粪便中病原菌的分离培养与鉴定

粪便中病原菌的分离培养与鉴定

[摘要]目的：从粪便中分离、培养和检测病原菌，对于临床治疗及预后调查有一定的价值。粪便标本中常见的病原菌有志贺氏菌属、致病性大肠杆菌、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等，各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法分辨是否为病原菌。此次我们主要分离培养并鉴定粪便标本中的大肠埃希菌和痢疾志贺菌[3]。方法：本文利用伊红美蓝平板培养后的菌落特征，再提纯培养细菌进行革兰染色镜检、动力实验、生化反应。可鉴定粪便标本中的病原菌。

[关键词]革兰染色大肠埃希菌志贺菌分离培养鉴定

1.实验材料与仪器

1.1标本：粪便标本

1.2培养基：普通琼脂平板、伊红美蓝平板、营养琼脂斜面培养基、营养肉汤液体培养基、半固体琼脂培养基

1.3试剂：细菌干粉培养基革兰染色法[1]试剂【结晶紫、碘酒、95%乙醇、稀释复红】、糖发酵管【乳糖、葡萄糖】、褔氏志贺菌诊断血清。

1.4仪器：接种环、接种针、酒精灯、试管架、恒温培养箱、显微镜、蒸馏水、玻片缸、消毒液、1‰新洁尔灭、灭菌平皿、刻度吸管、吸水纸、橡皮筋。

2.实验过程

2.1细菌的分离与培养

细菌分离培养：伊红美蓝平板分区划线分离（5区）。

无菌操作取粪便标本于固体平板培养基上，采用分区画线分离法培养细菌。于37℃培养24小时，从而分离出单个菌落。

2.2细菌群体生长特征的观察

观察形成菌落的大小、形状、边缘、表面、色素。

粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落。紫黑色菌落具

有金属光泽、大而隆起、不透明，菌落直径2～3mm。淡粉红色菌落，半透明，直

径1～2mm。

2.3细菌纯培养

粪便标本在伊红蓝平板上，有紫黑色，粉红色两种菌落。分别挑选这两种菌

落在斜面培养基上接种标记，在37℃培养24h。

2.3.1斜面接种法

选择平板上相同的菌落数多的、典型的、容易挑取的单菌落在平皿底部玻璃上，画个大圈选择菌落，右手拿接种环通过火焰烧灼灭菌，再用灭菌的接种环套

住菌落，轻刮取菌，将其伸入代接斜面试管底部，轻轻向上划线，接接种环退出

斜面试管，再用火焰烧管口，并在火焰边将试管塞塞上，观察斜面培养基。

2.3.2营养肉汤接种

其操作步骤基本与斜面接种时相同，不同之处是挑取菌体的接种环放入液体

培养基后，应在体液表面处的管内壁上轻轻摩擦，使菌体从环上脱落，混进培养基，塞好试管塞后，摇动液体，使菌体在液体中分布均匀，或用试管振荡器混匀。

2.4细菌的形态学检查

2.4.1细菌涂片标本制备

采用斜面培养基的少量细菌涂抹在洁净载玻片的生理盐水上，涂抹成直径1

厘米大小的均匀薄膜，自然于干燥后利用外焰固定。从伊红美蓝平板上挑取的紫

黑色或粉红色菌落接种的斜面，菌苔已经没有原来菌落的颜色。菌苔灰白色、表

面湿润、光滑、不透明或半透明。

2.4.2革兰染色方法

涂片→干燥→固定→结晶紫初染1分钟→水洗→卢戈碘液→媒染1分钟→水洗→95%乙醇脱色约20秒钟→水洗→稀释复红→复染1分钟→水洗→吸干，油镜观察。

2.4.3动力试验

用半固体穿刺接种法（接种针斜面取菌，从半固体培养基中心，垂直刺入，到达培养基底部的4/5处，再循原来的路线推出接种针）做细菌的动力试验，在37℃培养24h观察结果。

2.4.4生化反应

通过无菌操作，用灭菌接种针刮取细菌培养物少许，分别接种在葡萄糖微量管和乳糖发酵微量管内。将微量管平放在平皿盖内，37℃培养过夜后观察结果。

2.4.5痢疾诊断血清玻片凝集试验

取载玻片两张分别滴加痢疾杆菌诊断血清和生理盐水各15ul。用接种环挑取少许紫黑色菌落和粉红色菌落，各自与上述混合液液滴混匀，观察结果。

3.结果观察、分析、总结

3.1粪便中的细菌在伊红美蓝平板上的菌落特征

结果显示，粪便标本在伊红美蓝平板上形成了紫黑色跟粉红色两种菌落。紫黑色细菌：长杆状、粉红色。粉红色细菌：短杆状粉红色，较紫黑色细菌粗大。

3.3半固体穿刺接种法

紫黑色的菌落自接种部位向周围移动扩散生长，使培养基呈扩散云雾状混浊状态。粉红色的菌落只能沿着穿刺线生长繁殖，穿刺线边缘清晰，周围培养基清澈透明。

3.4生化反应试验结果如下

(+产酸或阳性, ⊕产酸或产气,-阴性)

3.5痢疾诊断血清玻片凝集实验结果

粉色的菌苔和痢疾杆菌诊断血清的混合悬液由均匀混浊,并出现大小不等的

乳白色颗粒团块即阳性。

紫黑色的菌苔与生理盐水的混合悬液不能产生颗粒固块即阴性。

4．结论

采用平板划线分离法，从浓汁标本中分离出黄色和白色两种菌落。显微镜下，这两株细菌均为G+球菌，排列不规则，呈葡萄串状，是典型的葡萄球菌；结合菌

落或菌苔颜色，这两株葡萄球菌分别是金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌。通过血

浆凝固酶试验鉴别，金黄色葡萄球菌是致病菌。

用伊红美蓝平板，从粪便标本中分离出紫黑色具有金属光泽和粉红色半透明

菌落。紫黑色菌落是能分解乳糖的大肠埃希菌。粉红色菌落是不能分解乳糖的致

病菌。显微镜下，它们都是G-杆菌，散在排列，从形态上不能鉴别是什么细菌。

经糖发酵试验，半固体动力试验，血清学试验结果鉴定，它们分别是大肠埃希菌

和福氏志贺菌。

由菌落形态观察、染色镜检、生化及动力试验结果可初步判定标本中所得到

的紫色菌落为非致病大肠埃希菌，粉红色透明菌落为致病痢疾志贺菌。

参考文献：

[1]肖征,章京楠,曹正,翟燕红.对比快速染色法与革兰氏染色法对阴道炎的诊断价值[J].标记免疫分析与临床,2021,28(03):510-513.

[2]李宏,高东旗,宋宏彬,李青凤,冯继贞,董宏彬. 一起野外驻训分队感染性腹泻暴发的调查与分析[J]. 中华医院感染学杂志,2021,(08):1196-1199.

[3]王启发,赫自强,李银妹,胡永峰,金东. 粪便样本中志贺菌分离培养方法的优化[J]. 疾病监测,,:1-7.

粪便微生物学检验的标准操作程序

粪便微生物学检验的标准操作程序 1 检验目的 做疾病的病原学诊断，查找于疾病有关的病原菌以及了解微生物与疾病的关系，指导临床治疗及预后和流行病学的调查。 2 原理 正常人的肠道中栖居大量的不同种类的微生物，组成了微生态菌膜屏障。起着健康的作用，腹泻是因为病原细菌或病毒在肠道内繁殖的结果。 3 标本要求 （1）标本类型：粪便。 （2）标本采集：见标本采集手册 （3）标本储存和运输：室温放置，室温运输并立即送检。 （4）标本拒收状态：非无菌方式采集的标本或未按要求部位采取的标本。 4 容器和添加剂类型 均使用灭菌器皿盛放标本 5 试剂 （1）试剂名称：革兰氏染液、氧化酶试剂、3%触酶、血平板、中国蓝平板、SS平板、柯玛嘉平板、相关生化试剂等。 6仪器设备： （1）接种针、接种环、酒精灯 （2）梅里埃ATB药敏鉴定仪 （3）显微镜、SPX-150B型生化培养箱、超净工作台、台式离心机、天平 7 校准程序 (送市计量质量检测研究所校准) 8 标本的处理

8.1 沙门-志贺菌：取粪便少许，增菌后转种或将粪便直接接种SS 及中国蓝或麦康凯、伊红美蓝平板，35℃、18-24h后进行鉴定。 沙门氏菌增菌37℃,16-24h，转钟在平板上，增菌液：粪便等于10:1。志贺菌增菌37℃,4-6h，转种在平板上。 注：伤寒病人在发病1—2周采取血液，发病2—3周采取粪便和尿液。 8.2 霍乱弧菌培养：标本接种于碱性蛋白胨水中，进行增菌，增菌培养孵育6—8h后，取表面菌膜移种于碱性琼脂平板/庆大霉素一亚碲酸钾平板上。 8.3 真菌培养：将标本接种于含氯霉素的沙氏琼脂及血琼脂平板上，置25-35℃和35℃孵育24—48h，来鉴定。 9 操作流程 粪便或肛门试子 分离培养增菌培养 麦康凯或中国蓝亚硒酸增菌培养基GN增菌培养基 （适用于沙门菌属）（适于 志贺菌属） SS琼脂 SS及麦康凯琼脂平板分离 三糖或双糖铁培养基 血清鉴定生化反应鉴定药物敏感性 试验 报告 10 质量控制： 参加我科质量管理小组组织的各项质量控制活动

微生物脓汁粪便实验报告

医学微生物学实验报告 一、实验题目：脓汁和粪便标本中病原菌的检测 二、实验目的： 1、了解细菌生长的基本营养条件。熟悉培养基的种类。掌握培养基制备的原则和一般方法。了解理化因素对细菌的影响。掌握常用的消毒灭菌法和无菌操作技术。 2、掌握病原菌的分离与培养方法。了解并比较细菌在固体、半固体及液体培养基上的生长特征。 3、掌握油镜的正确使用、细菌涂片标本的制备。掌握革兰氏染色法。熟悉细菌的基本形态。了解细菌的特殊结构。熟悉几种常用的细菌生化反应的名称、原理、方法、结果分析及用途。掌握血浆凝固酶试验的原理、方法及用途。掌握玻片凝集试验的原理、方法、结果观察与判断。熟悉药物敏感性试验方法的种类、原理及应用。掌握纸片扩散法。 三、实验器材 接种环，接种针，酒精灯，脓汁标本1支，粪便标本1支，碘酒棉球1瓶，酒精棉球1瓶，眼科镊子2把，伊红美兰平板，营养琼脂平板；斜面培养培养基，营养肉汤，生理盐水，镜油瓶、拭镜纸1套，吸水纸1本，载玻片4张，半固体琼脂培养基，糖发酵管1套，抗菌素纸片1套，药敏试验培养物4个 四、方法与步骤 4.1实验原理 （1）、培养基制备：用人工方法将微生物生长繁殖所需要的多种营养物质，按比例混合配制而成的营养制品，其主要用途是分离培养纯种微生物，传代或保存微生物，鉴别微生物的种属，研究微生物的生理及生化特性。 （2）、细菌的分离与培养：细菌学检验，特别是细菌培养必须是无菌操作。细菌的接种技术主要有：平板划线分离法，斜面、液体或半固体培养基接种法。为避免在接种过程中污染环境和空气中的细菌污染培养物，要求在酒精灯旁进行细菌接种。采用一般培养法即需氧培养法，将已接种好的培养基置于37℃恒温箱中培养18～24小时，一般细菌即可在培养基中生长繁殖。

粪便中病原菌的分离培养与鉴定

粪便中病原菌的分离培养与鉴定 [摘要]目的：从粪便中分离、培养和检测病原菌，对于临床治疗及预后调查有一定的价值。粪便标本中常见的病原菌有志贺氏菌属、致病性大肠杆菌、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等，各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法分辨是否为病原菌。此次我们主要分离培养并鉴定粪便标本中的大肠埃希菌和痢疾志贺菌[3]。方法：本文利用伊红美蓝平板培养后的菌落特征，再提纯培养细菌进行革兰染色镜检、动力实验、生化反应。可鉴定粪便标本中的病原菌。 [关键词]革兰染色大肠埃希菌志贺菌分离培养鉴定 1.实验材料与仪器 1.1标本：粪便标本 1.2培养基：普通琼脂平板、伊红美蓝平板、营养琼脂斜面培养基、营养肉汤液体培养基、半固体琼脂培养基 1.3试剂：细菌干粉培养基革兰染色法[1]试剂【结晶紫、碘酒、95%乙醇、稀释复红】、糖发酵管【乳糖、葡萄糖】、褔氏志贺菌诊断血清。 1.4仪器：接种环、接种针、酒精灯、试管架、恒温培养箱、显微镜、蒸馏水、玻片缸、消毒液、1‰新洁尔灭、灭菌平皿、刻度吸管、吸水纸、橡皮筋。 2.实验过程 2.1细菌的分离与培养 细菌分离培养：伊红美蓝平板分区划线分离（5区）。 无菌操作取粪便标本于固体平板培养基上，采用分区画线分离法培养细菌。于37℃培养24小时，从而分离出单个菌落。 2.2细菌群体生长特征的观察

观察形成菌落的大小、形状、边缘、表面、色素。 粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落。紫黑色菌落具 有金属光泽、大而隆起、不透明，菌落直径2～3mm。淡粉红色菌落，半透明，直 径1～2mm。 2.3细菌纯培养 粪便标本在伊红蓝平板上，有紫黑色，粉红色两种菌落。分别挑选这两种菌 落在斜面培养基上接种标记，在37℃培养24h。 2.3.1斜面接种法 选择平板上相同的菌落数多的、典型的、容易挑取的单菌落在平皿底部玻璃上，画个大圈选择菌落，右手拿接种环通过火焰烧灼灭菌，再用灭菌的接种环套 住菌落，轻刮取菌，将其伸入代接斜面试管底部，轻轻向上划线，接接种环退出 斜面试管，再用火焰烧管口，并在火焰边将试管塞塞上，观察斜面培养基。 2.3.2营养肉汤接种 其操作步骤基本与斜面接种时相同，不同之处是挑取菌体的接种环放入液体 培养基后，应在体液表面处的管内壁上轻轻摩擦，使菌体从环上脱落，混进培养基，塞好试管塞后，摇动液体，使菌体在液体中分布均匀，或用试管振荡器混匀。 2.4细菌的形态学检查 2.4.1细菌涂片标本制备 采用斜面培养基的少量细菌涂抹在洁净载玻片的生理盐水上，涂抹成直径1 厘米大小的均匀薄膜，自然于干燥后利用外焰固定。从伊红美蓝平板上挑取的紫 黑色或粉红色菌落接种的斜面，菌苔已经没有原来菌落的颜色。菌苔灰白色、表 面湿润、光滑、不透明或半透明。 2.4.2革兰染色方法

粪便标本中病原菌的检测

粪便标本中病原菌的检测 目的从粪便标本中分离、培养和检测病原体。方法培养基的制备、消毒和灭菌，细菌的分离与培养，细菌群体和个体形态特征的观察，细菌生化反应鉴定。结果:粪便标本形成紫黑和粉红色两种菌落，均为革兰氏阴性菌，对青霉素不敏感，对链霉素敏感。两种细菌均对广谱抗菌素庆大霉素敏感。 关键词：粪便微生物细菌菌落生化鉴定药敏试验 引言： 粪便标本中常见的病原菌有志贺氏菌属、致病性大肠杆菌属、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、艰难梭菌等。粪便标本中常含有很多杂菌，应根据检验目的菌的不同而选择培养基（如SS、伊红美蓝平板、碱性蛋白胨水），尽可能抑制杂菌，以利于病原菌的检出。 这次实验我们从粪便标本中检出的是大肠埃希菌、痢疾志贺菌。 更重要的是我们了解了，医学微生物学主要的研究方法和手段，掌握了微生物试验的基本技能和基本原理，树立了牢固的无菌观念。同时培养学生自学能力、科学思维能力、动手能力和表达能力。培养学生从临床标本中分离细菌以查找与疾病有关的病原体，为临床治疗预后调查提供一定的价值 1.实验器材： 接种针、接种环、油性笔、打火机、试管架、普通冰箱、冷藏室、隔水式电热恒温培养箱、奥林巴斯 CX21型生物显微镜、1500W电炉、蒸馏水、玻片缸、消毒液、1‰新洁而灭、天平、砝码、细菌干粉培养基、锥形瓶、量筒、试管筐、糖发酵管、灭菌平皿、试管（棉塞）、刻度吸管、洗耳球、称量纸、硫酸纸、牛皮纸、橡皮筋、尺子 2.实验方法： 2.1培养基的制备、消毒和灭菌 培养基制备的一般程序： ①调配→溶化→矫正pH →分装→灭菌→检定→保存。 ②干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→灭菌→检定→保存。 2.2细菌的分离与培养 2.2.1采用平板划线分离法，将取粪便标本中混杂的多种细菌，分别在普通平板和伊红美蓝固体培养基表面划线，使之分散成单个细菌，在37℃培养18～24h ，从而分离出单个菌落。 2.2.2细菌群体生长特征的观察。观察形成菌落的大小、形状、边缘、表面、色素。

肠道病原菌的分离与鉴定实验报告

肠道病原菌的分离与鉴定实验报告 摘要 本实验旨在分离、鉴定肠道病原菌，并深入了解肠道病原菌对人们健康的影响。本实验采用选择性培养基和生化试剂对样品进行处理和鉴定，最终成功分离出大肠杆菌、沙门菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌等肠道病原菌。 引言 肠道病原菌是导致肠胃疾病的主要病因之一。一些细菌和病毒都可引起肠道感染，导致腹泻、呕吐、腹痛等不适症状。有些肠道病原菌很难通过常规的培养方法进行分离和鉴定，因此对于其鉴定至关重要。在临床和实验室中，肠道病原菌的鉴定是非常重要的。在本实验中，我们将通过选择性培养基和生化试剂来分离和鉴定肠道病原菌。 材料与方法 实验所需材料： -食品样品（牛肉、猪肉、家禽产品等） -选择性培养基（MacConkey agar, SS agar, XLD agar） -氯霉素（50μg/ml） -β-半乳糖苷酶 -生化试剂（甲基红、青田霉素、麦芽糖、尿素、甲酸氢钠、甲酸亚铁、碳酸氢铵、硫代硫酸钠、氧化亚铁、硫酸铜、氯化铵、硝酸钴、聚苯乙烯乳胶、过氧化氢） 实验步骤： 1. 食品样品的处理：将样品切成小块，加入100 ml的含氯霉素（50μg/ml)的生理盐水中，放在室温下搅动10分钟，再将悬浮液离心10分钟，取沉淀制备10倍连续稀释液备用。 2. 分离培养：取三个不同的选择性培养基MacConkey agar、SS agar和XLD agar，分别接种均匀悬浮液并用无菌环展开，然后使其在37℃恒温箱中孵化24小时。 3. 生化识别：观察菌落的形态、颜色和表面涂膜，并用生化试剂行革兰染色、甲基红反应、青田霉素试验、尿素酶试验、甲酸氢钠氧化试验、甲酸亚铁还原试验、碳酸氢铵水解试验、硫代硫酸钠还原试验、氧化亚铁试验、硫酸铜凝集试验、氯化铵水解试验、硝酸钴试验、聚苯乙烯乳胶凝聚试验和过氧化氢试验，根据结果进行分类鉴定。

病原生物学综合性实验一脓汁和粪便标本中病原菌的检测

综合性实验一脓汁和粪便标本中病原菌的检测 从临床标本中分离细菌的目的是为了查找与疾病有关的病原菌，这对于临床治疗及预后调查是很有价值的。所以，在分离时应掌握以下原则，以便指导检出病原菌，避免漏诊误诊。1．了解微生物在人体的分布。人体的很多部位与外界相通，存在正常菌群，分离时应注意 标本中的菌群是正常菌群的污染，还是致病菌。另外，机体的某些部位(如血液、骨髓)是 无菌的，如检出细菌，应视为致病菌。 2．了解标本来源及临床情况，以便有目的地检出病原菌。 3．根据标本来源和可能存在的病原菌确定选用各种分离培养基，以提高检出率。如血平板 可用于化脓性链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎球菌等的分离。 常见的化脓性病原菌有葡萄球菌、链球菌、淋球菌、脑膜炎球菌、肺炎链球菌、结核杆菌、 假单胞菌、流感杆菌等。脓汁标本在做细菌分离培养的同时，均须直接涂片检查，观察是否有典型形态的菌体，芽胞有无，为临床提供最初的诊治依据。 粪便标本中常含有很多杂菌，应根据检验目的菌的不同而选择培养基(如SS、伊红美蓝平板，碱性蛋白胨水)，尽可能地抑制杂菌，以利于病原菌的检出。粪便标本中常见的病原菌有 志贺氏菌属、致病性大肠杆菌、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、艰难梭菌等。粪便标 本中因各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法分辩是否为病原菌，因此，粪便标本 一般不作直接涂片检查，只有检查霍乱弧菌、结核杆菌、疑似葡萄球菌或艰难梭菌引起的伪 膜性肠炎，以及菌群失调时，才作直接涂片检查。 细菌鉴定工作的原则及基本方法是： 1、必须用纯的细菌培养物作鉴定。因为不同的细菌生化反应结果相差较大，而反应结果是 以阳性或阴性表示的，一旦用混合菌做生化反应，结果不可分析。 2、鉴定方法的选择。测定细菌特征的实验方法很多，应根据鉴定目的选择有价值的、快速 简便的试验项目，既能完成鉴定，试验项目又尽可能少。 一、培养基的制备 Preparation of Culture Media 【实验目的】 1了解细菌生长的基本营养条件。 2熟悉培养基的种类。 3掌握培养基制备的原则和一般方法。 【实验原理】 培养基是用人工方法将微生物生长繁殖所需要的多种营养物质，按比例混合配制而成的营养 制品，其主要用途是分离培养纯种微生物，传代或保存微生物，鉴别微生物的种属，研究微

脓汁和粪便标本中病原菌的检测

脓汁和粪便标本中病原菌的检测 病原菌是引起多种疾病的微生物，包括细菌、病毒、真菌和寄生虫等。当人体感染病原菌时，常会产生脓汁和粪便等病理样本。对病原菌进行检测可以帮助医生诊断疾病和进行治疗。 脓汁是由细胞、细菌、炎性介质和液体组成的炎症渗出物。脓汁样本的检测可以帮助医生确定炎症发生的部位和病原菌种类，对于引起严重感染的病原菌，如金黄色葡萄球菌和链球菌等，及时检测非常重要。 脓汁样本的采集可以通过穿刺或切开取材。采集样本前需要进行局部消毒，避免产生假阳性结果。采集后需要将样本送到合格的实验室进行细菌培养和鉴定。 细菌培养是目前脓汁样本中病原菌检测的主要方法。样本在培养基上进行检测，通过观察培养基的变化和菌落的形态、颜色等特征，可以初步判断病原菌种类。此外，还可通过病原菌的生化试验和抗生素敏感试验等来进一步鉴定。 粪便样本中的病原菌检测是临床常用的方法之一。胃肠道感染、痢疾等疾病常表现为腹泻、呕吐、腹痛等症状，这些症状通常伴随着粪便的改变。检测粪便样本中的病原菌可以帮助医生确定疾病的病因，进而制定合理的治疗方案。 采集粪便样本需要注意消毒和避免受到多余杂质的干扰。采集的样本应放入干燥、无菌的容器中，并在24小时内送到实验室进行检测。 粪便样本中的病原菌检测方法分为培养法和分子生物学方法两种。培养法是常用的方法，具有价格低、操作简单、可检测多种病原菌等优点。具体操作过程包括将样本放入培养基中，根据菌落形态、色素、大小等特征进行初步鉴定，进一步确定病原菌种类，最后进行抗生素敏感性试验。 分子生物学方法则通过检测病原菌的DNA或RNA序列进行鉴定，具有快速、灵敏、特异性高等优点。目前已有多种分子生物学方法被应用于粪便样本中病原菌检测，如PCR、LAMP等。 综上所述，脓汁和粪便样本中病原菌的检测有助于医生确定疾病的病因，对于治疗方案的制定具有重要的指导意义。在样本采集和实验室检测中需要严格遵守操作规程，以确保结果准确可靠。

粪便标本中致病菌的检验实验设计

临床模拟标本细菌学检验的实验设计书 1.标本分析 标本中可能的正常菌群：正常情况下肠道中有多种细菌寄生，包括大量的厌氧菌、肠球菌、大肠埃希菌、肠杆菌、变形杆菌、粪产碱杆菌等。 标本中可能存在的病原菌：①细菌性：吸收不良性腹泻，包括致病性大肠埃希菌等；产毒素性腹泻，包括霍乱弧菌、肠毒素型大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、艰难梭菌、变形杆菌、气单胞菌属、蜡样芽胞杆菌等；侵袭性腹泻，包括志贺菌、肠致病型大肠埃希菌、肠侵袭型大肠埃希菌、肠出血型大肠埃希菌、空肠弯曲菌、小肠结肠炎耶尔森菌等；食物中毒，包括沙门菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、乙型溶血链球菌和肉毒梭菌等；伪膜性肠炎，包括艰难梭菌或金黄色葡萄球菌；慢性腹泻，可能由结核杆菌引起；继发性肠道感染：铜绿假单胞菌、非结核分枝杆菌等。②真菌性：念珠菌、毛霉菌等。③病毒性：轮状病毒等。 2.检验思路

图1-1 粪便标本细菌学检验程序 3.拟采用的实验方法及预期结果 （1）显微镜检查（仅在怀疑为霍乱弧菌、艰难梭菌、结核分枝杆菌感染等情况下进行） ①不染色标本检查：用生理盐水或卢戈氏碘液或0.1%亚甲蓝染液与等量的粪便标本混合均匀涂于载玻片上，盖上盖玻片用相差显微镜或暗视野显微镜高倍镜镜检。 A.若标本呈米泔样或洗肉水样，镜检发现逗点状或弯曲状的弧菌，呈流星样

穿梭，运动活泼，提示霍乱弧菌感染。此时加入O群或O139群霍乱弧菌多价诊断血清，显微镜下观察与不加诊断血清比较，若大于80%的细菌停止运动或运动明显减弱，判断为制动试验阳性，可初步报告为“疑似O群或O139群霍乱弧菌”。 B.若发现呈S形、螺旋形并快速、拧塞样或投镖样运动的细菌，提示为弯曲菌。 C.若高倍镜观察发现有无光亮的卵圆形孢子或假菌丝可初步报告酵母样真菌感染。 ②染色检查：如细菌染色呈现下列典型形态时，对诊断具有提示作用。 A.取新鲜米泔样类便标本涂片2张，用乙醇或甲醇固定，分别进行革兰染色和1：10稀释苯酚复红染色，油镜观察呈鱼群状排列的杆状或弧形红色革兰阴性杆菌。提示为霍乱弧菌。 B.粪便做革兰染色，镜检发现细小、长而弯曲，呈S形或螺旋形、海鸥状的革兰阴性弧菌，可初步报告“疑似空肠弯曲菌”。 C.取水样便涂片，革兰染色，若发现大量散在或成堆（葡萄状）排列的革兰阳性球菌同时伴随革兰阴性杆菌明显减少，疑为引起伪膜性肠炎的葡萄球菌。 D.抗生素相关性腹泻的主要病原菌，大便呈黄绿色糊状便或暗绿色海水样便，黏液多，有时可见片状伪膜，涂片革兰染色可见大量革兰阳性粗大杆菌、无荚膜、卵圆形芽胞位于菌体一端同时伴有炎症细胞疑为艰难梭菌。 E.涂片革兰染色见瓜子状革兰阳性孢子或假菌丝，可初步报告检出酵母样真菌。 F.取蚕豆大小小的粪便与饱和生理盐水10ml混合，静置1小时，取表面液体涂片进行抗酸染色，发现红色抗酸杆可报告“找到抗酸杆菌”，提示为结核分

模拟粪便中伤寒沙门菌的分离与鉴定

模拟粪便中伤寒沙门菌的分离与鉴定 肠杆菌科（Enterobacteriaceae）细菌是一大群生物学性状相似的革兰阴性杆菌，常寄居于人及动物的肠道内，亦存在于土壤、水和腐物中[1]。多数是非致病菌或条件致病菌，少数为致病菌。其生物学性状相似，但生化反应，抗原构造有差异，故可据此将它们进行分类、鉴定。 粪便中肠道菌的分离与鉴定对于临床病原学诊断具有重要意义。 1.材料与方法 1.1 材料 1.1.1模拟粪便、普通琼脂平板培养基、SS平板培养基、葡萄糖微量发酵管、乳糖微量发酵管、尿素酶微量管、醋酸铅培养基微量管、蛋白胨水培养基、吲哚试剂、半固体培养基、伤寒诊断血清、37℃恒温培养箱等。 1.2 方法 1.2.1细菌分离培养取模拟粪便标本分区划种于SS平板培养基，置37℃培养箱培养18~24h后，观察结果，并对分离所获的菌落的细菌进一步鉴定。 1.2.2 细菌的生化反应挑取可疑菌落（无色菌落）的细菌，分别接种于葡萄糖微量发酵管、乳糖微量发酵管、尿素酶微量发酵管、醋酸铅培养基微量管、蛋白胨水培养基、半固体培养基，置37℃培养箱培养18~24h后观察结果。 1.2.3 血清学鉴定取伤寒诊断血清和生理盐水滴于玻片上，再取可疑菌分别与伤寒诊断血清和生理盐水混匀，观察有无凝集现象。 2.结果 2.1细菌分离培养 SS平板上分离出两种不同性状菌落，一种为圆形、凸起、湿润、边缘整齐、表面光滑的无色透明菌落，直径约1~2mm，另一种为圆形凸起、湿润、边缘整齐、表面光滑的红色菌落，直径约2~3mm。 2.2 细菌生化反应和血清学鉴定 所分到的两种不同性状菌落的生化反应、动力学试验、血清学鉴定结果见表1 表1可疑菌的生化反应、动力试验和血清学检查结果 双糖铁葡萄糖乳糖尿素 H2S 靛基质动力血清学 可疑菌—/+ H2S+ + —— + — + + 3.结果分析和讨论 在肠杆菌科中，志贺菌、沙门菌等致病菌不发酵乳糖，其他大部分非致病肠道杆菌可分解乳糖，故在SS平板上无色半透明小菌落为可疑致病菌落[2]。取可疑菌落接种于克氏双糖铁培养基进行初步判断，实验结果符合表2伤寒沙门菌的培养结果[3]，故初步判定该可以菌落为伤寒沙门菌。取可疑菌落进行五种生化反应和动力学试验，进一步验证。可疑菌的五种生化反应及动力学试验均符合表3中伤寒沙门菌的培养结果[4]，故可初步鉴定为伤寒沙门菌，为确诊需结合血清学诊断结果。实验中采用直接玻片凝集试验，用实验室提供的伤寒沙门菌诊断血清检测伤寒沙门菌抗原，实验结果为阳性，故可以确诊为伤寒沙门菌。但在临床应用过程中，根据临床确诊标准，不能确诊患者患有伤寒，必须根据血清学试验（肥达试验），同时结合临床表现、病程、病史以及地区流行病学情况作出诊断。肥达氏反应伤寒沙门菌“O”抗体凝集效价≥1∶80，“H”抗体凝集效价≥1∶160，恢复期效价增高4倍以上者，才能诊断为伤寒[5]。

脓汁和粪便标本中病原菌的检验实验报告

脓汁和粪便标本中病原菌的检测 年级专业：学号：姓名： 一实验目的：从脓汁和粪便标本中分离、培养和检测病原体。了解医学微生物学主要的研究方法和手段，掌握基本技能和基本原理，树立牢固的无菌观念。 二实验器材：试管架,酒精灯,污物盘，普通冰箱，隔水式电热恒温培养箱，奥林巴斯CX21型生物显微镜，乙醇乙醚，吸水纸，石蜡油，拭镜纸，染色架，革兰染色瓶，1500W 电炉，石棉网，手套，酒精棉球，镊子，碘酒棉球,接种针、接种环、油性笔、打火机、试管架、冷藏室、蒸馏水、玻片缸、消毒液、1‰新洁而灭、天平、砝码、细菌干粉培养基、锥形瓶、量筒、试管筐、糖发酵管、灭菌平皿、试管（棉塞）、刻度吸管、洗耳球、称量纸、硫酸纸、牛皮纸、橡皮筋、尺子 三方法与步骤： ○1培养基的制备、消毒和灭菌: 1.调配→溶化→矫正pH →分装→灭菌→检定→保存。 2.干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→灭菌→检定→保存。 ②细菌的分离培养:采用平板划线分离法，将取脓汁和粪便标本中混杂的多种细菌， 分别在普通平板和伊红美蓝固体培养基表面划线，使之分散成单个细菌，在37℃培养18～24h ，从而分离出单个菌落。 ③细菌的纯培养：脓汁标本在普通平板上有黄色、白色两种菌落；粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落。挑选这四种不同菌落分别在斜面培养基上接种 ④细菌的形态学检查：涂片制备→干燥→固定→革兰染色 ⑤细菌的生化试验等:糖发酵试验, 细菌药物敏感性试验, 血浆凝固酶试验, 半固体接种法, 痢疾血清玻片凝集反应 ⑥结果观察、分析、总结 四结果与讨论

结果讨论： 1.在制备好培养基后，我们首先采用的是平板划线分离法，从脓汁标本中分离出黄 色和白色两种菌落→在显微镜下观察，这两株细菌均为G+球菌，排列不规则， 呈葡萄串状，是典型的葡萄球菌→再结合菌落或菌苔颜色，可初步断定，这两株 葡萄球菌分别是金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌→再通过血浆凝固酶试验鉴别， 金黄色葡萄球菌是致病菌。 2.用伊红美蓝平板，从粪便标本中分离出紫黑色具有金属光泽和粉红色半透明菌 落。紫黑色菌落是能分解乳糖的大肠埃希菌。粉红色菌落是不能分解乳糖的致病 菌。显微镜下，它们都是G-杆菌，散在排列，从形态上不能鉴别是什么细菌。经 糖发酵试验，半固体动力试验，血清学试验结果鉴定，它们分别是大肠埃希菌和 福氏志贺菌。 在实验过程中，出现以下情况： 1.开始做实验的时候，可能是第一次做微生物实验，很多操作都不规范。例如，没有在无 菌操作区进行操作；没有坐着操作；操作时经常会和旁边同学交流；棉塞下端接触到管口外的地方；试管用完后忘记将管口迅速通过火焰3次等等。这些错误的操作的发生，都因为没有养成无菌操作的习惯，应加以改进。 2.在培养基上接种培养细菌后，出现有的培养基显示的细菌数量聚集在一起，没有形成单 菌落，这是因为，划线的时候力度不对，把琼脂给划破了，标本都渗进了琼脂里面，再用接种环划线时也不能将细菌分离。 3.在进行糖发酵试验时，结果显示该有气体产生的却没有气体产生。这可能是因为我们试 验完成后，管口朝上，反应过程中产生的气体溢出，观察不到正确的实验结果。 综上所述，对病原菌的正确检测对指导临床用药具有重要意义，只有在正确知道细菌种类的情况下才能对菌用药，否则就会容易造成耐药性的产生，不容易治愈疾病。在试验过程中必须严格按照试验的要求去做，操作者应树立一种无菌概念，尽量在无菌环境下操作，既能确保能够得出正确的实验结果，又保证操作者的安全和环境不受污染。

医院粪便标本细菌学检验标准操作规程

XXXX医院 粪便标本细菌学检验标准操作规程 1 目的 2 适用范围 3 标本管理 3.1 标本类型 3.2 标本采集 3.3 标本拒收标准 4 试剂与仪器 5 检验步骤 6 操作流程 7 结果报告 8 注意事项 9 临床意义 10 危急值报告 1 目的 规范粪便标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果可靠。 2 适用范围 粪便培养。 3 标本 3.1 标本类型：粪便、直肠拭子。 3.2 标本采集 3.2.1 自然排便采集：自然排便后挑取其脓血、黏液部分2 ~ 3 g，液体粪便取絮状物2 ~ 3 ml，盛于灭菌容器内，或置于保存液（运送培养基）、增菌培养基中送检。 3.2.2 直肠拭子：如不易获得粪便时，或排便困难病人及婴儿，可

用直肠拭子采取，即以无菌棉拭用保存液或生理盐水湿润后，插入肛门内4 ~ 5 cm（幼儿2 ~ 3 cm）轻轻转动取出，插入卡-布（Cary-Blair）运送培养基内或无菌容器内送检。 3.2.3 粪便标本应该立即送检，室温保存不能超过2小时，如不能及时送检可以放入磷酸盐甘油（pH 7.0）或转运培养基，但不能超过24小时。培养艰难梭菌的标本保存于-20℃以下。培养沙门菌和志贺菌的标本应放置磷酸盐甘油溶液中保存。保存弯曲杆菌和弧菌的标本，需加CaCl2（100 mg／L）试剂。 3.3 标本拒收标准 3.3.1 粪便标本放置时间超过2小时。 3.3.3 直肠拭子未置于运送培养基中。 4 试剂与仪器 4.1 革兰染液、氧化酶试剂、麦康凯平板、SS平板、TCBS平板及相关生化试剂等。 4.2 VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定药敏、革兰阳性菌鉴定药敏卡、药敏纸片等，有效期及储存条件参见试剂说明书。 4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。 4.4 诊断血清。 5 检验步骤 接收标本后，立即对标本进行编号、登记。 5.1 涂片检查粪便标本因各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和

粪便细菌学规范

粪便细菌学检验操作规范 实验室常规检查是细菌培养，沙门氏菌、志贺氏菌、邻单胞菌和气单胞菌、副溶血性弧菌、致泻性大肠杆菌作为实验室常规培养的主要腹泻病原菌。 一、标本采集与运送： 1．标本采集 （1）标本采集尽可能在发病早期和应用抗菌药物治疗之前。在不同的时间采集2~3 份标本可以提高致病菌的分离率。 （2）自然排便采集粪便标本时，取有脓血、粘液、组织碎片部分的粪便 1~ 3g。液体粪便则取絮状物，一般取1~ 3ml，直接装入粪便容器或保存液或运送培养基中送检。 （3）直肠拭子采集粪便标本，检查带菌者时可以采取肛拭（棉拭先用保存液或增菌培养基湿润），深入肛门内7~10cm 除采样，不能及时接种时，应将标本放入保存液内。 （4）容器应清洁、带盖、广口的（不宜使用纸盒）、送检的标本中不能加入防腐剂。 2．标本运送 （1）粪便标本应尽快送检，室温条件下不能超过2h。如不能及时送检可加入pH 7.0的磷酸盐甘油或转运培养基，但不宜超过24h。使用改良Cary-Blair培养 基时，不能运送培养志贺氏菌的标本。 （2）直肠拭子采集的标本必须置入运送培养基或GN肉汤中送检，转运时间不宜超过2h。 （3）高度怀疑霍乱弧菌感染的标本运送必须符合特殊标本的安全要求。 （4）直肠活检标本用粪便容器送检，内盛少量无菌蒸馏水以防止沉淀。 3．标本保存 不能及时检验的标本通常4-6C保存，用磷酸缓冲盐甘油溶液保存培养沙门

氏菌和志贺氏菌的标本，保存培养弯曲杆菌和弧菌的标本，需加CaCl2（100mg/L。） 二、标本镜检 粪便标本直接镜检找到大量多核白细胞，提示侵袭性致病菌感染。如果是由肠道菌群紊乱引起的腹泻，革兰氏染色结果可以提示是酵母菌还是葡萄球菌感染。 2.革兰氏染色 制备一张薄的粪便涂片，采用常规革兰氏染色方法。镜下观察是否有大量WBCs成丛的革兰氏阳性球菌，酵母菌。 3.水样粪便的标本，采用悬滴法暗视野（或相差显微镜）镜检，如发现细菌呈穿梭状极活泼的运动，则考虑为弧菌感染。加入O1 群霍乱弧菌诊断多价血清或0139血清，显微镜下观察若运动停止则为抑动试验阳性。 采用悬滴法镜检发现投镖式或螺旋式运动的细菌，革兰阴性弧形、S形或螺 旋形的小杆菌，提示弯曲杆菌感染。 三、细菌培养及培养基的选择 1 ．腹泻病原菌常规培养 对患者粪便标本进行腹泻病原菌常规培养，包括沙门氏菌、志贺氏菌、致泻性大肠杆菌、邻单胞菌、气单胞菌，致病性弧菌。此外，也包括可引起菌群失调的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和酵母菌。粪便标本至少应接种血平皿、HE（XLD或SS、EMB（或MAC或中国兰）等培养基。沿海地区还需增加TCBS琼脂培养基。 补充说明： （1）SS培养基对部分志贺氏菌有抑制作用。 （2）常用的肠道选择性培养基（如SS等）对气单胞菌、邻单胞菌有抑制作用，初次分离时应接种血平皿和MAC。 （3）若用EMB （伊红美兰）、MAC （麦康凯）等培养基培养后，未检出常见致病菌，但感染性腹泻症状明显，可重新采集粪便标本接种GN肉汤，35C培 养4-6h，再转种HE （肠道琼脂）等培养基，进一步分离培养。

脓汁和粪便标本中病原菌检测实验报告二

脓汁和粪便标本中病原菌的检测 年级专业：14临床输血学号： 3140704004 姓名：宁立军组别：第七组 合作者：牛恺文黄可秀朱晋辉 实验室：第六实验室指导老师：罗军 实验的得分： 一、实验目的 通过革兰氏染色并在油镜下观察细菌形态结构、细菌的生化反应和细菌的血清学反应等手段区别和鉴定脓汁标本中和粪便标本中细菌，检测病原微生物，并进行细菌药物敏感性试验。 二、实验器材 1器材 接种环接种针打火机马克笔酒精灯电热恒温培养箱物显微镜电炉试管（带棉塞）称量纸药勺牛皮纸橡皮筋尺子锥形瓶高压蒸汽灭菌器镊子玻片吸水纸 2 试剂药品 普通营养琼脂培养基蒸馏水脓汁标本粪便标本石蜡油生理盐水结晶紫卢戈碘液 95%乙醇稀释复红葡萄糖微量发酵管（2支）乳糖微量发酵管（2支）青霉素抗菌素纸片链霉素抗菌素纸片庆大霉素抗菌素纸片兔血浆福

氏志贺菌诊断血清 三、方法与步骤 1培养基制备 称取一定量的肉汤培养基，至于 三角烧瓶中，加入适量的蒸馏水，煮 沸一次，趁热分装；称取一定量的营 养琼脂培养基，至于三角烧瓶中，加 入适量的蒸馏水，煮沸三次（煮至刚 刚冒泡，立刻置于台面，半分钟后再 煮），使完全溶解，趁热分装。（平板 培养基：以无菌操作，倾注平皿10ml，琼脂完全凝固后，平板倒放，4℃冰箱保存备用。斜面培养基：培养基趁热斜放，培基不超过试管长度的2/3，琼脂凝固以后，4℃冰箱保存备用。）贴上标签后灭菌使用。 2空气与人体体表细菌学检查 根据空气中细菌气溶胶粒子，在 地心引力的作用下，以垂直的自然 方式沉降到培养基表面，培养以 后，计数菌落形成单位（CFU），了 解空气的污染情况。平板盖打开， 盖朝下放在平板旁，琼脂平板暴露15分钟即可。

脓汁和粪便标本中病原菌的检测实验报告模板一

医学微生物学实验报告 姓名___ __________ 学号___ ________ 年级___ ____ 组别__ ______

实验名称脓汁和粪便标本中病原菌的检测 实验者合作者 日期指导老师 一、实验目的 1、掌握培养基的制备的原则和一般方法 2、掌握细菌的分离培养方法 3、掌握油镜的正确使用，细菌标本图片的制备 4、掌握细菌的形革兰氏染色法以及形态学检查方法 5、熟悉细菌的生化试验方法（糖发酵试验、抗菌素敏感性试验、血浆凝固酶实验、动力学实验）的原理及方法 6、掌握玻片凝集试验的原理及方法 二、实验器材 1、5ml试管15支、托盘天平、锥形瓶、营养肉汤干粉培养基、量筒、使馆狂、酒精灯、洗耳球、刻度吸管 2、脓汁标本1支，粪便标本1支、伊红美兰平板2个，营养琼脂平板2个、接 种环、酒精灯 3、斜面4支、细菌分离培养物（上次实验平板） 4、斜面培养物4支，营养肉汤4支，生理盐水2支，镜油瓶、拭镜纸1套，吸 水纸1本，载玻片4张 5、斜面培养物4支，营养肉汤培养物（菌液）4支，半固体琼脂4支，营养琼 脂平板4个，糖发酵管1套，抗菌素纸片1套，眼科镊子2把。 6、半固体培养物4支，药敏试验培养物4个，微量发酵管培养物1套。 三、方法与步骤 流程图： 营养琼脂培养基的制备细菌的分离 培养 细菌的纯培 养 细菌形态学 检查 液体培养基 接种 细菌的生化实验

1、营养肉汤培养基的制备 ①称取1.1g营养肉汤干粉培养基于锥形瓶中，加入50ml蒸馏水溶解 ②加热煮沸1次，加热时需要摇动 ③分装于15支小试管中，每支3ml ④集中放在试管筐中，罩上硫酸纸和牛皮纸，用橡皮筋包扎好 ⑤灭菌 2、细菌的分离培养 平板画线法： 小组分工：甲→脓汁标本→营养琼脂平板丙→粪便标本→伊红美蓝平板乙→脓汁标本→营养琼脂平板丁→粪便标本→伊红美蓝平板 步骤： ①点燃酒精灯，把接种环在酒精灯上烧灼灭菌，金属杆快速通过火焰2～3次，以杀灭表面微生物。 ②取出标本，在火焰旁边，左手斜持标本管下端，右手小指夹住试管棉塞上端，缓慢拔出棉塞并夹持之，管口迅速通过火焰3次 ③将冷却的接种环沾取标本1环，管口迅速通过火焰灭菌后塞上棉塞放回。 ④接种环与平板呈30～40度角，在平板表面上方，以曲线的形式，作大幅度来回连续划线，边划边退，线段要划得长而密集，每区划线不少于30条。画完第一区要烧掉接种环上多余的标本。转动平板，转动平板，通过第一区5～7次，使接种环重新沾上少量细菌，同样的方法划过第二到五区，接种环呈递减次数地通过第二到第四区。 ⑤平板倒置，37℃培养18~24h,观察结果。 3、细菌的纯培养（斜面接种法） 分工：甲→金黄, 乙→白色。 丙→紫黑, 丁→粉红。 步骤： ①取制作的平板，在菌落分布最稀疏的区域，选择平板上典型的、容易挑取的单菌落。（从营养琼脂平板中分别选取金黄色菌落、白色菌落，从伊红美蓝平板上分别选出紫黑色菌落、粉红色菌落。） ②接种环套住菌落，轻轻刮取细菌。 ③接种环取菌后，伸入斜面底部，自下向上先拉一条细菌接种线。再伸入底部，自下向上，作蜿蜒划线。 ④37℃培养24小时，观察结果。 4、细菌形态学检查（革兰氏染色法）

脓汁和粪便标本中病原菌的检测实验报告模板三.

微生物实验报告 一、实验目的 1、掌握培养基制备的原则和一般方法。 2、掌握病原菌的分离与培养方法。 3、掌握油镜的正确使用、细菌涂片标本的制备、革兰氏染色法，熟悉细菌基本形态。 4、熟悉几种常用的细菌生化反应的名称、原理、方法、结果分析及用途。 5、掌握血浆凝固酶试验的原理、方法及用途。 6、熟悉药物敏感性试验方法的种类、原理及应用，掌握纸片扩散法。 7、掌握玻片凝集试验的原理、方法、结果观察与判断。 二、实验器材 1、天平、称量纸、干粉培养基、锥形瓶、量筒、15支试管、试管架、试管筐、5ml刻度吸管、平皿、洗耳球、酒精灯 2、脓汁标本1支，粪便标本1支；伊红美兰平板2个，营养琼脂平板2个，伊红美蓝平板2个，接种环，酒精灯 3、斜面4支、细菌分离培养物（上次实验平板） 4、斜面培养物4支，营养肉汤4支，生理盐水2支，镜油瓶、拭镜纸1套，吸水纸1 本，载玻片4张，染色瓶，染色架 5、斜面培养物4支，营养肉汤培养物（菌液）4支，半固体琼脂4支，营养琼脂平板4 个，糖发酵管1套，抗菌素纸片1套，眼科镊子2把 6、半固体培养物4支，药敏试验培养物4个，微量发酵管培养物1套。 三、方法与步骤 1、培养基的制备： 培养基称量干粉培 养基(g) 水量(ml) 煮沸(次）分装(ml) 备注 营养琼脂11.4 300 2瓶，500ml 锥形瓶，平

板 营养琼脂 2.9 75 3 5 15支，中试管，斜面 营养肉汤 1.1 50 1 1 15支小试管，液体 半固体琼脂 1.7 60 3 3 15支，小试管，高层 干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里，然后罩上硫酸纸、牛皮纸，用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到髙压蒸汽灭菌室→灭菌（用于倒平板的培养基不用加热溶解，摇匀即可） 2、细菌的分离培养 平板划线分离法 甲→脓汁标本→营养琼脂平板(黄色）乙→脓汁标本→营养琼脂平板(黄色） 丙一粪便标本一伊红美蓝平板(紫色）丁一粪便标本一伊红美蓝平板(紫色） 方法：（1)右手拿接种环（如握笔式)，烧灼灭菌，欲伸入试管内的接种环杆部分亦要迅速通过火焰2~3次，以杀灭其表面细菌；（2)左手握住盛有标本的试管的下端，右手以无名指、小指与手掌在火焰旁拔出试管棉塞并挟住之，将管口迅速通过火焰三次灭菌；（3)立即将已灭冷却的接种环伸入试管内，沾取标本（或菌液）一环，试管口火焰灭菌后塞好棉塞; (4)左手斜持平板，略开盖，在酒精灯火焰左前方约5~6cm处，将接种环上的菌液涂抹于平板表面的边缘部分；（5)烧灼接种环，冷却后，从原涂抹部分开始，连续平行划线，每次只划平板的1/4~1/5，划毕后接种环再经火焰灭菌，冷却后用同样方法在平板其余部分划线，每次划线要与前次划线重叠1-3条，共计3^次（区)；（6)接种完毕，将接种环烧灼灭菌后方可放下；（7)将培养皿倒置，37°C培养34小时后，观察结果。 3、细菌的纯培养 斜面接种分工 甲→普通平板→黄色菌落→1支斜面乙→普通平板→白色菌落→1支斜面 丙→EMB平板→紫黑菌落→1支斜面丁→ EMB平板→粉红菌落→1支斜面

大肠杆菌及其检验

大肠杆菌及其检验 大肠杆菌的生物学特性 ●简介： 大肠埃希氏菌习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属，并且大肠杆菌株ATCC 11775是该属的模式菌种。 附：肠杆菌科各属 大肠杆菌的不同菌株间DNA相关性为80%，而与同科的志贺氏菌属（除鲍氏志贺氏菌外）的DNA相关性可达80-87%。 大肠杆菌为人和动物肠道中的常居菌，一般多不致病，在一定条件下可引起肠道外感染。 ●形态与染色 大小0.4～0.7×1～3um,无芽胞,大多数菌株有动力。 有普通菌毛与性菌毛，有些菌株有多糖类包膜，革兰氏阴性杆菌。 附：有动力是什么意思？请看动力试验。 革兰氏阴性杆菌是什么意思？请看革兰氏染色介绍。 大肠杆菌扫描电镜照片 大肠杆菌透射电镜照片 大肠杆菌分裂照片

最新：大肠杆菌革兰氏染色照片 培养特性 由于此菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。 最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能生长，生长温度范围为15-46℃。 在普通营养琼脂上生长表现3种菌落形态： （1）光滑型：菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、光滑、呈灰色，在生理盐水中容易分散。 （2）粗糙型：菌落扁平、干涩、边缘不整齐，易在生理盐水中自凝。 （3）粘液型：常为含有荚膜的菌株。 此菌兼性厌氧，在有氧条件下生长良好，最适生长pH为6.8-8.0，所用培养基pH为7.0-7.5,若pH值低于6.0或高于8.0则生长缓慢。 附：菌落形态有什么用处？菌落形态学 生化反应 大部分菌株发酵乳糖产酸产气，并发酵葡萄糖、麦芽胞、甘露醇、木胶糖、阿拉伯胶等产酸产气。

IMViC试验为“+、+、-、-”。即为典型大肠杆菌。 ●抗原构造 比较复杂，主要由菌体O抗原、鞭毛H抗原、夹膜K抗原组成。 ●抵抗力 该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55℃经60分钟或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。 在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低的粪便中存活更久。对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感，但易耐药，是由带有R因子的质粒转移而获得的。 致泻性大肠杆菌简介 大肠杆菌为人和动物肠道中的常居菌，一般多不致病，在一定条件下可引起肠道外感染。 某些血清型菌株的致病性强，引起腹泻，与人类疾病有关的大肠杆菌，统称为致泻性大肠杆菌（enterovirulent E. coli ）。 一般包括四种： 肠毒素性大肠杆菌（ETEC） 致病性大肠杆菌（EPEC） 出血性大肠杆菌（EHEC） 侵袭性大肠杆菌（EIEC）。

脓汁和粪便标本中病原菌的检测实验报告模板三

脓汁和粪便标本中病原菌的检测实验报告模板三

微生物实验报告 一、实验目的 1、掌握培养基制备的原则和一般方法。 2、掌握病原菌的分离与培养方法。 3、掌握油镜的正确使用、细菌涂片标本的制备、革兰氏染色法，熟悉细菌基本形态。 4、熟悉几种常用的细菌生化反应的名称、原理、方法、结果分析及用途。 5、掌握血浆凝固酶试验的原理、方法及用途。 6、熟悉药物敏感性试验方法的种类、原理及应用，掌握纸片扩散法。 7、掌握玻片凝集试验的原理、方法、结果观察与判断。 二、实验器材 1、天平、称量纸、干粉培养基、锥形瓶、量筒、15支试管、试管架、试管筐、5ml刻度吸管、平皿、洗耳球、酒精灯 2、脓汁标本1支，粪便标本1支；伊红美兰平板2个，营养琼脂平板2个，伊红美蓝平板2个，接种环，酒精灯 3、斜面4支、细菌分离培养物（上次实验平板） 4、斜面培养物4支，营养肉汤4支，生理盐水2支，镜油瓶、拭镜纸1套，吸水纸1 本，载玻片4张，染色瓶，染色架 5、斜面培养物4支，营养肉汤培养物（菌液）4支，半固体琼脂4支，营养琼脂平板4 个，糖发酵管1套，抗菌素纸片1套，眼科镊子2把 6、半固体培养物4支，药敏试验培养物4个，微量发酵管培养物1套。 三、方法与步骤 1、培养基的制备： 培养基 称量干粉 培养基(g) 水量(ml) 煮沸(次）分装(ml) 备注 营养琼脂11.4 300 2瓶，500ml 锥形瓶，平

板 营养琼脂 2.9 75 3 5 15支，中试管，斜面 营养肉汤 1.1 50 1 1 15支小试管，液体 半固体琼 脂1.7 60 3 3 15支，小试 管，高层 干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里，然后罩上硫酸纸、牛皮纸，用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到髙压蒸汽灭菌室→灭菌（用于倒平板的培养基不用加热溶解，摇匀即可） 2、细菌的分离培养 平板划线分离法 甲→脓汁标本→营养琼脂平板(黄色）乙→脓汁标本→营养琼脂平板(黄色） 丙一粪便标本一伊红美蓝平板(紫色）丁一粪便标本一伊红美蓝平板(紫色） 方法：（1)右手拿接种环（如握笔式)，烧灼灭菌，欲伸入试管内的接种环杆部分亦要迅速通过火焰2~3次，以杀灭其表面细菌；（2)左手握住盛有标本的试管的下端，右手以无名指、小指与手掌在火焰旁拔出试管棉塞并挟住之，将管口迅速通过火焰三次灭菌；（3)立即将已灭冷却的接种环伸入试管内，沾取标本（或菌液）一环，试管口火焰灭菌后塞好棉塞; (4)左手斜持平板，略开盖，在酒精灯火焰左前方约5~6cm处，将接种环上的菌液涂抹于平板表面的边缘部分；（5)烧灼接种环，冷却后，从原涂抹部分开始，连续平行划线，每次只划平板的1/4~1/5，划毕后接种环再经火焰灭菌，冷却后用同样方法在平板其余部分划线，每次划线要与前次划线重叠1-3条，共计3^次（区)；（6)接种完毕，将接种环烧灼灭菌后方可放下；（7)将培养皿倒置，37°C培养34小时后，观察结果。 3、细菌的纯培养 斜面接种分工 甲→普通平板→黄色菌落→1支斜面乙→普通平板→白色菌落→1支斜面