12 h水平显著降低(P<0.01)，24 h但是未见明显差异(P>0.05)；肺病理切片方面：正常对照组及假手术组肺组织未见明显病理 学损伤性变化。CLP术后12h,模型组的肺组织轻微充血，CLP手术后24h，与12h对比，模型组肺组织损害更甚，充血更明显，减方对照组肺组织病变情况较模型组无明显改变。炎调方组和模型组相比，病变范围略小。结论炎调方能明显下调脓毒症大鼠血清IL-1β水平，并且能减轻脓毒症大鼠肺组织损伤。 关键词:炎调方脓毒症肺病理切片脓毒症（sepsis）是指由感染导致的全身炎症反应综合征（systemic inflammatory response syndrome,SIRS），进一步发展可以成急性呼吸窘迫综合征（ARDS）和脓毒症休克（septic shock），甚至可导致多脏器功能障碍综合征（MODS）[1]。严重的脓毒症患者和脓毒性休克目前仍然是作为ICU内患者死亡的主要原因，其病死率达2８％~５０％。脓毒症一直以来都作为危重病、急救医学领域临床和基础科研的难点和热点 [2]。本研究是通过经典的盲肠结扎穿孔(CLP)术制作脓毒症大鼠模型，以通腑活血法治疗脓毒症，通过检测大鼠部分炎症介质变化和肺组织的变化及观察大鼠的死亡情况，进一步探讨并丰富炎调方对脓毒症干预的效果研究，为诊疗脓毒症疾病的发展提供研究证据。 1 实验材料 1.1动物来源与分组 88只雄性SD大鼠，购自上海中医药大学的实验动物中心，购回后所有大鼠均作适应性饲养一周后随机分为正常组、假手术组、模型组、炎调方组、对照组（炎调方减去大黄和芒硝）。 1.2 药物炎调方组：玄参l5g，当归15g，生大黄10g(后下)，芒硝10g(冲)，桃仁10g，赤芍15g。对照组：玄参l5g，当归15g，桃仁10g，赤芍15g。中药均由上海曙光西院中药房提供。按常规的煎煮方法来煎煮，最后将芒硝充分溶解于药液中，将药液浓缩为含生药1.0 g ／ml，放入4℃冰箱备用。对照组（炎调方减去大黄和芒硝）煎煮方法同前，药液被浓缩为含生药1.0g／mL，保存备用于4℃冰箱。 1.3 仪器 Multiskan MK3 酶标仪（赛默尔上海世飞仪器厂）；501C超级恒温水域槽（上海精宏实验设备公司）；台式离心机(microfuge lite)(Beckman 公司)；OLYMPLUS BH2 显微镜（PHILIP）；石蜡全自动切片机(德国CUT6062切片机)；低温冰箱（-70℃）(Forma scientific公司)。 2 方法 2.1 脓毒症模型的制备 参照相关文献[3-5]，采用盲肠结扎穿孔(cecal ligationand puncture，CLP) 法制造脓毒症大鼠模型，实验鼠术前禁食12小时，腹腔注射2﹪的戊巴比妥钠（40mg/kg）麻醉，安尔碘消毒皮肤，沿中下腹做大约1.5cm的切口，提出盲肠，用4号线把盲肠根部结扎，将18号针把盲肠穿通3次后将肠还纳于腹腔，并逐层缝合皮肤。术后注射生理盐水（30mg/kg）于皮下抗休克。待麻醉清醒后可自由活动、喝水、进食。假手术组仅仅切开腹腔并翻动肠道，不去结扎穿刺，剩下的操作同模型组。 2.2 分组按随机方法将实验大鼠分成5个组，正常组8只，麻醉并腹主动脉取血和肺部组织后处死；假手术组8只，麻醉后开腹翻动肠道，关闭腹腔，12h后麻醉并腹主动脉取血和肺部组织后处死；模型组24只，CLP术后12h、24h、36h分别麻醉然后腹主动脉取血和肺部组织后处死，每个组各8只；炎调方组，将炎调方于术前灌胃（9.9g/kg），每天一次，连续3天，灌胃3次后2h予以造模，CLP术后各时间点分别麻醉并腹主动脉取血和取肺部组织后处死，每个组各8只；对照组（炎调方减去大黄和芒硝）24只，该方造模前灌胃（9.9g/kg），每天一次，连续3天，灌胃三次后2h予以CLP造模，术后各时间点分别麻醉和腹主动脉取血致死，每组各8只。 2.3 标本采集与检测 腹腔注射2％戊巴比妥钠(40mg／kg)麻醉大鼠，安尔碘消毒皮肤后逐层开腹，予以腹主动脉抽血．取血后静置30min于室温下，离心（3000转／rain15min）后血清存于4℃冰箱，备测白细胞介素1β（IL-1β），然后快速打开大鼠左右胸腔，取出左右两边肺叶。切取左肺和右肺的病理组织，左肺固定于福尔马林10％液体，酒精极度脱水，石蜡包埋并切片，常规HE染色，在光镜下对比肺组织的变化。右肺迅速置于液氮中备用，然后转入-70℃冰箱冻存。 3 统计学方法统计软件用于SPSS 19.0，计量资料的数据以Mean±SD（x±S)来表示，采用单因素方差分析方法。（P<0.05是差异具有统计学意义） 4 实验结果 4.1 多组大鼠死亡情况观察实验中,实验鼠共死亡19只（其中模型组8只，炎调方组4只，减方炎调方组7只），进入后续实验共69只。正常组、假手术组大鼠活动无异常。模型组的手术之后都有脓毒症严重现象，如手术结束后清醒推迟，呼吸变快明显，腹部向下膨隆，精神不振，少动等现象，剖开腹腔发现脓血和浑浊性恶臭液体，肠管可见肿胀，肺部明显淤血，CLP+减方对照组大鼠与模型组相比未见明显变化。CLP+炎调方组大鼠精神明显好于CLP组，术后表现较轻。取材前，各组大鼠的死亡情况（只）(见表1)。正常组和假手术组全部存活，模型组12h,24h分别死亡2，5只（死亡率8.3％,3 5.7％），炎调方组12h,24h分别死亡1,2只（4.17％,13.3％），减方炎调方组12h, 24h分别死亡1,4只（4.17％,2 6.67％）。 4.2各组大鼠血清IL-1β的比较
2020脓毒症致心肌损伤模型的研究进展
2020脓毒症致心肌损伤模型的研究进展 摘要 脓毒症致心功能不全是一种危及生命的并发症，也被称为脓毒症心肌病，可以表现为心肌损伤、心功能障碍等，其发病机制尚不明确。目前，脓毒症致心肌损伤的动物模型已经相对成熟，而随着多种心肌细胞株的建立，研究者也构建出多种细胞模型用于该疾病的研究。本文将对脓毒症致心肌损伤的机制，动物及细胞模型的研究进展予以综述，为优化和选择实验模型提供参考依据。 脓毒症是机体对感染的反应失调而引起器官功能障碍的一种致命综合征。脓毒症所致心功能不全是脓毒症患者死亡率上升的主要原因之一，脓毒症导致心肌损伤(sepsis-induced myocardial injury，SIMI)是脓毒症主要表现之一，其发病机制复杂且不明确，临床上亦无统一的诊断标准和特异性疗法。因此，建立SIMI模型来研究发病机制并开发治疗药物显得格外重要。目前，已经建立了多种SIMI的模型，在体动物模型研究已经相对成熟；近年来，离体细胞模型，如原代剥离心肌、心肌细胞系、人多潜能干细胞来源的心肌细胞(cardiomyocytes derived from human pluripotent stem cells，hPSC-CMs)，也逐渐受到大家的关注。本文将对SIMI的机制、模型及其特点进行综述，为优化和选择SIMI模型提供参考依据。 1 SIMI的发病机制
1.1 炎性损伤 脓毒症时，机体通过内源性与外源性的炎症反应造成心肌损伤。脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)可以与心肌细胞表达的Toll样受体4(Toll-like receptor 4，TLR 4)结合，导致心肌细胞产生多种促炎因子，如肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β，IL-1β)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)等。同时，机体免疫系统产生的大量炎性细胞因子，通过血液系统到达心脏，内源与外源两方面造成心肌过度炎性损伤[1](图1)。 图1 SIMI的主要机制 1.2 线粒体损伤 线粒体稳态对于心肌细胞功能维持尤为重要，而脓毒症发生时心肌细胞中线粒体分裂、融合失衡及线粒体氧化磷酸化受损，ATP合成减少[2]。
脓毒血症动物模型具体步骤及说明
脓毒血症动物模型具体步骤及说明 原型物种人 来源盲肠结扎穿孔术（CLP）致脓毒症 模式动物品系SPF级SD大鼠，健康，雄性，体重为180g~200g 实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。 实验周期2d 建模方法1. 称量大鼠，腹腔注射水合氯醛（350mg/kg）麻醉，腹部正中剃毛后用碘酒及酒精擦拭手术区域。 2. 沿腹白线切开腹腔约2cm，找出盲肠，用5-0 缝线结扎约1/3盲肠，以21G针头贯通穿刺结扎的盲肠2次。轻轻挤压使少量肠内容物从穿刺孔溢出确保通畅；将处理好的盲肠回纳入腹腔，用5-0 缝线缝合内层，3-0缝线缝合外层，将大鼠置于加热垫维持肛温在37±0.5℃。 3. 待大鼠苏醒后自由饮水，正常饲养。 4. 2d后大鼠水合氯醛钠麻醉后，于腹主动脉取血5ml，室温静止2h，4℃离心机3000r/min离心10min，分离出上层血清，置-80℃冰箱保存备用。处死大鼠，取出心脏、肝脏、肾脏、肺、小肠，4％多聚甲醛固定，石蜡包埋切片(厚4um)，HE染色，观察病理改变，其余组织置于-80℃冰箱备用。 应用疾病模型
1.一般情况观察脓毒症组术后苏醒延迟，醒后精神萎靡，身体蜷缩，基本不活动，进食进水减少，对外界反应迟钝，呼吸频率加快，被毛蓬松少光泽，大便稀软，不再扎堆取暖。12h出现死亡大鼠，随着时间的延长大部分大鼠出现皮温低，肌力减弱，眼周血性分泌物，停止进食进水，排泄稀水样便，色黄，腥臭味。进一步发展出现呼吸急促，对被动仰卧无反抗，排泄物呈黏液状，量多，最终死亡。剖腹可见恶臭味血性渗液，肠管水肿黏连，盲肠坏死变黑。 心脏：光镜下结果比较，对照组大鼠心肌肌纤维结构排列紧密、无水肿、充血及渗出。模型组心肌肌纤维结构排列疏松，带状空泡化，细胞核肿胀，间质水肿、充血。 肝脏：肝有大量空泡脂肪样变性，肝细胞肿胀并有炎性细胞浸润。 肺：模型组肺间隔增厚，部分肺泡组织结构被破坏，炎症细胞浸润。 肾：可见肾皮质及间质水肿伴大量炎性细胞浸润，肾小管上皮细胞均有肿胀。空泡变性，坏死脱落。肾小管囊腔扩张、管型形成。皮髓质境界欠清晰，肾小球收缩、毛细血管微血栓形成 小肠：模型组小肠粘膜水肿、白细胞浸润、出血和上皮细胞坏死脱落。 血浆中炎症因子增加是脓毒症的典型特征之一,IL－1β、TNF－α及IL－6 是主要的促炎症细胞因子，在脓毒症模型后显著升高。
心肌活力饮对阿霉素所致大鼠心肌损伤的影响
心肌活力饮对阿霉素所致大鼠心肌损伤 的影响 （作者：_________ 单位：___________ 邮编：___________ ） 作者：王仁平,张敏,吕志信,李清华,徐宏遵,刘红霞,黄瑞霞【摘要】目的探讨心肌活力饮对阿霉素（ADM）诱导大鼠心肌损伤的保护作用和抗氧化作用。方法选用ADM诱导大鼠心肌损伤模型。SD 大鼠80只，随机分为4个组，每组20只，分别为正常对照组、模型对照组、心肌活力饮组（10 g原药材/kg）及阳性药黄芪生脉饮组（7 mL/kg）。除正常对照组夕卜,其余各组大鼠分别腹腔注射ADM（2.5 mg/kg）,每周3次，共4周。到期测定血、心肌丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD活性,并进行心肌病理检查。结果心肌活力饮组及黄芪生脉饮组血液及心肌的MDA水平明显低于模型对照组,SOD水平则显著高于模型对照组，心肌病理计分下降。结论心肌活力饮有抗氧化作用，对ADM所引起的心肌损伤具有保护作用。 【关键词】心肌活力饮；阿霉素；丙二醛；超氧化物歧化酶；心肌损伤；大鼠 Abstract : Objective To observe the protective and antioxidative effect of Xinjihuoliyin on the myocardium injury
in duced by adriamyc in (ADM) in rats. Methods 80 SD rats were randomly divided into four groups : normal group, control group, Xinjihuoliy in group and positive con trol group (Hua ngqishe ngmai yin group). I n con trol group, Xinjihuoliyin group and Huan gqishe ngmai yin group, ADM was in traperit onial injected at a dose of 2.5 mg/kg, three times every week, for 4 weeks, while n ormal sali ne was in traperito nial injected at a dose of 3 mL/kg in n ormal group. In Xinjihuoliyin group, Xinjihuoliyin was in tragastric admi nistrated once a day at a dose of 10 g/kg. In Huan gqishe ngmai yin group, Huan gqishe ngmai yin was in tragastric adm ini strated once a day at a dose of 7 mL/kg and distilled water was given to other two groups. The activity of superoxide dismutase (SOD) and the content of malon dialdehyde (MDA) of serum and myocardium were assayed. The myocardial pathomorphism was detected at the same time. Results Comparedwith the control group, MDAof serum and myocardium was lower, and SOCbf serum and myocardium was higher in Xinjihuoliyin and Huan gqishe ngmai yin group. The scale of myocardial pathological damage in Xinjihuoliyin and Huan gqishe ngmai yin group was improved. Con clusi on Xinjihuoliyin has protective effect and an tioxidative effect on the myocardium injury in duced by adriamyc in in rats.
大鼠脓毒症模型
大鼠盲肠结扎穿孔术（CLP）致脓毒症模型脓毒症(sepsis)是指由感染引起的全身炎症反应综合征(Systemic inflammatoy response syndrome，SIRS)，临床上证实有致病菌侵袭存在或有高度可疑的感染性病灶，临床中多以常见并发症出现在重度感染、大面积烧伤、严重创伤或大手术术后的危重患者当中。脓毒症一旦发生，进展迅速，短时间可由全身炎性反应综合征(Systemic inflammatory response syndrome，SIRS)、脓毒症进展为重度脓毒症(severe sepsis)(合并器官功能不全)、脓毒症休克(septic shock)(并发充分液体复苏亦无法纠正的低血压)及多器官功能障碍综合征(Multiple organ dysfunction syndrome，MODS)，以上三者可贯序发生，亦可同时发生，严重危及患者生命，产生极高的致死风险。虽然目前已经有许多动物模型用来复制脓毒症，但盲肠结扎穿孔术（CLP）致脓毒症的啮齿动物模型仍然是目前应用最广泛的脓毒症动物模型。 1.实验动物 SPF级Wistar大鼠，健康，雄性，体重为180g~200g 2.实验分组 实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。 3.实验周期 2d 4.建模方法 1.称量大鼠，腹腔注射水合氯醛（350mg/kg）麻醉，腹部正中剃毛后用碘酒及酒精擦拭手术区域。 2.沿腹白线切开腹腔约2cm，找出盲肠，用5-0缝线结扎约1/3盲肠，以21G针头贯通穿刺结扎的盲肠2次。轻轻挤压使少量肠内容物从穿刺孔溢出确保通畅；将处理好的盲肠回纳入腹腔，用5-0缝线缝合内层，3-0缝线缝合外层，将大鼠置于加热垫维持肛温在37±0.5℃。 3.待大鼠苏醒后自由饮水，正常饲养。 4.2d后大鼠水合氯醛钠麻醉后，于腹主动脉取血5ml，室温静止2h，4℃离心机3000r/min离心10min，分离出上层血清，置-80℃冰箱保存备用。处死大
SD 大鼠脓毒血症
大鼠脓毒血症建立方法 SD 大鼠, 体重190～270 g ,雌雄均有, 禁食24 h 后进行实验。用2.5 %戊巴比妥钠按1 ml/ kg 体重, 腹腔注射麻醉大鼠, 随机分为实验组和对照组(假手术组) 。常规消毒腹部, 在下腹部正中央切口, 长约2 cm , 打开腹腔寻找盲肠, 小心分离其远端与大肠的系膜, 盲肠内如有粪便, 则把粪便小心挤向相连的大肠, 实验组在盲肠远端1/ 2 处用无菌4 号丝线紧紧结扎, 并用无菌7 号针头在已结扎盲肠远段中央处贯通穿刺。然后把盲肠推回腹腔, 关闭腹腔, 逐层缝合。对照组仅做开腹分离盲肠远端与大肠的系膜及关腹手术。术后按50 ml/ kg 体重皮下注射生理盐水, 补充手术中丢失的体液, 连续观察24h , 整个实验过程中在室温22～25 ℃环境进行并让大鼠自由饮水。在盲肠结扎前、结扎后8 h、16h、和24h 在无菌条件下取大鼠尾血1 滴进行细胞培养, 实验组还在无菌条件下取腹腔渗出液少许进行细菌培养。 用结扎整个盲肠加穿刺的方法可复制出动物的理想败血症模型, 因为动物模型血液细菌培养阳性, 培养出来的细菌与感染灶细菌完全或部分相同, 动物表现与临床败血症类似, 重复性好, 模型复制后有一定的存活时间供研究之用。有人把结扎整个盲肠改为结扎盲肠1/ 2 , 把穿刺盲肠2 次改为贯通穿刺盲肠, 操作更为简便, 效果也令人满意。 造成盲肠缺血坏死, 自身肠道的细菌进入腹腔造成感染。血液培养显示, 在CL P 后16 h , 血液已有大肠杆菌及绿脓杆菌生成, 与腹腔渗出液细菌培养结果相同; 培养出的菌种与报道略有不同, 这可能是由于大鼠来源及实验室的条件不同造成的。 实验组动物术后24 h 活杀, 见盲肠结扎的远端已发生坏死, 穿刺的针孔明显, 腹腔感染, 有臭味的渗出液,但腹腔未见粪便, 这与人类阑尾穿刺并发腹膜炎等疾病过程相似。大鼠盲肠结扎加穿刺引起的败血症存活情况与结扎盲肠部分的多少, 穿刺针孔的多少和大小有关。针孔多, 针孔大, 死亡率高。上述结扎整个盲肠并用9号针头刺孔2 个, 24 h 有75 %大鼠死亡。有人结扎1/2 盲肠并用7 号贯通穿刺, 24 h 无大鼠死亡。另外,饲养动物环境也是影响动物存活率的重要因素。有人曾在室温30 ℃时, 饲养CL P 大鼠5 只, 结果在24 h内全部死亡。
牛磺酸对阿霉素所致大鼠心肌损伤的保护作用
牛磺酸对阿霉素所致大鼠心肌损伤的保 护作用 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 作者：赵丽晶范红艳沈楠王艳春 【摘要】目的探讨牛磺酸( Taurine,Tau) 对阿霉素(adriamycin,ADR)所致心肌损伤的保护作用。方法Wistar大鼠60只，随机分为正常对照组、模型组（ADR组）、Tau剂量组（高400 mg·kg-1·d-1、中200 mg·kg-1·d-1、低100 mg·kg-1·d-1），每组12只。除正常组外，其他各组腹腔注射ADR 2.5 mg·kg-1·w-1，连续4 w，制备大鼠心肌损伤模型。各Tau剂量组腹腔注射ADR第2天灌胃给予相应剂量Tau，连续30 d。应用自动生化分析仪测定血清中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、谷草转氨酶（GOT）含量，采用硫代巴比妥比色法测定丙二醛（MDA）含量，采用改良的黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）含量，ELISA法测定转化生长因子β1(TGFβ1)及肿瘤坏死因子α(TNFα)的含量。结果Tau各治疗组的LDH、CK、GOT及MDA的含量明显低于ADR模型组；TGF β1蛋白及TNFα含量均低于ADR模型组(P0.001)。结论Tau可通
过提高SOD的活性，并抑制TGFβ1蛋白及TNFα的表达对ADR 所致心肌损伤发挥保护作用。 【关键词】牛磺酸；阿霉素；心肌损伤 阿霉素（adriamycin，doxorubicin，ADR）是临床上常用的广谱化疗药物，对多种恶性肿瘤均有较好的疗效，但在杀伤癌细胞的同时ADR对正常组织亦有损伤，其中对心肌的损害较为明显。牛磺酸（Taurine,Tau）又称α氨基乙磺酸，是人体内的非必需氨基酸，通过调节钙稳态、维持细胞渗透压及稳定细胞膜等多种机制发挥细胞保护作用〔1〕。本研究采用阿霉素建立心肌炎模型，着重观察Tau对心肌炎的保护作用。 1 材料与方法 1.1 动物 Wistar大鼠60只，清洁级，雌雄兼用，由吉林大学基础医学部实验动物中心提供。随机分为对照组、模型组、Tau剂量组（高400 mg·kg-1·d-1、中200 mg·kg-1·d-1、低100 mg·kg-1·d-1），每组12只。 1.2 方法 1.2.1 药品、试剂与仪器 Tau（中国医药上海化学试剂公司，批号20081024），阿霉素（浙江海正药业股份有限公司，批号20090412）。LDH、GOT、CK、CK MB、SOD和MDA试剂盒均购于南京建成生物工程公司；TGF
脓毒症动物模型的选择与评价
脓毒症（Ｓｅｐｓｉｓ）作为急危重症领域的棘手难题，日益引起临床医师及科研工作者的关注。近十年来，现代生物科技的飞速发展极大地促进了人们对脓毒症发病机制的认识，并推动了脓毒症治疗措施的改进和更新。其中，脓毒症动物模型的应用对此起到了十分重要的作用。脓毒症动物模型的不断发展也反映了人们对脓毒症本质的认识正在逐渐深入，总结和分析现有动物模型，对于如何建立更贴近临床实际的脓毒症动物模型、合理设计实验以及准确解释动物实验数据都具有重要意义。 １ 应用脓毒症动物模型的意义 在过去的几年中，人们对感染后炎症反应分子机制的研究已取得显著进展，其中很大部分是利用体外观察的方法对细胞生理学研究的成果。应明确的是，尽管体外实验的手段先进而且方便，但要更好地了解脓毒症时体内炎症反应的发生、发展过程和其他病理生理变化，还需采用临床相关的脓毒症或脓毒性休克动物模型进行深入的探讨。 一般认为，利用动物模型进行脓毒症研究具有以下优点。 １．１ 在进行具有高度创伤性的操作或进行器官离体实验时只能使用动物模型。特别是在研究脓毒症的病理生理变化时通常需要采集组织标本（如肝、肺、肾等），而这些标本很难从临床获得。只有利用动物模型才可能方便地采取脓毒症各个阶段的组织标本。 １．２ 临床脓毒症病因较复杂，难以判断其确切的发病时间。很多患者还伴有其他严重的非相关疾病。并且，临床的脓毒症患者通常接受多种支持治疗，这些治疗不可避免地会影响对脓毒症自然病程的观察。因此，直接探讨人类脓毒症的病理生理机制相当困难，而采用动物模型进行实验则可免受上述因素的干扰。 １．３ 由于临床脓毒症患者的遗传学背景非常复杂，加之患者年龄、性别、同时存在的其他疾病以及支持治疗等因素均可导致临床资料的高度变异性。而要控制这种变异只能靠加大样本量，这无疑将会耗费更多的时间并给临床脓毒症试验带来很大的经济压力。由于动物模型的生物学差异较人类要小，因此所需的样本量也明显少于临床观察。 １．４ 在探讨脓毒症的发病机制时经常要使用一些药物或试剂（如某种细胞因子的抗体或拮抗剂等），这些制剂可能具有毒性或未经过临床的安全性检验不能用于人体。因此，只有采用动物模型才能方便地利用这些制剂来了解脓毒症发病的分子机制。除此之外，应用脓毒症的动物实验模型还可对药物进行临床试验前的筛选。 由此可见，在探索脓毒症发生、发展机制的过程中，选择适宜的脓毒症或脓毒性休克动物模型进行体内研究仍具有不可替代的地位。 ２ 脓毒症动物模型的选择及其局限性 大量的临床及实验研究资料表明，尽管在过去十几年中有关脓毒症发病机制的认识已取得较大进展，但对于脓毒症治疗和新药开发方面的研究却不容乐观。许多新的干预脓毒症制剂虽然在动物实验中表现出很好的应用前景，但其在临床ＩＩ期和ＩＩＩ期试验中均未取得显著的临床疗效，甚至反而加重疾病的程度。迄今为止，严重脓毒症或脓毒性休克的死亡率仍高达５０％左右。造成这一现象的重要原因之一即是在药物应用于临床前的动物实验观察中所 脓毒症动物模型的选择与评价 姚咏明（解放军总医院野战外科研究所 解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所，北京，１０００３７） ＹＡＯ Ｙｏｎｇ－ｍｉｎｇ 作者简介 姚咏明（１９６５－），男，湖 北人，医学博士后，教 授，博士生导师。主要从 事创伤休克、脓毒症和 多器官功能障碍综合征 发病机制及防治的研究。 现任解放军总医院野战 外科研究所副所长、中 国微生物学会微生物毒 素分会副主任委员、中 国中西医结合急救医学 分会常委、中国灾害防 御协会救援医学会常务 理事等职。