猪链球菌的分离与鉴定

猪链球菌的分离与鉴定

引言

猪链球菌（Streptococcus suis）是一种常见的猪类病原菌，可引起猪类葡萄球菌感染症。同时，在随着猪肉消费量的增加，猪链球菌也被发现为一种人畜共患病原菌。因此，对猪链球菌的分离和鉴定具有重要的研究意义。本文将介绍猪链球菌的分离和鉴定方法。

分离方法

样品采集

在病猪的排便或病死病理组织中直接采集样品。采集后尽快送到实验室进行处理。

样品处理

将样品切碎，加入无菌的PBS（磷酸盐缓冲液），做成10倍稀释液，均匀混合。取适量的稀释液接种到培养皿中。

培养

将接种好的培养皿放入恒温培养箱中，28℃孵育24-48小时。

选取单个菌落

从培养皿中取出单个菌落，划线于固体营养琼脂平板上。

将划线后的琼脂平板倒置，28℃恒温培养箱中增菌孵育24小时。

鉴定

将菌落提取出来，进行生化试验和分子生物学检测，以进一步鉴定猪链球菌。

鉴定方法

生化试验

糖类发酵试验

对猪链球菌来说，它们可以使用蔗糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖和麦芽糖等进行发酵。在高锰酸钾下形成的气体可以表明发酵过程。

呼气酶试验

使用亚硝酸钠作为试剂，猪链球菌可以产生呼吸酶，呼吸酶可以将亚硝酸钠氧化成亚硝酸，反应产生气味刺激患者的气味。

分子生物学检测

PCR检测

使用PCR技术可以检测出猪链球菌的16S rRNA基因，以此来进行鉴定。

将PCR扩增的产物进行凝胶电泳检测，以此来确定是否存在猪链球菌的特殊条带。

结论

通过以上的实验步骤，我们可以成功的将样品中分离出猪链球菌，并建立了一套完整的进行猪链球菌鉴定和鉴别的方法，使我们更加全面、准确、迅速的了解猪链球菌的生态特征，为控制猪链球菌病的发生和传播以及维护公共卫生安全提供了重要的技术支持。

微生物检验学之病原性球菌及检验

病原性球菌及检验 一、葡萄球菌属 （一）生物学特性 1.形态与结构本属菌革兰染色阳性，呈圆球形，直径0.5～1.5μm，不规则成堆排列，形似葡萄串状，在脓汁、肉浸液培养物中，可见单个，成对或短链排列。无鞭毛和芽胞，某些菌株能形成荚膜。 2.培养特性需氧或兼性厌氧，营养要求不高，通常在肉浸液及肉浸液琼脂或加入血液的培养基上生长良好。最适pH为7.4，最适温度为35～37℃。 在普通琼脂平板上经35℃24～48h培养，可形成圆形、凸起、表面光滑湿润、边缘整齐并且不透明的菌落，直径为2～3mm。可产生不同的脂溶性色素，如金黄色、白色、柠檬色色素。 在血琼脂平板上，几乎所有的葡萄球菌可产生α、β、γ和δ溶血素。 在液体培养基（普通肉浸液）中生长迅速呈均匀混浊状。 3.生化反应本属菌触酶试验阳性，对糖的发酵反应不规则，多数能分解葡萄糖、麦芽糖及蔗糖，产酸不产气。多数致病性葡萄球菌能分解甘露醇产酸、液化明胶和产生血浆凝固酶。 4.抗原葡萄球菌水解后，用沉淀法可获得两种抗原，即蛋白抗原和多糖抗原。 （1）蛋白抗原：为完全抗原，有种属特异性，无型特异性。存在于葡萄球菌的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白。 （2）多糖抗原：是半抗原，具有型特异性，有三种：①A型多糖抗原；②B 型多糖抗原；③C型多糖抗原。

5.分类 （1）《伯杰系统细菌学手册》（1986）据DNA相关性表型特征等将葡萄球菌分为19个种。继之，各国学者又相继从人和动物中检出数种凝固酶阴性葡萄球菌新种，共27种。 （2）古典分类法：根据其在固体培养基上产生的不同色素分为金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和柠檬色葡萄球菌。 1965年，国际葡萄球菌和微球菌分类委员会将葡萄球菌分为凝固酶阳性葡萄球菌与凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）。CNS常包括表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌。凝固酶阳性葡萄球菌包括金黄色葡萄球菌、中间型葡萄球菌和家畜葡萄球菌。 6.抵抗力对理化因素抵抗力强，耐热、耐干燥、耐高盐，是抵抗力最强的无芽胞细菌。 （二）致病性 1.侵袭性疾病①皮肤及软组织感染，如毛囊炎、疖、痈等；②全身性感染，如败血症、脓毒血症、骨髓炎、心内膜炎、脑膜炎等；③呼吸道感染，如支气管肺炎、肺炎、脓胸等；④医院内感染。 2.毒素性疾病①食物中毒，急性胃肠炎；②烫伤样皮肤综合征；③中毒性休克综合征；④葡萄球菌性肠炎。 （三）微生物检验 1.标本采集根据葡萄球菌感染所致的疾病不同，可采集脓汁、渗出液、伤口分泌物、血液、尿液、粪便、痰液以及脊髓液等。 2.检验方法及鉴定

人感染猪链球菌病样品采集与实验室检测方法

附件1 人感染猪链球菌病样品采集与实验室检测方法 一、样品采集 1．采样器材 ⑴无菌封闭性好的试管，最好使用负压采血管或带螺口盖的塑料管，避免使用玻璃试管。 ⑵可以清楚标记且标记不易脱落的记号笔。 ⑶可以方便采集组织标本的无菌容器。 ⑷无菌的剪刀、镊子和手术刀。 ⑸血平皿和增菌培养瓶。 ⑹乳胶手套、隔离服、防护口罩等。 ⑺带有冰袋或者冰排的安全可靠的保温运输容器。 ⑻采样送检单。 2．样品种类 ⑴现症病人非抗凝全血 ⑵现症病人抗凝血 ⑶脑脊液标本 ⑷尸体解剖应无菌采集淋巴结、脾、肝、心腔血、胸（腹）水 ⑸如有病死猪也可进行解剖，取淋巴结、脾、肝、心腔血、肉 3．血液和脑脊液标本采集方法 ⑴无菌抽取血液10ml分置于有抗凝剂和无抗凝剂的无菌试管或者负压采血管中 ⑵按常规方法腰穿采集3～5ml脑脊液标本置于无菌试管中。

⑶采集的标本立即接种血平皿和/或增菌培养瓶，置于35～37℃培养。 4．样品运输保存 ⑴所有的原始标本在转运过程中应置于安全密闭的容器中。 ⑵标本应冷藏运输。 ⑶用于检测的标本可在4~8℃冰箱暂放。 ⑷剩余标本应放置于-70℃保存。 5．注意事项 ⑴严格无菌操作，防止标本污染。 ⑵用于分离培养的标本应在抗菌治疗前采集。 ⑶应尽可能床边接种血平皿和增菌培养瓶。如无法床边接种，样品应尽快送实验室，并立即检测。 ⑷在标本采集过程中，注意安全防护。使用乳胶手套、隔离服、防护口罩。采取预防措施，防止针头等锐器刺伤。 二、实验室检测 1．推片镜检 抗凝血或脑脊液可推片进行革兰氏染色镜检。阳性标本可见中性粒细胞内吞噬颗粒，细胞外偶尔可见革兰氏阳性链球菌。 2．猪链球菌分离鉴定 ⑴血平板接种 血液或脑脊液等标本可直接接种于新鲜羊血琼脂平板（如无血平板可用含8 %胎牛血清的营养琼脂平板代替）。组织标本可直接涂抹平板或剪碎用无菌生理盐水洗涤，洗液接种平板。平板置37℃5% CO2培养箱或者烛缸中培养24～72

猪链球菌的分离与鉴定

猪链球菌的分离与鉴定 引言 猪链球菌（Streptococcus suis）是一种常见的猪类病原菌，可引起猪类葡萄球菌感染症。同时，在随着猪肉消费量的增加，猪链球菌也被发现为一种人畜共患病原菌。因此，对猪链球菌的分离和鉴定具有重要的研究意义。本文将介绍猪链球菌的分离和鉴定方法。 分离方法 样品采集 在病猪的排便或病死病理组织中直接采集样品。采集后尽快送到实验室进行处理。 样品处理 将样品切碎，加入无菌的PBS（磷酸盐缓冲液），做成10倍稀释液，均匀混合。取适量的稀释液接种到培养皿中。 培养 将接种好的培养皿放入恒温培养箱中，28℃孵育24-48小时。 选取单个菌落 从培养皿中取出单个菌落，划线于固体营养琼脂平板上。

将划线后的琼脂平板倒置，28℃恒温培养箱中增菌孵育24小时。 鉴定 将菌落提取出来，进行生化试验和分子生物学检测，以进一步鉴定猪链球菌。 鉴定方法 生化试验 糖类发酵试验 对猪链球菌来说，它们可以使用蔗糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖和麦芽糖等进行发酵。在高锰酸钾下形成的气体可以表明发酵过程。 呼气酶试验 使用亚硝酸钠作为试剂，猪链球菌可以产生呼吸酶，呼吸酶可以将亚硝酸钠氧化成亚硝酸，反应产生气味刺激患者的气味。 分子生物学检测 PCR检测 使用PCR技术可以检测出猪链球菌的16S rRNA基因，以此来进行鉴定。

将PCR扩增的产物进行凝胶电泳检测，以此来确定是否存在猪链球菌的特殊条带。 结论 通过以上的实验步骤，我们可以成功的将样品中分离出猪链球菌，并建立了一套完整的进行猪链球菌鉴定和鉴别的方法，使我们更加全面、准确、迅速的了解猪链球菌的生态特征，为控制猪链球菌病的发生和传播以及维护公共卫生安全提供了重要的技术支持。

猪链球菌病的实验室鉴定及防治措施

猪链球菌病的实验室鉴定及防治措施 猪链球菌病是由链球菌科猪链球菌引起的一种常见的猪类传染病。猪链球菌病主要病变部位在皮肤和淋巴系统，病猪常表现为皮肤红肿、淋巴结肿大以及发热等症状。猪链球菌病严重影响了猪的生产性能和养殖效益，因此对其进行准确的实验室鉴定和合理的防治措施非常重要。 实验室鉴定猪链球菌病的方法主要包括病原学鉴定、生物学特性鉴定和分子生物学鉴定。 病原学鉴定是通过采集病猪的临床标本，在适当增菌基质中培养猪链球菌，观察和分离纯种菌株。通常可以采集病猪的皮肤切片、淋巴结组织和关节液等标本进行培养，常用的培养基有血琼脂、亚硝酸盐琼脂和巴氏液等。培养到纯种菌株后，可以进行生物学特性的鉴定。 生物学特性鉴定主要包括菌体形态、生理生化特性以及药敏试验等。通过菌体形态特征，如菌落形态、菌体形状、胞外多糖产生等，可以初步确认猪链球菌；而通过生理生化特性鉴定，如氧需求性、pH值耐受性、产气等，可以进一步确认该菌种。 分子生物学鉴定是目前较为先进的鉴定方法，通过PCR反应扩增猪链球菌特异性的基因或基因片段，如16S rRNA基因等，然后进行DNA序列测定和分析，最终确定该菌种。分子生物学鉴定方法具有高灵敏度、高特异性和高准确性的优势。 对于猪链球菌病的防治，主要采取以下措施： 1. 强化卫生和消毒。加强猪舍的清洁消毒工作，定期对猪舍进行内外环境消毒，包括对猪栏、饮水设备、饲料器具和兽医器械等进行清洁和消毒操作，减少猪链球菌的传播源。 2. 合理养殖管理。根据疫情的流行特点，合理调整猪群的密度，避免猪只之间的交叉感染；同时加强对饲料、饮水和环境的管理，保证猪只的饲养条件良好，增强其免疫力。 3. 接种疫苗。针对猪链球菌病，可以选择适当的疫苗进行接种，以增强猪只的防御能力。疫苗接种应根据猪只的年龄、季节和病情等因素来确定接种时间和剂量。 4. 应对突发疫情。一旦发生猪链球菌病的疫情，应及时采取隔离和治疗措施，对病死猪只进行尸检和埋葬处理，避免病菌的扩散和传播。 猪链球菌病的实验室鉴定和防治措施对于保障猪类养殖的健康和生产效益非常重要。只有通过准确的实验室鉴定，采取科学合理的防治措施，才能有效地预防和控制该疾病的发生和传播。

猪关节炎型链球菌病的临床症状、实验室检验与防控 - 养猪技术

猪关节炎型链球菌病的临床症状、实验室检 验与防控-养猪技术 近两年来，猪链球菌病的流行主要发生于断奶前后的仔猪，仔猪关节炎型链球菌病主要呈地方性流行。该病在全年任何季节都能够发生，尤其是温度较高的夏季和秋初比较常见。病猪饲料转化率下降，生长发育缓慢，症状严重时甚至可能发生死亡，应采取有效的防范措施。下面具体来了解一下：猪关节炎型链球菌病的临床症状猪关节炎型链球菌病的防控措施。1、流行特点猪关节炎型链球菌病的发病机理是猪通过呼吸道或者消化道感染病原菌，进入体内后经由血液循环传播，主要在四肢关节定居，从而导致关节肿胀、发炎，影响正常机能，且伴有全身症状。任何品种、年龄的猪感染链球菌后都可能发生慢性或者急性关节炎，其中仔猪最容易，通常认为是由于脐部感染而引起。猪可通过多种途径感染链球菌，如呼吸道分泌物、阴道分泌物以及母乳中都普遍存在病菌，甚至健康仔猪的扁桃体内也能够分离得到该菌。猪能够经由肚脐以及扁桃体、蹄部、皮肤损伤感染病菌，尤其是哺乳仔猪或者保育仔猪饲养在粗糙地面且没有铺垫垫料时容易使腿部皮肤发生损伤．从而就容易通过伤口感染链球菌而出现发病。2、临床症状发病初期，病猪通常是后肢出现跛行，关节发生肿胀，往往呈躺卧状，人为驱赶会由于疼痛而大声尖叫。如果关节严重肿胀，将肿胀部切开会有少量混杂血液的黄白色脓汁流出。随着病程的进展，病猪多个关节周围肌肉会发生肿胀，伴有疼痛，呈现跛行，且肌肉逐渐发生萎缩，走动严重困难或者发生瘫痪而无法站起。另外，体温一般升高达到

39-40.5°C。部分病猪的一侧前肢或者后肢上部发生明显肿大，用手触摸具有坚硬感，且伴有疼痛反应，但之后不断变软，肿胀处发生溃烂，并长时间有白色脓汁流出；食欲不振，尿液呈淡赤色，粪便稍干，被毛粗乱，日渐消瘦，最终由于严重衰竭而发生死亡，病程一般持续3-5周。 3、病理变化病猪主要病变是四肢关节发生肿大，且关节囊内存在大量呈胶样状的淡黄色液体，个别会存在纤维素化脓性物质；鼻、喉黏膜发生充血、肿胀、出血，且表面附着黏液；全身淋巴结都发生程度不同的充血、肿大以及出血，特别是肠系膜淋巴结比较严重；肝脏呈暗红色，发生肿大，肝叶下缘覆盖有纤维素；心肌色泽变暗，心包积液，且其中往往含有较多的纤维素絮片；肺脏存在淤血，发生肿胀、水肿，气管内含有大量呈泡沫状的灰白色液体；脾脏呈黑紫色，明显肿大，质地变脆且柔软；肾脏色泽暗淡，发生轻度肿大，质地较脆，被膜以及表面存在不同大小的出血点；胃肠黏膜明显充血、出血。 4、实验室检验镜检。在病猪关节腔内先后使用灭菌注射器抽取6份关节液用于检测，取少量病料制成涂片，经过革兰氏染色、镜检，可见少量革兰氏阳性球菌，呈卵圆形或者圆形。分离培养。取6份病料以划线的方式分别接种于5%〜10%的绵羊鲜血琼脂平板，置于37C条件下进行24-48h的分离培养，发现都能够长出细菌，且48h后都会长出直径为o．5-0.8mm的圆形、灰白色小菌落，明显隆起，且菌落周围由于发生不完全性溶血而呈草绿色。挑取病菌先后在营养琼脂和麦康凯琼脂上接种，都没有长出细菌。取病菌在马丁肉汤（添加10%血清）中，细菌能够生长，经过24h上面变得澄清，且管底存在颗粒状沉淀。另外，该菌接种血琼脂后置于10°C下

猪链球菌感染病例诊断方法及防治措施

猪链球菌感染病例的诊断方法及防治措施 近年来，猪链球菌已成为规模化猪场的常见病和多发病，常见有败血型、脑膜炎型、淋巴结脓肿型、关节炎型，其中猪链球菌II型作为一种人畜共患病原对人危害最大，不但给养殖户造成重大的经济损失，还给公共卫生安全造成重大影响。所以，针对猪链球菌病进行相应的防控对养殖业和公共卫生安全意义重大。针对猪链球菌病特点，以广西融安县某猪场为例，结合笔者在基层多年兽医服务经验，提出以下几点防治的措施及治疗方案。 一、流行病学特点 病猪、痊愈带菌猪是链球菌病主要传染源，通常具有地方流行性，一年四季都会发生，其中以7～9月暴发率最高。猪是该病的最易感动物，其中4～11周龄的仔猪发病率及病死率最高。笔者对融安县几个规模较大的猪场统计发现，猪链球菌的发病率可达到25%以上，病死率在30%～50%。 猪链球菌传播途径有如下几种： 首先是呼吸道和伤口，常见有母猪经呼吸道传染仔猪，初生仔猪因脐带伤口感染，仔猪打耳、阉割、拨牙以及皮肤擦伤等伤口被细菌感染; 其次是食入或接触被细菌污染的饲料、水后经消化道感染;此外还有成年带菌母猪在分娩或者哺乳时感染仔猪。 二、临床表现与诊断

1、临床表现 猪链球菌病的潜伏期一般为3～6d，根据临床症状可以分为四种，具有病程快，危害大，传染性高等特点，一般患猪临床症状和病理变化如下。 败血型。主要致病原多为猪链球菌II型，怀孕母猪、架子猪较为多见，发病急，病程短，初期症状不明显，所以死亡率高，达80%以上。病猪临床症状表现为高温，体温41～43℃，呆立嗜睡，便秘，呼吸困难，厌食，精神差，眼红泛泪，流鼻带脓，偶有咳嗽，颈部、腹部、耳朵及四肢皮肤发紫，有淤血块和出血斑。 脑膜炎型。病程1～2d。主要致病原为C群和R群链球菌，多发生于20～35天前后断奶仔猪，主要表现为神经症状。病猪病初体温稍高，食欲减退，有鼻液流出，便秘，继而病猪会表现出神经症状，转圈，空嚼，磨牙，仰卧，直至后躯麻痹，侧卧于地，最终昏迷而死。 淋巴结脓肿型。病程一般为2～4周，病死率低。主要是E群的链球菌主要引起猪淋巴发炎化脓，其中常见颌下、咽部和颈部等部位的淋巴结。病猪临床表现为淋巴结处隆起明显，触摸发硬，痛并带热，咳嗽，流鼻涕，呼吸、咀嚼、吞咽及进食受一定影响。淋巴结成熟后破裂，会有绿色无臭脓汁流出，流完后全身症状好转，局部逐渐痊愈。 关节炎型。病程2～3周。病猪临床症状表现为充血、关节肿胀、关节软骨坏死、无法站立等，多见于哺乳仔猪及断奶仔猪，常因无法抢乳而饿死，也有逐渐好转而康复。 2、病理变化

猪链球菌的分离鉴定及对常用抗菌药物的耐药性

猪链球菌的分离鉴定及对常用抗菌药物的耐药性 刘静;李贤贤;张鹏;王淑杰;吴悦;赵玉莲;李鹤;李艳华 【摘要】本试验对某猪场采集的猪鼻腔棉拭子进行猪链球菌的分离纯化及鉴定,采用琼脂扩散法和微量稀释法对鉴定出的猪链球菌进行药敏试验,以美国临床检验标准委员会(NCCLS)的抑菌圈直径和临界浓度做为判断标准.试验结果表明,通过培养特性、染色特点、形态观察、生化试验及PCR鉴定,分离到10株猪链球菌.10株猪链球菌对青霉素G(PEN)、阿莫西林(AMO)的耐药率最低,为0％,对头孢西丁(FOX)、红霉素(ERY)、氧氟沙星(OF)、磺胺甲(噁)唑(SMZ)则表现出明显的耐药性,耐药率均达100％,对头孢唑啉(CEZ)、头孢噻呋(CEF)的耐药率在20％～60％之间.【期刊名称】《中国兽医杂志》 【年(卷),期】2012(048)007 【总页数】4页(P30-33) 【关键词】猪链球菌;分离鉴定;药敏试验 【作者】刘静;李贤贤;张鹏;王淑杰;吴悦;赵玉莲;李鹤;李艳华 【作者单位】东北农业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨150030;东北农业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨150030;黑龙江省农垦北安管理局动物卫生监督所,黑龙江北安164095;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,黑龙江哈尔滨150030;东北农业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨150030;东北农业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨150030;东北农业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨150030;东北农业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨150030

【正文语种】中文 【中图分类】S852.61+1 猪链球菌病是一种人畜共患的传染性疾病，在世界上广泛分布，是由C、D、L群 链球菌引起的猪多种疾病的总称，在临床上主要表现为败血症、脑膜炎、关节炎、淋巴结脓肿等症状。其中，猪链球菌是引起猪链球菌病最主要的病原，引起猪脑膜炎以及败血症等疫病，人通过特定的传播亦可感染该菌［1－2］。近几年来，随 着我国养猪业集约化程度的不断提高，猪链球菌病发生呈明显上升趋势，且常与猪繁殖障碍及呼吸道综合征、猪附红细胞体病、非典型猪瘟、猪圆环病毒病混合感染，一旦发生很难控制，给我国养猪业带来巨大的经济损失［3］。虽然理论上有很多药物能治疗猪链球菌病，但随着抗菌药物的广泛使用以及不合理用药，使得病原菌的耐药现象日趋严重［4－5］。为此，我们对黑龙江省某猪场采集的猪鼻腔棉拭 子进行猪链球菌分离纯化、生化鉴定和PCR鉴定，并对分离菌进行了药敏试验， 以期为猪链球菌病的防治工作提供依据。 1 材料与方法 1.1 菌株及病料标准2型猪链球菌菌株ATCC700794、ATCC19714，购自美国 疾病控制中心。病料系从黑龙江省某猪场通过灭菌棉拭子采集的猪鼻腔分泌物。1.2 培养基脑心浸液肉汤培养基、脑心浸液琼脂，购自中国检验检疫科学研究院 北京陆桥生物技术有限责任公司，生化反应管购自杭州天和微生物试剂有限公司。 1.3 药物青霉素 G（Penicillin G，PEN）、阿莫西林（Amoxicillin，AMO）为 东北制药总厂生产；头孢唑啉（Cefazolin，CEZ）、头孢噻呋（Ceftiofur，CEF）、头孢西丁（Cefoxitin，FOX）为石药集团中润制药（内蒙古）有限公司生产；红霉素（Erythromycin，ERY），购自武汉远鸿科技开发有限公司；氧氟沙

猪源链球菌的分离鉴定及其生物学特性研究

猪源链球菌的分离鉴定及其生物学特性研究 猪源链球菌的分离鉴定及其生物学特性研究 引言： 链球菌是一类广泛存在于自然环境中的革兰氏阳性球菌，其中猪源链球菌引起的疾病一直以来都对养猪业造成了严重的威胁。本文对猪源链球菌进行了分离鉴定，并对其生物学特性进行了详细研究，以期为预防和控制猪链球菌疾病提供理论基础和科学依据。 一、研究方法 1. 样本采集 从不同地区的养猪场收集病猪的组织和体液样本，如病猪的腹腔渗出液、肺部组织等。 2. 分离培养 将采集的样本在50℃下灭菌30分钟后，取适量样本接种在链 球菌肉汤和鸡血琼脂上进行培养。根据典型菌落形态、血培养的溶血情况、革兰染色结果等进行初步鉴定。 3. 生化鉴定 通过对菌落的培养特性、革兰染色结果、嗜碱性、嗜热、耐盐及吡啶基酸反应等进行鉴定，使用API酶学试剂和一些常规的生化试验对猪源链球菌进行细节鉴定。 二、分离鉴定结果 经过培养和生化试验后，从猪源样本中分离出了一株形态特征相似的细菌，经过进一步鉴定后确认为猪源链球菌（Streptococcus suis）。 三、生物学特性研究 1. 形态特征

猪源链球菌是一种革兰氏阳性球菌，为链球状排列。菌体呈非分枝状，直径约为0.6-1.2微米。在细菌统计学参数中，我们使用形态特征对猪源链球菌进行了分类和识别。 2. 生长特性 猪源链球菌喜好碱性环境，适宜生长温度为37-42℃，在一般 寒暖季节温度下便可活动并繁殖。此外，猪源链球菌在富含葡萄糖的培养基中生长良好，并能利用一些碳源和氮源来扩展生长。 3. 肠溶性和溶血毒力实验 通过对猪源链球菌的肠溶性和溶血毒力进行实验，发现菌株具有一定的溶血作用，但与其它链球菌相比较，其溶血毒力较弱。 4. 耐药性研究 对猪源链球菌菌株进行了敏感性试验，发现其对不同类型的抗生素表现出不同程度的抗药性。其中，对青霉素类药物敏感性较高，而对红霉素类药物抗药性较强。 5. 基因组序列分析 应用基因组测序技术对猪源链球菌进行了序列分析，探究其基因组结构与特点，帮助了解其毒力因子、药物耐药基因等信息。 结论： 本研究通过对猪源链球菌的分离鉴定及生物学特性研究，增加了我们对猪链球菌疾病的认识。我们发现猪源链球菌具有一定的致病性，并对抗生素呈现出不同程度的抗药性。此研究为预防和控制猪链球菌疾病提供了重要的科学依据，对保障养猪业的健康发展具有重要意义 通过对猪源链球菌的分类和识别、生长特性、肠溶性和溶血毒力实验、耐药性研究以及基因组序列分析，我们对猪链球

猪链球菌的分离鉴定

目录 中文摘要 (1) 英文摘要 (2) 前言 (3) 1.材料与方法 (4) 1.1 实验材料 (4) 1.1.1 病料 (4) 1.1.2 仪器 (4) 1.1.3 试剂及药品 (5) 1.1.4 培养基的制备 (5) 1.1.5 试验动物 (6) 1.2 试验方法 (6) 1.2.1 细菌涂片、染色、镜检 (6) 1.2.2 细菌分离培养 (6) 1.2.3 生化试验 (6) 1.2.4 血清学鉴定 (7) 1.2.5 动物致病性试验 (7) 1.2.6 药敏试验 (8) 2 结果与分析 (8) 2.1 染色结果 (8) 2.2 分离培养结果 (9) 2.3 生化试验结果 (9) 2.4 血清学试验结果 (10) 2.5 动物致病性试验结果 (10) 2.6 药敏试验结果 (10) 2.7 防治 (10) 3.结论与讨论 (11) 3.1 关于猪链球菌致病机理 (11) 3.2 关于猪链球菌病诊断 (12) 3.3 关于猪链球菌病防制 (13) 3.4 结论 (14) 参考文献 (15) 致谢 (16)

摘要 猪链球菌病是猪链球菌（Streptococcosis suis）引起的猪的一种重要的疾病，猪只不分品种和年龄阶段均容易感染，并且能够感染给人，可导致人和猪的死亡。猪链球菌主要感染3-12周龄的仔猪。近些年来，在美国、英国、荷兰、日本、加拿大、丹麦等许多国家均有猪链球菌病发生的报道，并在世界范围内造成了巨大的经济损失。在我国南方几省也曾经一度广泛流行，给我国也带来了很大的经济损失。目前已经鉴定出了35种血清型的猪链球菌，其中以2型最重要、最为常见。2004年4月，沈阳市某种猪繁育场大范围的发生仔猪的关节炎和败血症。本次试验以无菌采取患关节炎猪的关节液和患败血症猪的肝、肺、脾及肠系膜淋巴结各8份作为病料，并对这16份病料进行了病原菌分离试验、血清学鉴定、药敏试验、致病力试验。试验结果表明：该病原菌为2型猪链球菌，而且引起关节炎症状的猪链球菌较引起败血症的猪链球菌致病力弱；该菌对头孢菌素、青霉素等高度敏感，而对土霉素、链霉素等具有较强的耐药性。 关键词：猪；链球菌；分离鉴定

猪链球菌病防治知识问答

猪链球菌病防治知识问答（三） 12.实验室检验方法都有哪些? 答：第一种方法是病料直接涂片染色镜检。即用组织或血液或脓汁涂片，用革兰氏染色后镜检，可见革兰氏阳性(紫色)短链球形或卵圆形细菌，也可呈单个散开或成双排列，无芽孢，有的可见到荚膜。 第二种方法是细菌分离鉴定。 即先接种于硫乙醇酸盐肉汤增菌培养后，再转种于血液琼脂平板上接种，37℃培养24～48小时，形成大头针帽大小，无色、黏稠、露珠状菌落，菌落周围有完全透明的溶血环现象。 必要时可用聚合酶链式反应试验(PCR)方法进行菌型鉴定。 13.对猪链球菌病的快速诊断技术有哪些? 答：针对目前流行的人畜共患的2型猪链球菌病，可采用简洁、快速的涂片染色镜检和PCR技术检测。其中PCR技术病料还可应用于鉴别2型猪链球菌毒性菌株和非毒性菌株。 14.确诊大概需要多长时间，做什么试验? 答:通常需要2～4天时间。主要用于做肝、脾、血液的涂片镜检，细菌分离鉴定，以及用PCR方法确认猪链球菌2型及检查是否具有毒力因子。 15.如何采集、保存、运送和分离病原的样品? 答:根据不同的病型采取不同的病料。败血型病猪，无菌操作采集新鲜的病死猪的心、肝、脾、肾和肺等病料(腐败病料可能含有杂

菌)，1～2厘米见方大小，放入干净自封袋或容器内，无泄漏包装，尽快冷藏运送到实验室。淋巴结脓肿型病猪，可用无菌注射器吸取未破溃的淋巴结脓肿内的脓汁。脑膜炎型病猪，则以无菌操作采取脑脊髓液及少量脑组织。 16.是否有疫苗可用于预防猪链球菌病? 答:目前已有猪链球菌疫苗产品，适用于猪链球菌病疫区和流行猪场的预防和紧急免疫。猪链球菌疫苗有弱毒活疫苗和灭活疫苗，前者是由C群链球菌制备的，该疫苗对由猪链球菌2型引起疾病的预防效果不佳，已很少使用;猪链球菌2型灭活疫苗是由猪链球菌2型制备。截止到7月底，农业部批准的两家GMP认证的兽医生物制品企业生产，已经在向市场提供成熟的疫苗产品。 17.抗菌素对猪链球菌病预防和治疗是否有效? 答:在猪群发病时，对疫点内的同群健康猪和疫区内的猪，可选用高敏抗菌药物进行紧急预防性给药。抗菌性药物可选用头孢类、恩诺沙星或氧氟沙星等药物。 抗菌性药物的使用应在当地动物防疫监督机构指导下进行。要求必须遵守兽药休药期的有关规定，即生猪出栏前生猪用药必须在兽药规定休药期前停用，防止出现药物残留。